NS-398影响基质金属蛋白酶-2及其抑制剂的表达

近年研究发现,选择性环氧合酶（COX）-2抑制剂具有抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡的作用.但是选择性COX-2抑制剂影响肿瘤细胞侵袭转移能力的报道较少,其影响基质金属蛋白酶（MMP）和基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）表达方面的报道尤其少见.因此,我们以选择性COX-2抑制剂NS-398作用于HepG2肝癌细胞株,观察MMP-2、TIMP-2表达的变化,探讨其在肿瘤侵袭和转移中的作用.     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌HepG2细胞株的生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2表达的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2的表达。结果NS-398抑制HepG2的增殖活性，经20、40、80和160μmol／L的NS-398处理细胞48h后，其抑制率分别为6．72％、16．21％、20．86％和25．34％，呈剂量依赖效应关系；细胞经160bLmol／L的NS-398处理24h、48h和72h后，G。／G1期细胞由76．07±0．75％分别减少至62．27±0．74％、59．17±1．47％和53．03±1．60％（P〈0．05），S期细胞由11．40±0．79％分别增加至13．23±0．81％、16．20±1．95％和16．60±1．25％（P〈0．05），G2／M期细胞无明显变化；凋亡细胞增多，凋亡率分别为8．47％、16．3％和23．9％；细胞经160μmol／L的NS-398处理48h后bcl-2蛋白与对照组比，表达下调（P〈0．01）。结论NS-398对人肝癌细胞株HepG2有抑制增殖、诱导凋亡作用，细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调有关。     

Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌QBC939细胞增殖侵袭的影响

目的观察选择性Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌细胞株QBC939增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胆管癌QBC939细胞,加入不同浓度的NS-398培养后,采用MTT比色法观察不同浓度NS-398作用不同时间对QBC939细胞的增殖抑制情况;采用Transwell小室法检测不同浓度NS-398作用后QBC939细胞的侵袭能力。结果 NS-398对QBC939细胞的增殖有抑制作用,并呈时间及浓度依赖性(P均<0.01),最大抑制浓度为100μmol/L。加入NS-398培养36 h后,随着药物浓度的增加,QBC939细胞体外侵袭能力明显减弱(P<0.01)。结论NS-398可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,并减弱其体外侵袭能力。     

NS-398对人胃癌细胞株增殖及COX-2表达的影响

目的 体外观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖及COX-2表达的影响。方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察NS-398对SGC7901细胞增殖的影响，流式细胞仪(FCM)研究NS-398对SGC790l细胞凋亡的作用．免疫细胞化学观察COX-2蛋白的表达。结果 体外NS-398能减少SGC790l细胞株COX-2的表达．对SGC7901有细胞毒作用．可增加细胞凋亡率。结论 体外NS-398对SGC7901细胞增殖有抑制作用。可能与抑制COX-2表达及诱导细胞凋亡有关。     

NS-398联用AG-041R对胃癌细胞的协同抑制作用机制

目的:研究特异性COX-2抑制剂NS-398和CCK-B/胃泌素受体拮抗剂AG-041R对人胃癌细胞的抑制作用机制.方法:以人胃癌细胞株MKN-45为研究对象,采用MTT法、流式细胞仪(FCM)、RT-PCR观察NS-398,AG-041R及联合应用对MKN-45细胞增殖、凋亡百分率及癌基因c-MycmRNA表达的影响.结果:NS-398和AG-041R均在一定范围(12-72h;NS-398:1×10-8-1×10-4mol/L;AG-041R:1×10-8-1×10-5mol/L)内呈浓度和时间依赖性地抑制MKN-45细胞的增殖,AG-041R(1×10-6mol/L)、NS-398(1×10-5mol/L)作用72h抑制率分别为42.1%,41.8%,二者联合应用有协同抑制胃癌细胞增殖效应,且随着作用时间延长而增强.FCM显示NS-398(1×10-5mol/L)、AG-041R(1×10-6mol/L)和二者联合作用于MKN-45细胞72h后,细胞凋亡率分别为9.57%±0.60%、10.25%±0.68%和20.83%±1.90%,与对照组(1.67%±0.76%)相比细胞凋亡率均显著增高(P<0.01),联合用药组细胞凋亡率显著高于单一用药组(P<0.01).RT-PCR显示NS-398、AG-041R及联合应用均显著抑制MKN-45细胞c-MycmRNA的表达,联合用药组抑制效应显著高于单一用药组.结论:联合应用NS-398和AG-041R剂量、时间依赖性地抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡,抑制癌基因c-MycmRNA的表达,具有协同作用.     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导食管癌细胞EC 9706凋亡及其机制的探讨

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS一398对食管癌细胞株EC 9706增殖及凋亡的影响,砌究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨NS-398诱导Ec 9706细胞凋亡的作用机制.方法 NS-398作用EC 9706细胞后,MTT法测定NS-398对人食管癌EC 9706细胞增殖的抑制率;DNA片段分析法和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果 NS-398(10～100μmol/L)对EC 9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导EC 9706细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;NS-398可降佴Survivin蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论 NS-398可诱导人食管癌细胞株EC 9706凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Capase-3表达有关.     

