中药制剂明睛颗粒对激光诱导脉络膜新生血管小鼠骨髓来源细胞脉络膜新生血管趋化黏附作用的影响

目的 观察中药制剂明睛颗粒对激光诱导脉络膜新生血管（CNV）小鼠外周血骨髓来源细胞（BMCs）在CNV趋化和黏附的影响。方法 将75只C57BL/6J小鼠按随机数字表方法随机分为3组：干预组、对照组、正常空白组。干预组和对照组各30只小鼠,正常空白组15只小鼠。干预组和对照组小鼠采用氪激光光凝诱导CNV发生。激光造模后0.5~1 h给予尾静脉注射绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠的BMCs。造模后第1天干预组小鼠予以明睛颗粒溶剂每日灌胃直至处死取样,每只小鼠灌胃0.3 ml,相当于30 g/（kg?d）生药;对照组予以等体积蒸馏水灌胃;正常空白组小鼠常规喂养。分别在灌胃干预后第7、14、28天,采用脉络膜铺片观察CNV及BMCs在CNV处的趋化和黏附情况;光学显微镜观察小鼠视网膜脉络膜组织病理改变;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠外周血趋化因子受体4（CXCR4）的含量;免疫荧光法观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1α）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）、细胞间黏附分子（ICAM-1）在CNV区域的表达。结果 脉络膜铺片观察显示,干预组和对照组均可见CNV生成,而正常空白组均未见CNV;明睛颗粒干预后第7、14天,干预组CNV中BMCs明显少于对照组,CNV面积亦较对照组小（t=10.9,P=0.007、0.024）。光学显微镜观察显示,干预组视网膜脉络膜病变较对照组轻。ELISA检测结果显示,干预后7、14天干预组外周血CXCR4含量明显低于对照组和正常对照组（F=8.107、4.499,P＜0.05）;免疫荧光法检测结果显示,干预组CNV区域SDF-1α、ICAM-1、VCAM-1表达较对照组减弱。结论 中药制剂明睛颗粒能在CNV形成早期抑制外周血BMCs在CNV的趋化和黏附及参与CNV形成作用。其机制可能与明睛颗粒减少外周血及CNV周围趋化因子和黏附因子的蛋白表达有关。     

后Tenon囊下注射曲安奈德对激光光凝后糖尿病大鼠视网膜炎症相关细胞因子表达的影响

目的 观察后Tenon囊下注射曲安奈德（TA）对激光光凝后糖尿病大鼠视网膜炎症相关细胞因子表达的影响。方法 雄性Brown Norway健康大鼠48只,通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。将大鼠随机分成实验组、对照组和空白组,分别为20、20、8只大鼠。实验组、对照组大鼠行激光光凝后,给予后Tenon囊下注射TA或生理盐水50 μl。空白组不作任何处理。激光光凝后1、3、7 d,采用荧光定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测大鼠视网膜中血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA和蛋白表达。结果 激光光凝后1、3、7 d,实验组和对照组分别与空白组比较,其VEGF、IL-6、TNF-α mRNA和蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。实验组VEGF、IL-6、TNF-α mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降。实验组与对照组比较,激光光凝后1 d,VEGF mRNA表达间差异无统计学意义（P＞0.05）;其余各时间点VEGF、IL-6、TNF-α mRNA和蛋白表达间差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 后Tenon囊下注射TA可有效降低激光光凝导致的糖尿病大鼠VEGF、IL-6、TNF-α表达水平的升高。     

