微管干预剂对大鼠缺氧心肌细胞能量生成的影响

目的 了解缺氧条件下微管干预剂对大鼠心肌细胞能量生成的影响。方法 常规分离、培养大鼠心肌细胞，分为单纯缺氧组、缺氧＋秋水仙碱（微管解聚剂）组及缺氧＋5、10、15 mmol／L紫杉醇（微管稳定剂）组。每组细胞加入刺激剂后，缺氧培养0．5、1．0、3．0、6．0、12．0、24．0h。采用锥虫蓝染色检测细胞死亡率，常规比色法检测细胞肌酸激酶（CK）活性，高效液相色谱法检测细胞腺苷三磷酸（ATP）及腺苷二磷酸（ADP）含量。结果 （1）缺氧＋秋水仙碱组及缺氧＋15mmol／L紫杉醇组细胞培养1．0～24．0h死亡率均高于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋5、10mmoL／L紫杉醇组6．0～24．0h时均低于单纯缺氧组（P〈0．05）。（2）缺氧＋秋水仙碱组培养1．0～12．0h时CK活性均高于单纯缺氧组（P〈0．01）。0．5～12．0h时，缺氧＋15mmoL／L紫杉醇组CK活性均高于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋5、10mmol／L紫杉醇组低于单纯缺氧组（P〈0．05或P〈0．01）。（3）缺氧＋5mmol／L紫杉醇组培养0．5～6．0h ATP含量[（49．9±2．8）、（40．7±2．0）、（25．8±1．9）、（19．1±1．2）μg／10^6个细胞]高于单纯缺氧组[（42．9±5．8）、（29．5±1．8）、（18．2±0．9）、（14．1±0．7）μg／10^6个细胞，P〈0．05或P〈0．01]。0．5～12．0 h时，缺氧＋秋水仙碱组低于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋15mmol／L紫杉醇组低于单纯缺氧组及缺氧＋10mmol／L紫杉醇组（P〈0．01）。各组ADP含量变化趋势与ATP相反。结论 微管解聚剂和高浓度微管稳定剂可使缺氧心肌细胞ATP含量锐减。适宜浓度的微管稳定剂在缺氧早期可促进心肌细胞能量生成，对心肌具有保护作用。     

缺氧早期大鼠心肌细胞微管损害的观察

目的 了解缺氧早期心肌细胞微管损害程度。方法将分离培养的Wistar大鼠心肌细胞分为正常组、缺氧组（建立缺氧细胞模型并设缺氧10、20、30、60min为观察时相点）。用激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察2组细胞微管分布、形态变化，对微管蛋白荧光强度进行半定量分析．用蛋白质印迹法检测2组细胞游离d微管蛋白的表达。结果 与正常组比较，缺氧10min后，缺氧组细胞微管念珠状结构消失，但排列尚有规律、数量无明显减少；缺氧20min不仅念珠状结构消失，而且微管排列散乱，远离胞核区出现微管缺失；缺氧30、60min时微管发生扭曲、断裂，纹理紊乱，完全丧失规律性。缺氧组心肌细胞微管蛋白荧光强度较正常组下降，且随缺氧时间延长愈加明显；缺氧组心肌细胞内游离的α微管蛋白表达（缺氧10min为46644±145）高于正常组（13357±98），两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01），随缺氧时间的延长此升高趋势愈加明显。结论在缺氧状态下，心肌细胞微管发生解聚时间较早，其结构和分布规律被破坏。微管解聚在缺氧所致心肌细胞早期病理损害中的作用值得深入研究。     

