KIR2DL5基因研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer-cell immunoglobulin-like receptors,KIPs)是由一组位于19q13.4的紧密成簇的基因编码的免疫球蛋白超家族受体,蛋白结构具有多样性。KIR2DL5由于其独特的基因转录表达特征、单倍体分布、群体分布和表达的多样性,以及D0-D2免疫球蛋白样胞外段结构域和较长的胞内段结构特征而有别于其他KIR,在KIR研究中尤为重要。本文拟对这一基因的研究进展作一综述。     

反复流产、胚胎停育与内分泌激素水平相关性分析

目的探讨反复性早期自然流产（ERSA）、胚胎停育与内分泌激素水平之间的关系。方法对就诊于我院遗传优生门诊的89例有反复性早期流产、胚胎停育史患者常规进行卵泡期内分泌激素水平测定（性激素6项）,异常者给予相应治疗后再次妊娠,监测胚胎发育情况（血清孕酮及绒毛膜促性腺激素水平、B超观察）。结果89例患者中内分泌水平异常者73例（82.2%）,内分泌水平正常者16例（17.8%）。其中最常见的3种内分泌激素异常形式依次是：单纯泌乳素高（25例,占36.0%）;泌乳素高合并雌激素低（19例,占26.0%）;单纯雌激素低（13例,占17.8%）。内分泌异常的73例患者经内分泌治疗后再次妊娠后,胚胎发育良好者71例,占97.3%。结论反复性早期流产、胚胎停育与内分泌激素水平异常有十分密切的关系,特别是与泌乳素高和或雌激素低有很大关系,合适的内分泌激素水平对保证胚胎发育和妊娠的维持具有重要的作用。     

胚胎停育相关因素研究

目的 探讨胚胎停育的原因。方法 对115例有胚胎停史患者询问病史（询问有无有害物质接触史、家族史）进行妇检、盆腔B超、感染因素的检查（支原体、衣原体、弓形虫、风疹、巨细胞病毒（、游离T3、T4、空腹血糖、患者丈夫进行精液常规检查，患者夫妇同时检查染色体核型、ABO血型及血清IgG抗体滴度水平检测。结果在病因明确的胚胎停育中感染因素中支原体、衣原体感染占首位（22．61％），其次是染色体异常（10．43％）、ABO血型不合（6．96％）、其他因素（8．70％），不明原因占50．43％。结论 对胚胎停育夫妇应进行系列检查，尽可能确定病因学诊断，以免漏诊，同时也有利于早期针对部分病因．进行处理，减少自然流产的发生率。     

KIR2DL4基因的多态性与南方汉族白血病的相关性研究CSCD

目的探讨南方汉族人群白血病与KIR2DL4等位基因多态性的相关性。方法提取南方汉族急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）（n=283）、急性髓系白血病（acutemyeloid[eukemia,AML）（n=227）、慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia,CMI。）（n=80）患者和306名南方汉族随机正常志愿捐血者的DNA基因组,应用本实验室自行设计的引物对KIR2DL4基因的全部8个外显子进行测序分型,用Assign4．7分析软件判定基因型。用SPSS13．0统计软件分别对检出的每个KIR2DIA等位基因、10A型等位基因和9A型等位基因的检出比例分别进行差异显著性分析,并进行P值校准（Pc）。结果ALL、AML、CMI,患者和正常对照均检出5种等位基因：KIR2DIA＊001、＊005、＊006、＊008、＊011。ALL病例组与对照组的KIR2DI．4＊011等位基因检出比例、10A型KIR2DL4等位基因检出比例的差异有统计学意义（KIR2DL4＊011：OR=1．66,P=0．01;10A型K琥2DIA：OR=0．42,P=0．03）,但尸值经过校准后,差异均无统计学意义（Pc≥O．05）。AML、CML病例组分别与对照组检出的各个KIR2DL4等位基因、10A型等位基因和9A型等位基因的检出比例进行比较,组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05、Pc〉0．05）。结论南方汉族ALL、AML、CML白血病与KIR2DL4等位基因多态性无显著关联。     