激光光凝治疗进展期先天性视网膜劈裂症的疗效观察

目的 观察激光光凝治疗进展期先天性视网膜劈裂症（XLRS）的临床效果。方法 临床确诊为XLRS的27例患儿36只眼纳入研究。所有患儿均随访1年以上,其劈裂有缓慢发展但在随访期间未发生相关并发症。患儿均为男性。年龄3～12岁,平均年龄6.47岁。单眼18例,双眼9例。将患眼随机分为治疗组和对照组,每组18只眼。采用多波长激光机的氪黄激光对治疗组患眼劈裂周围行堤坝式激光光凝,避开黄斑与视盘周围1个视盘直径范围的区域。对照组患儿每隔半年门诊随访观察。两组患儿均随访3年,以末次随访为疗效判定时间点,观察患儿的最佳矫正视力（BCVA）及玻璃体积血、视网膜脱离等严重并发症的发生情况。BCVA检查结果换算为最小分辨角对数（logMAR）视力记录。结果 末次随访时,治疗组患眼平均logMAR BCVA为0.73±0.41,较治疗前无明显变化,差异无统计学意义（t=1.187,P=0.201）。对照组患眼平均logMAR BCVA为0.88±0.60,较治疗前也无明显变化,差异无统计学意义（t=1.895,P=0.098）。治疗组与对照组治疗前后患眼平均logMAR BCVA提高值比较,差异有统计学意义（t=-2.093,P=0.033）。治疗组18只眼中,视力提高4只眼,占22.2%;视力稳定10只眼,占55.6%;视力下降4只眼,占22.2%。对照组18只眼中,视力提高3只眼,占16.7%;视力稳定4只眼,占22.2%;视力下降11只眼,占61.1%。治疗组视力下降率较对照组明显降低,差异有统计学意义（χ²=5.600,P＜0.01）。治疗组18只眼中,出现严重并发症2只眼,占11.1%。对照组18只眼中,出现严重并发症7只眼,占38.9%。治疗组严重并发症发生率较对照组明显降低,差异有统计学意义（χ²=3.710,P＜0.05）。结论 激光光凝治疗进展期XLRS可稳定或提高患儿视力,防止严重并发症的发生。     

线粒体DNA氧化损伤对糖尿病大鼠视网膜血管的影响

目的 观察不同病程糖尿病大鼠视网膜血管细胞线粒体DNA（mtDNA）损伤及黏附分子表达、细胞凋亡情况。方法 Sprague-Dawley大鼠100只,分为正常对照组和实验组。实验组大鼠腹腔注射链尿佐菌素诱导糖尿病模型,造模成功后依照病程分为DR1、DR2、DR3月组,正常对照组分为NR1、NR2、NR3月组。提取各组大鼠视网膜血管DNA,联合Fpg酶切Southern 印迹杂交检测未损伤mtDNA含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察mtDNA编码基因环氧酶-1（COX-1）及转录因子A（mtTFA） mRNA的表达;消化铺片TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）免疫荧光、细胞间黏附因子(ICAM-1)免疫组织化学染色,分别观察细胞凋亡及黏附分子的表达。结果 不同病程糖尿病大鼠视网膜未损伤mtDNA含量与不同鼠龄正常对照组比较,糖尿病大鼠未损伤mtDNA含量明显减少,且随着病程延长减少更明显;COX-1及mtTFA mRNA表达相应降低;糖尿病大鼠随病程延长,TUNEL、ICAM-1阳性细胞数增多。结论 糖尿病大鼠随着病程延长,视网膜血管细胞mtDNA损伤加重,其编码基因及转录调控基因mRNA的表达均相应下降,黏附分子表达上调,细胞凋亡增加。     

甲泼尼龙对大鼠视网膜激光损伤中Müller细胞胶质纤维酸性蛋白和增生细胞核抗原表达的影响

目的 研究甲泼尼龙对视网膜激光损伤后Müller细胞胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和增生细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的影响。 方法 40只Sprague-Danley(SD)大鼠随机分为治疗组和对照组，治疗组大鼠在视网膜激光光凝损伤后连续3 d腹腔注射剂量为30 mg/kg的甲泼尼龙，对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水；分别于激光光凝术后3、7、14、28 d各处死5只动物，取出眼球，用AFA固定液进行组织固定后做石蜡包埋、切片，用免疫组织化学方法测定GFAP和PCNA的表达。 结果 激光光凝损伤后3d ，治疗组和对照组视网膜Müller细胞均表达PCNA，治疗组PCNA表达明显较对照组弱，3 d 后PCNA表达消失；激光光凝损伤后3 d ，治疗组和对照组视网膜Müller细胞均表达GFAP，在各时间点治疗组GFAP表达明显较对照组弱。 结论 甲泼尼龙可减轻Müller细胞激光损伤后PCNA和GFAP的表达，最终影响视网膜激光光凝损伤的瘢痕修复，这为研究视网膜激光损伤和防护的机制提供了实验证据。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 299-301)     

