胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的 探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠海马CA1区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2,促凋亡因子Bax mRNA表达的影响.方法 实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心.30只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(对照组,n=6)、心肺复苏组(复苏组,n=12)及CPR后胰岛素干预组(胰岛素组,n=12).经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型;以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)并持续10 min以上,作为自主循环恢复(ROCS)标准;ROCS 10 min后,胰岛素组大鼠经立体定位仪定位,脑室内注射12.5 μL(1 U)胰岛素,其余2组大鼠注射等量生理盐水.维持生命体征,CPR后24,72 h,应用实时荧光PCR (Realtime-PCR)测定海马CA1区神经元Bcl-2,Bax mRNA的表达量;CPR后7d,应用TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;CPR前后监测大鼠静脉血糖变化.计量资料采用均数±标准差(-x±s),组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);相关性统计应用Pearson相关分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CPR后24,72 h,胰岛素组大鼠Bcl-2 mRNA表达量均高于复苏组(1.45±0.05) vs.(0.79±0.01);(0.95±0.06) vs.(0.35±0.03),差异具有统计学意义(P＜0.01).组内比较发现,胰岛素组、复苏组72 h表达均低于24 h(P＜0.01).而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素组、复苏组72 h与24h比较差异无统计学意义(P＞0.05).②CPR后7d,胰岛素组大鼠海马CA1区神经元凋亡计数,复苏组(124.75±17.35)个/mm2明显高于对照组(5.12±3.26)个/mm2和胰岛素组(92.79±7.49)个/mm2,差异具有统计学意义(P＜0.01).③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义(P＞0.05).结论 脑室内注射1U胰岛素,能够促进CPR后大鼠神经元促凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经元凋亡,具有神经保护作用.脑室注射1U胰岛素不降低外周血糖.     

磷酸肌酸对大鼠心肺复苏后心肌细胞凋亡的影响

目的 通过观察大鼠心肺复苏(CPR)后心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达及外源性磷酸肌酸(CP)干预的影响,研究大鼠CPR后心肌损伤机制及外源性CP的保护作用.方法 将32只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、常规复苏组(B组)、常规剂量CP组(C组,胸外按压时首次给药CP 0.5g/kg,2 h后再次给药1.0g/kg)、大剂量CP组(D组,胸外按压时首次给药CP 1.0g/kg,2 h后再次给药2.0g/kg).每组动物8只.建立窒息型大鼠心搏骤停(CA)-CPR模型,ROSC后24 h取心肌标本待测.以脱氧核糖核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测ROSC后24h的心肌细胞凋亡指数(AI);以免疫组化法检测ROSC后24h的心肌细胞Bcl-2,Bax蛋白表达.数据比较采用方差分析.结果 与A组比较,CPR后24h B,C,D各组心肌凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均显著升高(均P＜0.01),Bcl-2/Bax值均明显降低(P＜0.01);与B组比较,C组和D组心肌的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值均明显上升(P＜0.01);与C组比较,D组的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值明显上升(P＜0.05).结论 外源性磷酸肌酸可明显抑制窒息型大鼠CPR后心肌细胞凋亡,对心肺复苏后心肌损伤具有保护作用,该作用以大剂量时更明显.     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

葛根素对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨葛根素(puerarin)对心力衰竭(心衰)大鼠心肌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:20只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组和实验组,每组10只。采用缩窄腹主动脉构建大鼠心衰模型,8周后,实验组大鼠每日腹腔内注射葛根素0.02g/kg,对照组大鼠每日腹腔内注射生理盐水5mL/kg,连续30d后断头法处死大鼠,取心肌组织,分别采用末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,透射电镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征,对凋亡相关Bcl-2与Bax蛋白表达的变化进行定性与定量检测。结果:实验组较对照组凋亡指数和凋亡百分率显著降低,实验组Bcl-2表达明显上升,Bax表达则明显下降,差异有显著意义(P<0.05)。结论:葛根素具有抗心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