槲皮素和黄芪甲苷对大鼠缺氧心肌细胞的保护作用

目的 了解并比较槲皮素、黄芪甲苷对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用，寻找其作用的量效关系。方法 将SD乳鼠心肌细胞分成单纯缺氧组（A组）、缺氧＋100mg／L槲皮素组（B组）、缺氧＋50mg／L槲皮素组（c组）、缺氧＋25mg／L槲皮素组（D组）、缺氧＋50．0mg／L黄芪甲苷组（E组）、缺氧＋25．0131mg／L黄芪甲苷组（F组）、缺氧＋12．5mg／L黄芪甲苷组（G组）、缺氧＋10mg／L维生素E组（H组）。各组细胞原代培养后先加入相应浓度的槲皮素、黄芪甲苷、维生素E，再行缺氧处理12h（A组培养后直接行缺氧处理）。检测各组心肌细胞活力和乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS，只检测A、C、F、H组）值。结果B～G组与A组比较，LDH、MDA、ROS（C、F组）值下降，心肌细胞活力、SOD值上升，作用普遍优于H组。在同等高、中、低浓度下，加入黄芪甲苷组的心肌细胞活力和LDH水平总体优于加入槲皮素组（如C、F组的心,肌细胞活力为0．454±0．018、0．471±0．017，LDH为2800±9、2312±52），但两组MDA、SOD和ROS值比较，差异无统计学意义（C、F组的ROS为16．0±5．3、22．4±8．7，P〉0．05）。结论 黄芪甲苷、槲皮素能有效保护缺氧心肌细胞，减轻损伤程度，其作用优于维生素E。黄芪甲苷的保护作用较槲皮素更好，但两者减轻细胞脂质过氧化损伤的作用差异不明显。     

低温氧合血微流量持续灌注保存大鼠心脏的效果

目的探讨低温氧合血微流量持续灌注保存大鼠心脏的效果。方法切取Wistar大鼠心脏，随机分为3组，实验组的心脏以4℃氧合血微流量（1ml／h）持续灌注低温保存10h；对照组的心脏以4℃St．Thomas液微流量持续灌注低温保存10h；单纯冷保存组的心脏以4℃St．Thomas液单纯浸泡保存10h。保存后的鼠心用Langendorff装置灌注，生物机能实验系统测定血流动力学指标；高效液相色谱仪测定心肌细胞的ATP含量；光镜和电镜观察心肌组织和线粒体的形态学改变。结果在再灌注30min时，实验组的左心室收缩压（LVSP）为（38．25±3．84）mm Hg，左心室发展压（LVDP）为（32．54±4．01）mm Hg，左心室压力微分（±dp／dt）为（1080±123）mm Hg／s；对照组的LVSP为（34．48±4．68）mm Hg，LVDP为（19．27±4．63）mmHg，±dp／dt为（935±196）mmHg／s；单纯冷保存组的LVSP为（32．14±4．95）mmHg，LVDP为（16．99±4．85）mmHg，±dp／dt为（825±302）mmHg／s，实验组的上述血流动力学指标优于对照组和单纯冷保存组（P〈0．05）。实验组心肌细胞的ATP含量为（1．759±0．502）μmol／L，对照组的ATP为（1．453±0．573）μmol／L，单纯保存组的ATP为（1．059±0．463）μmol／L，实验组的ATP含量明显高于对照组和单纯冷保存组（P〈0．05）。实验组的心肌组织和细胞超微结构的变化轻于对照组和单纯冷保存组。结论低温氧合血微流量持续灌注能改善大鼠心脏的保存效果。     

心肌细胞缺氧引起微管结构破坏导致线粒体通透性转换孔开放的实验研究

目的观察缺氧引起的心肌细胞微管破坏能否导致线粒体通透性转换孔(MPTP)开放及其呼吸功能的变化情况。方法将原代培养的SD大鼠乳鼠同批心肌细胞随机分为对照组、缺氧组、常氧 解聚剂组、缺氧 稳定剂组。对照组常氧培养。常氧 解聚剂组加入8μmol/L秋水仙素室温平衡30 min后,与对照组一起行常氧培养。缺氧 稳定剂组加入10μmol/L紫杉醇室温平衡30 min后,和缺氧组一起行缺氧处理。检测对照组及其他组细胞处理0．5、1．0、3．0、6．0、12．0h后微管免疫荧光、MPTP的开放及线粒体内膜电位变化,噻唑蓝法测定线粒体的呼吸功能。结果处理0．5h,缺氧组和常氧 解聚剂组微管免疫荧光强度分别为(76．1±3．9)%、(74．8±5．O)%,微管发生明显破坏,MPTP开放,线粒体内膜电位损耗和细胞呼吸功能下降,且随着处理时间的延长,以上现象愈发显著。处理0．5h,缺氧 稳定剂组微管免疫荧光强度为(92．8±4．0)%,与对照组(100．0±0．0)%相近(P＞0．05)；随着处理时间的延长,该组各检测指标的改变程度均明显轻于缺氧组(P＜0．05或0．01)。结论缺氧可引起心肌细胞微管明显破坏,导致MPTP开放,进而影响线粒体的呼吸功能。微管解聚剂能较好地模拟缺氧引起的微管破坏；微管稳定剂则能有效地减轻缺氧引起的微管破坏,改善线粒体通透性转换及其呼吸功能。     

