山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能的体外观察

目的 诱导培养椎间盘纤维环成纤维细胞，探讨其成骨潜能，比较重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein2，rhBMP-2）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF—α）对其成骨的不同影响。方法利用体外细胞培养技术，建立实验山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞培养体系，根据培养液的不同，分为空白对照组、TNF-α组（加入50U／ml TNF-α）、rhBMP-2组（加入0．1μg／ml rhBMP-2）和TNF—α＋rhBMP-2组（加入50U／ml TNF-α＋0．1μg／ml rhBMP-2），培养3周观察纤维环成纤维细胞在条件培养液诱导下的成骨表型变化、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和骨钙素（osteocalcin，OC）等成骨指标变化。结果 各实验组培养液对细胞增殖无明显影响。rhBMP-2组和TNF-α＋rhBMP-2组细胞趋化性生长明显，矿化结节出现，茜素红染色呈深红色钙阳性反应。各实验组ALP活力与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2组与TNF—α＋rhBMP-2组成纤维细胞的OC分泌量与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），TNF—α组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 体外培养的椎问盘纤维环成纤维细胞有成骨潜能，rhBMP-2对纤维环成纤维细胞有明确的诱导成骨作用。     

PI3K/AKT信号通路在CTGF促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B信号通路是否介导结缔组织生长因子促人增生性瘢痕成纤维细胞转分化。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，实验分3组：①空白对照组：②结缔组织生长因子（10ng／m1）刺激组：③磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002（10μmol/L）预处理后结缔组织生长因子刺激组。应用免疫印迹技术检测48h后a-平滑肌肌动蛋白的表达，应用流式细胞术检测a-平滑肌肌动蛋白阳性细胞百分率。结果：和空白对照组相比，结缔组织生长因子刺激组细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高；经磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后，再以结缔组织生长因子刺激，细胞a-平滑肌肌动蛋白表达和阳性细胞百分率升高水平下降，经统计学分析，差别具有显著性（P〈0．05）。结论：结缔组织生长因子能够促进人增生性瘢痕成纤维细胞转分化，磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B信号通路介导该效应，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002可抑制此效应。     

角质形成细胞源IL-1α对成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的：研究角质形成细胞分泌的IL-1α对成纤维细胞生物学行为的影响。方法：组织块法培养成纤维细胞，消化法培养角质形成细胞，采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌的IL-1α；成纤维细胞中加入含不同浓度IL-1α抗体（0．04μg／ml，0．2μg／ml，1μg／ml）的角质形成细胞条件培养液为实验组，含DMEM的条件培养液为对照组，采用Cell counting kit-8、放免法测定成纤维细胞增殖、胶原合成。结果：细胞爬片可见大量染色阳性角质形成细胞，细胞增殖测定，各实验组吸光度（A）值与对照组比较，差异均有统计学意义（P（0．01）；随抗体浓度增高，A值减小，0．2μg／ml及1μg／ml浓度组与0．04μg／ml浓度组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；胶原分泌浓度测定，各实验组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）：随抗体浓度及胶原浓度增高，0．2μg／ml及1μg／ml浓度组与0．04μg／ml浓度组比较，差异有统计学意义（P（0．01）。结论：正常角质形成细胞分泌大量IL-1α，可促进成纤维细胞增殖，抑制胶原分泌。     

羧甲基壳多糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 观察羧甲基壳多糖（carboxymethyl-chitosan，CM-CH）对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFB）增殖和胶原合成的作用，探讨其治疗瘢痕疙瘩的机制。方法 采用四噻唑蓝（methylthiazoletrazolium，MTT）测定法和羟脯氨酸比色法（hydroxyproline，HP）测定不同浓度CM-CH作用KFB后对其增殖和上清液中胶原合成的影响。结果 CM-CH在10、50、100、200μg／ml作用KFB48、72h后，对KFB增殖有明显抑制作用（P〈0．05）。200μg／ml作用24、48、72h后，对KFB增殖抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CM-CH在10、50、100、200μg／ml对KFB作用48h后，能显著抑制该细胞胶原的合成（P〈0．01）。100、200μg／ml CM-CH抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CM-CH对体外培养的KFB增殖和胶原合成有明显抑制作用，从而提示该物质治疗瘢痕疙瘩具有潜在前景。     

MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养HK-2细胞,随机分组：对照组,TGF-β1刺激组（5ug／L）,MG-132组（2．5μmol／L）,MG-132＋TGF-融组（MG-132 2.5μmol／L孵育30min后再加TGF-β1 5μg／L）。培养24h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IκB-α和IκB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoechst 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高（P〈0．05）,但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低（P〈0．05）,且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高（P〈0．05）。MG-132＋TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低（P〈0．05）,Smad7 mRNA略升高（P〉0．05）,而Srnad7蛋白明显升高（P〈0．05）,胞浆中Fn和α-SMA表达减少。MG-132组、MG-132＋TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IκB-α和IκB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MG-132可抑制TGF-132诱导的HK-2 Smurf1、Smurf2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另-方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-κB活化促进HK-2细胞凋亡。     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。     

低密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的通路研究

目的探讨低密度脂蛋白（LDL）和氧化（OX）LDL是否可诱导人肾小管上皮细胞转分化及其可能机制。方法体外培养的第2代肾小管上皮细胞随机分为（1）阴性对照组；（2）LDL（50mg／ml）组；（3）oxLDL（50mg／ml）组；（4）LDL（50mg／m1）＋PD98059（5μmol／L）组；（5）oxLDL（50mg／ml）＋PD98059（5μmol／L）组。应用形态学、免疫荧光、Western印迹观察LDL和oxLDL刺激小管细胞角蛋白（cytokerafin）、E-钙粘糖蛋白（cadhefin）、α-SMA和波形蛋白（vimenfin）表达的改变、Ⅰ型胶原产生的改变，及其与ERK1／2MAPK通路活化的关系。结果OXLDL较LDL有更强的致小管上皮细胞转分化的作用，与对照组相比。细胞中上皮细胞标记cytokeratin和E-cadherin表达减少，间充质细胞标记α-SMA和vimentin明显增加，Ⅰ型胶原产生增多（P〈0．05）。LDL和oxLDL刺激组细胞中ERK1／2MAPK和GSK-3β磷酸化活化较对照组明显增强（P〈0．05）；β-catenin发生细胞核内转移。MAPK抑制剂PD98059可抑制GSK-3β的磷酸活化，并几乎完全阻断oxLDL诱导的肾小管上皮细胞转分化，但对LDL诱导的小管上皮细胞转分化只有部分阻断作用。结论本研究首次在体外观察到（1）oxLDL可诱导肾小管细胞上皮细胞转分化和Ⅰ型胶原的产生，作用明显强于LDL；（2）ERK1／2MAPK、GSK-3β和β-catenin组成一条信号通路调节LDL和oxLDL诱导的小管上皮细胞转分化。     

脂多糖对皮肤成纤维细胞生物学特性的影响及与创面愈合的关系

目的探讨脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成的影响，以研究细菌内毒素与皮肤创面愈合的关系。方法取正常皮肤按黄勇等方法行成纤维细胞培养后，分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（E．coli055：B5）培养，对照组为DMEM培养。分别通过MTT比色法及细胞计数法观察各组1～9d吸光度（A）值和细胞数量的变化；于LPS加入后7d细胞处于融合状态时，通过^3H-脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测细胞胶原合成量的变化，并绘制细胞生长曲线。结果与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组A值增加，于5～9d差异有统计学意义（P〈0．05）；1．000μg／ml组A值降低，于3～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组促进细胞胶原合成，且0．100μg／ml组作用达高峰（P〈0．05），1．000μg／ml LPS抑制细胞胶原合成，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，0．005～0．500μg／ml组细胞数量明显增加，分别于3～6d、1～6d、3～6d、2～6d及3～6d时比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；1．000μg／ml组细胞数量明显降低，于2～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成，但过高浓度LPS则产生抑制效应。提示一定量的细菌内毒素可能有利于皮肤创面愈合，当内毒素过多时将对创面愈合产生负面作用。     

