强化胰岛素治疗拮抗严重烫伤大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 了解强化胰岛素治疗对重度烫伤大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及机制.方法 将18只SD大鼠分为3组,每组6只.烫伤组及强化组大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ度烫伤.强化组伤后静脉注射胰岛素等渗盐水(15 mU·kg-5·min-1)和100 g/L葡萄糖;烫伤组给予等渗盐水(2 mL·kg-1·1%TBSA-1·8 h-1);假伤组模拟烫伤,伤后给予生理量的液体.记录3组大鼠伤后6 h的左心室压力最大上升/下降速率(±dp/dt max);采用原位末端标记法和DNA梯带法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bcl-2的表达水平.结果 假伤组、强化组、烫伤组大鼠+dp/dt max值分别为(5.5±0.5)x 103、(3.4±0.4)×105、(2.5±0.5)×103mm Hg/s(1 mm Hg=0.133 kPa);-dp/dt max值分别为(4.55±0.34)× 103、(2.94±0.22)× 103、(2.05±0.19)× 103mm Hg/s.烫伤组大鼠±dp/dt max均低于强化组(P＜0.01).烫伤组大鼠心肌细胞凋亡指数[AI,(13.1±3.4)%]明显高于假伤组[(0.6±0.4)%,P＜0.01];强化组AI为(6.7±1.8)%,明显低于烫伤组(P＜0.01).假伤组大鼠心肌组织未见DNA断裂条带,烫伤组可见明显的DNA断裂形成梯带,而强化组梯带形成不明显,表示其凋亡细胞明显少于烫伤组.烫伤组心肌组织内p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平明显低于强化组.结论 强化胰岛素治疗通过上调Akt活性,增加Bcl-2的表达,可能是其抗心肌细胞凋亡、保护心功能的机制之一.     

烫伤大鼠心肌细胞一氧化氮生成对心肌的保护作用

目的了解氨基胍对烫伤大鼠心肌的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为烫伤组、氨基胍组。2组大鼠均造成30％TBSAⅢ度烫伤后常规补液，氨基胍组伤前20min腹腔内注射氨基胍（40mg／kg）。于伤前及伤后1、3、6、12、24h取大鼠动脉血检测血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度、一氧化氮（NO）浓度，另取心肌组织测定NO浓度；观察氨基胍组、烫伤组伤后6h大鼠的心功能水平。结果伤后3h烫伤组大鼠血清NO浓度[（59．6±5．4）μmol／L]明显高于伤前[（24．6±0．8）μmoL／L，P〈0．01]，6h达峰值，24h明显回落，均明显高于氨基胍组（P〈0．01）；心肌组织NO浓度的变化趋势同上。与烫伤组比较，氨基胍组伤后各时相点cTnI浓度明显升高。与烫伤组伤后6h比较，氨基胍组大鼠该时相点的心功能抑制加重。结论氨基胍可抑制NO生成，加重了烫伤大鼠的心肌损害并使其心功能下降，提示NO对烫伤后早期心肌可能具有保护效应。     

胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠血清凋亡配体的作用

目的 了解大鼠严重烫伤后血清凋亡相关配体的变化及胰岛素强化治疗的作用.方法 将150只Wistar大鼠随机分为假伤组、烫伤组和治疗组.烫伤组和治疗组烫伤后立即腹腔注射等渗盐水40 mL/kg复苏;治疗组伤后24 h皮下注射胰岛素0.25 U/100 g,以后每12小时注射1次,共注射5 d.第1～5天的剂量分别为0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 U/100 g,将大鼠血糖控制在3～6 mmol/L.假伤组浸入37℃温水假伤后不进行液体复苏.于伤后1、4、7、10、14 d抽取各组大鼠腹主动脉血,采用酶联免疫吸附测定法检测血清TNF-α、可溶性Fas配体(sFasL)、可溶性Fas受体(sFas);放射免疫法检测血清胰岛素水平.结果 烫伤组大鼠伤后1 d血清TNF-α水平[(30.9±8.7)ng/L]即达高峰,与假伤组[(12.7±2.8)ng/L]和治疗组[(16.8±4.7)ng/L]比较,差异有统计学意义(P<0.01),以后逐渐下降;治疗组大鼠伤后血清TNF-α水平虽然有所上升,但在伤后7 d内明显低于烫伤组(P<0.01).烫伤组、治疗组大鼠血清sFasL分别在伤后7～14 d和4～10 d高于假伤组(P<0.05),此后逐渐恢复至正常水平.伤后4～10 d治疗组sFas水平明显高于烫伤组及假伤组(P<0.05).伤后7、10 d烫伤组大鼠血清sFasL与sFas比值高于假伤组,而治疗组则在伤后7 d低于烫伤组(P<0.05),伤后14 d 2组均接近正常水平.烫伤组大鼠血清胰岛素水平在伤后4～10d低于假伤组(P<0.05).治疗组从伤后第1天起血清胰岛素水平即显著升高,伤后4 d[(327±15)μU/mL]达高峰,并显著高于假伤组[(42±15)μU/mL,P<0.01]和烫伤组[(28±10)μU/mL,P<0.01],随着治疗的进行,该指标逐渐恢复到正常水平.结论 胰岛素可能通过调节凋亡配体的分泌而抑制烧伤后细胞凋亡.     

胰岛素对烫伤大鼠肝脏氧自由基损伤的保护作用

目的 了解大鼠严重烫伤后早期应用胰岛素对肝脏氧自由基损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠84只,随机分为正常组、盐水组、胰岛素组,每组各28只.后2组大鼠在背部造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后立即腹腔注射等渗盐水40 ml/kg或皮下注射胰岛素3 U/kg.伤后6、12、24、48 h,检测盐水组和胰岛素组大鼠肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,同时检测肝脏胞间黏附分子1(ICAM-1),光学显微镜下观察肝细胞形态学改变.正常组大鼠亦作相应检测.结果 与正常组比较,盐水组大鼠伤后6 h肝脏T-AOC、SOD明显降低,ROS明显升高(P＜0.05或P＜0.01);伤后12～48 h血清ALT及ICAM-1均高于正常组(P＜0.01).伤后24 h,胰岛素组大鼠肝脏T-AOC、SOD分别为(386±75)、(210±39)U/g,较盐水组(124±18)、(111±9)U/g明显升高(P＜0.01);ROS为(154±29)U/g,较盐水组(351±41)U/g明显降低(P＜0.01).伤后48 h,胰岛素组大鼠血清ALT及肝脏ICAM-1与盐水组比较呈下降趋势(P＜0.01).组织病理学结果显示,胰岛素可减轻烫伤后肝细胞损伤程度.结论 严重烫伤后早期用胰岛素干预,可增强大鼠肝脏抗氧化损伤能力,对肝脏有保护作用.     

牛磺酸对烫伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性的保护作用

目的 了解牛磺酸对大鼠烫伤后心肌线粒体成分和酶活性变化的影响.方法 将120只大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ度烫伤.分为烫伤组(60只),伤后腹腔注射等渗盐水(4mL·kg-1·1%TBSA-1);牛磺酸治疗组(60只),伤后腹腔注射20 g/L牛磺酸液(200 mg/kg).伤后1、3、6、12、24、48 h处死大鼠.取心肌组织检测心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素c氧化酶(CCO)、超氧化物歧化酶(SOD)、Ca2+-腺苷三磷酸酶(ATPase)活性和细胞色素c、细胞色素aa3、丙二醛(MDA)、细胞质及线粒体内ca2+含量.另取10只大鼠作为对照组,模拟烫伤不予补液,1 h后处死大鼠取心肌组织检测以上指标.结果 烫伤组大鼠伤后1 h CCO活性即开始下降,伤后6、12 h下降最明显,而SDH活性在伤后6 h下降最明显,且各时相点均低于对照组;牛磺酸治疗组CCO和SDH下降不明显,伤后3、6、12 h CCO活性与烫伤组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).伤后3、6、12、及24 h烫伤组心肌线粒体细胞色素c和细胞色素aa3均显著降低.而牛磺酸组虽然有所下降,但以上4个时相点的值均高于烫伤组(P＜0.05).烫伤组SOD活性在伤后3、6、12 h均显著性下降,ca2+ATPase活性在伤后3、6、12及24 h均有不同程度下降;而牛磺酸治疗组虽然有所下降,但以上4个时相点SOD、Ca2+-ATPase值均高于烫伤组(P＜0.05).伤后3～48 h烫伤组、牛磺酸治疗组MDA值均高于对照组(P＜0.05),但牛磺酸治疗组低于烫伤组(P＜0.05).伤后1 h烫伤组大鼠心肌线粒体中Ca2+即开始升高为13.7±1.5,伤后3、6、12、24 h分别为24.8±2.6、29.7±3.1、16.3±1.9及13.5±1.7.均高于对照组(10.7±1.6,P＜0.05);心肌细胞质中ca2+在伤后3、6、12、24 h也明显高于对照组(P＜0.05).伤后3、6、12及24 h牛磺酸治疗组大鼠心肌线粒体中ca2+浓度分别为16.8±2.8、18.7±1.9、10.5±1.8及13.3±1.7,均低于烫伤组.结论 牛磺酸对烫伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性破坏具有保护作用,其机制与提高线粒体清除氧自由基的能力和减轻Ca2+超载有关.     

胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的 了解胰岛素样生长因子I(IGF-I)对缺血缺氧致心肌细胞凋亡的影响,探讨其调控机制.方法 分离培养SD乳鼠的心肌细胞.于制备缺血缺氧心肌细胞模型(缺血缺氧组)前1 h,用IGF-I(200μg/L)进行干预(干预组),以缺血缺氧组致伤前测定结果为正常对照(对照组).观察不同时相点心肌细胞凋亡的吸光度(A)值、线粒体膜电位变化及磷酸化Akt蛋白表达变化.结果 对照组心肌细胞凋亡A值为0.18±0.03;缺血缺氧后1、3、6、12 h分别为0.33±0.05、0.61 ±0.06、1.17±0.08、2.25±0.11,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);干预组上述时相点的A值分别为0.26±0.04、0.49±0.05、0.84±0.06、1.63±0.09,与缺血缺氧组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).缺血缺氧6、12 h,心肌细胞线粒体膜电位荧光强度较对照组40.2±10.1下降,分别为18.7±5.1、6.3±1.9(P＜0.01),干预组较缺血缺氧组相对增高,分别为28.8±6.2、12.5±3.1(P＜0.05).与对照组比较,其余各组缺血缺氧后6 h磷酸化Akt蛋白表达量增加.结论 IGF-I对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与IGF-I激活磷脂酰肌醇3-激酶/Akt、增加磷酸化Akt表达、减少细胞色素c的释放有关.     

心肌挫伤后心脏肌钙蛋白-T和心肌酶谱含量的变化及其诊断作用

目的 观察心脏肌钙蛋白－Ｔ（ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉ－Ｔ,ｃＴｎ－Ｔ）和心肌酶谱（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｅｎｚｙｍｅｓ,ＭＥ）在心肌挫伤（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｃｏｎｔｕｓｉｏｎ,ＭＣ）后含量变化及其对ＭＣ的诊断价值。方法 采用兔钝性胸部创伤（ｂｌｕｎｔ ｃｈｅｓｔ ｔｒａｎｍａ,ＢＣＴ）模型,致成中度至重度ＭＣ,分别在伤前、伤后４、８ｈ、２４ｈ测定血清ｃＴｎ－Ｔ和ＭＥ含量。结果 伤后４ｈ,     

