抑制蛋白激酶Cα活性增加TNF-α对小鼠肝癌细胞毒性的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及联合蛋白激酶Cα (protein kinase C alpha,PKC-α)抑制剂Go6976对小鼠肝癌(H22)细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的H22细胞分成两组,每组分四部分,一组仅以不同浓度的TNF-α(0,20、40、60 ng／ml)处理,另一组TNF-α处理同时以Go6976(4．6 nmol／ml)抑制PKC-α活性,分别于4 h,8 h,16 h采用流式细胞仪检测小鼠肝癌细胞的凋亡率,Western blotting方法检测PKC—α和磷酸化PKC-α蛋白的表达情况。结果 TNF-α(0、20、40、60 ng／ml)处理H22细胞4 h,细胞凋亡率分别为2．44％±0．31％、 1．80％±0．32％、2．73％±0．14％、3．05％±0．78％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达无显著改变;同时用 TNF-α和Go6976处理H22细胞,凋亡率、PKC-α和磷酸化PKC-α的表达与单独使用TNF-α的结果相似。TNF-α处理8 h,细胞凋亡率分别为2．11％±0．43％、1．83％±0．31％、3．40％±0．47％、6．05％± 0．78％,PKC-α及磷酸化PKC-α的表达随TNF—α浓度增加而上调;TNF—α处理同时抑制PKC-α活性,细胞凋亡率显著升高,分别为2．90％±0．39％、7．76％±0．35％、11．43％±1．05％、12．96％± 2．44％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达相应下调。仅以TNF-α处理或TNF—α处理同时抑制PKC-α活性16 h,其结果与8 h的结果基本一致;于Go6976抑制细胞PKC-α活性组,TNF-α60 ng／ml时细胞凋亡率较TNF-α40 ng／ml时有所下降,但坏死细胞的比例却明显升高。结论 TNF-α上调PKC—α和磷酸化PKC-α表达;抑制PKC-α活性,显著增加TNF-α对H22细胞的细胞毒性。     

过氧化物酶体增殖物激活受体β反义寡脱氧核苷酸促进肿瘤坏死因子α介导的HaCaT细胞凋亡的实验研究

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)β反义寡脱氧核苷酸(asODN)在肿瘤坏死因子(TNF)α介导的HaCa了细胞凋亡中的作用。方法常规复苏HaCaT细胞,随机分为正常对照组(不行转染)、对照组(单纯用脂质体处理)、错义寡脱氧核苷酸(scrODN)组(转染PPARβscrODN)、asODN组(转染PPARβasODN)、TNF-α组(受TNF-α刺激)、scrODN TNF-αC组(同scrODN组处理后受TNF-α(刺激)、asODN TNF-α组(同asODN组处理后受TNF-αC刺激),PPARβscrODN或asODN均为4μmol／L,TNF-α为10μg／L。采用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法观察PPARβmRNA及其蛋白质的表达水平;采用hoechst33258荧光染色,观察细胞的形态学改变并计算凋亡核百分率;采用噻唑蓝法测定存活细胞数;采用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)比色测定试剂盒检测caspase-3的活化情况。结果正常对照组、对照组、scrODN组PPARβmRNA及其蛋白质的表达水平相近;asODN组则明显下降。正常对照组、scrODN组及asODN组凋亡核百分率低下,存活细胞数较多,caspase-3活性也处于低水平。TNF-α组、scrOON TNF-α组凋亡核百分率分别为(33．1±2．7)％、(32．9±3．0)％,存活细胞数较少,caspase-3活性较高;asODN TNF-α组凋亡核百分率增至(58．8±4.6)％,且存活细胞数、caspase-3活性分别明显低于和高于前2组(P<0．05)。结论PPARβasODN能促进TNF-α介导的HaCaT细胞凋亡。     