汉防己甲素对马兜铃酸A诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的干预作用

目的：探讨汉防己甲素（tetrandrine,rret）对马兜铃酸A（aristoloehic acid Ⅰ,AAⅠ）诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的拮抗效应。方法：将正常培养的HK-2随机分组：正常组、模型组、汉防己甲素高浓度组、汉防己甲素中浓度组、汉防己甲素低浓度组、泼尼松龙对照组（糖皮质激素组）。48h后观察各组细胞形态的变化,逆转录-聚合酶链式反应方法检测各组E—cadherin、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平,双抗体夹心酶联免疫吸附法测定各组细胞培养液中TGF-β1浓度,流式细胞技术测定各组E—cadherin阳性表达细胞的百分率。结果：汉防己甲素干预组及泼尼松龙对照组E—cadherin mRNA表达水平明显高于模型组（P〈0．05）,相反,其TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平明显低于模型组（P〈0．05）;汉防己甲素干预组及泼尼松龙对照组TGF-β1浓度亦明显低于模型组（P〈0．05）;汉防己甲素干预组（中、低浓度）E—cadherin阳性表达细胞的百分率明显高于模型组（P〈0．05）,但汉防己甲素高浓度组和泼尼松龙对照组E—cadherin阳性表达细胞的百分率较之模型组增高不明显（P〉0．05）。结论：一定浓度（10μg／ml）的AAⅠ能诱导体外培养的HK-2转分化,适当浓度的Tet对AAi诱导的HK-2转分化具有明显的拮抗作用;AAI亦能上调TGF-β1的表达,而适当浓度的Tet能拮抗AAI引起的TGF-β1的高表达。     

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡机制影响的初步探讨

目的拟观察5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和β转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β）Ⅰ型受体以及细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法（1）瘢痕疙瘩组织成纤维细胞原代培养,取4～6代传代细胞加入5个不同浓度（10,20,40,80,160μmol／L）5-氟尿嘧啶干预24,48,72h。（2）利用四甲基偶氮唑盐法（MTT）测定瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力。（3）应用蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测各组瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad7和TGF-βI型受体的表达及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果（1）MTT实验中,当5-氟尿嘧啶浓度为10,20μmol／L作用24h时,未发现成纤维细胞死亡,与空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;其他浓度下作用各组成纤维细胞死亡现象差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）免疫印迹法实验结果如下：①与空白对照组相比,TGF-βI组Smad7表达明显减弱,TGF-βI型受体表达则显著增强,差异有统计学意义（P〈0．01）。②加入5-氟尿嘧啶干预后可显著增强Smad7的表达,差异有统计学意义（P〈0．01）。③经不同浓度5-氟尿嘧啶干预后,实验组Bcl-2蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。但实验组Bax蛋白表达均高于对照组（P〈0．05）,TGF-βI型受体表达无明显影响,差异均无统计学意义（P〉O．05）。结论5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

α—平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的诱导作用。方法 以5例增生性瘢痕为实验组,3例正常瘢痕为对照组,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察在不同TGF-β1浓度作用下,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α-SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞,三维培养体系中α-SMA含量明显低于二维培养体系,不同浓度TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ng/ml的TGF-β1作用最有效;与对照组的成纤维细胞相比,实验组的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感。结论 在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异,对TGF-β1敏感性不同;细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少。     

重组人核心蛋白多糖固相拮抗转化生长因子β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用

目的模拟人体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1(TGF-β1)接触方式,观察核心蛋白多糖固相拮抗TGF-β1刺激瘢痕成纤维细胞的效果.方法制备成纤维细胞胶原网格(FPCL)体外三维培养模型,将其分为4组.对照组向FPCL中加入培养液;核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,再加入培养液;TGF-β1组向FPCL中加入含5 μg/L TGF-β1的培养液;TGF-β1+核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,然后加入含5μg/L TGF-β1的培养液.在培养12、24、48、72、96 h时观察各组FPCL的收缩情况,并用蛋白质印迹法与逆转录聚合酶链反应分别检测FPCL中瘢痕成纤维细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达水平.结果各培养时相点下,TGF-β1组FPCL收缩比对照组明显增强,核心蛋白多糖组FPCL收缩则比对照组明显减弱.TGF-β1组的PAI-1、α-SMA的蛋白及相应mRNA表达水平(3 482±211、4 320±272;0.89±0.15、0.56±0.11)显著高于对照组(1 764±147、1 699±146;0.29±0.06、0.21±0.06,P＜0.01);其余两组相应检测指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论重组人核心蛋白多糖混入胶原凝胶,可显著抑制TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用,表明在体外核心蛋白多糖具有拮抗TGF-β1的作用.提示皮肤组织损伤后,由于创面机械性缺少核心蛋白多糖,TGF-β1活性上调,可能是瘢痕增生的一个重要因素.     