本研究旨在观察TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。用不同浓度的TIEG1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用12.03 ng/ml TIEG1处理HL-60细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测Bcl-2及Bax的表达变化。结果表明,TIEG1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。TIEG1 12.03 ng/ml增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势(P<0.05)。结论:TIEG1可以抑制HL-60细胞增殖,进而诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TIEG1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,Bcl-2/Bax与TIEG1诱导HL-60细胞凋亡相关。     

Bcl-2和Bax调节细胞凋亡的研究

Bcl-2和Bax是凋亡调节基因Bcl-2家族的两个重要成员,二者可通过形成同源或异源二聚体来调节细胞凋亡。Bcl-2和Bax调节凋亡的机制与线粒体内信号传递系统、Bcl-2蛋白磷酸化和Bax转位有密切关系,并且,Myb、CREB、P53、Gif-1和WT1等多种基因均对Bcl-2的表达或功能具有调节作用。     

黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探讨其作用机制。方法:采用小剂量高脂高糖喂养联合链脲佐菌素单次注射法造成2型糖尿病大鼠模型,黄芩苷[150mg(kg·d)]灌胃8周,8周后称体重、肾重,计算肾指数;收集大鼠血液和24h尿,测定血糖和尿微量蛋白;一侧肾脏采用TUNEL法检测凋亡及免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,另一侧肾脏液氮保存后采用荧光实时定量RT-PCR法测Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果:与对照组比较,糖尿病组肾脏凋亡细胞数明显增多。Bax和Bcl-2表达均增强,Bax/Bcl-2增高(P<0.01);黄芩苷治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低(P<0.01)。结论:黄芩苷可以抑制糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡,其作用机制可能与影响凋亡基因Bax和Bc1-2表达有关。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Bcl-2、Bax和Bcl-xl表达的影响

目的：探讨二甲胺四环素（minocycline）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡和相关因子表达的影响及对损伤脊髓神经功能的保护作用。方法：36 只SD大鼠分为4组，空白组只暴露脊髓，不损伤，A、B组及损伤组建立脊髓损伤模型。A、B组分别给予二甲胺四环素和甲基强的松龙腹腔内注射；损伤组和空白组腹腔内注射生理盐水。免疫组化法检测4组大鼠损伤脊髓神经细胞凋亡因子（Bcl-2 、Bcl-xl、 Bax）的表达； TUNEL 标记凋亡细胞。结果：A组的神经功能高于损伤组（P〈0.01），与B组差异无显著性意义；损伤组的凋亡阳性细胞多于A、B组（P〈0.05）；A组Bcl-2阳性表达细胞多于损伤组（P〈0.05），而Bcl-xl、 Bax表达与损伤组差异无显著性意义。结论：凋亡是脊髓损伤后神经细胞死亡的一种重要方式； 二甲胺四环素能上调Bcl-2的表达，改变Bcl-2/Bax的比值，从而抑制脊髓神经细胞凋亡，对损伤脊髓的神经功能有保护作用。     

丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的观察丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区细胞凋亡及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达的影响,为进一步的研究提供依据。方法本实验采用二血管阻断加低血压法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。SD大鼠24只,随机被分成3组,每组8只：①假手术组（F组）：只分离股动脉和双侧颈总动脉,不降压,不夹闭双侧颈总动脉;②缺血再灌注组（IR组）：股动脉放血使血压降至基础血压的50％～60％,夹闭双侧颈总动脉10min再放开;⑧丙酮酸乙酯处理组（EP组）：与IR组处理相同。EP组于恢复血流即刻腹腔注射丙酮酸乙酯40mg／kg,其余两组给予等量生理盐水,每隔6h注射一次;再灌注24h后断头取脑,用原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法检测海马CA1区Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果IR组和EP组AI和Bel—2、Bax蛋白表达水平均明显高于F组,差异有统计学意义（P〈0．05）;与IR组比较,EP组AI显著降低、Bax蛋白表达水平显著下降以及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论丙酮酸乙酯可抑制大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax表达水平有关。     