选择性环氧化酶2抑制剂对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤,患者5年生存率仅15％。因此,新的治疗方法的探讨对肺癌防治具有重要意义。流行病学资料表明,非甾体类抗炎药物(NSAIDS)阿司     

3种选择性环氧合酶-2抑制剂对肝细胞癌生长的影响

背景肝细胞癌(HCC)中有环氧合酶(COX)-2表达,非甾体抗炎药阿司匹林可能通过抑制COX-2的表达而抑制HCC生长.目的比较3种选择性COX-2抑制剂美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721 生长的影响,观察高选择性COX-2抑制剂罗非昔布对裸鼠HCC原位移植瘤生长的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入检测SMMC-7721细胞的DNA合成情况;采用免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;采用DNA原位末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡.给予HCC原位移植瘤裸鼠罗非昔布每日30 mg/kg 8周,测量肿瘤体积和重量.结果美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布均能显著抑制SMMC-7721细胞的3H-TdR掺入,其抑制作用呈剂量依赖性,50%抑制浓度(IC50)分别为8.55×10-8mol/L、1.22×10-8mol/L和6.27×10-9 mol/L.3种选择性OX-2抑制剂(1×10-5 mol/L)作用24 h均可明显降低SMMC-772I细胞的PCNA表达,使细胞凋亡指数较对照组显著增高(14.6%±2.8%、21.6%±3.6%和27.1%±3.5%对1.0%±0.7%,P＜0.01),COX-2抑制剂的选择性越高,凋亡指数也越高(P＜0.01).罗非昔布组裸鼠的HCC原位移植瘤显著小于对照组,体积抑瘤率和重量抑瘤率分别为73.2%和78.1%.结论3种选择性COX-2抑制剂均能在体外有效抑制SMMC-7721细胞的生长,选择性越高,抑制作用越强.罗非昔布在体内能抑制HCC的生长,可能成为治疗HCC的有效药物.     

选择性环氧合酶-2抑制剂塞莱希布对大鼠肝纤维化的作用

目的:探讨选择性COX-2抑制剂塞莱昔布对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用.方法:5-6周龄的♂SD大鼠50只,随机分为6组.A组(肝纤维化模型组):10只,50%CCl4橄榄油溶液1mL/kg,每周2次皮下注射,同时给予生理盐水灌胃;B组(早期治疗组):10只,造模同时给予塞莱昔布15mg/kg溶于生理盐水中灌胃,每天1次;C组(中期治疗组):10只,造模同时给予生理盐水灌胃,第3周起改为塞莱昔布灌胃;D组(晚期治疗组):10只,造模同时给予生理盐水灌胃,第5周起改为塞莱昔布灌胃;E组:5只,给予相同体积的橄榄油皮下注射,同时给予相同剂量的塞莱昔布灌胃;F组:5只,给予相同体积的橄榄油皮下注射和生理盐水中灌胃.上述处置共8wk.实验结束后腹主动脉取血,取肝组织,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;病理组织学HE染色及Masson染色观察肝纤维化严重程度并评分,免疫组织化学方法检测肝组织Ⅰ胶原、α-SMA、COX-1、COX-2的表达.结果:A组与F组相比,可见显著的肝纤维化改变(P<0.01);与A组相比,B组病理染色可见肝纤维化程度明显减轻(P<0.01),血清ALT、...     

