7-二氟亚甲基-5,4’-二甲氧基染料木黄酮通过下调核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达抑制血管内皮细胞与单核细胞的黏附

目的研究7-二氟亚甲基-5,4’-二甲氧基染料木黄酮对氧化诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响,并初步探讨其作用机制。方法蛋白定量分析法测定内皮细胞与单核细胞的黏附率,酶联免疫吸附法检测E选择素、细胞间黏附分子1的释放,Western Blotting检测核因子κB、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达。结果1.0mmol/L H2O2孵育内皮细胞24h,内皮细胞与单核细胞的黏附增多,E选择素和细胞间黏附分子1的释放增加,核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达上调。用7-二氟亚甲基-5,4’-二甲氧基染料木黄酮预处理后可见内皮细胞与单核细胞的黏附率降低,E选择素和细胞间黏附分子1的释放减少,核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达下调。结论7-二氟亚甲基-5,4’-二甲氧基染料木黄酮对氧化诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附及黏附分子E选择素、细胞间黏附分子1的释放有明显抑制作用,其作用机制可能与下调核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达有关。     

鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B对H2O2诱导的海马神经元损伤的作用及可能机制

目的探讨鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B(NB)对H_2O_2诱导的海马神经元细胞损伤的作用及可能机制。方法将对数生长期的HT22海马神经细胞分为正常对照组、H_2O_2处理组、NB干预组(H_2O_2+NB)、单独NB组和阳性药物对照组(H_2O_2+NAC)。其中H_2O_2组为加入终浓度为300μmol/L的H_2O_2与细胞共孵育24 h;H_2O_2+NB组和H_2O_2+NAC组是于H_2O_2处理前2 h分别给予100μmol/L的NB或5 mmol/L的NAC共孵育24 h。为明确磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/血红素氧合酶1(PI3K/Akt/HO-1)途径是否参与了NB的神经保护作用,对细胞给予PI3K抑制剂Ly294002预处理30 min,再加入NB及H_2O_2共孵育24 h。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,生化试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)及细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax,及相关信号通路蛋白p-Akt和HO-1水平。采用SPSS 19.0软件进行统计分析,组间比较采用方差分析或Tukey′s检验。结果 (1)细胞活性。与空白对照组比较,H_2O_2组细胞存活率明显下降,细胞上清LDH含量显著增加,细胞形态出现明显皱缩、空泡变性及细胞减少。给予NB或NAC干预可显著增加细胞活性、减少LDH释放,细胞形态的破坏得到明显改善。(2)氧化损伤指标。与正常对照组比较,H_2O_2组细胞MDA水平显著增加,SOD及GSH活性显著降低;与H_2O_2组比较,加入NB或NAC的细胞MDA漏出量显著降低,SOD、GSH活性显著升高。(3)细胞凋亡情况。流式细胞术结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显增高,加入NB及NAC处理后,与H_2O_2组比较,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2处理组Bcl-2表达显著下降,Bax水平显著升高;与H_2O_2处理组比较,给予NB或阳性药物NAC处理的细胞Bcl-2显著升高,Bax水平显著下降。(4)相关信号通路蛋白表达。Western blotting显示,与正常对照组比较,H_2O_2组p-Akt、HO-1水平升高;与H_2O_2组相比,NB+H_2O_2组p-Akt、HO-1水平显著升高(P0.05)。上述所有指标在正常对照组与NB组细胞间比较差异均无统计学意义(P0.05)。另外,加入Ly294002组的细胞p-AKT及HO-1表达水平均较H_2O_2+NB组显著降低。结论 NB可通过抗氧化、抗凋亡减轻H_2O_2诱导的神经元损伤,发挥神经保护作用,其机制可能是激活PI3K/Akt/HO-1信号通路。     

miR-92a对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡以及MAPK-ERK通路的影响

目的探讨下调miR-92a表达对过氧化氢(H_2O_2)诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞分为空白对照组(Blank)、H_2O_2模型组、阴性对照组(NC)、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组。Blank组不经任何特殊处理。NC组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞进行转染,q RT-PCR法验证转染效率。另H_2O_2模型组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor+H_2O_2组细胞经H_2O_2诱导6 h,流式细胞术法检测细胞凋亡率。采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量。Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路蛋白磷酸化情况。结果成功建立miR-92a inhibitor转染细胞模型。经H_2O_2处理6 h后,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组H9C2细胞的凋亡率、ROS产生量、MDA和LDH释放量均低于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组,而细胞培养上清中SOD水平高于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组(P0.05)。Western blot法检测,与H_2O_2模型组相比,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组细胞Bcl-2蛋白表达量上调,Bax、Caspase-3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、p-ERK蛋白表达量降低(P0.05)。H_2O_2对H9C2细胞AKT和ERK蛋白表达量无影响(P0.05)。结论下调miR-92a表达可抑制H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡,其可能的作用机制与降低ROS释放量、调控Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白以及MAPK-ERK信号通路有关。     

miR-23b通过MAPK信号通路对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究microRNA(miR)-23b对H_2O_2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H_2O_2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-) p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性。结果转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0. 05)。转染后经H_2O_2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H_2O_2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0. 05)。MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论上调miR-23b可减少H_2O_2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H_2O_2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关。     