黄色微脉冲激光与传统格栅样激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿疗效比较

目的 比较黄色微脉冲激光与传统格栅样激光光凝（MLG）治疗糖尿病黄斑水肿（DME）的临床疗效。方法 经荧光素眼底血管造影（FFA）及光相干断层扫描（OCT）检查确诊的弥漫性DME患者78例106只眼纳入研究。采用随机数字表法将患者分为微脉冲组和MLG组，分别为39例51只眼、39例55只眼。微脉冲组患者行577 nm黄色微脉冲激光治疗，MLG组行561 nm黄绿光连续波长激光光凝治疗。治疗前后所有患者均行眼底、矫正视力、OCT及微视野检查，检测其矫正视力、黄斑中心视网膜厚度（CMT）及黄斑10°范围内视网膜平均光敏感度（MS）。以治疗后6个月为疗效判定时间点，观察患者治疗前后平均矫正视力、平均CMT及平均MS的变化，对比分析治疗前后两组患者平均矫正视力、平均CMT及平均MS差值之间的差异。结果 治疗后6个月，微脉冲组、MLG组平均矫正视力分别为0.45±0.20、0.42±0.20，均较治疗前提高，差异有统计学意义（t=3.404、2.316，P＜0.05）。微脉冲组、MLG组组内治疗前后平均矫正视力的差值分别为0.08±0.02、0.06±0.03，两组差值比较，差异无统计学意义（t=0.532，P＞0.05）。治疗后6个月，微脉冲组、MLG组平均CMT分别为（323.94±68.30）、（355.85±115.88） μm，均较治疗前降低，差异有统计学意义（t=4.028、2.039，P＜0.05）。微脉冲组、MLG组组内治疗前后平均CMT的差值分别为（55.12±13.68）、（22.25±10.92） μm，两组差值比较，差异无统计学意义（t=1.891， P＞0.05）。治疗后6个月，微脉冲组、MLG组平均MS分别为（6.63±2.65）、（4.53±1.81） dB；微脉冲组平均MS较治疗前提高，差异有统计学意义（tt=3.335，P＜0.05）；MLG组平均MS较治疗前降低，差异也有统计学意义（t=3.589，P＜0.05）。微脉冲组、MLG组组内治疗前后平均MS的差值分别为（1.10±0.33）、（-0.91±0.25） dB，两组差值比较，差异有统计学意义（t=4.872，P＜0.05）。结论 黄色微脉冲激光和MLG治疗DME均能提高患者视力，降低CMT；但黄色微脉冲激光可提高患者MS，而MLG降低了患者MS。     

短脉冲模式扫描激光治疗糖尿病视网膜病变疗效观察

目的 观察短脉冲模式扫描激光（PASCAL）系统全视网膜激光光凝（PRP）（PASCAL-PRP）治疗糖尿病视网膜病变（DR）的疗效。方法 临床检查确诊的DR患者43例70只眼纳入研究。其中,男性19例32只眼,女性24例38只眼;年龄45～77岁。视力≥0.1者62只眼,＜0.1者8只眼;伴黄斑水肿者18只眼。严重非增生型DR（NPDR）28只眼,增生型DR（PDR）42只眼。所有患眼均行1次PASCAL-PRP治疗。伴黄斑水肿者应用PASCAL单点模式和黄斑模式(MAC A+MAC B)。观察治疗后1年患眼视力、视网膜新生血管、黄斑水肿改善情况。结果 70只眼中,视力提高、稳定、下降者分别为10、53、7只眼;黄斑水肿改善、加重、稳定者分别为38、12、20只眼。PDR 42只眼中,视网膜新生血管消退20只眼;视网膜新生血管病灶稳定11只眼;视网膜新生血管病灶活动11只眼。视网膜新生血管病灶活动者,随访期间给予1～2次补充激光光凝治疗。其中因玻璃体积血、出现增生牵拉行玻璃体切割手术治疗3只眼。结论 PASCAL可以选择多种模式治疗DR安全有效。     

