日本血吸虫卵抗TNBS诱导的小鼠结肠炎的观察

目的 探讨日本血吸虫卵对2,4,6 三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的小鼠结肠炎的抑制作用。 方法 50只6～8周龄BALB/c 雌性小鼠随机分为正常对照组、乙醇对照组、虫卵对照组、结肠炎组和虫卵免疫结肠炎组，10只/组。虫卵免疫结肠炎组以日本血吸虫卵经腹腔注射免疫小鼠 4次，10 000个卵/鼠，每次间隔1周，末次免疫后6 d用TNBS诱导结肠炎模型。观察对照组和实验组小鼠的体重、结肠病理改变及细胞因子水平的变化。 结果 结肠炎组小鼠经TNBS诱导后，出现明显的粘液血便、体重下降、结肠充血水肿，肠黏膜呈现严重炎性浸润伴溃疡，IFN-γ水平为（3.47±0.87） ng/ml，IL-4水平为（146.06±45.76） pg/ml。虫卵免疫结肠炎组小鼠症状较轻，体重恢复较快，IFN-γ表达被明显抑制，其水平为（1.53±0.51） ng/ml，IL-4水平显著升高至（598.50±135.90） pg/ml。 结论 日本血吸虫卵对TNBS诱导的BALB/c小鼠结肠炎具有抑制作用。     

源自日本血吸虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的 探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Schistosoma japonicum cysteine protease inhibitor,SjCystatin）对葡聚糖硫酸钠（Dextransulphate sodium,DSS）诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎的抑制作用。方法 18只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组：A组为对照组,B组为肠炎组,C组为SjCystatin治疗组。A组给予蒸馏水,B、C组连续饮用3％DSS溶液7 d诱发肠炎;C组每天经腹腔注射10 μg SjCystatin,A和B组注射PBS。观察各组小鼠临床表现,进行临床疾病活动指数（Disease activity index,DAI）评分。第7天处死小鼠,观察结肠大体及组织病理改变。同时提取小鼠结肠组织匀浆,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其上清中肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、白细胞介素?4（IL?4）、IL?6及IL?10水平。结果 与A组[（[0.50±0.28]）分]相比,B组小鼠DAI评分[（[9.30±1.30]）分]明显增加,建模后小鼠结肠病理损伤显著,结肠组织匀浆上清中TNF?α为（321.33 ± 67.01） pg/mL,IL?6为（403.58 ± 180.51） pg/mL,均明显上升。C组小鼠DAI评分为（[6.67±1.57]）分,显著下降（F = 86.86,P < 0.01）;小鼠结肠大体及组织病理明显缓解,结肠组织匀浆上清中TNF?α为（188.14 ± 40.14） pg/mL,IL?6为（209.71 ± 48.47） pg/mL,均显著下降（F = 17.46、9.89, P < 0.01）。结论 SjCystatin对DSS诱导的C57BL/6小鼠急性溃疡性结肠炎有抑制效果。     

日本血吸虫造卵物质组织化学动态观察

日本血吸虫造卵物质组织化学动态观察陈子宸，林英娇我国何毅勋［１，２］已阐明了日本血吸虫的发育和虫卵形成的生理，并以组织化学方法证实雌虫生殖细胞中的卵黄腺细胞中的卵黄颗粒球是制造卵壳物质的前身物，包含蛋白质、酚酶和酚类物质［１，２］。本研究以组织化学方...     

SIEA免疫血清对体外培养的日本血吸虫卵 胚胎发育的作用

目的 采用体外培养方式,探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗源（SIEA）免疫血清的抗卵胚胎发育的作用。方法 从日本血吸虫小鼠肝脏无菌分离提取虫卵,转入RPMI-1640培养基中,对照组与试验组分别加入正常鼠血清 SIEA免疫血清。试验1：培养虫卵30d;试验2：培养虫卵14d。观察统计各期虫卵比较。结果 在试验1中,SIEA免疫血清组成熟卵比例与对照组比较,下降22.5%,初产卵、胚胎卵和死亡卵比例均高于对照组。在试验2中,SIEA免疫血清成熟卵比例下降14.7%,胚胎卵比例上升24.4%。结论 体外培养系统中SIEA免疫血清具有抗日本血吸虫卵胚胎发育的作用。     