自制多器官保存液对肾皮质能量代谢的影响

目的寻找理想的器官保存液，以提高器官移植的长期疗效。方法应用高效液相系统（HPLC），检测自制多器官保存液（SMO液）和对照组（HC-A液和UW液）对犬肾低温保存中皮质腺苷酸含量改变的影响。取皮质标本匀浆、沉淀蛋白、离心，HPLC检测上清中腺苷酸含量，根据标准曲线方程和加样回收率计算ATP、ADP、AMP含量、比值和能荷（EC）。结果随保存时间延长，各组皮质腺苷酸含量下降；保存12、36、72h后SMO组皮质ATP含量（3．7±0．5、3．1±0．3、2．3±0．5nmol／mg蛋白）高于HC—A组（2．8±0．2、2．0±0．2、1．5±0．2nmol／mg蛋白），P〈0．05，SMO组EC（0．38±0．04、0．37±0．05、0．35±0．04）高于HCfA组（0．32±0．03、0．30±0．04、0．28±0．03），P〈0．05，在多数保存时点SMO组ADP、ATP／AMP高于HC—A组（P〈0．05），但2组间AMP、ATP／ADP比值差异无统计学意义（P〉0．05）；犬肾保存期间SMO组腺苷酸含量及EC与UW组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论低温保存期间SMO液能够维持皮质内较高的ATP和EC水平，减轻肾脏低温缺血损伤。     

自体骨髓细胞经门静脉移植治疗肝硬化与肝功能不全的临床研究

目的观察自体骨髓细胞经门静脉移植对肝硬化和肝功能不全的治疗效果。方法2005年2月至2006年6月在我科接受手术治疗的40例肝硬化门静脉高压症患者（脾切除、断流术或内镜食道曲张静脉套扎术）,被随机分为治疗组和对照组,每组20例。两组患者于术中埋置“门静脉导管-皮下药盒”,术后3-4周,治疗组经移植通道输注自体骨髓细胞,而对照组只输注生理盐水。在第1次输注后每隔1个月再重复进行输注,共输注3次。第3次输注后1个月进行疗效评价。结果（1）两组恢复均顺利,未发现与移植操作有关的不良反应或并发症。（2）丙氨酸转氨酶、总胆红素、白蛋白和凝血酶原时间：治疗组分别由（60±52）μmol／L、（26±15）μmol／L、（33±5）μmol／L和（18±2）s变为（26±15）μmol／L、（14±8）μmol／L、（41±3）μmol／L和（12±2）s（P〈0．01）;对照组分别由（47±37）μmol／L、（22±23）μmol／L、（35±4）μmol／L和（18±4）s变为（65±51）μmol／L、（19±42）μmol／L、（35±4）μmol／L和（18±4）s（P〉0．05）;治疗组优于对照组（P〈0．01）。（3）血清透明质酸和前胶原Ⅲ肽：治疗组分别由（188±160）ng／ml和（13±18）ng／ml变为（104±80）ng／ml和（8±9） ng／ml（P〈0．05）;对照组分别由（79±193）ng／ml和（10±16）ng／ml变为（136±187）ng／ml和（9±17）ng／ml（P〉0．05）;治疗组亦优于对照组（P〈0．01）。结论自体骨髓细胞经门静脉移植可改善肝功能和肝纤维化血清学指标。     