辅酶Q10对大鼠视网膜光损伤的防护作用研究

目的观察辅酶Q10对实验性大鼠视网膜光损伤的防护作用及其机制。方法30只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、辅酶Q10组等3组，用（2000±120）lx绿色荧光灯对SD大鼠进行24 h持续照射，建立视网膜光损伤模型。于光照前24 h、30 min分别通过阳性对照组和辅酶Q10组大鼠尾静脉注射生理盐水和辅酶Q10。光照后第1天常规摘除眼球,光学和电子显微镜观察视网膜组织病理学改变；流式细胞术检测视网膜细胞凋亡率。结果组织病理学检查显示，辅酶Q10组外核层排列整齐，仅见少量凋亡细胞,内、外节轻度水肿，与阳性对照组比较，光损伤后的组织病理改变明显减轻；流式细胞术检测显示，正常对照组视网膜细胞凋亡率为（1.65±1.48）%，阳性对照组为（25.83±2.92）%，辅酶Q10组为（12.43±2.25）%。阳性对照组视网膜细胞凋亡率较正常大鼠视网膜明显升高(t=18.28，P＜0.01),辅酶Q10组的视细胞凋亡率较阳性对照组明显降低（t=9.07，P＜0.01）。结论辅酶Q10对光损伤引起的视网膜损害及视细胞凋亡有较好的防护作用。（中华眼底病杂志，2007，23：122-125）     

不同途径移植人脐带间充质干细胞对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的 观察人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对糖尿病（DM）大鼠血糖的影响及对视网膜病变的治疗作用。方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠45只,随机分为正常对照组（A组）、DM组,分别为10、35只大鼠。DM组经尾静脉注射链脲佐菌素诱导DM模型。10周时,A组、DM组分别随机选取2只大鼠行视网膜血管铺片。DM组剩余的33只大鼠随机分为糖尿病视网膜病变组（B组）、尾静脉注射hUCMSC 组（C组）、玻璃体腔注射hUCMSC 组（D组）,各组均为11只大鼠。A、B组不进行干预。干预后2、4、6、8周为观察处理时间点。各处理时间点前,连续3 d每次随机选取2只大鼠检测随机血糖。DM组大鼠血糖与同期A组大鼠血糖比较,差异均有统计学意义（t=-64.400、-60.601、-44.065、-43.872,P=0.000）。8周时从B、C、D组随机选取2只大鼠行视网膜血管铺片。免疫组织化学法观察视网膜脑源性神经营养因子（BDNF）阳性染色情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测视网膜BDNF mRNA相对表达量。结果 干预后,不同处理时间点A、B、C、D组大鼠血糖比较,差异均有统计学意义（F=400.017、404.410、422.043、344.109,P=0.000）;C组大鼠血糖与B、D组大鼠血糖比较,差异有统计学意义（t=4.447、4.990、P＜0.01）。免疫组织化学染色结果显示,A组BDNF表达呈阳性,主要分布在神经节细胞层;B组BDNF表达呈弱阳性;C、D组BDNF表达增多。RT-PCR检测结果显示,4、6、8周时,B、C、D组间视网膜BDNF mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义（F=29.372、188.492、421.537,P=0.000）;C、D组视网膜BDNF mRNA相对表达量与B组比较,差异均有统计学意义（t=66.781、72.401、63.880、88.423、75.120、83.002,P＜0.01）;C组视网膜BDNF mRNA相对表达量与D组比较,仅8周时差异有统计学意义（t=127.321,P=0.005）。结论 尾静脉注射hUCMSC能够显著降低大鼠血糖水平;尾静脉或玻璃体腔注射hUCMSC均可增加BDNF的表达。     