丁酸钠对重度烫伤大鼠心脏保护作用的研究

目的:探讨丁酸钠对重度烫伤大鼠心脏的保护作用.方法:雄性SD大鼠48只,随机分为假烫组、烫伤组和丁酸钠组(n=16).烫伤组和丁酸钠组采用沸水水浴法制作50％TBSA Ⅲ度烫伤动物模型,并于制模完成后即刻皮下分别注射丁酸钠400 mg/kg(丁酸钠组)或等体积生理盐水(烫伤组).假烫组以37℃水代替沸水.各组动物于烫伤后2.5 h和5.5 h从尾静脉注射异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖蓝2.5 mg.伤后3h和6h,每组各取8只动物经腹主动脉穿刺取血,测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;同时取心肌组织标本,测定葡聚糖蓝含量,以反映心脏微血管通透性的变化,干/湿重法测定心肌组织含水率.结果:与假烫组相比,烫伤组大鼠伤后3h和6h,血浆CK-MB水平明显升高(P＜0.05);心脏微血管通透性和心肌组织含水率明显增加(P均＜0.05).丁酸钠组大鼠在烫伤后3h和6h,血浆CK-MB水平、心脏微血管通透性和心肌组织含水率虽然高于假烫组,但较烫伤组均明显降低(P均＜ 0.05).结论:丁酸钠能够降低大鼠心肌微血管通透性和组织含水率,对于严重烫伤引起的心肌损害有显著保护作用.     

槲皮素和黄芪甲苷对大鼠缺氧心肌细胞的保护作用

目的 了解并比较槲皮素、黄芪甲苷对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用，寻找其作用的量效关系。方法 将SD乳鼠心肌细胞分成单纯缺氧组（A组）、缺氧＋100mg／L槲皮素组（B组）、缺氧＋50mg／L槲皮素组（c组）、缺氧＋25mg／L槲皮素组（D组）、缺氧＋50．0mg／L黄芪甲苷组（E组）、缺氧＋25．0131mg／L黄芪甲苷组（F组）、缺氧＋12．5mg／L黄芪甲苷组（G组）、缺氧＋10mg／L维生素E组（H组）。各组细胞原代培养后先加入相应浓度的槲皮素、黄芪甲苷、维生素E，再行缺氧处理12h（A组培养后直接行缺氧处理）。检测各组心肌细胞活力和乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS，只检测A、C、F、H组）值。结果B～G组与A组比较，LDH、MDA、ROS（C、F组）值下降，心肌细胞活力、SOD值上升，作用普遍优于H组。在同等高、中、低浓度下，加入黄芪甲苷组的心肌细胞活力和LDH水平总体优于加入槲皮素组（如C、F组的心,肌细胞活力为0．454±0．018、0．471±0．017，LDH为2800±9、2312±52），但两组MDA、SOD和ROS值比较，差异无统计学意义（C、F组的ROS为16．0±5．3、22．4±8．7，P〉0．05）。结论 黄芪甲苷、槲皮素能有效保护缺氧心肌细胞，减轻损伤程度，其作用优于维生素E。黄芪甲苷的保护作用较槲皮素更好，但两者减轻细胞脂质过氧化损伤的作用差异不明显。     

胰岛素在烫伤大鼠脑组织中的表达

目的观察烫伤大鼠脑组织中胰岛素的表达情况。方法将15只Wistar大鼠背部造成30％TBSAⅢ度烫伤(烫伤组),于伤后4、12、24 h以Zamboni液行左心室灌注,然后取大鼠脑组织,用免疫荧光法检测脑组织中胰岛素的表达。另取10只大鼠作为对照组,除不烫伤外,其余处理同烫伤组。结果对照组大鼠脑组织中胰岛素的表达不明显。烫伤组大鼠伤后4 h脑组织的嗅球、大脑皮质等部位可见胰岛素免疫反应阳性细胞,其细胞胞体较大,呈椭圆形或梭形;胞核大、圆而透亮,突起明显;阳性产物主要分布于细胞的细胞质,少数细胞的突起内也可见明显的胰岛素阳性产物。伤后12、24 h烫伤组大鼠脑组织中未见胰岛素免疫反应阳性细胞。结论大鼠脑组织具有自身合成胰岛素的潜能,但在正常基础状态下合成量极少,而在烫伤的应激状态下合成量增加。     

