RNA干扰沉默IGF—IR基因治疗卵巢癌的实验研究

目的研究RNA干扰技术沉默IGF—IR在卵巢癌靶向治疗中的意义。方法以IGF—IR为目的基因,设计合成siRNA重组质粒;利用Real—timePCR和Westernblot方法,分别从mRNA水平及蛋白水平检测IGF—IR的表达;通过MTF实验检测细胞增殖情况。结果本实验成功构建了三个表达载体pSihIGF—IR-1、pSihIGF—IR-2和pSihIGF—IR-3,转染卵巢癌OVCAR3细胞,48h后,IGF—IR的mRNA及蛋白水平均明显降低,并且显著抑制了OVCAR3细胞的体外增殖。结论应用RNA干扰技术,能够高效、特异的沉默IGF—IR基因的表达,抑制肿瘤生长。针对卵巢癌IGF—IR的RNAi技术,可能为卵巢癌的临床治疗开拓-条新的途径。     

前列腺组织中ERα、ERβ的表达及其意义

目的探讨雌激素及其受体ERα、ERβ与良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、前列腺癌(prostate cancer,PCa)的关系。方法采用免疫组化SP法检测ERα和ERβ在20例正常前列腺(normal prostate,NP)、80例BPH及46例PCa标本中的表达。结果 ERα主要在前列腺组织间质细胞表达,上皮细胞中无表达,在NP中呈低表达,在BPH中高表达,而在PCa表达下降(P0.01);但ERα在PCa不同病理分级和临床分期中的表达强度差异无显著性(P0.05)。ERβ主要在前列腺组织上皮细胞表达,很少位于间质,在NP、BPH中高表达,而在PCa中表达下降甚至呈阴性(P0.01),ERβ表达与分化程度呈正相关(P0.01),且主要表达于A、B期组织中(P0.01)。结论 ERα主要在间质细胞表达,而ERβ主要在上皮细胞表达,提示雌激素对BPH及PCa的作用可能主要是通过ERβ途径发挥作用的。ERβ在PCa中的表达明显下降,提示其可能与PCa的发生、发展有关,推测PCa中大部分ERβ可能是更具有侵袭性的ERβ变异体,致使PCa恶性程度增加。     

IGF—IR与细胞增殖,凋亡和肿瘤

IGF-IR属于跨膜酪氨酸蛋白激酶受体家族 ,被配基激活后有三个重要的作用 :①是细胞体内、体外最佳生长所需 ;②是细胞转化表型建立和维持以及肿瘤发生所必需 ;③保护细胞免遭凋亡。这些是肿瘤细胞发生和恶性增殖的基础。     

人肝癌及肝硬变中IGF—2及HBxAg表达的对比研究

对６０例肝细胞癌、癌旁肝组织和４７例肝硬变石蜡切片进行ＩＧＦ－２和ＨＢｘＡｇ免疫组化染色。结果表明，在ＨＢｘＡｇ阳性的肝癌和肝硬变中ＩＧＦ－２阳性率分别为１００％（３２／３２例）和９４．６％（３５／３７例），而ＨＢｘＡｇ阴性组分别为８２．１％（２３／２８例）和６０％（６／１０例）。ＩＧＦ－２在肝癌中的阳性强度明显高于癌旁肝和肝硬变。ＩＧＦ－２的分布形态有：（１）胞浆包涵体样、（２）全胞浆、（３）核     

卵巢癌和子宫内膜癌患者血清TGF-α和IGF-Ⅱ的水平

转化生长因子 α(ＴＧＦ α)和胰岛素样生长因子 Ⅱ(ＩＧＦ Ⅱ)是与正常生理、细胞增殖和肿瘤密切相关的细胞因子 ,作者检测了卵巢癌和子宫内膜癌患者以观察其临床意义。1　材料和方法正常对照组 2 8例、子宫肌瘤组 31例、恶性肿瘤组 36例(卵巢癌 2 1例、子宫内膜癌 15例 )。方法 :空腹取血 3ｍＬ ,血清置 - 2 0℃保存。ＴＧＦ α和ＩＧＦ Ⅱ测定用ＲＩＡ法 ,试剂购自北京东亚免疫技术研究所。结果以 ｘ±ｓ表示 ,均值差异显著性比较采用ｔ检验。阳性判断标准 :大于 ｘ±ｓ为阳性。ＴＧＦ α和ＩＧＦ Ⅱ灵敏度 =真阳性 癌患者总数 ,特异…     