可溶性酪氨酸激酶2融合蛋白对肿瘤坏死因子α诱导腹膜血管内皮细胞新生血管能力的影响

目的观察可溶性酪氨酸激酶2融合蛋白（sTie-2-Fc）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导腹膜血管内皮细胞新生血管能力的影响，及探讨TNF-α促进血管新生的机制。方法观察原代培养的人腹膜微血管内皮细胞经TNF-α作用后在基底膜基质（Matrigel）上形成管状结构的能力；在transwell板上迁移能力；对异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）通透性的改变；以及用sTie-2-Fc干预后细胞上述功能的改变。结果TNF-α组与对照组相比，内皮细胞形成管状结构数显著增多[（70±7）个，4个视野比（17±4）个，4个视野，P〈0．05]；TNF-α＋sTie-2-Fc组[（40±6）个，4个视野]比TNF-α组管状结构数显著减少（P〈0．05）；sTie-2／Fc组和对照组间细胞管状结构数差异无统计学意义。TNF-α促进内皮细胞迁移能力可被sTie-2-Fc拮抗[（198±12）个／HP比（76±11）个／HP，P〈0．05]。对照组和sTie-2-Fc组间通透性差异无统计学意义；与对照组和sTie-2-Fc组比较，TNF-α组和TNF-α＋sTie-2-Fc组细胞通透性显著增加（P〈0．05），但两组间细胞通透性差异也无统计学意义。结论TNF-α促进腹膜血管新生与血管生成素及其受体有关。     

恶性梗阻性黄疸经皮肝穿刺胆管内外引流术前后T淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子变化及其意义

目的探讨经皮肝穿刺胭管内外引流术对恶性梗阻性黄疸（MOJ）患者免疫功能的影响。方法将我院2000年11月至2007年3月收治的108例恶性肿瘤致梗阻性黄疸患者按胆汁引流途径分成2组：外引流组52例，内引流组56例。分别于术前1d、术后1周检测肝功能、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）及细胞金疫功能指标，观察各指标术前术后的变化，与健康对照组进行比较。结果外、内引流总胆红素（TBIL）分别由术前（344．55±106．57）、（322．20±111．51）／μmolL降为术后1周的（291．57±104．47）、（284．73±105．96）／／L，两组总胆红素均较术前明显下降（P〈0．05），两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。TNF-α在外、内引流组分别由术前的（109．59±20．96）、（110．99±17．25）ng／L降为术后的（105．33±20．60）、（84．93±14．44）ng／L，内引流组较术前显著改善（P〈0．01）；内引流组患者术后外周血T淋巴细胞亚群（TLS）CD4^＋、CD3^＋、CD4^＋／CD8^＋值较术前明显增高，术后CD8^＋则明显低于术前（P〈0．05）；而外引流组TNF-α及外周血CD4^＋、CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋与术前比较，差异无统计学意义（P〉0．05），两组问存在明显差异。结论经皮肝穿刺胆道引流术是治疗恶性肿瘤致梗阻性黄疸有效的方法；恶性肿瘤致梗阻性黄疸时全身免疫功能低下，胆道内引流后细胞免疫功能显著改善。     

全反式维甲酸和三氧化二砷协同诱导胰腺癌细胞凋亡

目的研究与三氧化二砷（As2O2）具有协同效应治疗胰腺癌的药物。方法以胰腺癌细胞系SWl990为研究对象，观察5-氟尿嘧啶（5-Fu）、健择（Gemcitabine）和全反式维甲酸（AT—RA）与As2O3共同作用对细胞的影响。通过台盼蓝拒染法检测细胞生长和细胞活力，流式细胞仪检测AnnexinV或PI阳性细胞的含量，评价以上药物对细胞增殖和凋亡的作用。结果5-Fu和Gemcitabine与As2O3无协同效应。单独应用As2O3或ATRA均抑制SWl990细胞生长，不诱导细胞凋亡。其中，对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3组为（4．4±0．1）×10^5个／ml，ATRA组为（6．7±0．2）×10^5个／ml。但是，As203和ATRA共同处理SWl990细胞后，细胞生长明显抑制，并诱导细胞凋亡。对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3＋ATRA组为（3．3±0．1）×10^5个／ml；对照组细胞活力为（92，0±1．2）％，As2O3组为（90．0±1．3）％，ATRA组为（93．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（65．0±2．1）％；对照组Annexin V和PI阳性细胞的含量为（6．0±1．2）％，As2O3组为（11．0±3．3）％，ATRA组为（5．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（37．0±5．3）％。结论As2O3和ATRA可协同诱导胰腺癌细胞凋亡，两者联合应用可能作为胰腺癌辅助治疗的另一选择。     