激光光凝治疗早产儿视网膜病变的疗效分析

目的 观察激光光凝治疗早产儿视网膜病变（ROP）的临床效果。方法 临床确诊为阈值前Ⅰ型和阈值期的ROP患儿64例127只眼纳入研究。其中,阈值前Ⅰ型ROP 15例30只眼,占患眼的23.6%;阈值期ROP 49例97只眼,占患眼的76.4%。所有患儿均于确诊后72 h内在全身麻醉状态下行间接检眼镜引导的532 nm或810 nm激光光凝治疗。阈值前Ⅰ型ROP 15例30只眼中,行532 nm激光光凝治疗6例12只眼,行810 nm激光光凝治疗9例18只眼。阈值期ROP 49例97只眼中,行532 nm激光光凝治疗37例73只眼,行810 nm激光光凝治疗12例24只眼。治疗后随访时间12~36个月,平均随访时间18.4个月。观察患儿病变退化情况。以1次激光光凝治愈率、重复治疗率、不良预后发生率、全身及局部并发症的发生情况为疗效观察指标,对比分析阈值前Ⅰ型与阈值ROP,以及532 nm与810 nm激光光凝治疗的效果差异。结果 127只眼中,附加病变消失、嵴消退、病变完全退化125只眼,占98.4%;颞侧周边部残存膜状牵拉、视网膜血管颞侧牵拉移位2只眼,占1.6%。未出现进展为4期或5期严重不良预后者。经1次激光光凝治疗病变完全退化者118只眼,占92.9%;经2~3次激光光凝治疗病变完全退化者6只眼,占4.7%;因近周边部病变较重,激光光凝反应欠佳,行冷冻治疗者3只眼,占2.4%。64例127只眼中,发生麻醉意外1例,占患儿的1.6%;出现结膜下出血12只眼,占患眼的9.4%;发生白内障1只眼,占患眼的0.8%。经532 nm或810 nm激光光凝治疗阈值前Ⅰ型和阈值期ROP的治疗效果相当,差异无统计学意义（P＞0.05）。但需要重复激光光凝治疗、附加冷冻治疗、出现不良预后及严重并发症者主要出现在阈值期532 nm激光光凝治疗的患儿中。结论 激光光凝可有效治疗阈值前Ⅰ型和阈值期ROP。     

骨髓间充质干细胞(MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜变性的治疗作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的治疗作用.方法 应用不同剂量(30 mg·kg-1、45 mg·kg-1、60 mg·kg-1、75 mg·kg-1、90 mg·kg-1)的MNU腹腔注射给予C57BL小鼠和MNU作用不同时间(1d、3d、7d)后,通过视网膜电图(electroretinogram,ERG)和HE染色检测小鼠视网膜的电生理功能和组织形态变化,优化建立稳定的RP动物模型的最佳条件;在此动物模型的基础上,经玻璃体内注射和尾静脉注射给予MSCs移植,并应用ERG和HE染色评估MSCs对MNU诱导的RP的治疗作用.结果 与对照组相比,30 mg·kg-、45mg·kg-1剂量的MNU可引起视网膜形态和功能的轻微损伤,而60 mg·kg-1及其以上剂量的MNU可使视网膜ERG波幅明显降低(均为P ＜0.001),视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度明显变薄(P ＜0.001),损伤严重;与对照组相比,60 mg·kg-的MNU作用后1d和3d,视网膜ERG波形开始降低,形态结构开始出现ONL厚度变薄的损伤,作用7d时,ERG波形呈现熄灭型(均为P＜0.001),ONL厚度明显变薄(P ＜0.001),内外核层融合,损伤严重.与MNU单独作用组相比,60 mg·kg-1 MNU作用1d后给予MSCs移植,7d后MSCs组内ONL厚度增加(P ＜0.001),视网膜ERG波形趋于恢复(均为P＜0.001).结论 MSCs移植对MNU诱导的视网膜退行性变有一定的治疗作用.     

