严重烧伤大鼠肾脏细胞凋亡及其机制的研究

目的探讨严重烧伤大鼠肾脏细胞凋亡的分子机制。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为烧伤组和对照组,每组25只。烧伤组造成30％TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤),伤后创面涂碘伏抗感染,并于伤后6 h抽取大鼠静脉血后处死,留取肾脏标本。对照组除不烫伤外,其余处理同烧伤组。采用原位缺口末端标记法检测两组大鼠肾脏细胞凋亡率。流式细胞术检测肾脏细胞中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)各受体的mRNA及蛋白表达水平。同时检测大鼠血浆尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。结果烧伤组大鼠肾脏细胞的凋亡率为(32．4±1．1)％,明显高于对照组[(1．0±0．6)％,P<0．05];而大鼠肾脏组织中TRAIL诱骗受体DcR1的mRNA及蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0．05)。伤后6 h,烧伤组大鼠BUN值[(13．3±2．0)nmol/L]及Cr值 [(76．4±2．0)μmol/L]均明显高于对照组[(5．2±0．7)mmol/L、(40．2±2．8)μmol/L,P<0．05]。结论 TRAIL凋亡通路可能参与介导了严重烧伤大鼠肾脏细胞的凋亡。     

TRAIL受体在胰腺癌中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在胰腺癌中的表达及意义。方法 应用半定量RT～PCR法检测TRAIL受体（死亡受体DR4、DR5和诱骗受体DcR1、DcR2）mRNA在胰腺癌组织及正常胰腺组织中的表达。结果 死亡受体DR4和DR5在所有胰腺癌组织和正常胰腺组织中均有表达，且在胰腺癌组织中的表达明显强于在正常胰腺组织中的表达（P〈0．01）。诱骗受体DcR1和DcR2在所有正常胰腺组织中均有表达，而在胰腺癌组织中仅有18例表达DcR1，有20例表达DcR2；诱骗受体DcR1和DcR2的表达水平在胰腺癌和正常胰腺组织中差异无统计学意义（P〉0．05）。胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度和临床分期有关，分化程度越低，DR5的表达量越低，Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR5的表达显著低于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0．05）。DR4、DcR1及DcR2在胰腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度和临床分期无关（P〉0．05）。结论 ①胰腺癌组织中普遍存在TRAIL受体的表达，并存在受体类型的表达差异，TRAIL基因受体在胰腺癌凋亡的调控机理中可能发挥重要作用。②胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度及恶性程度相关；死亡受体DR4及诱骗受体DcR1和DcR2不能作为判断胰腺癌分化程度及恶性程度的指标。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体系统和核因子κB在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）系统在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法观察TRAIL及其死亡受体4（DR4）、诱骗受体2（DcR2）和核因子KB（NF-KB）在糖尿病大鼠不同时期肾脏中的表达及分析其与肾功能的关系。将80只Wistar大鼠随机分为对照组（NC组）和糖尿病组（DM组），一侧肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型。在第4、8、12、16周末，随机处死各组8只大鼠，收集血液、尿液和肾组织，检测血生化指标、尿蛋白量（24h）和肥大指数等。应用荧光实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法检测肾皮质TRAIL及其受体DR4、DcR2和NF-KB的mRNA和蛋白的表达情况。结果各时间点DM组大鼠尿蛋白量（24h）和肥大指数（肾质量，体质量）均显著高于NC组（P〈0．05）；血白蛋白在第8周末开始显著低于NC组（P〈0．01）；Scr、BUN于第16周末显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠TRAIL及其受体DR4mRNA在第4、8及12周末时表达均显著低于NC组（P〈0．01）；第16周末时表达显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠DcR2mRNA在第4、8及12周末时表达均显著高于NC组（P〈0．01）；NF-KB的基因表达均显著高于NC组（P〈0．05）。免疫组化结果显示TRAIL及其受体DR4、DcR2主要在肾小管表达，而在肾小球和脉管系统未见表达；NF-KB在肾小球和肾小管均有表达；TRAIL及其受体和NF-KB在各组表达趋势与PCR结果一致。结论TRAIL系统作为调节细胞凋亡的一组重要因子，参与了糖尿病肾病的发生发展。     