检测Ieptin、IGF—I、IGF—BP3、E2、T在肥胖儿发育中的临床意义

目的：研讨学龄前肥胖和非肥胖儿童的瘦素与内分泌激素水平。方法：检测（3-6）岁122例单纯性肥胖儿童与61例非肥胖儿童的瘦素（leptin）、胰岛素样生长因子I（IGF—I）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGF—BP3）、雌二醇（E2）、睾酮（T）水平。结果：肥胖儿童的leptin、IGF—I、IGF—BP3、E2水平均显著高于各自非肥胖儿童组（P均〈0．01）。T水平两组间无显著差别（P〉0．05）。结论：学龄前单纯性肥胖儿童存在leptin抵抗和内分泌代谢紊乱，检测lepfin、IGF—I、IGF—BP3、E2、T对单纯性肥胖症的早期干预有着重要的临床意义。     

甲状腺乳头状癌雌激素受体α36的表达及其临床意义

目的:测定雌激素受体α36(ERα36)在甲状腺乳头状癌(PTC)原发灶中的表达,探讨其临床意义.方法:免疫组织化学显色检测ERα36和ERα66在PTC组织中的表达.结果:PTC组织中,ERα36和ERα66均特异性表达于肿瘤细胞,ERα36表达水平高于ERα66(67.6％vs 20.6％);45岁以上患者ERα36阳性率高于45岁以下患者(95.2％ vs 55.3％).PTC组织中ERα36和ERα66的表达与性别、淋巴结转移情况无关.结论:ERα36与PTC密切相关,较ERα66更有可能在PTC发生与发展中发挥重要作用.     

抗胰岛素样生长因子I型受体单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备和鉴定抗胰岛紊样生长因子I型受体(IGF-IR)单克隆抗体(mAb),为深入研究肿瘤细胞中IGF-IR 功能及致病机制奠定基础.方法:用脂质体法将制备的重组慢病毒载体三质粒pWPXL-IGF-IR、PMD2G、PAX2共转染包装细胞293T,将上清病毒转染目的细胞NIH-3T3,通过Western blot检...     

IGF—Ⅱ和TGF—α变化对肝癌与肝硬化的诊断价值

目的:研究IGF-Ⅱ和TGF-α变化对肝癌与肝硬化的诊断价值。方法:采用放射免疫分析法检测了42例肝癌病人、31例肝硬化病人和40例正常人血清中IGF-Ⅱ和TGF-α的水平,并与AFP进行了比较分析。结果:对照组IGF-Ⅱ和TGF-α分别为0.47±0.1lμg/L和12.89±3.68ng/L;肝硬化组分别为1.20±0.96μg/L和12.30±3.40ng/L,IGF-Ⅱ显著高于对照组p<0.01;肝癌组为1.98±1.35μg/L和18.85±9.61ng/L两项均显著高于对照组和肝硬化组p<0.01。结论:IGF-Ⅱ和TGF-α能配合甲胎蛋白(AFP)检测肝癌,三项指标联合检测可以提高肝癌和肝硬化的确诊率。     

下调ERα36提高他莫昔芬对卵巢癌细胞作用的敏感性

目的探讨新型膜性雌激素受体ERα36在他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗卵巢癌中的作用。方法转染特异性的siRNA,下调卵巢癌细胞SKOV3、HO8910中ERα36的表达;TAM处理肿瘤细胞后,采用CCK-8、流式细胞术及Western blot等方法检测卵巢癌细胞的增殖、凋亡及相关信号通路关键蛋白的表达。结果 siRNA特异性下调ERα36蛋白的表达;CCK-8检测显示,1μmol/L TAM作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度;不同浓度的TAM作用ERα36下调的肿瘤细胞后,与siRNA对照组相比,肿瘤细胞抑制率明显上升(P0.01);下调ERα36表达后,p-Akt蛋白表达显著下降(P0.01),凋亡相关Caspase-3、Bax蛋白表达量显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论利用特异性siRNA下调ERα36的表达后,可以增强TAM对卵巢癌细胞作用的敏感性。     

子宫内膜异位症患者血清中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF1)水平变化的意义

目的探索子宫内膜异位症患者血清IGF1水平变化与子宫内膜异位症发病的关系。方法采用双抗体夹心ABC ELISA法测定36例子宫内膜异位症患者及24例健康妇女IGF1水平。结果(1)子宫内膜异位症组血清IGF1水平为(284.4±86.6)ng/m l,对照组血清IGF1水平为(138.2±74.1)ng/m l。子宫内膜异位症组血清IGF1水平高于对照组血清IGF1水平,两组比较,差异有显着性(P<0.05)。(2)两组妇女分别进行增生期与分泌期血清中IGF1水平比较,正常组妇女增生期与分泌期血清中IGF1水平比较,差异无显著性(P>0.05)。子宫内膜异位症组妇女增生期与分泌期血清中IGF1水平比较,差异无显着性(P>0.05)。结论血清中IGF1水平变化与子宫内膜异位症的发病密切相关。     