米诺环素对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞的保护作用

目的 观察米诺环素对视网膜色素变性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP过程的影响。方法 40只新生rd小鼠随机分为10组，5组为实验组，5组为对照组，每组4只小鼠。实验组，出生后每日腹腔注射米诺环素22.5 mg/kg；对照组，出生后每日腹腔注射生理盐水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各处死一组实验组和对照组小鼠，取眼球做组织学观察并行凋亡细胞检测，并对两组视网膜光感受器细胞数、外核层厚度以及凋亡细胞数目进行统计分析。结果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器细胞开始凋亡，14 d达高峰，28 d光感受器细胞完全消失；（2）出生后7 d实验组光感受器细胞数目和外核层厚度与对照组比较差异无统计学意义；（3）出生后14、21 d实验组光感受器细胞数目和外核层厚度多于对照组相应时间点，差异有统计学意义（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d实验组外核层凋亡细胞数目少于对照组相应时间点，差异有统计学意义（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。结论 米诺环素在rd小鼠RP早期可以延缓光感受器细胞丢失，但不能完全阻止RP的发生。     

锂对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的保护作用

目的 研究锂在视网膜色素变性小鼠模型上对光感受器细胞凋亡的神经保护作用.方法 实验研究.FVB/NJ视网膜色素变性小鼠出生后立刻用含锂的食物喂养,7和14 d时摘除眼球做视网膜冰冻切片,同时取血测血清锂浓度.HE、TUNEL和视杆细胞免疫荧光染色进行视网膜组织形态、光感受器细胞凋亡分析.结果 光镜下可见,对照组外核层可见TUNEL阳性细胞,出生后14 d外核层厚度和细胞层数(3或4层)明显低于7 d时的厚度(9或10层),而锂喂养组出生后14 d外核层的厚度和细胞层数明显高于对照组,与出生7 d时的外核层厚度及细胞层数无明显差异.结论 锂能够保护视网膜色素变性小鼠光感受器细胞免于凋亡.(中华眼科杂志,2008,44:248-252)     

NADPH氧化酶抑制剂对遗传性视网膜色素变性感光细胞凋亡的抑制作用

背景 我们先前的研究表明,rd小鼠遗传性视网膜色素变性（RP）过程中小胶质细胞活化与感光细胞的凋亡密切相关.研究显示,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在小胶质细胞活化及神经元损伤中发挥重要作用,但NADPH氧化酶在RP过程中作用机制及其抑制剂的作用有待探讨.目的 探讨rd小鼠发生RP过程中NADPH氧化酶产生活性氧簇（ROS）的活化反应及其抑制剂对感光细胞的保护作用. 方法 按抛掷硬币法将60只SPF级rd小鼠随机分为香荚兰乙酮注射组和PBS对照组,香荚兰乙酮注射组小鼠于出生后9d（P9）腹腔内注射NADPH氧化酶抑制剂香荚兰乙酮10 mg/kg（0.01 ml/kg）,每日1次,连续5d（至P13）;PBS对照组rd小鼠以同样方式注射等容量的PBS;C57 BL/6N小鼠10只不注射任何药物作为rd小鼠的野生对照鼠.各组小鼠于出生后14 d（P14）处死并制备视网膜冰冻切片,采用二氢乙锭（DHE）荧光染色法检测3个组小鼠视网膜中ROS的表达;采用实时定量PCR（real-time PCR）法测定2个组rd小鼠视网膜感光细胞中视紫红质mRNA的定量表达;采用苏木精-伊红染色法检查2个组rd小鼠视网膜外核层厚度.结果 DHE荧光染色表明,小鼠视网膜中ROS表达呈红色荧光,注药组小鼠视网膜外核层中ROS的红色荧光明显强于C57BL/6N野生鼠,但明显弱于PBS对照组.Real-time PCR检测表明,香荚兰乙酮注射组小鼠感光细胞中视紫红质mRNA相对表达量为4.21 ±0.33,明显低于PBS对照组的0.93±0.24,差异有统计学意义（t=2.360,P=0.000）;香荚兰乙酮注射组小鼠视网膜外核层厚度为（35.95±1.63） μm,明显厚于PBS对照组的（23.17±1.38） μm,差异有统计学意义（t=3.850,P=0.016）.结论 在rd小鼠视网膜感光细胞变性过程中,NADPH氧化酶生成ROS的活化反应明显增强;香荚兰乙酮能够延缓rd小鼠感光细胞的凋亡过程.     