选择性环氧化酶-2抑制剂对肝癌细胞侵袭力的影响

目的:研究选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利 (Nimesuli,Nim)对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭力的影响并探讨其作用机制．方法:应用Nim作用于SMMC-7721细胞,并设对照组和实验组(Nim 25,50,100,200, 400 μmol/L),MTT法检测Nim作用24、 48、72 h后,对SMMC-7721细胞增殖的影响;用Transwell小室检测Nim作用24 h后对 SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、明胶酶谱法分析 Nim对SMMC-7721细胞分泌的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA和酶活性的影响．结果:Nim对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;Nim 25,50, 100,200,400 μmol/L作用后,与对照组比较 Nim能降低SMMC-7721细胞分泌的MMP mRNA和酶的活性(MMP-2 mRNA:0．968, 0．545,0．330,0．158,0．083 vs 1．063,P<0．05或 P<0．01;MMP-9 mRNA:1．005,0．758,0．465, 0．208,0．103 vs 1．075,除25 μmol/L作用外,其余P<0．01);Nim作用后SMMC-7721细胞穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(SMMC-7721 细胞穿透聚碳酸酯膜抑制率为7．8％,28．0％, 35．6％,53．6％,61．4％),与对照组比较有显著差异(P<0．05)．结论:选择性环氧化酶-2抑制剂Nim可以抑制肝癌细胞的生长和其侵袭力,Nim抑制肝癌细胞侵袭力的作用机制与通过降低MMP水平有关．     

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80 μmol/L)处理24,48,72 h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P＜0.01;TE-13:F=46.99,P＜0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P＜0.01;TE-13:r=0.925,P＜0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P＜0.01;TE-13:r=-0.703,P＜0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P＜0.01;TE-13:r=-0.753,P＜0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.     

环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞株的体外研究

目的 观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响，明确以COX2为靶点治疗结肠癌的作用途径以及与COX-2活性、表达水平的相关关系。方法 将选择性COX-2抑制剂NS-398作用于结肠癌细胞系HT29，运用MTT法检测细胞增殖状态。流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响。进一步用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测药物作用前后HT-29中COX-2mRNA表达。ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）水平。Western blot检测药物作用前后细胞周期素D1、Bcl-2的表达。结果 结肠癌细胞系HT-29中COX-2 mRNA高表达，NS-398呈时间和剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖，促进其凋亡。加入NS-398的HT-29细胞中COX-2mRNA表达水平无明显变化（P〉0．05），PGE2却显著下降（P〈0．01）。72h时空白组与NS-398（75μmol／L）处理组细胞周期素D1、Bcl-2表达水平比值分别为2．21和3．25（P〈0．01），两者表达水平随作用时间延长而下降。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398不影响结肠癌细胞COX-2 mRNA表达水平，而与其活性相关（PGE2水平）．可能通过细胞周期素D1、Bcl-2影响结肠癌细胞系HT-29的增殖与凋亡，揭示了COX-2为靶点治疗结肠癌的分子机制。     

NS-398对HepG2细胞的放射增敏作用及其机制

有研究显示环氧合酶-2(COX-2)在许多肿瘤中高表达,推测与肿瘤的发生、发展、转移密切相关.研究还发现抑制COX-2的表达和(或)对抗COX-2的活性可以阻滞COX-2的促癌作用[1],提示COX-2可能成为肿瘤诊治的一个新靶点.本研究采用COX-2选择性抑制剂NS-398处理人肝癌细胞株HepG2细胞,旨在探讨其对肝癌放射敏感性的影响及其可能作用机制.     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制胃癌细胞P-糖蛋白表达

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对胃癌细胞株SGC-7901 P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 胃癌细胞株SGC-7901经浓度分别为0、10、100μmol／L的NS-398处理后，酶联免疫吸附试验检测NS-398对胃癌细胞前列腺素E2（PGF2）分泌的影响，24、48h后用RT-PCR检测多药耐药（mdr）1 mRNA表达，48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp表达。结果 NS-398可显著抑制胃癌细胞株SGC-7901 PGE2分泌，并呈浓度依赖性（P〈0．05）。不同浓度NS-398作用于细胞后，胃癌细胞株SGC-7901的mdr1／P-gp表达受不同程度抑制，100μmol／L的NS-398对mdr1 mRNA表达抑制作用强于10μmol／L（P〈0．01）。不同浓度药物与测量时间为交互作用．作用48h与24h相比，NS-398对mdr1 mRNA表达的抑制作用更强（P〈0．01）。结论 NS-398可抑制SGC-7901的mdr1／Pgp表达，且呈剂量效应关系。NS-398可能通过抑制COX-2活性，抑制COX-2下游产物PGE2表达，从而抑制P-gp表达。选择性COX-2抑制削可能有助于减轻肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。     

Selective COX-2 inhibitor, NS-398, suppresses cellular proliferation in human hepatocellular carcinoma cell lines via cell cycle arrest