反义IGF—I基因转染抗小鼠B16黑色素瘤的研究

利用基因治疗方法中反义ＲＮＡ技术，通过脂质体包裹反义胰岛素生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）基因导入小鼠Ｂ１６黑色素瘤，与对照组相比致瘤性降低，生长缓慢，荷瘤鼠的胸腺重量增大，脾脏的生发中心细胞增殖，白髓和红髓的淋巴细胞扩增的程度很明显，体内反义ＩＧＦ－Ｉ基因治疗与ＬＡＫ细胞治疗联合应用延长荷瘤小鼠的生存期的效果胜过两者单独应用的效果，结果表明：反义ＩＧＦ－Ｉ基因具有一定的抑制小鼠Ｂ１６黑色素生长的作用和     

ERα、ERβ、pS2蛋白在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达及意义

目的研究ERα、ERβ、pS2蛋白在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达及意义。方法选取1997年1月~2004年5月间,青岛大学医学院,青岛市第三人民医院,第八人民医院,收治的子宫肌瘤和平滑肌肉瘤患者128例的石蜡块,用免疫组化法测定ERα、ERβ、pS2表达。结果子宫平滑肌肉瘤中,ERα阳性率(36.1%),子宫肌瘤中ERα阳性率(83.6%),两者比较有显著性差异(P<0.01);其强度亦有显著性差异(P<0.01);平滑肌肉瘤ERβ阳性率(18.0%)子宫肌瘤中ERβ阳性率(59.7%),两者比较有显著性差异(P<0.01);其强度亦有显著性差异(P<0.01)。平滑肌肉瘤pS2阳性率(41.0%)子宫肌瘤pS2率(23.9%),两者比较有显著性差异(P<0.05);pS2在子宫平滑肌肉瘤中的表达强度比在子宫肌瘤中高,两者比较有显著性差异(P<0.05)。随着子宫肉瘤临床分期的增加,ERα、pS2的阳性表达率降低,差异有显著性(P<0.05);ERα、ERβ、pS2在绝经前比在绝经后高,各指标在绝经前后比较都有显著性差异P<0.01。结论ERα、ERβ、pS2与子宫平滑肌肉瘤的发病机制有关,与子宫平滑肌肉瘤的预后有关。     

卵巢癌患者血清IGF-Ⅰ、TGF-α和CA125联检的临床价值

目的：探讨联检血清IGF—Ⅰ、TGF-α、GA125对卵巢癌的临床价值。方法：用免疫放射分析、放射免疫分析、磁微粒子免疫发光法,对35例卵巢癌患者42例各类良性卵巢肿瘤患者、38例正常人血清IGF—Ⅰ、TGF—α,、CA125进行测定,并动态观察了卵巢癌患者术后7d,术后30d血清IGF—Ⅰ、TGF-α、CA125的变化。结果：卵巢癌患者血清中IGF—Ⅰ、TGF-α、CA125均高于正常对照组和良性卵巢肿瘤患者组（P〈0．01）,术后30d与术前及术后7d比较有显著性差异（P〈0．01）,术后30d与正常组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：血清IGF—Ⅰ、TGF-α、CA125联检对卵巢癌的明确诊断和术后观察有积极意义,可作为诊断治疗卵巢癌的可靠指标。     

胰岛素样生长因子1和胰岛素对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的影响1

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素对人α1(Ⅰ)前胶原(COL1A1)基因启动子的调控作用及肿瘤坏死因子α(TNFα)、干扰素γ(IFNγ)、干扰素α(IFNα)对这一作用的影响.方法构建含COL1A1基因启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体pCOLH0.27与pCOLH2.5,它们分别含该启动子序列-268～+42bp(0.27kb)与-2483～+42bp(2.5kb)片段.将这2个重组体瞬时转染人皮肤成纤维细胞,加入IGF-1或胰岛素,部分细胞还加入TNFα或IFNγ或IFNα,测定CAT活性.结果13nmol/LIGF-1使转染后的这2个重组体活性分别增高3.68倍与4.04倍.2.5μmol/L的胰岛素亦使之分别增高3.69倍与3.93倍.TNFα、IFNγ、IFNα能降低IGF-1与胰岛素诱导的pCOLH2.5活性.结论IGF-1和胰岛素能在转录水平促进COL1A1基因的表达,TNF-α、IFNγ、IFNα能抑制IGF-1和胰岛素的这一作用.     