高脂诱导肥胖小鼠的视网膜变性及其与氧化应激的关系

目的:探讨高脂饮食建立的C57BL/6小鼠肥胖模型的视网膜变性的超微结构改变及其与氧化应激的关系。方法:高脂饲料喂养19wk后,小鼠分为肥胖抵抗(DIO-R)组和肥胖倾向(DIO)组,同时对照组小鼠给予基础饲料。应用光镜、透射电镜及TUNEL法检测3组小鼠视网膜超微结构的改变及凋亡情况,并应用生化方法检测视网膜的氧化和抗氧化指标。结果:与对照组及DIO-R组比较,DIO组小鼠视网膜及外核层(ONL)变薄(P<0.01);感光细胞出现凋亡及坏死,其外段视盘膜排列紊乱,部分溶解、断裂,神经节细胞体积变小,细胞质分布紊乱,核染色质固缩;TUNEL法检测结果显示,在ONL层可见较多的凋亡细胞,其细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与对照组比较,DIO组小鼠视网膜匀浆丙二醛(MDA)含量明显升高(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)活力显著下降(P<0.05)。结论:高脂诱导的肥胖可导致C57BL/6小鼠视网膜变性及细胞凋亡,其机制可能与氧化应激有一定关系。     

Activation of the TRAAK two-pore domain potassium channels in rd1 mice protects photoreceptor cells from apoptosis

AIM: To investigate the expression of TWIK-related arachidonic acid-stimulated K+ channel (TRAAK) in retinal degeneration mice (rd1) and further evaluate how TRAAK affect photoreceptor cell apoptosis. METHODS: The rd1 mice were distributed into blank (no treatment), control (1.4% DMSO, intraperitoneal injection) and riluzole groups (4 mg/kg·d, intraperitoneal injection) from postnatal 7d to 10, 14 and 18d; C57 group (no treatment), as age-matched wild-type control. The thickness of the outer nuclear layer (ONL) of retina was detected by paraffin section hematoxylin and eosin staining. The expression of TRAAK and the apoptosis of the ONL cells were detected by immunostaining, Western blotting, and real-time polymerase chain reaction. RESULTS: The channel agonist riluzole activated TRAAK and delayed the apoptosis of photoreceptor cells in ONL layer of rd1 mice. Both at mRNA and protein levels, after riluzole treatment, TRAAK expression was significantly upregulated, when compared with the control and blank group. Then we detected a series of apoptosis related mRNA and protein. The anti-apoptotic factor Bcl-2 downregulated and the pro-apoptotic factors Bax and cleaved-caspase-3 upregulated significantly. CONCLUSION: Riluzole elevates the expression of TRAAK and inhibits the development of apoptosis. Activation of TRAAK may have some potential effects to put off photoreceptor apoptosis.     

