何首乌生品及不同炮制品中大黄素含量的测定结果分析

目的：对何首乌生品及不同炮制品中大黄素含量的测定结果进行分析探讨,为此药的临床应用提供可靠的参考依据。方法：以2010年版《中国药典》和《本草纲目》中的方法对何首乌进行炮制,用高效液相色谱法对何首乌生品及用不同炮制方法获得的何首乌水提液、醇提液中大黄素的含量进行测定,并对测定结果进行对比分析。结果：何首乌生品中大黄素的含量最高,九蒸九晒何首乌中大黄素的含量最低。进行水提物测定的结果显示,何首乌生品与九蒸九晒何首乌中大黄素的含量相比,差异明显（P<0.05）,有统计学意义。进行大黄素醇提取物测定的结果显示,何首乌生品与黑豆汁制首乌、九蒸九晒何首乌中大黄素的含量相比较,差异显著（P<0.05）,有统计学意义。结论：不同炮制方法制得的何首乌中大黄素的含量存在一定的差异性。何首乌生品中大黄素的含量最高。     

基于SREBP1的制何首乌抗肝癌脂代谢蒽醌类活性成分的筛选

目的:通过筛选制何首乌抗肝癌蒽醌类活性成分,为其降脂抗癌作用及其机制研究提供实验依据。方法:MTT法检测制何首乌主要蒽醌类成分对肝癌细胞Bel-7402活力的影响;RT-qPCR及Western blot检测对肝癌细胞脂代谢关键因子SREBP1(Sterol regulatory element binding protein 1)mRNA和蛋白的影响。结果:制何首乌蒽醌类成分对肝癌细胞抑制作用排序为:大黄素>大黄酸>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷>大黄酚,其中大黄素甲醚、大黄素和大黄酸抑制SREBP1 mRNA和蛋白水平的表达。结论:制何首乌中蒽醌类成分对肝癌细胞作用各异,鉴于大黄素在制首乌中含量最高,大黄素可能在制何首乌抑制肝癌脂代谢中发挥主要作用。     

加热时间对何首乌中蒽醌类成分的影响

目的探讨加热时间与制首乌内在质量的关系.方法以不同加热时间的加压蒸何首乌为研究对象,采用高效液相法测定其中游离大黄素和游离大黄素甲醚以及水解后总大黄素和总大黄素甲醚的含量.结果加热时间对蒽醌类成分的含量变化影响较大.结论可通过加热时间控制何首乌中蒽醌类成分的变化幅度.     

何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素P450的影响

目的研究何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞色素P450的影响。方法将何首乌中不同成分提取物大黄素、大黄酸、大黄酚,以及制首乌分别按不同剂量给予大鼠每天灌胃一次,连续3个月,检测大鼠肝脏细胞色素P450,应用差速离心法获取大鼠肝微粒体,用分光光度法检测细胞色素P450含量。结果大鼠肝脏色素P450含量给药组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论制首乌及其主要成分对大鼠肝脏细胞色素P450并无明显影响。     

高压炮制对何首乌中大黄素、大黄素甲醚及二苯乙烯苷含量影响的分析

分析高压炮制对何首乌中大黄素、大黄素甲醚及二苯乙烯苷含量的影响。方法：对何首乌进行高压炮制,并观察不同炮制时间对何首乌中大黄素、大黄素甲醚及二苯乙烯苷等成分含量及性状的影响。采用高效液相色谱法（HPLC）对何首乌中大黄素、大黄素甲醚及二苯乙烯苷的含量进行测定。结果：在高压炮制何首乌时,随着时间的加长其中蒽醌、二苯乙烯的含量会逐渐下降,其中游离蒽醌的含量可逐渐增多。结论：在对何首乌高压蒸制4个小时后,其所含的结合蒽醌类成分可大幅度的减少。在炮制何首乌的过程中,为了增加其药效,减少其毒性,我们应将其炮制时间初步定为4个小时。在对何首乌蒸制4个小时后,其所含的结合蒽醌可逐渐被水解为游离蒽醌。与采用传统蒸制法相比,用高压蒸制法对何首乌进行炮制可明显缩短其炮制时间,保证其质量和药效,节约生产成本,提高生产效率,为何首乌制品的大规模生产奠定良好的基础。     