胰岛素干预对严重烧伤后早期大鼠血管内皮细胞的保护效应

目的了解胰岛素对严重烧伤后早期大鼠血管内皮细胞的保护效应，并分析相关机制。方法将sD大鼠分成假伤组（7只）、烧伤组（7只）和处理组（7只）。后2组制成30％TBSAⅢ度烧伤（用94℃水浴烫伤）模型，假伤组37℃水浴模拟致伤过程。伤后即刻，各组经腹腔注射等渗盐水（40ml／kg）抗休克，同时处理组皮下注射胰岛素3U／kg、另2组同法注射等体积等渗盐水。伤后24h透射电镜下观察各组大鼠主动脉内皮细胞形态及结构，检测其血糖、血清一氧化氮（NO）及各型一氧化氮合酶（NOS）水平。结果镜下可见，处理组较烧伤组主动脉内皮细胞受损程度明显减轻。伤后24h，假伤组、烧伤组、处理组大鼠血糖分别为（4．9±0.8）、（8．2±1.0）、（7．1±0.．7）mmol/L，后2组均显著高于假伤组（P〈0．01），但处理组明显低于烧伤组（P〈0．05）。处理组血清NO、总NOS和结构型NOS（cNOS）水平均明显高于烧伤组（P〈0．01），但2组血清诱导型NOS水平比较，差异无统计学意义（P〉0、05）。结论胰岛素干预可保护严重烧伤后早期大鼠的血管内皮细胞，其机制可能与促cNOS水平升高从而使生理态NO合成增加有关。     

严重烫伤大鼠肝细胞胰岛素信号转导缺陷机制的研究

目的　探讨严重烫伤大鼠肝细胞中胰岛素信号转导缺陷的环节 ,初步阐明严重烫伤后机体产生胰岛素抵抗的分子基础。　方法　以 30 %体表面积Ⅲ度烫伤大鼠为模型 ,采用麦胚凝集素 葡聚糖 4B亲和层析技术 ,部分纯化大鼠肝细胞胰岛素受体 ,通过胰岛素受体结合、受体蛋白自身磷酸化、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影和外源性底物磷酸化方法 ,观察烫伤大鼠早期肝细胞胰岛素受体结合行为、受体β 亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶 (TPK)活性的变化。 　结果　大鼠烫伤后 3d ,肝细胞胰岛素受体最大结合容量及亲和力无明显改变 ;受体 β 亚基自身磷酸化能力明显下降 ;受体TPK活性明显降低 ,对胰岛素刺激的反应性明显减退。　结论　严重烫伤后 ,大鼠肝细胞中的胰岛素信号转导发生偶联障碍 ,导致胰岛素生物效应受体后缺陷 ,可能是胰岛素抵抗发生的分子基础。     

局部应用胰岛素对大鼠烫伤创面基底膜形成的影响

目的观察胰岛素对大鼠深Ⅱ度烫伤再上皮化创面基底膜(BM)形成的影响。方法将96只SD大鼠背部造成45cm2深Ⅱ度烫伤,根据创面皮下注射药物的不同分为对照组(创面皮下浸润注射2ml等渗盐水,48只)和胰岛素组(创面皮下浸润注射0.1U长效混悬锌胰岛素 等渗盐水2ml,48只)。两组大鼠均在伤后第1天开始注射,1次/2d,直至创面完全上皮化。于伤后2、3、4、5、6、10、14d及创面完全再上皮化时,每组每时相点处死6只大鼠,取创缘1cm宽皮肤,利用网状纤维染色及透射电镜观察创面BM形态,用蛋白印迹法测定角质形成细胞(KC)层粘连蛋白(LN)5mRNA表达水平和LN含量。结果胰岛素大鼠组再上皮化创面BM结构清晰完整。伤后10、14d胰岛素组LN-5mRNA表达水平高于对照组(P<0.05或0.01)。创面完全再上皮化时两组大鼠LN-5mRNA表达水平均减弱。伤后14d及创面完全再上皮化时胰岛素组LN的蛋白表达量各为56±8、101±13,显著高于对照组39±5、73±16(P<0·05).结论烫伤创面皮下浸润注射0.1U胰岛素可以加速创面再上皮化,改善再上皮化创面质量。     