日本血吸虫未成熟卵抗血清对日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选

目的为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血吸虫基因。方法通过采用抗日本血吸虫未成熟卵SIEA26—28kDa免疫血清对日本血吸虫成虫cDNA文库进行筛选。结果共获得阳性克隆23个,经重复筛选之后,随机挑取其中的5个阳性克隆,分别进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示获得单一扩增条带,其大小位于150bp～1.5kb之间。结论从SjcDNA文库中筛选出抗卵相关阳性克隆,有关分析鉴定在进一步进行中。     

溃疡性结肠炎免疫学机制的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是一种反复发作的肠道慢性炎症性疾病,主要表现为结肠和(或)直肠黏膜充血水肿、浅表溃疡,伴黏液脓血便以及肠道功能障碍.UC的病因未明,发病率高,肠道长期慢性炎症的刺激容易发生恶变.UC还被报道与多种肠道外疾病相关,如硬化性胆管炎、关节炎、心包炎等.因此,UC受到了广泛的关注,国内外学者对其病因和发病机制进行了广泛而深入的研究,目前比较一致的观点认为UC的发病是由于具有遗传易感性的人群在环境危险因素作用下,其免疫系统丧失了对肠道菌群抗原的免疫耐受,引起失控的炎症反应,造成组织损伤和功能障碍.异常的免疫应答介导的炎症反应是引起肠黏膜病理损伤的关键因素.     

溃疡性结肠炎患者外周血调节性T细胞分析

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）的一种，其病因可能涉及遗传、免疫、感染、精神等多种因素，但确切的发病机制尚无定论。近年研究提示，调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）作为具有抑制效应性T细胞增殖和活性的细胞亚群。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化机制研究

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其免疫调节机制。方法设置实验组1和2,实验组1小鼠从第1周开始高脂饮食喂养,分为预防组和对照组,第1周时分别腹腔注射SEA及PBS,每周1次,共4次;实验组2小鼠高脂饮食喂养至第14周,分为治疗组和对照组,第14周时分别注射SEA及PBS,每周1次,共4次。第22周处死小鼠,观察SEA对动脉粥样硬化的干预作用以及小鼠体内的细胞因子和调节性T细胞亚群CD4+CD25+FoxP3+T细胞水平的变化。结果给予SEA后,与相应对照组比较,预防组和治疗组小鼠血清总胆固醇含量均显著降低,外周血TNF-α、IL-10水平均显著下降;预防组小鼠动脉粥样硬化斑块面积被显著抑制,但治疗组无明显变化。第22周时,预防组外周血CD4+CD25+FoxP3+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.4±0.9)%,与对照组[(2.6±0.3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗组细胞比例给予SEA前后差异无统计学意义(P<0.05)。结论SEA能降低ApoE-/-小鼠血清总胆固醇水平;预防性给予SEA具有抑制动脉粥样硬化作用,其主要机制是在疾病初始阶段抑制炎症因子产生Treg细胞增殖。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的 用重组日本血吸虫副肌球蛋白（rSj97)免疫小鼠,观察保护效果。方法 小鼠随机分为3组,免疫组在0、2、15周,皮下注射rSj97加佐剂Quil,同一时间佐剂对照组和空白对照组注射等量QuilA和缓冲液A,第3次免疫后,每鼠经腹部贴片攻击感染50条尾蚴,感染后45d剖杀小鼠,观察其减虫和减卵效果。结果 与缓冲液和QuilA对照组相比,rSj97 QuilA免疫组的减虫率分别为44．1％（P＜0．01）和17．8％（P＜0．05）,每克肝组织虫卵数（LEPG）减少率分别为76．5％（P＜0．01）和16．9％（P＜0．05）,每雌肝组织虫卵数（LEPF）减少率分别为62．2％（P＜0．01）和6．1％（P＜0．05）。结论 rSj97加佐剂QuilA可诱导小鼠产生明显的抗血吸虫攻击感染的保护性免疫力及抗生殖免疫力。     