二苯乙烯苷对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的影响

目的探讨二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,以过氧化氢作用内皮细胞建立细胞凋亡模型,再加入不同浓度的二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR、免疫印迹法检测Caspase-3的表达。结果与空白对照组相比,300μmol/L过氧化氢作用后细胞增殖明显受到抑制,Ho-echst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Caspase-3的表达量显著增加;加入二苯乙烯苷作用后,与过氧化氢组比较,10μmol/L二苯乙烯苷能够显著提高细胞增殖率,抑制细胞凋亡,并且使Caspase-3的表达减少(P<0.05)。结论二苯乙烯苷能够抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制与抑制Caspase-3表达有关。     

下调肌细胞增强因子2C基因对动脉粥样硬化血管内皮细胞增殖凋亡及核因子-κB信号通路的影响

目的探讨下调肌细胞增强因子(MEF) 2C基因对动脉粥样硬化(AS)血管内皮细胞增殖凋亡及核因子(NF)-κB信号通路的影响及机制。方法 Western印迹检测AS患者斑块组织和正常对照组MEF2C的蛋白表达;将MEF2C的特异性siRNA(si-MEF2C)及阴性对照siRNA(NC)转染人脐静脉血管内皮(ECV)-304细胞,Western印迹检测转染效果。ECV-304细胞经H_2O_2处理后转染si-MEF2C,细胞分为NC组、H_2O_2组、H_2O_2+si-MEF2C组和正常对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平; Western印迹检测核因子(NF)-κB p65、NFkappa B激酶抑制剂(IKK)α、增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达。结果 AS患者斑块组织MEF2C蛋白表达显著高于正常对照组(P<0. 05); MEF2C的特异性siRNA转染ECV-304细胞后MEF2C蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05)。H_2O_2组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著低于NC组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著高于NC组(P<0. 05),而H_2O_2+si-MEF2C组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著高于H_2O_2组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著低于H_2O_2组(P<0. 05)。结论下调AS血管内皮细胞MEF2C基因表达可提高细胞活力,抑制细胞凋亡,机制可能是细胞内ROS水平降低及NF-κB信号通路的下调。     

7-二氟甲氧基金雀异黄素对H_2O_2诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用

目的 探讨7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制.方法 荧光分光光度计检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附,酶联免疫吸附法检测E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子的释放,Western blotting检测P38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平.结果 H2O2处理血管内皮细胞24 h后,内皮细胞-单核细胞的黏附率显著增加,内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放增加;加入7-二氟甲氧基金雀异黄素后,血管内皮细胞-单核细胞的黏附率以及内皮细胞释放E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子呈浓度依赖性减少.H2O2处理血管内皮细胞24 h后,可显著激活P38丝裂原活化蛋白激酶,这一作用可被7-二氟甲氧基金雀异黄素所抑制.给予P38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制荆SB203580亦可阻断H2O2诱导的内皮细胞-单核细胞黏附及内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放.结论 7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附具有拮抗作用,其机制可能与其抑制P38丝裂原活化蛋白激酶的激活进而阻断内皮细胞释放黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1有关.     

地榆皂苷Ⅱ对H_2O_2诱导H_9C_2心肌细胞株凋亡的保护机制研究

目的探讨地榆皂苷Ⅱ对H_2O_2诱导的H_9C_2心肌细胞株凋亡的作用机制。方法采用不同浓度地榆皂苷Ⅱ(分别为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)处理H_9C_2心肌细胞株,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)测定细胞活性,荧光显微镜测定活性氧(ROS)表达量,利用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,通过蛋白免疫印迹法检测Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)等凋亡相关蛋白含量和细胞磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、卵黄状黄斑病蛋白3(Bestrophin3)表达情况及应用细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抑制剂后表达量的变化。结果 MTT检测结果显示:地榆皂苷Ⅱ对心肌细胞株无毒副作用,可有效抑制H_2O_2对心肌细胞株的损伤。H_2O_2能明显提高凋亡相关蛋白Bax、Casepase-3及Casepase-9表达;地榆皂苷Ⅱ可减少心肌细胞株ROS产生,促进p-ERK1/2表达,并抑制Bax、Casepase-3及Casepase-9表达。应用ERK1/2抑制剂后结果发现,Bestrophin3表达量明显下降(P0.05)。结论地榆皂苷Ⅱ可有效抑制心肌细胞株凋亡,原因可能通过促进依赖于ERK1/2表达的Bestrophin3,抑制心肌细胞株凋亡。     