AIM: To investigate the growth inhibitory mechanism of NS-398, a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor, in two hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines (HepG2 and Huh7). METHODS: HepG2 and Huh7 cells were treated with NS-398. Its effects on cell viability, cell proliferation, cell cycles, and gene expression were respectively evaluated by water-soluble tetrazolium salt (WST-1) assay, 4’-6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining, flow cytometer analysis, and Western blotting, with dimethyl sulfoxide (DMSO) as positive control. RESULTS: NS-398 showed dose- and time-dependent growth-inhibitory effects on the two cell lines. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expressions in HepG2 and Huh7 cells, particularly in Huh7 cells were inhibited in a time- and dose-independent manner. NS-398 caused cell cycle arrest in the G1 phase with cell accumulation in the sub-G1 phase in HepG2 and Huh7 cell lines. No evidence of apoptosis was observed in two cell lines. CONCLUSION: NS-398 reduces cell proliferation by inducing cell cycle arrest in HepG2 and Huh7 cell lines, and COX-2 inhibitors may have potent chemoprevention effects on human hepatocellular carcinoma.     

NS-398对HepG2细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺（NS-398）对肝癌细胞株HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法分别用100、200、300、400μmol/L的NS-398处理HepG2细胞,用MTT法测算肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,用免疫组化和Westernblot检测细胞的血管生长因子（VEGF）。结果NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,随着NS-398浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,其24h半数有效剂量（IC50）为300μmol/L。NS-398浓度为200μmol/L以上时HepG2细胞VEGF的表达与对照组相比,P〈0.01。结论NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与G1阻滞以及VEGF的表达受抑制有关。     

环氧合酶-2对人肝癌细胞增殖和凋亡的调节作用

目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在肝癌细胞中表达,探讨COX-2抑制剂celecoxib对肝癌细胞增殖和凋亡的作用．方法:免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究COX-2在肝癌细胞株中表达;MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响;透射电镜及流式细胞仪观察 celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响及MDR1／P-gp表达的变化;用RTPCR 方法检测Survivin mRNA药物处理后表达的变化．结果:celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈时间和剂量依赖性．celecoxib作用HepG2 48 h抑制率为70．98％±0．67％(200 μmol／L)、 47．93％±1．08％(100 μmol／L);Bel-7402为 57．29％±0．67％(200 μmol／L)、43．84％± 0．86％(100 μmol／L);同样浓度但作用20 h, HepG2为45．51％±1．35％(200 μmol／L), 14.35％±1．55％(100 μmol／L);Bel-7402则为34．35％±0．63％(200 μmol／L),15．35％± 0．88％(100 μmol／L),不同浓度以及不同作用时间相比均有显著差异(P<0．01);100 μmol／L celecoxib作用24,48,72,96 h的肝癌细胞凋亡率分别为12．2％±2．44％,4．0％±1．67％,20．4％±4．38％,57．9％±5．74％(HepG2)和3．0％± 1．05％,18．5％±3．51％,29.3％±3．25％,48．4％±4．77％(Bel-7402),与对照组相比有显著差异(P<0．01);细胞周期分布改变,G0／G1期细胞比例增加,24,48,72 h分别为:44．17％±1．01％,59．60％±0．61％,62．7％±1．22％ (HepG2)和47．80％±0．41％,58．60％±0．46％, 78．40％±1．95％(Bel-7402),与对照组比较有显著差异(P<0．01);对照组PCNA蛋白表达呈强阳性( ),经药物处理后表达减弱,并随时间延长而显著;HepG2中COX-2蛋白表达明显弱于Bel-7402,药物处理后表达也不同．Survivin在肝癌细胞株中呈高表达状态, celecoxib作用48 h mRNA表达降至零,而72 h 后表达水平又有上升;两株肝癌细胞中经 celecoxib处理后,MDR1／P-gp表达有降低的趋势(Bel-7402),或是基本上不受影响(HepG2)．结论:COX-2抑制剂celecoxib体外对肝癌细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖,并诱导凋亡,使细胞周期阻滞于G1／S期．COX-2与P-gp,Survivin表达密切相关．     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响

目的通过观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响,以探讨COX-2在肝纤维化中的作用。方法用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于体外培养的人肝星状细胞株LI-90,采用MTT法和半定量RT-PCR法检测塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响。结果塞来昔布可显著抑制体外培养的肝星状细胞LI-90的增殖和活化,随着药物剂量的增加和时间的延长,肝星状细胞LI-90的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性。结论塞来昔布对肝星状细胞增殖和活化的抑制作用是研究肝纤维化预防和治疗的重要方向之一。