Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌移植瘤生长的作用

目的:检测Survivin反义寡核苷酸(ASODN)在人肝癌耐药细胞株裸鼠皮下移植瘤中的表达情况．方法:将30只裸鼠建立人肝癌耐药细胞系 SMMC-7721／ADM皮下移植瘤模型,随机分成6组:空白对照组(A)、脂质体转染对照组 (B)、正义链对照组(C)、200(D)、400(E)和 600 μg/L(F)反义链组(ASODN组),用不同的转染液注射后2,4,8,12,16,20 d,用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印迹法检测治疗后各组肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白表达的变化．结果:注射后20 d,ASODN组肿瘤细胞生长明显抑制,空白对照组、脂质体转染对照组和正义链对照组裸鼠的mRNA和蛋白表达无明显差异,而ASODN组mRNA和蛋白表达随着时间和浓度的增加,Survivin表达减弱,E,F组与其余个组(A,B,C,D)相比有显著差异(mRNA: 0．33±0．04,0．28±0．03 vs 0．82±0．02,0．78± 0．05,0．72±0．04,0．57±0．03,P<0．05;蛋白: 34．9±3．89,21．2±3．65 vs 72．14±6．53,69．31 ±5.34,68．29±4．98,53．8±5．23,P<0．05)．结论:Survivin反义寡核苷酸能够下调 Survivin mRNA和蛋白的表达,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长．     

低分子肝素对人肝癌裸鼠模型中COX-2表达影响的研究

目的研究低分子肝素对人肝癌裸鼠模型（LCI—D20）中环氧合酶-2（COX-2）表达的影响。方法采用人肝癌组织移植制作人肝癌裸鼠模型36只并随机分为对照组、化疗组、肝素组和联合组各9只，造模第1天：对照组腹腔注射生理盐水；化疗组腹腔注射5-氟脲嘧啶（5-Fu）＋顺铂（DDP）；肝素组皮下注射低分子肝素；联合组腹腔注射5-Fu＋DDP、皮下注射法安明，1次／d，均共用5周。观察各组原位肿瘤体积、抑瘤率、肿瘤微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）、COX-2及血清AFP水平。结果化疗组、肝素组和联合组裸鼠原位肝癌体积明显小于对照组；化疗组与对照组相比MVD差异无显著意义，而肝素组与联合组的MVD、COX-2及VEGF阳性率、血清AFP均明显低于化疗组和对照组（P〈0．05）；肝素组和联合组抑瘤率低于化疗组，但差异无统计学意义。结论低分子肝素对人肝癌裸鼠模型中肿瘤血管形成具有抑制作用，该作用与抑。制COX-2表达有关。     

PGE2对胃癌MKN28细胞VEGF表达的影响

目的:观察前列腺素E2(PGE2)对胃癌MKN28细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA转录、蛋白表达水平的影响．方法:对胃癌MKN28细胞分别给予0．1,1,5, 10μmol／L浓度的PGE2处理3 h,分别以实时PCR,Western blot检测VEGF mRNA转录水平及VEGF蛋白表达水平的变化．结果:胃癌MKN28细胞经用不同浓度的PGE2作用3 h,VEGF mRNA表达呈剂量依赖性增加,其表达在PGE2浓度为0．1,1,5,10μmol／L时与对照组之间的差异均有统计学意义(0．67±0．093,0．74±0．13,0．87±0．07,1．49±0．15 vs 0．42±0．10．P<0．05或P<0．01)．VEGF蛋白表达量与PGE2浓度存在正相关,其表达在PGE2浓度为1,5,10μmol／L组与对照组之间的差异均有统计学意义(51．02±2．16,66．69±9．85,136．49±6．89 vs 26．87±3．98,P<0．05或P<0．01)．结论:外源性PGE2可显著增加胃癌MKN28细胞VEGF的表达．     