小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡

目的 研究小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡情况。 方法 将成年C57Bl/6J小鼠36只分为2组：实验组小鼠18只左眼视网膜下注射1.4%透明质酸钠造成视网膜脱离，对照组小鼠18只左眼仅作巩膜穿刺。分别于手术后1、3、7和28 d摘除眼球，视网膜切片进行组织化学、免疫荧光染色，共聚焦显微镜检查。抗视锥和抗视杆细胞的抗体分别标记视锥和视杆细胞，dUTP缺口末段标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。通过计数存活和凋亡的视锥和视杆细胞来定量光感受器细胞的凋亡和细胞丢失。 结果 凋亡细胞只存在于脱离部分视网膜的外核层，凋亡细胞在视网膜脱离后1 d即可检测得到，3 d时达到高峰，7 d后陡然减少。视网膜脱离后视杆和视锥细胞的死亡呈现同样的时程。 结论 凋亡是视网膜脱离后光感受器细胞死亡的主要病理改变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 124-127)     

Retardation of photoreceptor degeneration in the detached retina of rd1 mouse

PURPOSE: To study the neuroprotective effect of experimental retinal detachment (RD) on photoreceptor degeneration in rd1 mice. METHODS: RD was produced in the eyes of rd1 mice at postnatal day (P) 9. These eyes were collected and compared to controls without RD. The effects of RD on retinal degeneration were evaluated by histochemical staining of nuclei in the outer nuclear layer (ONL), rod and cone photoreceptors, and retinal vessels at P30 in retinal sections and flatmounts. Apoptotic photoreceptors were detected by TdT-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) at P15. Mice with or without RD were also reared in darkness and evaluated immunohistochemically at P30. RESULTS: The numbers of rhodopsin-positive (rod), peanut agglutinin-positive (cone), and diamino-2-phenyl-indol-stained (rod-plus-cone) cells in the ONL were increased by 2.0-fold, 1.3-fold, and 1.2-fold, respectively, in the rd1 eyes with RD compared to those without RD at P30. In the detached retina, the cone photoreceptor inner/outer segment structures and the deep retinal vessels surrounding the inner nuclear layer and the ONL, but not the ganglion cell layer, were preserved. At P15, TUNEL-positive cell numbers in the ONL were significantly reduced in the eyes with RD. Light exposure had no effect on photoreceptor degeneration in the eyes with or without RD. CONCLUSIONS: RD mediates the preservation of cone and rod photoreceptors in the ONL and surrounding vascular structures by reducing the rate of apoptosis of photoreceptors in rd1 mice. Light deprivation does not appear to be one of the mechanisms of photoreceptor protection in the detached retinas in these mice.     

补肾益精方对外周血干细胞在RCS大鼠视网膜上的募集及睫状神经营养因子表达的影响

目的：观察补肾益精方对外周血骨髓间充质干细胞在视网膜变性模型（RCS）大鼠视网膜募集及睫状神经营养因子（CNTF）分泌的影响，探讨补肾益精方治疗视网膜退行性病变的作用机制。方法：实验研究。采用尾静脉注射方式将1×107个GFP标记的骨髓间充质干细胞（GFP-MSCs）注射至3周龄RCS大鼠外周血，然后按随机数字表法分为蒸馏水组及补肾益精方（BSYJ）组，每组39只。注射后第1天开始分别采用蒸馏水及补肾益精方药液灌胃，正常SD大鼠作为对照组常规饲养。给药7 d、14 d及28 d时分别采用视网膜铺片、免疫荧光显微镜观察GFP-MSCs在视网膜的募集情况；实时荧光定量PCR及免疫荧光双染技术检测视网膜表达CNTF的情况；TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况；采用单因素方差进行数据分析。结果：给药7 d、14 d和28 d时，蒸馏水组GFP-MSCs的数目少于BSYJ组，其中给药28 d时，2 组差异有统计学意义（t=2.71，P=0.001）。给药7 d、14 d和28 d时，BSYJ组CNTF表达较蒸馏水组均明显增加，3 组差异有统计学意义（F=5.763，P=0.003；F=3.165，P=0.042；F=4.839，P=0.004）。给药7 d和28 d时，BSYJ组视网膜细胞凋亡率明显少于蒸馏水组，3组差异有统计学意义（F=0.002，P=0.001；F=0.307，P=0.004）。结论：补肾益精方能够促进外周血干细胞在视网膜上的募集以及促进CNTF的表达，这可能是补肾益精方延缓RCS大鼠视网膜细胞凋亡和病变进程的作用机制之一。