TRAIL受体在胰腺癌中的表达及意义

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体在胰腺癌中的表达及意义。方法:应用半定量RT-PCR,检测TRAILR mRNA在胰腺癌组织,正常胰腺组织及胰腺癌细胞系ASPC-1、Can-pan-2中的表达。结果:死亡受体DR4、DR5在所有胰腺癌组织、正常胰腺组织及胰腺癌细胞系中均有表达,诱骗受体DcR1、DcR2在所有正常胰腺组织及细胞系中均有表达。死亡受体DR4、DR5在胰腺癌组织中有较高的表达,而在正常胰腺组织中呈中低水平表达(P<0.01)。胰腺癌细胞系中死亡受体DR4、DR5呈高水平表达,而诱骗受体DcR1、DcR2仅呈中低水平表达。结论:TRAIL受体在胰腺癌普遍表达,并存在受体类型的表达差异;死亡受体在胰腺癌中高表达,可能在TRAIL诱导胰腺癌细胞凋亡的机制中发挥重要的作用。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况。方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平。结果 （1）40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织（P〈0．05）；（3）DR4和DR5mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄，肿瘤大小，有无包膜，分级程度，AFP水平，HBsAg，有无肝硬化有关系。结论 肝癌组织中存在TRAIL受体的表达，与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系。     

胰岛素干预对严重烧伤后早期大鼠血管内皮细胞的保护效应

目的了解胰岛素对严重烧伤后早期大鼠血管内皮细胞的保护效应，并分析相关机制。方法将sD大鼠分成假伤组（7只）、烧伤组（7只）和处理组（7只）。后2组制成30％TBSAⅢ度烧伤（用94℃水浴烫伤）模型，假伤组37℃水浴模拟致伤过程。伤后即刻，各组经腹腔注射等渗盐水（40ml／kg）抗休克，同时处理组皮下注射胰岛素3U／kg、另2组同法注射等体积等渗盐水。伤后24h透射电镜下观察各组大鼠主动脉内皮细胞形态及结构，检测其血糖、血清一氧化氮（NO）及各型一氧化氮合酶（NOS）水平。结果镜下可见，处理组较烧伤组主动脉内皮细胞受损程度明显减轻。伤后24h，假伤组、烧伤组、处理组大鼠血糖分别为（4．9±0.8）、（8．2±1.0）、（7．1±0.．7）mmol/L，后2组均显著高于假伤组（P〈0．01），但处理组明显低于烧伤组（P〈0．05）。处理组血清NO、总NOS和结构型NOS（cNOS）水平均明显高于烧伤组（P〈0．01），但2组血清诱导型NOS水平比较，差异无统计学意义（P〉0、05）。结论胰岛素干预可保护严重烧伤后早期大鼠的血管内皮细胞，其机制可能与促cNOS水平升高从而使生理态NO合成增加有关。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的表达及其作用。方法 应用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，采用原位末端标记法和流式细胞术检测4组(对照组、糖尿病4周组、8周组和12周组)大鼠肾脏细胞凋亡情况；免疫组化和流式细胞术检测肾脏TRAIL基因及其死亡受体DR4、DR5的蛋白表达。结果 与正常对照组相比．各糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多，TRAIL、DR4、DR5的表达亦显著增强。结论 在高糖环境的诱导下．TRAIL基因及其死亡受体出现的高表达，可能部分参与了糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡。     

TRAIL受体在前列腺癌中的表达

目的　探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)受体在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌恶性度的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中DR4、DR5及DcR1的表达。结果　前列腺癌组织DcR1表达水平显著低于良性前列腺增生组织 (P <0 .0 1) ,DR4、DR5的表达水平两者无显著性差异。前列腺癌组织中DR4、DR5及DcR1的表达程度与前列腺癌组织的病理分级和临床分期无关 (P >0 .0 5 )。结论　TRAIL基因受体DcR1在前列腺癌凋亡机制中可能发挥重要作用     