锌-金属硫蛋白对严重烫伤大鼠氧自由基损伤的保护作用

目的　研究严重烫伤大鼠延迟复苏后氧自由基损伤及锌-金属硫蛋白(MT)的保护作用。　方法　采用大鼠30%TBSAⅢ度烫伤模型,分成正常对照组、延迟复苏组、MT治疗组、维生素C(VitC)治疗组,应用电子自旋共振(ESR)技术和传统间接检测手段,观察伤后24、48h血浆及烧伤水肿液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）的变化,同时对心、肝、肾、小肠的组织形态及血浆生化指标进行检测。　结果　延迟复苏组血SOD含量下降,血及水肿液MDA明显升高,各脏器组织形态及血生化指标发生明显变化。MT治疗组较延迟复苏组SOD增高（P<0.05）,MDA含量明显下降（P<0.05）,脏器组织形态及血生化指标改善,且优于VitC治疗组。　结论　严重烫伤大鼠延迟复苏后存在氧自由基损伤,应用锌-金属硫蛋白治疗有一定保护作用。     

局部应用胰岛素对烫伤大鼠创面愈合的影响

目的观察局部应用小剂量胰岛素对烫伤大鼠创面愈合的影响,探讨其可能的作用机制.方法制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型.部分大鼠创面下浸润注射0.1、1.0 U胰岛素,分别设为B、C组;以创面下浸润注射等渗盐水(A组)和腹部皮下注射0.1 U胰岛素(D组)的烫伤大鼠作为对照.记录各组创面愈合时间,伤后3 d起隔日计算A、B、C组的创面愈合百分率.观察各组创面愈合后的组织形态学改变,采用流式细胞仪对各组创面表皮细胞进行细胞周期分析,并测定血糖浓度的变化. 结果A、B、C、D组创面愈合时间分别为(24.57±5.19)、(18.36±4.12)、(21.46±2.97)、(24.50±1.05)d,B组较其他3组明显缩短(P<0.01).伤后5、9、11、13、15、17、19 d B组创面愈合率均明显高于A组,且伤后17 d时明显高于C组(P<0.05～0.01).组织形态学观察可见A组表皮层薄,钉脚数量少,真皮层内多见纤维细胞;B、C组表皮层增厚,钉脚数量多,真皮层内多见成纤维细胞.B组伤后4 d S期细胞比例明显高于A组(P<0.01);B组伤后4、5 d G2-M期细胞比例均明显高于A、C组(P<0.05～0.01).烫伤后24 h A组血糖波动在3.42～4.62 mmol/L;B组血糖变化规律与A组相似;C、D组注射后1 h血糖明显降低(P<0.01),注射后4 h逐渐恢复正常.结论局部应用小剂量胰岛素能明显地促进烫伤大鼠创面愈合,胰岛素可加速修复细胞的增殖分裂可能是其作用机制之一.     

胰岛素对烫伤血清诱导骨骼肌成肌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨胰岛素对烫伤大鼠血清诱导大鼠骨骼肌成肌细胞株L6凋亡的调控作用及机制.方法 体外培养L6细胞,按照随机数字表法分为对照组、烫伤血清组、胰岛素组和烫伤血清+胰岛素组.在上述4组细胞培养液中分别添加体积分数20％正常大鼠血清、体积分数20％烫伤大鼠血清、体积分数20％正常大鼠血清+100 nmol/L胰岛素、体积分数20％烫伤大鼠血清+100 nmol/L胰岛素,孵育48 h.行Hoechst 33258染色,于倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并计数凋亡细胞;行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞磷酸化(p一)蛋白激酶B(Akt)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bax、Bcl-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase-3)的蛋白表达量.对实验数据行组间或配对t检验.结果 (1)倒置荧光显微镜下可见,烫伤血清组凋亡细胞为每视野(59.6±3 9)个,显著多于对照组、胰岛素组、烫伤血清+胰岛素组[每视野(4 9±2.6)、(5 5±2 1)、(19.7±2 3)个,t值分别为28.53、29.86、21.53,P值均小于0.01].(2)流式细胞仪检测结果显示,烫伤血清组细胞凋亡率为(18.5±1.8)％,明显高于对照组、胰岛素组及烫伤血清+胰岛素组[(1.1±0 6)％、(1 5±0 3)％、(7.8±0.6)％,t值分别为22.41、22 83、13 92,P值均小于0 01].(3)蛋白质印迹检测显示,烫伤血清组Bax蛋白表达量(1.12±0.63)及活化caspase-3蛋白表达量(2.15±0.51)明显高于对照组(0.16±0 03、0.21±0.03,t值分别为3 80、10 69,P值均小于0 01),p-Akt蛋白表达量(0.20±0.03)明显低于对照组(0 42±0 07,t=-8.46,P＜0.01);Bcl-2及p-PI3K蛋白表达量(0.19±0 03、0.17±0.03)与对照组(0.26±0 09、0 28±0.07)接近(t值分别为-2.73、-1.14,P值均大于0 05).与烫伤血清组比较,烫伤血清+胰岛素组Bax蛋白表达量(0.40±0.14)和活化caspase-3蛋白表达量(0.83±0.18)明显降低(t=-3.23,P ＜0.05;t =6.66,P ＜0.01),Bcl-2、p-Akt及p-PI3K蛋白表达量均升高(0.39±0.10、0 78±0 03、0.47±0.12,t值分别为4.07、18.71、5 05,P＜0.05或P＜0.01).结论 烫伤大鼠血清可显著促进骨骼肌成肌细胞凋亡,胰岛素能通过PI3K/Akt信号途径抑制细胞凋亡.     