烧伤残余创面的序贯性治疗

目的寻找烧伤残余创面序贯性治疗的有效方法。方法选择烧伤残余创面患者25例，采取自身对照，分别以凡士林油纱（A组）、组织工程全层皮肤（HTAS，B组）覆盖创面，用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS（C组）。取创面标本检测细菌量、肿瘤坏死因子（TNF）α含量及基质金属蛋白酶（MMP）13mRNA表达水平，计算创面愈合率。结果治疗后第3、6、9、12天，患者C组创面细菌量分别为（5．30±1．60）、（1．30±0．80）、（1．70±0．60）和（0．60±0.10）集落形成单位（CFU）／ml，显著低于A、B组（P＜0．01）。C组创面经治疗后6d，TNF-α．含量和MMP-13mRNA表达水平分别为（0．650±0．040）ng／mg、0．210±0．010，明显低于A组[（1．550±0．370）ng／mg、1．040±0．050，P＜0．01]和B组[（0．810±0，080）ng／mg、0．640±0．030，P＜0．01]；B组肉芽组织TNF-α含量和MMP-13mRNA表达量显著低于A组（P＜0．01）。治疗后15、30d，C组创面愈合率明显高于A、B组（P＜0．01）。结论应用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS，可显著促进创面愈合，是一种有效的烧伤残余创面序贯性治疗方法。     

高密度脂蛋白对严重烫伤大鼠肺功能的保护作用

目的了解高密度脂蛋白（HDL）对严重烫伤大鼠肺功能的作用及其机制。方法将Wistar大鼠分为对照组（15只）、烫伤组（60只）和HDL组（60只）。对照组大鼠不作处理；其余2组均造成30％TBSAIII度烫伤，伤后常规补液，其中HDL组伤后立即经尾静脉注入HDL（80mg／kg）。检测2组烫伤大鼠伤后12、24、48、72h血清胞间黏附分子1（ICAM—1）及肿瘤坏死因子α（TNF—α）的含量，并检测其动脉血二氧化碳分压（PCO2）氧分压（PO2）；观察大鼠伤后各时相点肺组织病理学变化。另检测对照组上述指标。结果与对照组比较，烫伤组大鼠伤后各时相点ICAM—1、TNF—α的含量及PCO，均显著升高（P〈0．05或P〈0．01），PO，显著降低（P〈0．05）。HDL组上述指标与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；但与烫伤组比较，各时相点ICAM—1、TNF—α含量均显著降低（P〈0，05或P〈0．01）。伤后48h，烫伤组ICAM-1、TNF—α分别为（3．42±0．25）μg／L、（4．04±0．28）ng／L，明显高于HDL组[（2．24±0．14）μg／L、（3．35±0．22）ng／L，P〈0．05或P〈0．01]。烫伤组大鼠伤后48h肺小血管周围炎性细胞浸润，肺内血管扩张出血，部分小血管管腔内红细胞淤滞凝集，形成“假血栓”；肺毛细血管内皮细胞连接松弛，内皮细胞水肿。HDL组肺内小血管周围炎性细胞浸润明显减轻；肺毛细血管内皮细胞连接较紧密。结论HDL对严重烫伤大鼠肺功能具有保护作用，可能与其抑制ICAM—1、TNF—α表达有关。     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。     