α-平滑肌肌动蛋白N-末端肽对伤口收缩的影响

目的：探讨α－平滑肌肌动蛋白（α－smooth muscle actin, α－SMA）的特异性抗体－α－SMANH2＿末端序列Ac-EED多肽（α－SMA－AcEEED）对伤口收缩的影响。方法L（1）Wistar大鼠背部制作去全厚皮伤口，硬塑料框固定创缘。伤后8－10d，实验 同外用N末端含AcEEED的α－SMA融合(α－SMA-FP,1mg/ml），对照组1、2分别外用胶原凝胶（0.5mg/ml）、N末端含AcDEDE的α－SMA融合蛋白（α－SKA－FP,1mg/ml）。伤后10d，测量各组去掉外固定框1、6、24h时的伤口面积，以取框后伤口面积与伤口原面积的百分比表示伤口收缩率。（2）分离伤后9d肉芽组织中的成纤维，在可变形性硅胶培养皿中培养。观察α－SMA－FP（10μ g/ml）处理成纤维细胞前、后及洗去α－SMA－FP后收缩状态的改变。结果：（1）去除外固定框后1、6、24h时，对照组1、2伤口收缩率相比较差异均无显性意义（P＞0．05）；实验组收缩率与两对照组比较匀有显性意义（P＜0．05）。（2）用α－SMA－FP处理前，镜下可见成纤维细胞有众多粗大皱折。α－SMA－FP处理后5min皱折明显减少，变浅；30min后，皱折完全消失。去除α－SMA－FP后，皱折逐渐恢复。以胶原凝胶和α－SMA－FP处理该细胞无此现象。结论：提示α-SMA-AcEEED在体内可特异性地抑制肉芽组织收缩，在体外能可塑性地抑制成纤维细胞的收缩。     

TGF-β和α-SMA在瘢痕组织中的表达及相关性研究

目的 检测转化生长因子－β（ＴＧＦ－β１,ＴＧＦ－β２,ＴＧＦ－β３）在增生性瘢痕和表浅性瘢痕中的表达,探讨其对增生性瘢痕的形成及α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ表达的可能作用。方法 采用免疫组化法检测２８例增生性瘢痕,１９例表浅性瘢痕和１６例正常皮肤组织中ＴＧＦ－β和α－ＳＭＡ的表达水平,并按年龄,性别,病程分组进行比较及ＴＧＦ－β和α－ＳＭＡ相关性分析。     

脂多糖刺激后人正常皮肤成纤维细胞基因表达谱的变化及其意义

目的：观察正常皮肤成纤维细胞经大肠杆菌内毒素（LPS）刺激后基因表达谱的变化,探讨LPS对后期瘢痕形成的影响及可能机制.方法：用0.1 μg/ml LPS刺激正常皮肤成纤维细胞并进行连续传代培养,选择第3代成纤维细胞,采用基因芯片技术检测成纤维细胞基因表达谱的变化,与自身正常皮肤成纤维细胞及自身增生性瘢痕组织成纤维细胞相关基因进行对比,挑选差异基因,采用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）方法进行验证.结果：LPS刺激后正常皮肤成纤维细胞基因表达谱发生改变,其中与胶原代谢相关的基因（Ⅰ型胶原、c-myc、TGF-β1mRNA）表达均上调;RT-PCR结果显示,这些基因表达与自身增生性瘢痕组织成纤维细胞表达量近似（P〉0.05）.结论：LPS可能诱导正常皮肤成纤维细胞转化为增生性瘢痕组织成纤维细胞,参与增生性瘢痕形成.     

β-氨基丙晴对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

目的 观察β－氨基丙晴（ＢＡＰＮ）对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的影响。方法 利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测ＢＡＰＮ不同浓度（ｍｇ／ｍｌ）不同时间对体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖的影响。结果 ＢＡＰＮ２４,４８,７２ｈ对瘢痕组织成纤维细胞均有抑制作用,且抑制率随浓度的增加和时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。其ＩＤ５０为２．５３ｍｇ／ｍｌ。结论 ＢＡＰＮ可抑制体外瘢痕组织成纤维     

Panax Notoginseng Saponins suppresses TRPM7 via the PI3K/AKT pathway to inhibit hypertrophic scar formation in vitro