D-双功能蛋白在大鼠和裸鼠肝细胞癌生长中的作用

目的探讨肝细胞癌大鼠模型肝癌组织中D-双功能蛋白(DBP)的表达及DBP诱导裸鼠肿瘤生长情况。方法 22只雄性SD大鼠随机分为2组,正常对照组大鼠8只,腹腔注射2-乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型组大鼠14只,蛋白免疫印迹、免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测DBP表达。14只雄性SPF级BALB/c-nu小鼠,随机分为2组,用空质粒和DBP过表达质粒分别转染HepG2细胞,将2组细胞分别注射于裸鼠皮下,空质粒对照组8只,DBP高表达组6只,检测2组裸鼠成瘤的大小。计量资料2组间比较采用t检验。结果肝细胞癌模型组大鼠肝癌组织中DBP的蛋白表达高于正常大鼠肝脏,差异具有统计学意义(1. 10±0. 35vs 0. 67±0. 12,t=-7. 48,P 0. 05); mRNA表达也高于正常大鼠肝脏,差异具有统计学意义(3. 70±0. 85 vs 1. 17±0. 72,t=-20. 46,P 0. 05)。DBP过表达组的裸鼠肿瘤体积显著大于空质粒组,差异具有统计学差异[(7590. 50±1867. 97) mm~3vs (1663. 78±420. 24)mm3,t=-39. 78,P 0. 01]。结论高表达的DBP在大鼠肝癌的发展进程中发挥了促进作用,并且为肝癌的治疗和抑制药物的研发提供新的靶点。     

VEGF反义寡核苷酸对淋巴瘤新生血管生成的抑制作用

目的研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠淋巴瘤血管生成的作用。方法将终浓度为20μmol/L的VEGFASODN、错义序列及PBS分别与人淋巴瘤细胞系Namal-wa细胞孵育24h,裸鼠随机分为VEGFASODN组、错义序列组和对照组,将上述处理的Namalwa细胞(5×106溶于PBS液20μl)接种于裸鼠皮下,4周后处死全部裸鼠,测定肿瘤大小,标本采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果第28天VEGFASODN组、错义序列组和PBS组肿瘤体积的大小分别为(212.6±196.5)、(468.2±161.3)和(473.1±166.7)mm3。VEGFASODN组微血管密度(12.26±0.78)较对照组(24.13±1.21)显著减少。结论VEGFASODN对裸鼠淋巴瘤的生长及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的：探讨survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用．方法：构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,采用瘤内注射方式,每只注射survivin反义寡核苷酸(ASODN)40g/200L,对裸鼠进行干预治疗．观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体质量、病理形态：应用RT-PCR检测肿瘤的survivin mRNA变化：应用caspase-3试剂盒检测caspase-3活性：免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数(PI)和微血管密度(MVD)．结果：治疗20d后,survivin ASODN治疗组的平均体积(427．34±12．44mm~3)明显小于对照组(703．56±12．51mm~3)和正义组(687．59±12．44mm~3)(P＜0．01)；治疗组瘤重(0．57±0．06g)也显著低于对照组(1．16±0．12g)和正义组(1．07±0．10g)(P＜0．01),抑瘤率为50．86％．survivin ASODN治疗组survivin mRNA与对照组和正义组相比降低了约50％：survivin ASODN治疗组肿瘤的caspase-3相对活性明显高于对照组和正义组(0．040±0．018 vs 0．006±0．001,0．007±0．002,P＜0．01)：survivin ASODN治疗组的PI(28．33±2．16)明显低于对照组(35．17±3．71)和正义组(34．33±3．27)(P＜0．01)；sHrvivin ASODN组MVD(15．50±3．08)明显低于对照组(21．33±2．94)和正义组(20．67±2．16)(P＜0．01)；而对照组和正义组PI和MVD均无显著性差异(P＜0．05)．结论：survivin ASODN可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应．     