何首乌有效成分不同配比对高脂血症大鼠抗氧化能力影响的实验研究

目的：探讨何首乌总苷、多糖、游离蒽醌3个成分不同配比对高脂血症大鼠抗氧化能力的影响。方法：采用均匀设计法,观察不同配比对高脂饲料喂养大鼠血清SOD、MDA、NO和T—GSH的影响,研究何首乌总苷、多糖、游离蒽醌不同配比对高脂血症的作用。结果：应用均匀设计法结合药效学实验筛选何首乌有效成分不同配比的变化,2号、3号、4号、5号、7号药物组血清SOD的活性高于模型组（P〈0．01）;模型组MDA高于其他组（P〈0．01）;3号、4号、5号药物组血清T—GSH含量高于模型组（P〈0．01）;空白组、1号、6号和7号组血清NO低于模型组（P〈0．01）。则有何首乌最佳配比分别为3号、4号、5号、7号药物组。结论：何首乌有效成分不同组合能减轻高脂血症引发的脂质过氧化反应而具有明显的抗氧化作用。     

发酵何首乌的化学成分研究与鉴定

目的探讨经微生物发酵何首乌前后药理作用改变的物质基础,对发酵后的何首乌化学物质成分进行分离和鉴定.方法经微生物发酵后的何首乌药材分别通过乙酸乙酯和正丁醇的提取,并对提取物进行硅胶柱正相分离方法得到化学成分.结果在发酵何首乌中通过光谱分析法鉴定得到6个化学成分,分别为w-羟基大黄素,大黄素,大黄素甲醚,正丁基-β-D-吡喃果糖,大黄酚,决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷.结论微生物发酵何首乌中主要的化学成分为大黄素和大黄素甲醚,化学成分与生何首乌相比没有发生明显的变化.     

炮制前后何首乌蒽醌类含量的比较研究

[目的]比较用相同方法炮制的不同产地何首乌中蒽醌类含量的差异。[方法]采用紫外分光光度法,以0.5%醋酸镁—甲醇溶液显色测定蒽醌含量,采用HPLC方法测定大黄素的含量。[结果]炮制后,何首乌中结合蒽醌类成分明显降低,总蒽醌类含量有所升高,但结合蒽醌占总蒽琨的比例明显降低;结合大黄素含量明显降低,总大黄素含量有所升高,但结合大黄素占总大黄素的比例明显降低。[结论]炮制对何首乌中蒽醌类成分的含量有影响。相比生首乌,制首乌中结合蒽醌含量明显降低,而总蒽醌含量有所上升;临床发现生首乌具有一定毒性而制首乌毒性较小,这可能和炮制后结合蒽醌含量降低有关系。     

缺血-再灌注心肌诱导型一氧化氮合酶基因表达及其活性的变化和卡托普利的影响

目的探讨心肌诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达及其活性的变化在心肌再灌注损伤中的作用；研究卡托普利对缺血再灌注心肌保护作用的机制。方法采用Langendorff离体鼠心灌流模型；将18只SD大自鼠随机均分为3组：对照组、缺血一再灌组及卡托普利组；观察心肌iNOS mRNA表达及其活性、丙二醛（MDA）含量、过氧化物歧化酶（SOD）活性、肌酸激酶（CK）含量和冠状静脉流出液一氧化氮（NO）的变化。结果缺血再灌注后心肌iNOS mRNA表达显著上调（P〈0．001），iNOS活性增高（P〈0．001）；卡托普利组再灌注30min，心肌iNOS mRNA表达及其活性、心肌MDA含量均低于缺血-再灌组（P〈0．01，P〈0．05），而心肌SOD活性（P〈0．01）和CK含量（P〈0．05）高于缺血-再灌组，再灌注期间冠状静脉流出液NO含量高于缺血-再灌组（P〈0．01）。结论缺血-再灌注心肌iNOS基因表达上调，心肌iNOS活性增高；影响心肌iNOS mRNA表达、调节心肌iNOS活性可能是卡托普利抗心肌脂质过氧化作用的机制之一。     