胰岛素强化治疗对烫伤大鼠心肌保护作用的研究

目的 了解胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠心肌的保护作用，并探讨其作用机制。方法 将18只SD大鼠分为3组，每组6只。强化组及烫伤组大鼠背部脱毛造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤。强化组伤后即输注胰岛素等渗盐水（含胰岛素0．12U／m1）及100g／L葡萄糖，使大鼠血糖水平控制在4．0～6．6 mmol／L之间，补液总量为2ml·kg^-1。·％TBSA^-1·8h^-1；烫伤组伤后仅给予等渗盐水，总量同前。假伤组模拟烫伤，伤后补充生理量的液体。于伤前及伤后1、2、3、4、5、6 h 抽取大鼠静脉血测定其血糖值。各组大鼠伤后均经右颈动脉插管人左心室并连接生理记录仪，观察左心室收缩压（LVSP）及左心室舒张末期压（LVEDP）。伤后6h，处死各组大鼠，留取左心室组织标本用于心肌细胞肌钙蛋白T的检测。结果 烫伤组大鼠伤后1～6h的血糖值为（7．6±1．7）～（8．4±4．7）mmol／L，均高于强化组[（4．5±0．9）～（5．2±1．3）mmol／L，P〈0．01]。伤后1h，烫伤组LVSP[（60±11）mmHg（1mmHg=0．133kPa）]降低、LVEDP[（21．3±11．3）mmHg]升高，与强化组[（72±8）、（11．7±5．2）mmHg]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。烫伤后各组大鼠肌钙蛋白T在心肌细胞内大量缺失，而强化组缺失程度明显低于烫伤组（P〈0．05）。结论 胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠左心室功能具有明显的保护作用，此作用可能与抑制心肌细胞蛋白的缺失有关。     

烧伤后增生性瘢痕成纤维细胞中TRAIL受体的表达及意义

目的检测肿瘤坏死斟子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体住烧伤后增生期增生性瘢痕成纤维细胞上的表达，并探讨其意义。方法应用RT-PCR和流式细胞术，检测了30例处于增生期的烧伤后增牛性瘢痕成纤维细胞中TRAIL各受体的表达，并以30例正常皮肤成纤维细胞作为对照。结果RT-PCR和流式细胞术的检测结果均显示：与正常对照组相比，增生期瘢痕的成纤维细胞中步匕亡受体DR5的表达显著降低（P〈0．05），诱导受体DcR1的表达显著升高（P〈0．05），其余受体的表达住两组间差异无统计学意义。结论烧伤后增生性瘢痕的形成可能与TRAIL介导的瘢痕内成纤维细胞凋亡受阻有关。     