奥美拉唑对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响

目的观察奥美拉唑对大鼠减体积肝移植肝细胞再生的影响。方法建立大鼠减体积肝移植模型，实验组移植后即时给予奥美拉唑，对照组予生理盐水。两组分别于肝移植术后分为5组（n=8），观察术后3、5、7、10、14d血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶值、移植肝重／供肝减体积前全肝重比值、移植肝细胞有丝分裂指数（MI）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达指数、溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入指数及血清胃泌素值。结果大鼠减体积肝移植术后5d肝细胞再生达高峰，实验组的再生活性显著高于对照组，MI为（2．54±0．24）％和（1．71±0．16）％（P〈0．01）、PC—NA指数为（26．96±2．09）％和（18．73±1．94）％（P〈0．01）、BrdU指数为（10．24±1．11）％和（5．75±0．88）％（P〈0．01）。术后7d，实验组和对照组移植肝重／全肝重比值分别为（76．3±1．6）％和（71．2±1．0）％（P〈0．05），血清胃泌素水平分别为（441．9±25．9）ng／L和（292．9±14．2）ng／L（P〈0．05）。术后14d，实验组和对照组移植肝重／全肝重比值分别为（94．5±1．7）％和（86．9±1．5）％（P〈0．01），血清胃泌素水平分别为（487．8±29．4）ng／L和（291．7±21．6）ng／L（P〈0．01）。实验组和对照组血清ALT、AST值差异无统计学意义。结论奥美拉唑能促进减体积肝移植术后的肝细胞再生，其作用可能与胃泌素分泌增高有关。     

烧伤残余创面的序贯性治疗

目的寻找烧伤残余创面序贯性治疗的有效方法。方法选择烧伤残余创面患者25例，采取自身对照，分别以凡士林油纱（A组）、组织工程全层皮肤（HTAS，B组）覆盖创面，用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS（C组）。取创面标本检测细菌量、肿瘤坏死因子（TNF）α含量及基质金属蛋白酶（MMP）13mRNA表达水平，计算创面愈合率。结果治疗后第3、6、9、12天，患者C组创面细菌量分别为（5．30±1．60）、（1．30±0．80）、（1．70±0．60）和（0．60±0.10）集落形成单位（CFU）／ml，显著低于A、B组（P＜0．01）。C组创面经治疗后6d，TNF-α．含量和MMP-13mRNA表达水平分别为（0．650±0．040）ng／mg、0．210±0．010，明显低于A组[（1．550±0．370）ng／mg、1．040±0．050，P＜0．01]和B组[（0．810±0，080）ng／mg、0．640±0．030，P＜0．01]；B组肉芽组织TNF-α含量和MMP-13mRNA表达量显著低于A组（P＜0．01）。治疗后15、30d，C组创面愈合率明显高于A、B组（P＜0．01）。结论应用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS，可显著促进创面愈合，是一种有效的烧伤残余创面序贯性治疗方法。     

热休克蛋白90对大鼠缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的探讨内源性热休克蛋白90（HSP90）在缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）相关信号通路中的作用。方法建立新生Wistar大鼠心肌细胞缺氧模型，将细胞分为正常组、缺氧组、加入HSP90特异性阻断剂格尔德霉素后再缺氧组（格尔德霉素＋缺氧组）。于缺氧后1、3、6、12、24、48h用噻唑蓝法检测心肌细胞的活力；缺氧24h，原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数（AI）；缺氧1、3、6、12、24h，蛋白质印迹法检测大鼠心肌细胞中内源性HSP90及AKT表达水平。结果（1）缺氧24、48h，缺氧组、格尔德霉素＋缺氧组细胞活力均较正常组明显下降（P〈0．05）；格尔德霉素＋缺氧组细胞活力缺氧12h即开始明显下降，缺氧48h时明显低于缺氧组（P〈0．05）。（2）缺氧24h，缺氧组细胞AI为（10．7±1．2）％，明显高于正常组[（1．9±0．3）％．P〈0．05]；格尔德霉素＋缺氧组细胞AI为（26、3±5．3）％，明显高于缺氧组（P〈0．01）。（3）缺氧12h，缺氧组心肌细胞内源性HSP90及AKT表达水平高于正常组与格尔德霉素＋缺氧组；缺氧24h，缺氧组有所下降．格尔德霉素＋缺氧组则下降更明显。结论内源性HSP90对维持心肌细胞的活力有重要作用．缺氧心肌细胞AKT表达水平可受内源性HSP90表达水平的影响。     