restin基因转染对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响

目的:探讨restin基因转染对胃癌细胞BGC803裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤血管生成的影响.方法:将重组质粒pEGFP-restin转染BGC-803细胞,以绿色荧光蛋白示踪其对胃癌细胞BGC-803生长的影响:RT-PCR鉴定目的基因的表达:通过裸鼠移植瘤实验比较restin对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,免疫组织化学染色方法观察微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:重组质粒经RT-PCR扩增后在600bp处稳定表达:将pEGFP-restin重质粒转染胃癌细胞BGC-803,荧光显微镜下见转染组细胞发出绿色荧光,肿瘤细胞形态不一;裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)比较,转染组胃癌细胞生长速度缓慢,肿瘤体积小(P＜0.01);空载体组与转染组的抑瘤率分别为3.60%、29.02%:免疫组化显示,转染组肿瘤微血管密度减少(4.25±0.29 vs 9.79±0.94,10.34±1.22,均P＜0.05),转染组VEGF表达降低(12.24 3.45 vs 44.52±9.70,39.76±6.38,均P＜0.05).结论:restin基因转染可抑制裸鼠移植瘤生长,影响肿瘤新生血管形成可能是其抗肿瘤作用之一.     

达肝素钠对早期肝癌的生长抑制作用

目的:研究达肝素钠(法安明)对早期肝癌生长的抑制作用.方法:采用人肝癌裸鼠转移模型(LCI-D20)40只,随机分成4组,即对照组(生理盐水)、化疗组(顺铂 5-氟尿嘧啶)、法安明组、联合组(顺铂、5-氟尿嘧啶与法安明).分别于术后第14天处死观察肿瘤大小、抑瘤率、血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)和肿瘤微血管密度(microvessel density;MVD).结果:化疗组、法安明组、联合组分别与对照组进行对比,其肿瘤明显缩小(26.25±11.55,33.70±14.78,17.25±6.80 mm3 vs 68.47±22.04 mm3,均P<0.05):抑瘤率结果也提示法安明对肿瘤有良好的抑制作用.法安明组和联合治疗组肿瘤组织内微血管及新生血管形成显著低于对照组和化疗组(5.2±1.55,4.7±2.21 vs 19.34±3.57,17.1±3.03,均P<0.05),化疗组、法安明组、联合组的AFP较对照组有明显降低(14.56±8.87,13.36±7.60,11.57±7.82 mg/L vs 22.20±6.29 mg/L,均P<0.05).结论:法安明通过抗肿瘤血管形成,对早期肝癌的生长有抑制作用.     

姜黄素对缺氧条件下HepG2细胞VEGF表达的影响

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:姜黄素(0、1、2、5、10.mol/L)处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,采用四唑盐(MTT)法观察HepG2细胞活性的变化,Western blot观察VEGF的蛋白水平变化,RT-PCR检测VEGF mRNA表达水平变化.结果:HqaG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,VEGF蛋白和mRNA水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(蛋白:2.12±0.23,1.59±0.13,0.82±0.11,0.33±0.05 vs 2.85±0.37,P<0.05或P<0.01:mRNA:0.60±0.05,0.54±0.04,0.16±0.02,0.06±0.01 vs 0.81±0.07,均P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.结论:姜黄素可抑制HepG2细胞中VEGF的基因表达.     