KIR2DL4-IgFc融合蛋白基因真核细胞表达载体的克隆及鉴定分析

目的：构建人KIR2DL4－IgFc段融合蛋白基因真核细胞表达载体。方法：用RT－PCR从孕妇蜕膜组织单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增KIR2DL4细胞外段cDNA，经Nhe I和BamH I双酶切后，定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中，然后经酶切和测序鉴定。结果：限制性内切酶切酶 切和序列分析表面已成功构建CD5lnegl-KIR2DL4载体，结论：本研究成功构建KIR2DL4－IgFc融合蛋白真核细胞表达载体，为研究KIR2DL4与其配体之间的关系奠定了基础。     

KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析

目的 克隆KIR2DL4 cDNA，并使其在NK-92细胞上获得稳定表达，分析KIR2DL4分子对NK-92细胞功能的调节作用。方法 采用RT-PCR方法，从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4 cDNA，将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4-pLNCX表达载体，将重组质粒转入NK-92细胞，利用单克隆抗体#33进行FACS检测，观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达。ELISA检测KIR2DL4对IFN-γ分泌的影响，同时根据LDH的释放实验，分析KIR2DL4分子对NK-92细胞毒功能的调节。结果：KIR2DL4分子在经KIR2DL4-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达，且不影响其他受体在：NK-92细胞上的表达水平。KIR2DL4分子能够部分限制：NK-92细胞对HLA-G阳性靶细胞的杀伤作用，交联KIR2DL4分子能够诱导IFN-γ的分泌。结论 成功构建了KIR2DL4-pLNCX逆转录病毒表达载体，并使KIR2DL4分子在NK-92细胞上获得功能性的高表达。     

邯郸地区1160对胚胎停育夫妇的异常染色体研究

目的 研究夫妇双方异常染色体与胚胎停育间的联系。方法 对本地区1160对胚胎停育夫妇的染色体探索研究。结果 检出187例染色体异常核型,检出率8.06%,包括36例结构异常,占19.25%;3例数目异常,占1.60%;4例倒位,占2.14%;144例染色体多态性,占77.01%。其中男性染色体异常检出率（62.57%）明显高于女性（37.43%）。结论 染色体异常是胚胎停育不可忽视的因素之一,对胚胎停育夫妇应重视其染色体检查,以便提供孕前遗传咨询和指导。     

105例胚胎停育绒毛细胞遗传学分析

目的探寻胚胎停育与绒毛细胞染色体异常的关系。方法收集2012年2014年2月佳木斯医学院105例胚胎停育患者,对其绒毛细胞进行培养和染色体核型分析。结果 105例胚胎停育患者,绒毛细胞培养失败6例,检出异常核型43例,染色体数目异常39例,染色体结构异常4例。结论胚胎绒毛细胞染色体异常是导致胚胎停育的重要原因。     

Caspase-3、survivin与胚胎停育的关系研究

目的 观察胚胎停育妇女绒毛织组中caspase-3和survivin的表达,探讨过度凋亡与胚胎停育的关系。方法 选取2018年5月1日~12月31日在天津市第一中心医院妇科计划生育门诊确诊胚胎停育患者30例作为观察组,另选取同期在我院计划生育门诊正常妊娠要求人工流产的患者30例作为对照组,采用SP法检测两组患者绒毛组织中caspase-3和survivin的表达。结果 对照组光镜下见绒毛组织大小一致,绒毛间可见正常结构的间充质细胞。观察组光镜下见绒毛组织发生不同程度的退行性改变,间充质变性,结构模糊,同时伴炎性反应;观察组绒毛组织细胞及对照组绒毛组织细胞皆有caspase-3蛋白的表达,观察组绒毛组织caspase-3表达量高于对照组,观察组阳性率为96.66%,高于对照组的86.66%,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组绒毛组织细胞及对照组绒毛组织细胞皆有survivin蛋白的表达,观察组绒毛组织survivin表达量低于对照组,观察组阳性率为73.33%,低于对照组的96.66%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胚胎停育可能与绒毛组织中caspase-3高表达、survivin低表达导致的细胞凋亡过度有关。     