微管干预剂对缺氧心肌细胞糖酵解途径关键酶的影响

目的 了解微管干预剂对缺氧心肌细胞糖酵解途径关键酶的影响. 方法体外培养心肌细胞,分为单纯缺氧组、缺氧+微管解聚剂(秋水仙碱)组、缺氧+低浓度微管稳定剂组、缺氧+中浓度微管稳定剂组、缺氧+高浓度微管稳定剂组,后3组加入的微管稳定剂为紫杉醇,浓度分别为5、10、15 μmol/L.采用激光共聚焦显微镜观察微管形态学变化,检测细胞活力及己糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶、乳酸脱氢酶的活性. 结果缺氧+微管解聚剂组和缺氧+高浓度微管稳定剂组心肌细胞微管结构破坏显著,细胞活力亦明显下降[缺氧1.0 h,2组细胞活力分别为(89.99±3.47)%、(84.56±6.61)%,明显低于单纯缺氧组(97.44±1.76)%(P<0.01)],前3种酶的活性亦明显降低;缺氧+低浓度微管稳定剂组前3种酶的活性与单纯缺氧组基本近似;缺氧+中浓度微管稳定剂组微管结构损伤显著轻于其他组,前3种酶的活性于缺氧6.0 h内高于单纯缺氧组.缺氧后各组乳酸脱氢酶活性升高. 结论适当浓度的微管稳定剂能明显减轻微管结构损伤,促使缺氧早期心肌细胞糖酵解酶活性增强.     

Increased vulnerability of brain mitochondria in diabetic (Goto-Kakizaki) rats with aging and amyloid-beta exposure

This study evaluated the respiratory indexes (respiratory control ratio [RCR] and ADP/O ratio), mitochondrial transmembrane potential (DeltaPsim), repolarization lag phase, repolarization level, ATP/ADP ratio, and induction of the permeability transition pore of brain mitochondria isolated from normal Wistar and GK diabetic rats of different ages (1.5, 12, and 24 months of age). The effect of amyloid beta-peptides, 50 micromol/l Abeta(25-35) or 2 micromol/l Abeta(1-40), on mitochondrial function was also analyzed. Aging of diabetic mice induced a decrease in brain mitochondrial RCR, ADP/O, and ATP/ADP ratios but induced an increase in the repolarization lag phase. Brain mitochondria from older diabetic rats were more prone to the induction of the permeability transition pore, i.e., mitochondria from 24-month-old diabetic rats accumulated much less Ca(2+) (20 micromol/l) than those isolated from 12-month-old rats (50 micromol/l) or 1.5-month-old rats (100 micromol/l). In the presence of 50 micromol/l Abeta(25-35) or 2 micromol/l Abeta(1-40), age-related mitochondrial effects were potentiated. These results indicate that diabetes-related mitochondrial dysfunction is exacerbated by aging and/or by the presence of neurotoxic agents such as amyloid beta-peptides, supporting the idea that diabetes and aging are risk factors for the neurodegeneration induced by these peptides.     