严重烧伤患者休克期降钙素基因相关肽及神经肽Y的变化对心脏功能的影响

目的研究严重烧伤患者休克期降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)的变化对心脏功能的影响。方法将60例严重烧伤(烧伤总面积32％-96％TBSA)患者设为试验组,常规进行休克期液体复苏和创面处理;另选60例健康志愿者作为对照组。检测试验组患者伤后1、3、6、12、24、48 h和对照组人员血液中CGRP、NPY、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的含量,并对其进行相关性分析。结果伤后3 h试验组患者CGRP水平为(28±6)ng／L,较对照组(55±7)ng／L降低,12 h达低谷(15±4)ng／L,伤后48 h仍低于对照组(P<0．05)。伤后1h试验组NPY、cTnT值[(136±20) ng／L、(0．41±0．08)μg/L]较对照组[(86±13)g／L、(0.16±0．06)／μg／L]升高,12 h达峰值[(189±31)ng／L、(1．78±0．47)μg／L],48 h仍高于对照组(P<0．05)。CGRP与cTnT变化呈显著负相关(r=-0.76,P<0．01);NPY与cTnT变化呈显著正相关(r=0．79,P<0．01)。结论血液中CGRP值降低、NPY值升高在严重烧伤休克期心肌损害中可能起着重要作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶途径在大鼠严重烧伤后早期心肌膜磷降解中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径在严重烧伤后早期心肌胞质型磷脂酶A2（cPLA2）表达及膜磷脂降解中的作用。方法将Wistar大鼠分为：正常组（8只）、单纯烧伤组（40只）、烧伤＋SB203580组（16只）和烧伤＋等渗盐水组（16只）。后3组大鼠制成40％TBSAⅢ度烧伤模型,后2组按实验设计分别注射p38MAPK抑制剂SB203580或等渗盐水。单纯烧伤组设5个时相点,其余烧伤组设2个时相点,每时相点8只。检测各组大鼠心肌cPLA2 mRNA表达和膜磷脂含量变化。缺氧复合烧伤血清处理体外培养的大鼠心肌细胞,观察SB203580对其cPLA2 mRNA表达的影响。结果单纯烧伤组大鼠伤后各时相点cPLA2 mRNA表达显著高于正常组的0．280±0．020,伤后3h达峰值;单纯烧伤组大鼠心肌膜磷脂含量伤后即降低,6h达最低值[（0．052±0．017）mg磷／mg蛋白]。烧伤后心肌cPLA2 mRNA表达与膜磷脂含量呈显著负相关（r=-0．53,P＜0．05）。与烧伤＋等渗盐水组比较,伤后6、12h烧伤＋SB203580组大鼠心肌磷酸化p38MAPK水平显著降低,cPLA2 mRNA表达仅为该组的72％、51％（P＜0．01）,心肌膜磷脂含量也显著高于该组。此外,SB203580也显著降低了缺氧复合烧伤血清处理的离体大鼠心肌细胞cPLA2 mRNA的表达水平。结论p38MAPK途径在大鼠严重烧伤后早期心肌膜磷脂降解中起重要作用,其机制可能与磷酸化p38MAPK上调心肌cPLA2 mRNA表达水平有关。     

重组胰高血糖素样多肽2对烧伤大鼠肠黏膜的保护作用

目的验证重组胰高血糖素样多肽2（GLP-2）对严重烧伤大鼠的肠道保护作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组；烧伤对照组；重组GLP-2治疗组（重组治疗组），烧伤后4h皮下注射重组GLP-2，100nmol·kg^-1·d^-1；化学合成GLP-2治疗组（合成治疗组），烧伤4h后皮下注射合成GLP-2，剂量同上。每组6只大鼠。伤后第7天检测各致伤组大鼠肠黏膜通透性、肠黏膜湿质量与肠段及躯壳质量比、肠黏膜蛋白含量以及观察肠道组织病理学变化，正常对照组观察指标相同。结果重组治疗组及合成治疗组与烧伤对照组[（0．350±0．040）mg／m1]比较，大鼠肠黏膜通透性明显降低（P〈0．01），分别为（0．250±0．026）、（0．243±O．008）mg／ml；肠黏膜湿质量与躯壳质量比及肠黏膜蛋白含量明显增加，重组治疗组大鼠肠黏膜蛋白含量为（57．9±2．8）mg／g，高于合成治疗组（48．9±4．1）mg／g。与正常对照组比较，各致伤组大鼠伤后第7天肠黏膜绒毛明显变短脱落、排列紊乱、基底层变薄。重组治疗组损伤较烧伤对照组有所减轻，与合成治疗组大鼠无明显区别。结论重组GLp02与合成GLP-2，能减轻烧伤大鼠肠道损伤，具有明显的肠道保护作用。     