BackgroundHypertrophic scar (HS) formation, a type of dermal fibroproliferative condition, is a frequent complication in wound healing resulting from burns, severe trauma, and surgical procedures. The effects of Panax Notoginseng Saponins (PNS) on the HS formation remain relatively under-explored. Hence, this study was intended to interrogate anti-apoptosis and anti-fibrosis effects of PNS on the hypertrophic scar fibroblasts (HSFs) during HS formation and assess the involvement of TRPM7 and PI3K/AKT signaling pathway.MethodsUsing MTT and CCK-8 assays, we evaluated cell cytotoxicity and cell viability. Collagen I/III (col 1/3) and α-SMA expression levels were assessed through immunofluorescence and western blot, and cell migration, cell apoptosis and cell cycle were examined with applications of wound healing, TUNEL staining and flow cytometry. TRPM7, PI3K/AKT, TGF-β1 and related-proteins were quantified using RT-qPCR and western blot.ResultsPNS administration could suppress TRPM7 expression and the viability of HSFs in a dose-dependent manner. Moreover, PNS could restrain the HS formation and ECM deposition by decreasing col 1/3 and α-SMA synthesis, suppressing cell migration, and boosting apoptosis and G1 arrest. Notably, this study revealed that PNS inhibited PI3K/AKT activation in HSFs. Besides, knockdown of TRPM7 enhanced therapeutic effects of PNS on HSFs, but overexpression markedly reversed above mentioned effects of PNS on HSFs.ConclusionThis study suggested that PNS hampered scar formation might via inhibiting ECM and stimulating cell apoptosis by modulating the PI3K/AKT signaling. Overall, these findings in the present study could support the use of PNS for preventing HS formation, and TRPM7 may be a novel molecular target for treating HS.     

Transforming growth factor-beta regulates tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation in vitro.

BACKGROUND: We recently found evidence of tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation (TEMT) during the development of tubulointerstitial fibrosis in the rat remnant kidney. This study investigated the mechanisms that induce TEMT in vitro. METHODS: The normal rat kidney tubular epithelial cell line (NRK52E) was cultured for six days on plastic or collagen type I-coated plates in the presence or absence of recombinant transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1). Transdifferentiation of tubular cells into myofibroblasts was assessed by electron microscopy and by expression of alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) and E-cadherin. RESULTS: NRK52E cells cultured on plastic or collagen-coated plates showed a classic cobblestone morphology. Culture in 1 ng/ml TGF-beta caused only very minor changes in morphology, but culture in 10 or 50 ng/ml TGF-beta1 caused profound changes. This involved hypertrophy, a loss of apical-basal polarity and microvilli, with cells becoming elongated and invasive, the formation of a new front-end back-end polarity, and the appearance of actin microfilaments and dense bodies. These morphological changes were accompanied by phenotypic changes. Double immunohistochemistry staining showed that the addition of TGF-beta1 to confluent cell cultures caused a loss of the epithelial marker E-cadherin and de novo expression of alpha-SMA. An intermediate stage in transdifferentiation could be seen with hypertrophic cells expressing both E-cadherin and alpha-SMA. De novo alpha-SMA expression was confirmed by Northern blotting, Western blotting, and flow cytometry. In particular, cells with a transformed morphology showed strong alpha-SMA immunostaining of characteristic microfilament structures along the cell axis. There was a dose-dependent increase in the percentage of cells expressing alpha-SMA with increasing concentrations of TGF-beta1, which was completely inhibited by the addition of a neutralizing anti-TGF-beta1 antibody. Compared with growth on plastic, cell culture on collagen-coated plates showed a threefold increase in the percentage of cells expressing alpha-SMA in response to TGF-beta1. CONCLUSION: TGF-beta1 is a key mediator that regulates, in a dose-dependent fashion, transdifferentiation of tubular epithelial cells into alpha-SMA+ myofibroblasts. This transdifferentiation is markedly enhanced by growth on collagen type I. These findings have identified a novel pathway that may contribute to renal fibrosis associated with overexpression of TGF-beta1 within the diseased kidney.     

高三尖杉酯碱对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

观察高三尖杉酯碱（ＨＨ）对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测不同浓度ＨＨ（μｇ／ｍｌ）作用不同时间对体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。当ＨＨ浓度为０．１２μｇ／ｍｌ时即可抑制体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的生长,０．６６μｇ／ｍｌ时即可产生５０％的抑制效应,１０μｇ／ｍｌ时可完全抑制成纤维细胞的生长,且抑制率随时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。ＨＨ可抑制体外瘢痕组织成纤维细胞的增殖且抑制作用呈剂量时间依赖性。     

姜黄素体外抗人增生性瘢痕纤维化的实验研究

目的:观察姜黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别应用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.05)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕纤维化的作用,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物。