日本血吸虫初产卵体外培养的研究(英文)

目的　观察日本血吸虫未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力影响的效果。方法　本研究通过体外培养系统 ,观察日本血吸虫成虫离体产卵及虫卵发育全过程中形态学特点的变化 ,检测抗未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力的影响。结果　在含正常兔血清的培养基中 ,初产卵经 12～ 14天培体外培养后 ,能完成发育至成熟期 ,对照组雌虫每周产卵总数为 176 5 7个 (n =2 0 )。但在含有抗未成熟虫卵超免疫兔血清的培养基中 ,雌虫产卵数量较正常兔血清培养对照组有显著降低 (P <0 0 0 1) ;在培养后第 10天 ,试验组雌虫即停止产卵 ,部分初产卵卵胚的发育和成熟过程被完全阻断 ;免疫荧光染色显示 ,抗卵免疫血清可作用于卵胚细胞及雌虫卵黄腺、肠腔内膜组织。结论　体外培养结果表明 ,日本血吸虫未成熟虫卵抗原诱导的免疫应答 ,在抗虫卵胚胎发育及抗雌虫生殖产卵中起重要作用。     

简便快速分离日本血吸虫未成熟虫卵方法的研究

目的探讨一种快速的日本血吸虫卵分离纯化方法,解决虫卵常规分离法存在耗费时间长、纯度不高及结构破坏等问题。方法在前人的工作基础上,对虫卵分离方法进行改进,采用反复过筛、加胰酶消化并结合离心去上清的方法。结果在短时间内获得了纯净的虫卵,所得虫卵结构完整,虫卵得率显著提高。结论该方法适宜于血吸虫卵的快速分离、纯化,为虫卵抗原制备及其抗原分析、鉴定提供了条件。     

应用免疫蛋白质组学方法鉴定日本血吸虫虫卵诊断抗原

目的虫卵可溶性抗原（soluble egg antigen,SEA）是目前日本血吸虫病免疫诊断中最常用的抗原。本研究联合应用双向凝胶电泳（2-DE）、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质。方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或应用日本血吸虫感染兔血清Western blot筛选抗原蛋白点,用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定每一抗原蛋白质分子。结果虫卵可溶性蛋白分子经2-DE分离后转印PVDF膜上,与感染兔血清孵育出现29个特异性阳性反应点,与健康兔血清出现3个非特异的阳性反应点;29个特异性抗阳性反应点中,从银染2-DE胶图上找到21个匹配的抗原蛋白质点;MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和NCBI数据库检索,13个点（61.9%）获得匹配蛋白质,4个点（19.0%）获得匹配EST,4个点（19.0%）未能从数据库中找到相匹配的信息。重组表达筛选出的SjCHGC06040和SjP40两个抗原蛋白质,Western blot结果显示reSjCHGC06040、reSjP40均能与感染兔血清抗体发生特异性反应,具有潜在的应用价值。结论 2-DE、MALDI-TOF质谱联合Western blot的免疫蛋白质组学研究方法,用于筛选、鉴定SEA中诊断抗原蛋白质,是切实可行的;但该方法存在一定的局限性,有待进一步改进。     