何首乌饮对过度训练大鼠血液指标的影响

目的：研究中药何首乌饮对过度训练大鼠血液指标的影响。方法：75只SD大鼠随机分为5组：安静对照组、安静何首乌饮组、模型组、何首乌饮治疗组和何首乌饮预防组,每组15只大鼠。采用负重力竭游泳训练复制过度训练大鼠模型。采用智能化免疫化学发光方法检测大鼠血清睾酮含量、血清尿素氮含量、血乳酸浓度。结果：模型组大鼠与安静对照组大鼠相比,血清睾酮含量明显降低,血清尿素氮含量、血乳酸浓度明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;何首乌饮治疗组、预防组大鼠与模型组大鼠比较,血清睾酮含量明显升高,血清尿素氮含量、血乳酸浓度明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：何首乌饮可明显改善过度训练大鼠血生化指标,表明其具有一定的抗疲劳作用。     

制何首乌标准饮片的均匀化工艺研究

目的 优选制何首乌标准饮片的均匀化工艺.方法 以出粉率为指标进行单因素考察,再在此基础上设计L9(34)正交试验,以出粉率、粒度跨距、醇溶性浸出物、二苯乙烯苷和游离蒽醌的质量分数,以及指纹图谱总峰面积为指标,对投药体积、单次打粉时间、打粉次数3个影响因素进行考察,优选制何首乌标准饮片的均匀化工艺. 结果 优选出最佳均匀化工艺条件为:投药体积占打粉机体积的2/3,单次打粉40 s,打粉2次. 结论 优选出的最佳均匀化工艺稳定,合理可行,可为制何首乌标准饮片均匀化技术规范的制定提供参考依据.     

HPLC法测定首乌胶囊中2,3,5,4 -四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的：测定首乌胶囊中2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为DiamonsilC18（4.6mm×200mm）,流动相为乙腈-水（25：75）,柱温为30℃,流速为1.0mL/min,检测波长为320nm。结果：2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.02104-0.526μg范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.45%,RSD（%）=1.23%（n=5）。结论：含量测定方法快速、准确,适用于首乌胶囊质量分析控制方法。     

益肾养元合剂质量标准研究

目的建立益肾养元合剂的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别益肾养元合剂中的何首乌、金樱子、狗脊;采用高效液相色谱法测定益肾养元合剂中二苯乙烯苷的含量。结果在薄层色谱中检出了何首乌、金樱子、狗脊;二苯乙烯苷进样量在25．82～826μg范围内呈良好的线性关系（r=1．0000）,平均回收率为102．0％,RSD为0．83％（n=6）。结论本方法操作简便、专属性强、准确、重复性好,可作为益肾养元合剂的质量控制标准。     

何首乌提取物对人正常肝细胞L02周期阻滞及凋亡的影响

目的：分析何首乌中致人肝细胞损伤物质的化学成分,初步探讨其致肝细胞损伤的机制。 方法：生、制何首乌用70%乙醇提取,提取物经AB-8型大孔树脂吸附分离,依次用水、50%乙醇和95%乙醇洗脱得到生何首乌和制何首乌水洗脱物、50%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物;生、制何首乌直接水煎煮得到水提物。体外培养人正常肝细胞L02,用含何首乌洗脱物和水提物的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,检测药物对L02细胞生长的影响,筛选致肝细胞损伤成分。高效液相色谱法对有明显细胞毒作用的洗脱物进行成分分析,噻唑蓝法检测其对L02细胞增殖的影响,Giemsa染色进行形态学观察,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况。 结果：生、制何首乌95%乙醇洗脱物对L02细胞有明显的生长抑制作用,其他组分对L02细胞的增殖无明显影响。成分分析显示,生、制何首乌95%乙醇洗脱物中大黄素含量最多,分别为（18.53±2.96）%和（10.28±1.34）%;何首乌95%乙醇洗脱物及大黄素可使L02细胞阻滞于S期,并诱导L02细胞凋亡。 结论：何首乌95%乙醇洗脱物是何首乌中导致肝细胞损伤的主要物质,而大黄素是导致肝细胞损伤的成分之一。     