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。     

葛根总黄酮上调磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B保护内皮细胞损伤

目的探讨葛根总黄酮(PR)对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤保护作用及其可能机制。方法分离培养大鼠主动脉内皮细胞。MTT法检测细胞活力,免疫印迹检测PR对PI3K和AKT蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况并进行细胞自噬荧光分析。组间比较采用单因素方差分析。结果与PR+H_2O_2组相比,PR+H_2O_2+LY294002组的A_(570nm)值显著降低[(2.07±0.08)vs(1.69±0.04),0.05]。与对照组相比,H_2O_2组25.47%)和PR+H_2O_2组(13.26%)的细胞凋亡率均显著增加(P0.05);而与H_2O_2组相比,PR+H_2O_2组的细胞凋亡率亦显著降低(25.47%vs 13.26%;P0.05)。与对照组相比,H_2O_2组和PR+H_2O_2组的自噬荧光强度均显著增高(P0.05),PR+H_2O_2组的自噬荧光强度显著低于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2+PR组的PI3K和AKT蛋白表达显著高于对照组(P0.05),PR+H_2O_2+LY294002组的PI3K和AKT蛋白表达显著低于H_2O_2+PR组(P0.05)。结论PR可通过抑制细胞过度自噬和凋亡,促进内皮细胞存活,对H_2O_2诱导的内皮细胞损伤有保护作用,且其作用机制可能与调控PI3K/AKT表达上调相关。     

葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响。方法葛根素处理大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组(细胞无特殊处理)、H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2干预细胞)和葛根素+H_2O_2组(250μmol/L葛根素和200μmol/L H_2O_2干预细胞),SB203580作为p38信号通路抑制剂,各组细胞处理24 h,通过流式细胞仪检测各组凋亡率;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(酶切caspase3)、p53、p-p38的蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率显著升高,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著升高(P0.05);与H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2组凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05);与葛根素+H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2+SB203580组细胞凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论葛根素可通过抑制p38信号通路及下调酶切caspase3和p53表达降低H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡。     

miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、ROS水平及PI3K/AKT信号通路的影响研究

目的:探索miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、活性氧簇(ROS)水平及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、NC组、H_2O_2组、miR-182mimics组和miR-182inhibitor组,各组细胞均培养24h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-182的mRNA表达;CCK8法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67和细胞增殖核抗原(PCNA),凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:与对照组比较,H_2O_2组细胞miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9的表达均显著升高(均P0.05);与H_2O_2组比较,miR-182mimics组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著升高,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低(均P0.05),miR-182inhibitor组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著升高(均P0.05)。结论:H_2O_2刺激可降低H9C2心肌细胞miR-182基因表达,过表达miR-182可促进细胞增殖,降低细胞凋亡,激活PI3K/AKT信号通路,其中对细胞增殖凋亡的影响方式是降低ROS含量,上调ki67和PCNA表达,下调Caspase-3和Caspase-9表达;抑制miR-182表达的结果则相反。     

生存素通过线粒体途径影响K5诱导的血管内皮细胞凋亡

目的探讨生存素(Survivin)在人纤溶酶原K5诱导血管内皮细胞凋亡中的作用。方法分离培养脐带血管内皮细胞,用K5诱导处理,应用qRT-PCR和Western blot测定细胞中生存素表达。在细胞中转染生存素过表达载体,同时用K5处理细胞,流式细胞术测定细胞凋亡情况,JC-1法测定细胞线粒体膜电位,比色法测定细胞中三磷酸腺苷(ATP)的合成水平和细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,用H2DCFDA法测定细胞中活性氧(ROS)水平,Western blot测定细胞色素C(Cyt C)在线粒体和胞质中的水平。结果 K5诱导处理后,血管内皮细胞中生存素的转录和表达水平均降低,而转染生存素过表达载体后的细胞中生存素表达水平升高。生存素过表达的血管内皮细胞经K5诱导处理以后,细胞凋亡率降低,细胞线粒体膜电位升高,细胞合成的ATP增加,Caspase-3、Caspase-9活性降低,细胞中ROS水平减少,线粒体中Cyt C水平升高,而胞质中Cyt C水平降低,与只经过K5处理的细胞相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 K5可诱导血管内皮细胞中生存素表达下调,而上调生存素表达可抑制K5诱导的内皮细胞凋亡。     