早期应用冬眠合剂对严重烫伤大鼠小肠的保护作用

目的 了解早期应用冬眠合剂对严重烫伤大鼠小肠的保护作用.方法 将66只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假伤组6只、烫伤组30只、烫伤+冬眠合剂组30只.麻醉后,将后2组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤,假伤组37℃水浴模拟烫伤.3组大鼠伤后均立即腹腔注射乳酸钠林格液(2 mL·kg-1·%TBSA-1)复苏;同时烫伤+冬眠合剂组皮下注射冬眠合剂(50 mg/mL哌替啶、25 mg/mL氯丙嗪、25 mg/mL异丙嗪各1 mL加入125 mL生理盐水中)12 mL/kg,假伤组和烫伤组注射生理盐水12 mL/kg.分别于伤后3、6、12、24、48 h取烫伤组与烫伤+冬眠合剂组大鼠各6只(假伤组伤后3 h取材),采集血液和小肠组织标本.观察烫伤组与烫伤+冬眠合剂组大鼠伤后24 h、假伤组伤后3 h小肠组织病理变化,并用免疫组织化学法检测小肠组织胞间黏附分子1(ICAM-1)和CD68的表达.采用ELISA法测定各组大鼠血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、IL-1β、TNF-α、IL-10水平.数据行单因素方差分析.结果 (1)伤后24 h,烫伤组大鼠小肠黏膜轻度出血,炎症细胞浸润、上皮细胞脱落;烫伤+冬眠合剂组较烫伤组肠绒毛排列规则,无明显充血、水肿表现.(2)烫伤组小肠ICAM-1和CD68阳性表达率分别为(1.69±0.27)%和(0.80±0.09)%,均显著高于假伤组的(0.77±0.10)%和(0.30±0.05)%(F值分别为77.303、66.933,P<0.05或P<0.01)与烫伤+冬眠合剂组的(0.53±0.09)%和(0.32±0.06)%(F值同前,P值均小于0.01).(3)烫伤+冬眠合剂组大鼠伤后12、24 h D-乳酸水平明显低于烫伤组(F值分别为20.936、19.854,P值均小于0.01).烫伤+冬眠合剂组DAO水平于伤后3、12 h显著低于烫伤组(F值分别为21.930、11.342,P值均小于0.05).(4)烫伤组各时相点IL-1β、TNF-α水平均明显高于假伤组(P值均小于0.01),烫伤+冬眠合剂组伤后6、12、24 h IL-1β、TNF-α水平均低于烫伤组(F值分别为96.517、17.365、79.715与21.328、17.682、28.424,P<0.05或P<0.01);烫伤+冬眠合剂组各时相点IL-10水平均高于烫伤组,并在6、24 h时差异具有统计学意义(F值分别为8.668、19.634,P<0.05或P<0.01).结论 早期应用冬眠合剂可减轻严重烫伤大鼠小肠黏膜水肿和损害,该机制可能与其降低肠道ICAM-1的表达和血液炎症介质水平、减少肠道局部炎症细胞数量有关.