过氧化物酶体增殖物激活受体对小鼠肝细胞生长周期的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物对小鼠原代肝细胞生长周期的影响和配体过氧化物酶体增殖物激活受体（proxisome proliferators—activated receptor，PPAR）alpha在肝癌形成过程中的变化。方法 在小鼠原代肝细胞中加入PPAR配体Wy-14，643，经不同培养时间后，应用流式细胞仪、逆转录-聚合酶链反应及Western blot等方法检测细胞增殖和凋亡，细胞周期蛋白p21WAFI、cyclinD1的mRNA及蛋白的变化情况。结果 在小鼠原代肝细胞中加入Wy-14，643培养2、4、6d，S＋G2／M期细胞比例分别为（42．3±1．2）％，（50．3±2．1）％，（52．1±2．3）％，细胞凋亡率分别（9．0±0．2）％，（7．9±2．O）％，（7．4±1．3）％，与未加药组相比，细胞增殖明显增高（P〈0．05），凋亡明显减少（P〈0．05）；各加药组cylinD1 mRNA和蛋白的表达也比对照组明显增高（P〈0．05）；各加药组p21^WAF1 mRNA与对照组相比表达无显著变化（P〉0．05），第4天开始出现p21^WAF1。蛋白的表达显著增加（P〈0．05）。结论 过氧化物酶体增殖物通过其配体PPARα引起细胞周期蛋白的改变，导致正常细胞周期信号的传导紊乱，引起细胞异常的增殖和凋亡，从而有可能诱发肿瘤。     

异丙酚对肿瘤坏死因子-α诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的研究异丙酚对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法脊髓神经元取自孕14d胎龄小鼠的胎鼠，于含B27的神经细胞培养基中培养7d后，随机分为6组：对照组（Con组）；50μmol／L异丙酚组（P50组）；TNF-α组（TNF-α组）；25μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P25＋TNF-α组）；50μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P50＋TNF-α组）；100μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P100＋TNF-α组），各组中加入相应终浓度的异丙酚孵育30min，再加入TNF-α至终末浓度为2000U／ml，培养24h后，采用碘化丙锭／Hoechst 33342双染法检测细胞凋亡，计算细胞凋亡率，采用免疫细胞化学方法测定Bcl-2表达。结果与Con组比较，TNF-α组神经元凋亡率升高，Bcl-2表达降低（P〈0．01），不同浓度异丙酚预先给药可减弱TNF-α诱导的上述改变（P〈0．05）。结论异丙酚可抑制TNF-α诱导小鼠脊髓神经元的凋亡，其机制与上调Bcl-2表达有关。     

干扰素-α诱导肾癌细胞胸苷磷酸化酶表达对5-FU化疗敏感性的影响

目的 探讨干扰素-α诱导肾癌细胞胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase，TP）表达对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的影响。方法采用不同浓度的干扰素-α2b处理肾癌细胞株786—0，应用RT—PCR和免疫印迹方法分别检测TP mRNA和TP蛋白水平变化。MTT法检测不同处理组786—0细胞中5-FU的半数抑制浓度（IC50）。建立肾透明细胞癌移植瘤动物模型，观察干扰素-α2b联合5-FU化疗对移植瘤生长的影响，免疫组化检测移植瘤中TP的表达，TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡。结果 干扰素-α2b3000和6000IU／ml处理组，TP mRNA表达量（灰度峰值）分别为0．5733±0．0231和0．8233±0．0404，TP蛋白表达量分别为0．6347±0．0719和0．8735±0．0640。干扰素-α对TP的表达有剂量依赖性增强作用（P〈0．01）。在干扰素-α2b作用下，5-FU对786—0半数抑制浓度由（13．9467±3．7140）μmol／L下降至（5．3200±0．1039）μmol／L，化疗敏感性增加（P〈0．01）。联合用药组移植瘤体积为（0．0940±0．0492）cm^3，小于单纯5-FU组的（0．5424±0．1591）cm^3（P〈0．05）。单纯5-FU组和联合用药组移植瘤中肿瘤细胞凋亡指数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 干扰素-α2b诱导的TP增强表达参与了干扰素-α联合5-FU化疗增效作用，TP是干扰素-α2b的靶基因之。     