高密度脂蛋白对严重烫伤大鼠肺功能的保护作用

目的了解高密度脂蛋白（HDL）对严重烫伤大鼠肺功能的作用及其机制。方法将Wistar大鼠分为对照组（15只）、烫伤组（60只）和HDL组（60只）。对照组大鼠不作处理；其余2组均造成30％TBSAIII度烫伤，伤后常规补液，其中HDL组伤后立即经尾静脉注入HDL（80mg／kg）。检测2组烫伤大鼠伤后12、24、48、72h血清胞间黏附分子1（ICAM—1）及肿瘤坏死因子α（TNF—α）的含量，并检测其动脉血二氧化碳分压（PCO2）氧分压（PO2）；观察大鼠伤后各时相点肺组织病理学变化。另检测对照组上述指标。结果与对照组比较，烫伤组大鼠伤后各时相点ICAM—1、TNF—α的含量及PCO，均显著升高（P〈0．05或P〈0．01），PO，显著降低（P〈0．05）。HDL组上述指标与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；但与烫伤组比较，各时相点ICAM—1、TNF—α含量均显著降低（P〈0，05或P〈0．01）。伤后48h，烫伤组ICAM-1、TNF—α分别为（3．42±0．25）μg／L、（4．04±0．28）ng／L，明显高于HDL组[（2．24±0．14）μg／L、（3．35±0．22）ng／L，P〈0．05或P〈0．01]。烫伤组大鼠伤后48h肺小血管周围炎性细胞浸润，肺内血管扩张出血，部分小血管管腔内红细胞淤滞凝集，形成“假血栓”；肺毛细血管内皮细胞连接松弛，内皮细胞水肿。HDL组肺内小血管周围炎性细胞浸润明显减轻；肺毛细血管内皮细胞连接较紧密。结论HDL对严重烫伤大鼠肺功能具有保护作用，可能与其抑制ICAM—1、TNF—α表达有关。     

烫伤大鼠心肌细胞一氧化氮生成对心肌的保护作用

目的了解氨基胍对烫伤大鼠心肌的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为烫伤组、氨基胍组。2组大鼠均造成30％TBSAⅢ度烫伤后常规补液，氨基胍组伤前20min腹腔内注射氨基胍（40mg／kg）。于伤前及伤后1、3、6、12、24h取大鼠动脉血检测血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度、一氧化氮（NO）浓度，另取心肌组织测定NO浓度；观察氨基胍组、烫伤组伤后6h大鼠的心功能水平。结果伤后3h烫伤组大鼠血清NO浓度[（59．6±5．4）μmol／L]明显高于伤前[（24．6±0．8）μmoL／L，P〈0．01]，6h达峰值，24h明显回落，均明显高于氨基胍组（P〈0．01）；心肌组织NO浓度的变化趋势同上。与烫伤组比较，氨基胍组伤后各时相点cTnI浓度明显升高。与烫伤组伤后6h比较，氨基胍组大鼠该时相点的心功能抑制加重。结论氨基胍可抑制NO生成，加重了烫伤大鼠的心肌损害并使其心功能下降，提示NO对烫伤后早期心肌可能具有保护效应。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。     

Thapsigargin potentiates TRAIL-induced apoptosis in giant cell tumor of bone

TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is capable of causing apoptosis in tumor cells but not in normal cells; however, it has been shown that certain types of tumor cells are resistant to TRAIL-induced apoptosis. In this study, we examined the potentiation of TRAIL-induced apoptosis in the stromal-like tumor cells of giant cell tumor of bone (GCT). We show that both mRNA and protein of TRAIL receptors—death receptors (DR4, DR5) and decoy receptors (DcR1, DcR2) are present in GCT stromal tumor cells. However, the expression profiles in all GCT clones tested do not readily correlate with their differential sensitivity to TRAIL. To this end, we selected thapsigargin (TG), an agent known to cause perturbations in intracellular Ca²⁺ homeostasis to enhance the apoptotic action of TRAIL. When added alone, neither TRAIL nor TG induces a therapeutically important magnitude of cell death in GCT tumor cells. Interdependently, scheduled treatment of the cultures with TG followed by subsequent addition of TRAIL resulted in a significant synergistic apoptotic activity, while in contrast, no obvious augmentation was seen when TRAIL was added before TG. This effect was in accord with our observation that TG predominantly up-regulated both mRNA and protein expression of DR5, as well as DR4 mRNA while down-regulating DcR1 protein in GCT stromal-like tumor cells. Taken together, our findings suggest that TG is able to sensitize tumor cells of GCT to TRAIL-induced cell death, perhaps in part through up-regulating the death receptor DR5 and down-regulating the decoy receptor DcR1. These findings provide an additional insight into the design of new treatment modalities for patients suffering from GCT.