成体大鼠心肌细胞微管解聚对线粒体分布及能量代谢的影响

目的 了解成体大鼠心肌细胞微管解聚对线粒体分布、线粒体活性及细胞能量代谢的影响. 方法 分离培养成体SD大鼠及SD大鼠乳鼠心肌细胞,按随机数字表法分为:大(乳)鼠对照组(常规培养,不加任何刺激因素)、大(乳)鼠微管解聚剂组(用含终浓度8μmol/L秋水仙碱的培养液培养,作用30 min).(1)用蛋白质印迹法检测各组大鼠和乳鼠心肌细胞聚合态β微管蛋白表达量.(2)取2组大鼠心肌细胞,用蛋白质印迹法检测细胞色素c表达量;免疫荧光染色法观察细胞聚合态β微管蛋白、电压依赖型阴离子通道(VDAC)分布情况;免疫细胞化学法检测细胞线粒体内膜电位;噻唑蓝法测量细胞活性;采用高效液相色谱法,检测细胞ATP、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)含量及能荷. 结果 (1)聚合态β微管蛋白表达量:大鼠微管解聚剂组为0.52±0.07,较大鼠对照组1.25±0.12明显减少(F=31.002,P=0.000);乳鼠微管解聚剂组为0.76±0.12,较乳鼠对照组1.11±0.24显著减少(F=31.002,P=0.000),但明显高于大鼠微管解聚剂组(F=31.002,P=0.009).(2)细胞色素c表达量:大鼠对照组为0.26±0.03,明显低于大鼠微管解聚剂组(1.55±0.13,t=-24.056,P=0.000).(3)免疫荧光染色:大鼠对照组心肌细胞微管多呈线性管状、与心肌纤维平行分布;VDAC着色显示线粒体呈颗粒状与微管同向分布.大鼠微管解聚剂组微管正常排列规律被破坏,表现为免疫荧光强度减弱,微管结构不清晰、连续性丧失、粗糙;线粒体分布散乱.(4)线粒体内膜电位:大鼠对照组荧光强度为1288±84,明显高于大鼠微管解聚剂组(331±27,t=26.508,P=0.000).(5)细胞活性:大鼠对照组吸光度值为1.75±0.11;大鼠微管解聚剂组为0.81±0.07,较前者明显降低(t=17.348,P=0.000).(6)能量代谢:与大鼠对照组比较,大鼠微管解聚剂组心肌细胞ATP含量下降,ADP、AMP含量上升,ATP/ADP值与能荷均降低. 结论 在正常成体大鼠心肌细胞内,微管与线粒体分布方向一致.微管解聚后心肌细胞线粒体排列紊乱,细胞色素c从线粒体漏出,线粒体内膜电位下降、能量供应降低,细胞活性下降.     

内毒素/脂多糖对烫伤大鼠休克期肝脏脂肪代谢的影响

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)对烫伤大鼠休克期肝脏脂肪代谢的影响。方法采用30%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,随机分为单纯烫伤组(烫伤组)和烫伤后LPS攻击组(攻击组),另设假烫对照组(对照组),每组20只。攻击组大鼠于烫伤后2h腹腔注射LPS,3.0mg/kg.伤后24、48h分别检测3组大鼠血浆LPS、肿瘤坏死因子(TNF)α、游离脂肪酸(FFA)含量和肝组织内腺苷三磷酸(ATP)、甘油三酯(TG)及丙二醛(MDA)含量,并进行肝组织形态学观察。结果对照组大鼠假烫后24、48h,血浆FFA水平分别为(0.4±0.3)、(0.5±0.3)mmol/L,烫伤组分别为(0.9±0.3)、(1.2±0.5)mmol/L,攻击组大鼠伤后增加至(2.3±0.3)、(2.5±0.4)mmol/L,后两组之间比较差异有统计学意义(P<0.01).伤后48h,烫伤组和攻击组的肝组织TG含量分别为(242±27)mmol/g和(530±30)mmol/g,ATP含量分别为(6.0±2.4)μmol/g和(1.7±0.5)μmol/g,组间比较差异有统计学意义(P<0.01).组织形态学检查见,烫伤组大鼠肝细胞脂肪变性和线粒体损伤程度明显轻于攻击组,对照组肝细胞形态正常。结论烧伤后早期LPS打击可引发脂源性能量利用障碍,并加剧肝脏脂肪变性。     

吡那地尔对烫伤大鼠心肌线粒体结构及呼吸功能的影响

目的　观察吡那地尔预处理后对烫伤大鼠心肌线粒体结构及呼吸功能的影响。方法将75只健康Wistar大鼠随机分为对照组(9只,腹腔注射50μg/kg等渗盐水)、单烫组(33只,仅作烫伤)及预处理组(33只,腹腔注射吡那地尔50μg/kg后再作烫伤)。透射电镜观察3组大鼠心肌线粒体结构的变化,用生物氧特性微机测量分析系统检测大鼠线粒体的呼吸控制率,并检测大鼠心肌线粒体中丙二醛(MDA)和超氧阴离子的含量。　结果　伤后3h预处理组大鼠心肌线粒体病理损害程度较单烫组轻;伤后1—6h其呼吸控制率显著高于单烫组(P<0. 05或0. 01);MDA和超氧阴离子含量分别于伤后3、6h和伤后1、3、6h低于单烫组(P<0. 05或0. 01)。伤后3h预处理组MDA、超氧阴离子含量各为(0. 60±0. 09 )μmol/g、0. 127±0. 020, 明显低于单烫组( 0. 83±0. 07 )μmol/g、0 169±0. 015(P<0. 01).　结论　吡那地尔预处理对烫伤大鼠心肌产生了明显的保护作用,其机制可能与线粒体中对腺苷三磷酸敏感的钾离子通道提前开放有关。     