大鼠前脑缺血再灌注后海马神经元细胞凋亡及 Bcl-2表达研究

目的：观察Bcl-2蛋白在前脑缺血再灌注后细胞凋亡中的变化,探讨脑缺血再灌注后细胞凋亡的分子机制。方法：21只雄性SD大鼠随机分为7组,即对照组,脑缺血再灌注后1、3、6、12、24、48h组。大鼠断头处死后,解剖取材,固定、包埋、切片。用原位末端标记法（TUNEL）检测前脑缺血再灌注模型海马的细胞凋亡情况,用免疫组化方法检测相关基因Bcl-2表达的变化。结果：前脑缺血再灌注1、3h海马区未见凋亡细胞出现,6h开始出现,24h 达高峰,之后开始下降。Bcl-2阳性表达在前脑缺血再灌注1h即出现,12h达高峰,之后下降至低水平。结论：Bcl-2蛋白表达在海马神经元凋亡过程中起重要作用。[著者文摘]     

Effect of exogenous phosphocreatine on cardiomycytic apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax after cardiopulmonary resuscitation in rats

BACKGROUND:

Ischemia-reperfusion injury in the myocardium after cardiac arrest (CA) and cardiopulmonary resuscitation (CPR) is an important pathologic basis of post-cardiac arrest of syndrome (PCAS), and apoptosis is one of the major mechanisms in myocardial ischemia-reperfusion injury. To lessen myocardial ischemia-reperfusion injury after cardiac arrest and CPR, it is important to reduce energy consumption and to increase energy supply in the myocardium. This study aimed to observe changes of cell apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax protein on the myocardium after CPR in rats, and the protective effects of different doses of exogenous phosphocreatine (creatine phosphate, CP) on them.

METHODS:

A total of 32 male adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: control group (group A), CPR group (group B), low-dose CP group (group C, CP 0.5 g/kg at beginning of CPR and 1.0 g/kg at 2 hours after CPR) and high-dose CP group (group D, CP 1.0 g/kg at beginning of CPR and 2.0 g/kg at 2 hours after CPR). Cardiac arrest was induced by asphyxiation and CPR started at 7 minutes after asphyxiation in groups B, C and D. Myocardium samples were taken at 24 hours after CPR. Cardiomycytic apoptosis was detected by the TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) method. The expression of Bcl-2 and Bax protein was measured by immunohistochemistry.

RESULTS:

Cardiomyocytic apoptosis index (AI) and expression of Bcl-2 and Bax protein increased more significantly in groups B, C and D than in group A (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio significantly decreased (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in groups C and D than in group B (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in group D than in group C (P<0.05), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.05).

CONCLUSION:

Exogenous phosphocreatine, especially at a large dose, could inhibit cardiomyocytic apoptosis and alleviate myocardial injury after CPR in rats.KEY WORDS: Cardiopulmonary resuscitation, Phosphocreatine, Apoptosis, Bcl-2, Bax, TUNEL     

小檗碱对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Bcl-2、Bax表达及凋亡活性影响

目的:观察小檗碱对大鼠脑缺血-再灌注损伤后神经保护作用及Bcl-2,Bax表达的影响,探讨小檗碱在脑缺血一再灌注损伤中的抗凋亡作用及机制.方法:线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组、小檗碱低剂量组、小檗碱高剂量组、假手术组.脑缺血2 h再灌注24 h;分别在再灌注后3 h和24 h进行神经行为评分,并在再灌注24 h后断头取脑.采用连续切片观察组织形态学改变,免疫组织化学技术检测脑组织中Bcl-2、Bax表达的部位及数量.结果:小檗碱组神经功能评分明显低于模型组,且大鼠脑梗死体积较模型组明显缩小,小檗碱高剂量组及低剂量组调高Bcl-2阳性细胞数增多、Bax阳性细胞教减少,Bcl-2/bax的表达比例增加(P<0.05);大鼠额顶部皮质神经元凋亡数目与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).小檗碱高剂量组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Bax阳性细胞数,皮质神经元凋亡数目与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:小檗碱能明显减轻脑缺血再灌注损伤所致的行为障碍.缩小梗死体积,可能通过上调抑凋亡Bcl-2表达、抑制Bax表达,减少细胞凋亡发挥脑保护作用.     