继发感染致急性坏死性胰腺炎病变加重的机制探讨

目的 探讨继发感染致急性坏死性胰腺炎病变加重的机制。方法 24只SD大鼠平均随机分成3组：对照组、坏死性胰腺炎（ANP）组、感染性坏死性胰腺炎（INP）组。8h后抽血测定血清淀粉酶、α-肿瘤坏死因子、白介素-1，并取胰腺组织行光镜、电镜检查和细菌培养。结果 （1）胰腺组织细菌培养阳性率：对照组为0（0／8）；ANP组为12．5％（1／8）；INP组为100％（8／8）。（2）光镜检查结果：对照组未见出血、坏死改变；ANP组可见出血，偶可见点灶状坏死，中等量炎细胞浸润；INP组出血常见，多见片状的坏死，大量炎细胞浸润。（3）电镜检查结果：对照组未见异常改变；ANP组可见分泌颗粒增多，粗面内质网轻度扩张；INP组可见分泌颗粒明显增多，粗面内质网扩张明显。（4）对照组、无菌性胰腺坏死（SNP）组、INP组的血清淀粉酶、α—TNF、IL-1检测结果分别为[（1903．8±224．6）U／L，（19．03±5．09）pg／ml，（7．73±0．92）pg／l]，[（9371．4±1451．8）U／L，（48．55±14．92）Pg／ml，（20．36±4．90）pg／l]，[（16980．0±2745．3）U／L，（131．40±39．17）pg／ml，（32．03±5．57）pg／l]，其中INP组和SNP组与对照组相比有显著升高（P〈0．01），INP组比SNP组有明显升高（P〈0．01）。结论 （1）继发感染可导致无菌性胰腺坏死病变明显加重；（2）以促炎细胞因子过度分泌为特征的全身炎症反应可能是继发细菌感染致无菌性胰腺坏死病变加重的主要机制之一。     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。     

靶向IGF-1R的siRNA表达载体的构建及其对肺癌细胞的促凋亡作用

目的构建IGF-1R的siRNA表达载体，并观察其在人肺腺癌A549中对IGF-1R表达抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法设计并构建了pENTR／U6-shRNA-1和pENTR／U6-shRNA-2，同时设计并构建了pENTR／U6-shRNA—luc作为对照，转染A549细胞，48h后检测IGF-1R表达及分析细胞凋亡情况。结果相对于对照组，pENTR／U6-shRNA-1和pENTR／U6-shRNA-2转染组IGF-IR mRNA的表达量分别为（22．1±2．5）％和（80．1±3．9）％，蛋白的表达分别为（15．2±3．1）％和（47．1±4．1）％，组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。pENTR／U6-shRNA-1转染组抑制了Akt的磷酸化，增加了3％乙醇诱导的细胞凋亡作用，并使77．5％细胞停留在G0／G1期。结论IGF-1R的siRNA表达载体能有效地抑制IGF-1R的表达和诱导细胞凋亡。     

马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响

目的：观察中药马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响。方法：在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol／L硝普钠（SNP）、2mmol／LSNP＋马钱子、10mol／L全反式维甲酸（ATRA）、10mold／L ATRA＋马钱子；在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30ng／L肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、TNF—α＋马钱子，各组培养24h后，采用Annexin V／PI双参数法对软骨细胞凋亡进行定量检测。结果：软骨细胞在加入SNP、ATRA、TNF—α发生凋亡时，加入马钱子能降低SNP、ATRA诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0．01，P〈0．05），但对TNF—α诱导的软骨细胞凋亡，无明显抑制作用（P〉0．05）。结论：中药马钱子对部分软骨细胞凋亡有一定抑制作用。     