人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达

目的：获得人KIR2DL1分子(killer lg—like receptor 2DL1)胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白。方法：从人外周血单个核细胞中提取总RNA，通过RT—PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA，经Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后，定向插入真核细胞表达载体CD51negl中。构建的重组真核表达载体CD51negl—KIR2DL1。经酶切分析和测序鉴定后，通过DEAE—dextran／ehloroquine法转染COS—7细胞：瞬时表达后，取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS—PAGE及Western印迹，鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性。结果：序列测定证实，该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列。重组真核表达载体CD5lnegl—KIR2DL1转染COS—7细胞后，ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达。SDS—PAGE结果显示，该融合蛋白的相对分子质量(Mc)约为73000。Western印迹结果证实，该蛋白能被特异性单克隆抗体(mAb)EB6所识别。结论：KIR2DL1—Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS—7细胞中获得功能性表达，为KIR2DL1的功能及其配体MHC的研究奠定了基础。     

超声诊断早期胚胎停育

目的探讨彩色多普勒超声在早期胚胎停育中的诊断价值。方法应用经腹及经阴道彩色多谱勒超声对首次超声确诊及可疑胚胎停育二次超声确诊病例的超声表现进行分析总结。结果超声一次确诊者60例（80％）,二次确诊者15例（20％）,其中枯萎孕卵33例（45％）,均未见卵黄囊显示;胚胎死亡21例（28%）,其中卵黄囊枯萎17例（23%）,增大4例（5．3％）。结论经腹及经阴道彩色多普勒超声能对胚胎停育及早、快速、准确地进行明确诊断,能早期发现宫内胚胎发育异常,可指导临床及时处理,具有重要的临床应用价值。     

浙江汉族人群 KIR3DL2等位基因的分布

目的:分析浙江汉族人群 KIR3DL2等位基因分布。 方法:基因组DNA提取采用磁珠法。应用PCR技术通过4对引物扩增 KIR3DL2基因的全长序列,利用BigDye terminator v3.1测序试剂盒对208名无血缘关系的汉族无偿献血者的全部外显子序列进行测序分析。根据 ...     

NK细胞受体KIR2DL4的结构与功能

KIR2DL4分子是NK细胞受体(NKR)的一种,属于免疫球蛋白样(IgSF)受体家族成员,主要分布在自然杀伤(Natural killer,NK)细胞上。KIR2DL4是HLA-G分子的特异性受体,结构上具备激活性和抑制性受体的双重特点,能够通过不同途径影响NK细胞的活性,具有重要的免疫调节功能。     

厦门地区81例胚胎停育患者绒毛组织细胞遗传学分析

目的分析胚胎停育与绒毛组织细胞染色体异常的关系,为临床诊治提供可靠的依据。方法对81例胚胎停育患者无菌条件下取绒毛组织进行细胞培养及染色体核型分析。结果 81例胚胎停育绒毛组织中培养成功77例,失败4例。其中,检出染色体核型异常18例,检出率为23.38%。结论胚胎绒毛染色体异常是引起胚胎停育的重要因素,故绒毛组织细胞遗传学分析对查明流产原因,合理指导下次妊娠有重要意义。     

上海地区汉族人群KIR2DL5基因多态性及单元型分析

KIR2DL5基因是杀伤细胞免疫球蛋白样受体 (KIR )单元型B的特征性标志 ,至少有 4个变异体 ,其中 2DL5A 0 0 1和2DL5B 0 0 3是表达型 ,统称为KIR2DL5 1;2DL5B 0 0 2和 2DL5B 0 0 4是不表达型 ,统称为KIR2DL5 2。本文用序列特异性引物PCR法 (PCR SSP )分析了KIR2DL5表达型KIR2DL5 1和不表达型KIR2DL5 2在上海地区正常汉族人群的分布及其在KIR单元型的组成。结果发现 (1)在 87名健康汉族人和 14个家族中表达型KIR2DL5 1和不表达型KIR2DL5 2基因频率分别为0 1977和 0 0 4 11;(2 )KIR2DL5基因变异体在不同单元型中分布不同 ,有 5种不同组合 ,其中单元型 1、 2、 3、 4、 11、 12、15和 16不含KIR2DL5及其变异体 ;单元型 5和 14只含有KIR2DL5 1;单元型 13和 17只含有KIR2DL5 2 ;单元型 6含有单一KIR2DL5 1或二者兼有 ;单元型 8和 9同时含有KIR2DL5 1和KIR2DL5 2。     