HPLC法测定首乌降脂胶囊中SG的含量

目的:建立首乌降脂胶囊中的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(SG)的含量测定方法。方法:HPLC法,C18柱,乙腈-水(22∶78)为流动相,检测波长为320 nm。结果:2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为0.1085μg~0.5425μg(r=0.9992,n=5);平均回收率为101.00%(RSD为2.83%,n=5)。结论:该方法简便,准确可靠,重复性好,可用于首乌降脂胶囊的质量控制。     

云南不同产地何首乌中大黄素和大黄素甲醚的测定

用薄层色谱扫描法测定云南省10个产地的13份何首乌样品中大黄素和大黄素甲醚含量。结果表明不同产地的药材中二者的总含量和各形态(游离型及结合型)差别很大，并且主要以结合型存在。说明云南的何首乌质量存在较大差异。     

首乌愈瘫片质量标准研究

目的建立首乌愈瘫片的质量标准。方法采用薄层色谱法对首乌愈瘫片中的决明子、槲寄生、海马、淫羊藿进行鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。结果选定的薄层色谱条件可鉴别制剂中决明子、槲寄生、海马、淫羊藿;2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.052～0.260μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为97.19%,RSD=1.63%。结论本法简单可行,能快速准确地对首乌愈瘫片进行鉴别和含量测定,可较好地用于首乌愈瘫片的质量控制。     

正交试验优选制首乌水煎煮工艺

目的优选制首乌最佳水煎煮工艺。方法以制首乌的代表成分2,3,5,4′-四羟基-二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为评价指标,采用L9（34）正交试验设计、高效液相色谱法考察药材粒度、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数四个因素,对制首乌的水煎煮工艺进行优选。结果最佳水煎煮工艺：粒度为小块,浸泡30 min,煎煮时间70min,煎煮次数3次。结论优选所得的最佳煎煮工艺科学合理。     

桃红清血胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷HPLC检测方法的建立及评价

目的：建立桃红清血胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量的HPLC测定方法,为工业生产的质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法(HPLC)测定桃红清血胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷的含量,具体条件为： Shim-pack VP-ODS C18柱(150.0 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水（17∶83）,检测波长为322 nm,柱温为30 ℃。结果：2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷在0.284～2.272 μg范围内有良好线性关系,回归方程为Y=－25　678+1　204　880X,r=0.999　9;平均回收率99.4%,(RSD)为2.29%（n=6）;以精密度实验、稳定性实验和重复性实验考察的RSD分别为0.46%、2.89%和2.39%。经测试并结合生产实际情况限定桃红清血胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量不少于0.8 mg/粒。结论：HPLC检测桃红清血胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量的方法准确、简单可行,重复性好,可作为桃红清血胶囊质量控制方法。     

补肾益智颗粒的质量标准研究

目的建立补肾益智颗粒的质量标准研究。方法采用薄层色谱法对补肾益智颗粒中的蛇床子、女贞子和制何首乌进行定性鉴定,采用高效液相色谱法对其中蛇床子素和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行测定。对于蛇床子素,高效液相色谱系统是由Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,乙腈-水（65∶35）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm。对于葡萄糖苷,高效液相色谱系统包括C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,甲醇-水（30：70）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm。结果补肾益智颗粒的蛇床子、女贞子和制何首乌供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;蛇床子素在0.09～1.35μg范围内与峰面积积峰值线性关系良好（r=0.999 9）。2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（二苯乙烯苷）在0.84～3.15μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）。平均回收率分别为100.52%和99.75%。结论建立的质控方法简便,快速,准确,回收率高,重现性好,可用于补肾益智颗粒的质量控制。