热休克因子1基因转染对烧伤血清刺激的巨噬细胞炎性介质表达的影响

目的了解外源性热休克因子1（HSF1）对烧伤血清刺激的巨噬细胞中相关炎性介质基因表达的影响。方法制备严重烧伤和正常大鼠血清；构建pcDNA3．1／HSF1重组载体。将培养的RAW264．7巨噬细胞株转染（具体分为：未转染、转染空载体、转染重组载体）后再分别使用前述2种血清刺激。另取部分未行血清刺激的转染重组载体的巨噬细胞，用蛋白质印迹法检测其HSF1蛋白表达水平；反转录-PCR法检测经血清刺激的细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和白细胞介素10（IL-10）基因表达水平。结果已转染重组载体的细胞株较稳定，检出有HSF1部分活化。反转录-PCR检测到，未转染的正常血清刺激的巨噬细胞中TNF—α、HMGB1、IL-10的基因仅有少量表达，而烧伤血清刺激能明显上调其基因表达（分别为0．910±0．100、0．860±0．020、0．430±0．010）；与转染空载体＋烧伤血清组（上述3项指标分别为0．800±0．050、0．880±0．030、0．420±0．010）比较，转染重组载体＋烧伤血清组可明显抑制巨噬细胞中TNF—α和HMGB1的基因表达并上调IL-10的基因表达（分别为0．130±0．100、0．450±0．020、0．450±0．020）。结论严重烧伤后给予HSF1可以抑制巨噬细胞产生的某些促炎介质的表达，适当上调某些抗炎介质的表达，对机体发挥保护作用。     

替普瑞酮对大鼠梗阻性肾病间质纤维化的影响

目的探讨替普瑞酮（GGA）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响和可能机制。方法15只SD大鼠随机分成3组：假手术组、UUO模型组和GGA治疗组，每组5只。从建立UUO模型前1d开始，GGA治疗组和模型组分别给予400mg／kgGGA和溶媒（0．05％阿拉伯树胶＋0．008％维生素E）灌胃，每天1次，术后第7天处死大鼠。常规染色观察肾脏组织病理改变。间接免疫荧光和Western印迹检测肾脏E-钙黏蛋白（E—cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。TUNEL染色和PCNA免疫组织化学染色分别观察肾小管上皮细胞的凋亡和增生情况。结果GGA能诱导肾脏特异性高表达热休克蛋白72（HSP72）。与UUO模型组相比，GGA治疗组肾小管损伤和肾问质纤维化的程度明显减轻『肾小管损害百分比（48．7％±1．3％比65．8％±7．3％）；肾间质损害分值（0．40±0．08比1．36±0．50），P均〈0．05】；E—cadherin蛋白水平增加，α-SMA蛋白水平降低（P均〈0．05）；每高倍视野中TUNEL阳性和PCNA染色阳性的细胞数显著减少（分别为6．78±1．25比2．81±0．63，57．61±5．42比17．66±1．38，P均〈0．05）。结论GGA可能通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡，延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程。     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体在烧伤大鼠胸腺组织中的表达

目的 了解肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）及其受体在严重烧伤大鼠胸腺组织细胞异常凋亡中的作用。方法 将50只Wistar大鼠随机分为假伤组（模拟烧伤）lO只和烧伤组40只（设伤后4、12、24、48h 4个时相点）。应用膜联蛋白A5-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶双染法，观察大鼠胸腺组织中细胞凋亡的情况；反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测TRAIL的死亡受体5（DR5）、DR4、诱骗受体1（DcR-1）、DcR2在大鼠胸腺组织中的表达。结果 与假伤组大鼠细胞凋亡率[（6．7±0．8）％]比较，烧伤组于伤后4h[（17．1±0．4）％]起增高，12h时[（25．2±1．1）％]达高峰，48h时仍明显高于假伤组（P〈0．05）。烧伤组大鼠胸腺组织中DR5的表达显著高于假伤组，DcR2的表达则显著低于假伤组；其余受体的表达组间相似。结论 严重烧伤后早期大鼠胸腺组织的细胞凋亡明显增加，且胸腺组织中DR5和DcR2的表达异常，提示TRAIL凋亡途径可能参与了病理性细胞凋亡过程。