佳木斯地区125例胚胎停育患者绒毛细胞染色体分析

目的探讨胚胎停育与绒毛细胞染色体异常的关系。方法收集佳木斯地区125例胚胎停育患者的绒毛细胞,通过对绒毛细胞染色体的培养和制备,对其染色体进行观察和分析。结果 125例胚胎停育患者,绒毛细胞培养失败7例,检出异常核型49例,染色体数目异常47例,染色体结构异常2例。结论胚胎染色体异常是胚胎停育的重要原因。     

26对胚胎停育患者的染色体分析

胚胎停育的病因多种多样，与染色体异常、免疫因素、解剖因素等都有关系。染色体异常是引起胚胎停育的常见病因。在早期妊娠自然流产中，约70％与胎儿染色体异常有关，其中核型异常的发生率高达50％-60％，这是自然淘汰的过程，但发生反复流产的夫妇中染色体异常率却比一般人群高10倍左右。我们收集26对夫妇双方外周血淋巴细胞染色体进行了分析，报告如下：     

KIR3DL1基因启动子亚克隆及表达调控载体的构建

为研究KIR3DL1基因的表达调控机制,亚克隆KIR3DL1基因的核心启动子序列,并构建KIR3DL1基因启动子-荧光素酶报告载体,采用PCR法从含有KIR3DL1基因转录起始位点5'侧翼区的质粒中扩增KIR3DL1基因核心启动子序列,产物纯化回收后与pGEM-T easy载体连接,测序鉴定正确的重组子经限制性内切酶BglⅡ和NcoⅠ双酶切后,插入同样经BglⅡ和NcoⅠ双酶切的用于基因表达调控研究的pGL3-Basic报告载体,最终获得了长度为254bp的KIR3DL1基因启动子克隆,构建了调控荧光素酶报告基因的真核表达载体.通过酶切及基因测序的方法证实所构建的重组子是正确的,说明KIR3DL1基因启动子表达调控载体的构建是成功的.     

HLA-Gα1结构域Met76和Gln79在KIR2DL4特异性识别中的作用研究

目的 探讨HLA-G α1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用.方法 采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgGFc段的可溶性融合蛋白;利用“桥式”PCR和“点突变”方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met76和Gln79的密码子突变为Ala76,79（HLA-mG）,通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAⅠ分子阴性的K562细胞上表达.流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Met76、Gln79残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用.结果 Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白.FACS结果表明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体在K562细胞上高表达.Met76、Gln79突变为Ala76,79后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别.结论 HLA-Gα1结构域中Met76和Gln79可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点.     

复发性自然流产与胚胎停育患者染色体异常状况分析

目的:分析复发性自然流产与胚胎停育患者染色体异常状况。方法:收集2018年6月至2019年10月本院收治的300例复发性自然流产或胚胎停育患者临床资料,采用树脂及蛋白酶K提取患者绒毛或者胎儿组织标本的基因组DNA,并采用多重连接依赖式探针扩增技术(Multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)检测患者染色体非整倍体异常。结果:300例标本中,染色体非整倍体异常158份(52.67%);三体及部分单体共133份,占所有染色体异常的84.18%。其中异常比例前五位分别为:16三体36份(12.00%);X0单体17份(5.67%);22三体12份(4.00%);13三体9份(3.00%);21三体8份(2.67%)。性染色体中,三体4份(1.33%);部分三体共11份(3.67%),其中17染色体最多;部分单体共9份(3.00%),以8及12染色体最多;同源染色体不平衡易位共2份(0.67%),其中以(8p-,8q+)易位最常见(2份);非同源染色体不平衡易位3份(1.00%)。结论:采用MLPA法检测复发性自然流产与胚胎停育患者染色体状况,具有高效、快捷等优点,染色体非整倍异常是导致复发性自然流产与胚胎停育的主要因素,其中16号染色体最为常见。