血脂康对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞凋亡的拮抗作用

目的研究血脂康对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养HUVEC,实验分为空白对照组、ox-LDL组、ox-LDL+不同浓度(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)血脂康组。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染细胞检测细胞凋亡,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印迹分析细胞色素C(CytC)、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达情况。结果血脂康(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)可拮抗ox-LDL诱导的HUVEC凋亡、ROS水平增加,100 mg/L血脂康可下调细胞CytC、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达。结论血脂康可通过减少ROS形成而抑制CytC释放、减少Caspase-3和PARP-1活化抑制线粒体凋亡途径启动,拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡。     

染料木黄酮对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响

以二甲亚砜为溶剂配制不同浓度染料木黄酮处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞,用流式细胞仪检测其细胞凋亡及细胞周期的变化.发现与对照组比较,随着染料木黄酮处理浓度的增高,乳腺癌细胞G0～G1期细胞的百分比逐渐降低,G2～M期细胞的百分比逐渐增高;各组中均未见明显的凋亡峰.认为染料木黄酮处理24 h后对MDA-MB-435细胞的增殖和凋亡没有明显的影响.染料木黄酮引起F-肌动蛋白解聚,不是由于其诱导细胞发生凋亡所致.     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导食管癌细胞EC 9706凋亡及其机制的探讨

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS一398对食管癌细胞株EC 9706增殖及凋亡的影响,砌究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨NS-398诱导Ec 9706细胞凋亡的作用机制.方法 NS-398作用EC 9706细胞后,MTT法测定NS-398对人食管癌EC 9706细胞增殖的抑制率;DNA片段分析法和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果 NS-398(10～100μmol/L)对EC 9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导EC 9706细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;NS-398可降佴Survivin蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论 NS-398可诱导人食管癌细胞株EC 9706凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Capase-3表达有关.     

阿托伐他汀通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的研究阿托伐他汀对高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及其分子机制。方法将培养的人脐静脉内皮细胞与不同浓度的葡萄糖(5.6 mmol/L、17.6 mmol/L、33.3 mmol/L)及阿托伐他汀(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)作用24 h后用吖啶橙/溴化已啶荧光染色观察凋亡细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞增殖率,流式细胞仪和W estern Blotting分别检测细胞早期凋亡率及Bcl-2/Bax蛋白表达。结果随着葡萄糖浓度的增加,人脐静脉内皮细胞增殖率逐渐降低(P0.05),细胞早期凋亡率逐渐升高(P0.05)。人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,Bax蛋白表达逐渐增强。用不同浓度的阿托伐他汀干预后,人脐静脉内皮细胞的增殖率逐渐升高(P0.05),而凋亡率逐渐降低(P0.05);人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白表达逐渐增强,Bax蛋白表达逐渐减弱。其中,与高糖组比较,10μmol/L阿托伐他汀干预组能提高Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax蛋白表达(P0.05)。结论阿托伐他汀可能通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达抑制高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

高葡萄糖刺激血管内皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4表达上调、活性氧增加及细胞凋亡

目的研究在高葡萄糖刺激的条件下,人脐静脉内皮细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4的表达、细胞内活性氧以及细胞凋亡的变化。方法倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;免疫荧光法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;高葡萄糖刺激人脐静脉内皮细胞,用逆转录聚合酶链反应检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA水平,Western blotting检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4蛋白表达的变化,DCFH-DA检测细胞内活性氧生成量,流式细胞仪和Hoechst染色检测细胞凋亡。结果高葡萄糖刺激人脐静脉内皮细胞时,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA及蛋白表达上调,细胞内活性氧生成增加,细胞凋亡增加。结论高葡萄糖处理促进人脐静脉内皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4表达上调并引起细胞内活性氧生成和凋亡增加。     

细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞凋亡中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,为阐明血管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液(10-6mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hochest33258荧光染色观察凋亡细胞形态学的变化,利用RT-PCR法分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01),与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,18 h达到高峰(P<0.01),24 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论 ERK1/2信号转导途径参与血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

2-甲氧基雌二醇对SKM-1细胞凋亡中bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡过程中bcl-2/bax表达的影响.方法 2-ME与SKM-1细胞共同培养,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期;RT-PCR技术检测bcl-2和bax mRNA表达.结果 1～8 μmol/L 2-ME作用后,SKM-1细胞凋亡率上升呈剂量依赖性;细胞被阻滞于G2/M期;细胞bcl-2 mRNA表达量下调,bax mRNA表达量上调.结论 2-ME诱导SKM-1细胞凋亡与细胞G2/M期阻滞和bcl-2/bax比率下降有关.