切割穹窿海马伞大鼠海马IGF2及其受体IGF2R蛋白的表达变化

目的:观察穹窿海马伞切割后不同时间点海马胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor,IGF2)及其受体IGF2R蛋白的表达变化及定位。方法:应用ELISA、Western blot和免疫荧光组织化学方法检测海马内IGF2及其受体IGF2R蛋白,以及齿状回门区和颗粒下层中IGF2/Hoechst和IGF2R/Hoechst阳性细胞的数量及形态学变化。结果:(1)ELASA结果显示:IGF2在切割后7 d表达开始上升,14 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常水平。(2)Western blot结果显示:IGF2R也存在一个相应的表达升高与消退的过程,说明两者具有明显的相关性。(3)免疫荧光染色结果显示:正常组海马齿状回门区和颗粒下层IGF2及其受体IGF2R阳性细胞的数量较少,切割穹窿海马伞后第3 d数量稍有增多,但差异不明显;7 d时阳性细胞明显增多;14 d时阳性细胞继续增多,并达到最高水平;21 d后阳性细胞的数量开始下降,28 d时接近正常组水平。结论:切割穹窿海马伞后IGF2及其受体IGF2R的高表达可能与海马神经再生中抑制神经干细胞和放射状胶质细胞增殖,从而启动其向神经元等分化有关。     

IGF—1R在肿瘤治疗中的研究进展

ＧＦ１Ｒ 为跨膜蛋白,其信号转导途径与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。在多种肿瘤细胞已证明,以抗ＩＧＦ１Ｒ 抗体封闭ＩＧＦ１Ｒ,能使ＩＧＦ１Ｒ 不能接受和转导相应配体的信号。他莫茜芬、乙醇、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、苏拉明、除莠霉素Ａ 及生 长激素释放激素的拮抗剂ＭＺ４７１ 可通过不同机制干扰ＩＧＦ１Ｒ介导的信号转导,在肿瘤治疗中有研究前景。以反义ＩＧＦ１ＲＲＮＡ 封闭ＩＧＦ１Ｒ基因及在某些肿瘤进行了以某肿瘤抑制基因抑制ＩＧＦ１Ｒ 表达的肿瘤基因治疗亦在研究中。     

子宫肌瘤组织EGFR受体与IGF-1R的定位及定量分析

目的 :探讨表皮生长因子受体与胰岛素样生长因子受体在子宫肌瘤发病机理中的作用。方法 :应用流式细胞术定量分析法及免疫组化S -P法分析比较 4 0例子宫肌瘤患者子宫肌层和子宫肌瘤组织表皮生长因子受体 (EGFR)和胰岛素样生长因子受体 (IGF - 1R)的含量及表达水平 ,月经周期根据月经史及子宫内膜组织来判断。结果 :子宫肌瘤组织EGFR ,IGF - 1R的表达及含量显著高于同一子宫邻近正常肌层组织 (p <0 0 5 ,p <0 0 1 ) ;子宫肌瘤组织与其邻近肌层组织相比较 ,EGFR的含量及表达在分泌期无显著性差异 (p >0 0 5 ) ,而在增生期含量明显增高 (p <0 0 5 ) ;而IGF - 1R的表达与月经周期无关。 结论 :EGFR ,IGF - 1R在子宫肌瘤组织中高表达与其发生、发展有关     

FAP-α和VEGF在卵巢癌中的表达及意义

目的:检测卵巢癌组织中纤维母细胞活化蛋白-α(fibroblast activation proteinα,FAP-α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况,探讨其与卵巢癌侵袭和转移的关系.方法:应用免疫组织化学法检测80例卵巢癌组织和30例正常...     

胃癌中IGFBP-4蛋白的表达及临床意义

目的 探讨IGFBP-4(insulin-like growth-factor-binding proteins-4)蛋白在胃癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化SP法分别检测正常胃黏膜、胃上皮内瘤变和胃癌组织中IGFBP-4蛋白的表达.结果 20例正常胃黏膜组织中IGFBP-4蛋白阳性率为10%,胃上皮内瘤变组织中的阳性率为36.84%,胃癌组织中的阳性率为81.25%;胃癌组织中IGFBP-4蛋白表达高于胃上皮内瘤变及正常胃黏膜组织(P<0.001),胃上皮内瘤变与正常胃黏膜的差异有显著性(P<0.05);高分化胃癌中IGFBP-4蛋白阳性率为57.14%,低分化胃癌中的阳性率为88.4%,两者之间差异有显著性(P<0.05);早期胃癌阳性率为55.0%,明显低于进展期胃癌86.96%;伴淋巴结转移组阳性率为89.04%,无淋巴结转移组阳性率为66.67%,差异有显著性;而与性别、年龄、肿瘤直径无关.结论 IGFBP-4蛋白的高表达与胃癌的发生、淋巴结转移及临床分期相关.