日本血吸虫热休克蛋白60 kDa的免疫原性及保护性研究

目的研究日本血吸虫热休克蛋白60 kDa(SjHSP60)免疫原性,评价其免疫保护性及可能机制。方法通过在线生物信息学软件预测SjHSP60的B细胞表位,随后用SjHSP60免疫BALB/c小鼠后检测特异性抗体水平和淋巴细胞增殖以评估其免疫原性,进一步通过攻击感染实验观察其免疫保护效果;最后分选免疫小鼠的CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)与CD4~+CD25~-T细胞共培养,通过细胞增殖实验检测CD4~+CD25~+Treg细胞的抑制功能。结果生物信息学预测结果显示,SjHSP60中存在多个B细胞表位的优势区段。SjHSP60可在小鼠体内诱导特异性抗体(P0.01),也可诱导小鼠脾细胞发生增殖(P0.01)和分泌IFN-γ(P0.01);但攻击感染实验显示,SjHSP60免疫小鼠体内虫荷(P0.05)、卵荷(P0.05)均未显著减少。体外共培养实验表明,SjHSP60可显著增强小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞的免疫抑制功能(P0.01)。结论SjHSP60对宿主免疫系统可发挥"双刃剑"作用,即在诱导特异性抗感染免疫应答的同时又可增强免疫抑制功能,从而削弱了其免疫保护作用。     

日本血吸虫虫卵破坏小鼠脾脏结构的作用

目的观察日本血吸虫虫卵对脾脏结构的病理影响。方法 C57BL/6小鼠分别经尾静脉注射日本血吸虫虫卵或虫卵可溶性抗原,经剖腹手术后向小鼠脾脏注射虫卵,4周后剖杀小鼠分离脾脏,石蜡切片苏木素伊红染色观察脾脏结构。以单性和双性尾蚴感染小鼠,9周后剖杀比较组间脾脏质量,石蜡切片观察各组小鼠脾脏结构。结果尾静脉注射虫卵小鼠脾脏淋巴滤泡数目减少,边缘区模糊难辨。手术将虫卵注射入小鼠脾脏4周后,虫卵注射部位淋巴滤泡萎缩甚至消失。单性尾蚴感染小鼠脾脏质量（0.15±0.01）g,显著低于双性尾蚴感染组（0.41±0.03）g（P〈0.01）。苏木素伊红染色脾脏切片显示单性尾蚴感染组小鼠脾脏淋巴滤泡未被破坏,而双性尾蚴感染组脾脏淋巴滤泡消失。结论日本血吸虫虫卵对C57BL/6小鼠脾脏结构有破坏作用。     

重组日本血吸虫铁蛋白的表达纯化及诱导小鼠保护性免疫研究

目的　表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法　用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS -PAGE和Western -blot鉴定表达纯化产物 ;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次 ,分别在 0、2、4周进行。第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴。 4 2天后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果　纯化的重组铁蛋白分子量为 4 0kD ,具有较好的免疫原性 ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。与对照组相比 ,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为 2 4 5 % ,减卵率为 4 5 8%。结论　重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达 ,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫。     

血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织中的分布

目的研究血吸虫感染BALB/c鼠后,虫卵在其部分组织中特别是在肠壁中的分布状况。方法 10只BALB/c鼠腹部贴片感染血吸虫尾蚴(40±1条/只),感染42d后剖杀,分别取鼠的肝脏、脾脏、肠道(小肠上段、中段、下段、盲结肠、直肠)进行成虫计数、虫卵计数、毛蚴孵化、组织切片观察,并将得到的结果进行统计学分析。结果血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织的分布为:肝脏(59.64%)、脾脏(0.81%)、小肠上段(6.27%)、小肠中段(5.24%)、小肠下段(5.14%)、盲结肠(17.48%)、直肠(5.41%),肝脏的沉积虫卵数和孵化数与其他组织相比差异显著,肠组织中大肠段比小肠段的沉积虫卵数和孵化数多且差异显著。在孵化率的比较中肝脏的孵化率最高(1.09%)。病理切片观察,肝脏产生大量肉芽肿结节,肠壁出现不同程度的炎症坏死。结论 BALB/c鼠定量人工感染血吸虫后,肝脏中的沉积虫卵最多,其次是盲结肠,最少的是脾脏;且不同组织的沉积虫卵数目与病理损伤程度有关。     

Treg细胞在致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠体内表达研究

目的 分析致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠与正常感染小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)变化差异,探讨其与致弱尾蚴免疫小鼠诱导免疫保护作用间的关系.方法 40只SPF级BALB/c雌性小鼠随即分3组:一组为辐照致弱尾蚴免疫后攻击感染组(A组),一组为直接攻击感染组(B组),每组各16只小鼠;其余...