Heat shock preconditioning on mitochondria during warm ischemia in rat livers

BACKGROUND: The aim of this study was to investigate the effects of stress tolerance from heat shock preconditioning on changes in mitochondrial functions during ischemia-reperfusion injury of the liver. MATERIALS AND METHODS: Rats were divided into a heat shock group (group HS) and a control group (group C). In group HS, rats received heat shock pretreatment 48 h prior to ischemia-reperfusion. Heat shock pretreatment was performed in a water bath at 42 degrees C for 15 min under general anesthesia. In group C, the same treatment was done with the water bath at 37 degrees C instead of at 42 degrees C. A 30-min warm ischemia by cramping the hepatoduodinal ligament (Pringle's maneuver) followed by a 60-min reperfusion was administered to all rats. Changes in membrane potential of hepatic mitochondria (MPM); mitochondrial respiratory function before ischemia (n = 5), after ischemia (n = 10), and after reperfusion (n = 10); and ATP recovery after reperfusion were compared between the groups. RESULTS: After a 30-min ischemia, MPM in group C decreased significantly and did not recover even after reperfusion. On the other hand, MPM in group HS was maintained even after a 30-min ischemia and 60 min into reperfusion as well. The respiratory control ratio (RCR) of the mitochondria in group C decreased to as low as 5.06 +/- 0.72 after a 30-min ischemia, but in group HS, RCR was maintained near a normal level. The ATP level recovered significantly earlier in group HS than in group C after reperfusion. CONCLUSIONS: Heat shock preconditioning of the liver protected mitochondria from loss of membrane integrity during ischemia and contributed to their ability to produce energy-rich phosphates during reperfusion.     

Amelioration of intestinal ischemia-reperfusion injury with intraluminal hyperoxygenated solution: studies on structural and functional changes of enterocyte mitochondria

BACKGROUND: The aim of this study was to investigate the effects of intraluminal hyperoxygenated solution (HOS) on enterocyte mitochondrial structure and respiratory function after intestinal ischemia-reperfusion (IR) in rabbits. MATERIALS AND METHODS: Thirty-two rabbits were divided randomly into four groups: control group in which sham operation was performed (Sham group), ischemia-reperfusion group (IR group), and two HOS treatment groups (H1 group and H2 group). Intestinal IR model was produced by clamping superior mesenteric artery (SMA) with an atraumatic vascular clamp for 1 h, followed by reperfusion for 2 h. Animals in the H1 group and H2 group received intraluminal HOS infusion for 1 h immediately after occlusion of SMA, and the rates of infusion were 10 and 20 mL/kg.h, respectively. After 2 h of reperfusion, enterocyte mitochondria morphological quantitative analysis was made with electron microscopy and biogenetics stereology, and the following parameters, including mitochondrial respiratory control ratio (RCR), intestinal O(2) extraction ratio (ER), and mucosal ATP contents, were measured, respectively. RESULTS: After IR, the mitochondria was severely swollen with broken cristae, and mean transaction area, diameter, surface density, and volume density of the mitochondria increased significantly. Meanwhile, specific surface and numeral density of the mitochondria decreased significantly. The mitochondrial RCR, intestinal O(2) ER, and mucosal ATP contents were all decreased significantly. There were no differences in all parameters between the IR group and H1 group. In the H2 group, the mitochondria were slightly swollen, and mean transaction area, diameter, surface density, and volume density of the mitochondria were all significantly lower, with the specific surface and numeral density of the mitochondria significantly higher compared with the IR group. The mitochondrial RCR, intestinal O(2) ER and mucosal ATP contents in H2 group were all significantly higher than those in IR group. CONCLUSIONS: Intraluminal HOS infusion at 20 mL/kg.h during ischemia ameliorates structural and functional changes of enterocyte mitochondria associated with intestinal IR injury, which is a safe, simple, and effective measure to protect the intestine from IR injury.