严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达

目的 探讨严重颅脑损伤后Bel-2、Bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 采用改进的Feeney自由落体损伤模型，应用分子生物学方法——脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleofidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)以及免疫组织化学方法，对50只严重颅脑大鼠脑组织中的凋亡细胞和Bel-2、Bax免疫反应阳性的细胞进行观察、统计。结果 损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞数明显高于未损伤组，Bel-2、Bax表达也有所增加，同时，损伤组Bax／Bel-2阳性细胞数的比值明显大于未损伤组。结论 Bel-2和Bax表达的比例对严重颅脑损伤后细胞凋亡可能起重要的调控作用。     

促红细胞生成素对心肺复苏后大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察促红细胞生成素（EPO）对心肺复苏后大鼠海马神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术（CPR）。雄性Wistar大鼠60只,随机分3组：手术对照组（A组）、心肺复苏组（B组）、心肺复苏＋EPO（C组）。应用免疫组化法观察各组大鼠复苏后12 h海马神经元凋亡细胞、NGF及BDNF表达情况。结果与对照组（A组）相比心肺复苏组（B组）大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低（P〈0.05）,凋亡细胞明显增加（P〈0.01）;心肺复苏＋EPO（C组）NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组（P〈0.01）,凋亡细胞明显降低（P〈0.05）,低于B组。结论 EPO能促进神经元NGF、BDNF的表达,减少神经细胞凋亡,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。     

姜黄素对喉癌Hep-2细胞增殖及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的探索姜黄素对喉癌细胞增殖的作用以及对细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法 Hep-2细胞暴露于含姜黄素(3-25μM)的培养基中,分别培养24h及48h,用MTT法检测对细胞增殖的影响;用RT-PCR法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果 MTT显示,姜黄素使Hep-2细胞增殖明显降低,并呈时间-剂量依赖性;RT-PCR结果显示,姜黄素使Bcl-2的mRNA表达水平降低,而使Bax的mRNA表达水平升高,并呈剂量和时间依赖性。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖具有显著的抑制作用。其作用机制可能与其下调Bcl-2基因表达水平及上调Bax基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

腺苷预处理对缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 研究腺苷预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 制备缺血/再灌注损伤(I/R)和腺苷预处理的大鼠模型,采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2和Bax.结果 ①缺血/再灌注组和腺苷组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组凋亡率显著低于缺血/再灌注组(P<0.01).②缺血/再灌注组抗凋亡蛋白Bcl-2表达与对照组比较无明显差别,而腺苷组Bcl-2显著高于缺血/再灌注组和对照组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组Bax低于缺血/再灌注组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P<0.01),而腺苷组Bcl-2/Bax比值显著高于缺血/再灌注组(P<0.01).结论 腺苷预处理明显抑制大鼠缺血/再灌注后心肌细胞的凋亡,并使Bcl-2/Bax比值增加.     

皮肤溃疡伤口中Bax和Bcl-2蛋白含量的变化及其与溃疡发生的关系

目的观察Bax和 Bcl- 2蛋白在溃疡、溃疡边缘和正常皮肤组织中的表达特征及其对溃疡形成的影响. 方法 24例被测标本中包括不同类型的溃疡组织 8例 ,其对应的溃疡边缘和正常皮肤组织各 8例 .用常规病理技术和免疫组化方法确定这两种蛋白在溃疡组织和正常皮肤中的定位和表达量的变化规律. 结果在正常皮肤组织中 , Bax蛋白的阳性颗粒较少 ,在表皮细胞内稍有表达 , 而 Bcl- 2蛋白则主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞中. 在溃疡组织中 , Bax蛋白存在于表皮基底层细胞和部分成纤维细胞的胞浆中, 而 Bcl- 2蛋白在表皮基底层细胞内有表达 . 从正常皮肤到溃疡组织 ,Bcl- 2含量逐渐下降 , 而 Bax的蛋白表达呈升高趋势 .结论在正常皮肤和溃疡组织中 , Bax和 Bcl- 2蛋白不同分布和表达变化规律显示, Bcl- 2和 Bax两种蛋白可能与溃疡创面处细胞凋亡增加相关 ,从而导致伤口愈合迟缓和溃疡的发生 .