SOM230促进HepG2细胞原位移植瘤坏死的机制

目的 观察一种新合成的生长抑素类似物SOM230对肝癌细胞株HepG2体外、体内生长的影响,探索非细胞毒性药物导致肝癌坏死的可能机制. 方法 采用四甲基偶氮唑盐法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞技术检测SOM230对体外培养的肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用.用肝癌细胞株HepG2建立裸鼠肝癌原位移植瘤模型,分为SOM230组(100 μg·kg~1·d~(-1)皮下注射)及对照组(等量等渗盐水皮下注射),连续用药8周,测定移植瘤坏死体积.Western blot测定肿瘤组织中生长抑素受体2(SSTR2)的表达水平;免疫组织化学显示肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、SsTR2的表达部位;酶联免疫吸附法检测移植瘤组织中肿瘤坏死因子α(TNF α)含量.两组间均数比较采用t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析. 结果 SOM230在体外对HepG2细胞增殖有一定的抑制作用,IC_(50)为2.73×10~6mol/L,对其凋亡无明显影响(TUNEL实验F=0.16,P>0.05;Annexin-V实验F=0.13,P>0.05).SOM230组的移植瘤坏死体积为73.4%±7.0%,明显高于对照组的30.2%±14.0%(t=-8.02,P<0.01).两组移植瘤的血窦中均有SSTR2阳性染色,表达水平差异无统计学意义;s0M230组肝癌移植瘤组织中的VEGF表达为阴性,但移植瘤内TNF α水平在两组的差异无统计学意义[SOM230组与对照组,(10.3±8.0)ng/ml与(9.2±5.8)ng/ml,t=-0.24,P>0.05)].结论 SOM230通过SSTR2介导,显著下调肝癌组织VEGF的表达水平,仅阻断生长旺盛肿瘤的血供,导致肝癌移植瘤明显坏死.     

重组人生长激素对荷人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及VEGF表达的影响

目的:探讨重组人生长激素frhGH)对荷人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤生长及VEGF表达的影响.方法:免疫细胞化学染色法鉴定SGC-7901细胞株GHR表达状态,30只接种皮下移植瘤的裸鼠随机分为:对照组(生理盐水0.2 mL/d).低剂量rhGH组[0.5 U/(kg·d)],高剂量rhGH组[2.5 U/(kg·d)],连续给药14 d,观察并记录裸鼠体质量和肿瘤体积,酶联免疫吸附法测定血清VEGF含量,免疫组织化学法检测胃癌组织中VEGF蛋白表达,RT-PCR检测VEGFmRNA表达.结果:SGC-7901细胞株GHR呈强阳性表达.自rhGH给药第3天起,rhGH给药组与对照组肿瘤体积相差悬殊(P＜0.05),且高剂量rhGHVg低剂量rhGH促肿瘤生长效应更加明显(P＜0.05),3组间裸鼠体质量差别不明显(P＞0.05).裸鼠血清VEGF含量,与对照组和低剂量rhGH组相比,高剂量rhGH组血清中VEGF水平明显升高,差别具有统计学意义(252.94 ng/L±15.32ng/L VS 49.94 ng/L4±5.73 ng/L,167.60 ng/L±9.54 ng/L.均P＜0.05).肿瘤组织VEGF蛋白的表达,对照组VEGF表达呈中度阳性;低剂量rhGH组和高剂量rhGH组VEGF表达量高,呈强阳性.肿瘤组织VEGF mRNA表达水平,高剂量rhGH组VEGF相对表达量明显高于对照组和低剂量rhGH组,差别具有统计学意义(0.647±0.0447 vs 0.3234±.0258,0.412±0.035 1.均P＜0.05).结论:rhGH能促进GHR阳性表达的SGC-7901移植瘤生长,并促进VEGF表达.     

姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

背景姜黄素对包括肝癌在内的多种肿瘤的发生发展表现出较好的抑制作用,但其抗肝癌的作用机制尚不完全清晰.有研究发现,姜黄素可通过调控miR-133a表达抑制胃癌细胞增殖和转移; miR-133a在肝癌中低表达的结果已有数据证实,但姜黄素是否介导miR-133a表达发挥抗肝癌的作用并不清楚.目的探讨姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响.方法以姜黄素(0、10、20μmol/L)处理肝癌SMMC-7721细胞48 h后, MTT法检测细胞活力, Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭; RT-PCR检测细胞中miR-133a表达.采用RT-PCR检测正常肝LO2细胞和肝癌SMMC-7721细胞中miR-133a表达;将miR-133a模拟物转染至SMMC-7721细胞后, Transwell小室检测miR-133a对姜黄素作用前后细胞迁移和侵袭的影响.结果姜黄素能够有效抑制SMMC-7721细胞活力(10μmol/L姜黄素存活率:0.71±0.07 vs 1.02±0.09; 20μmol/L姜黄素存活率:0.45±0.05 vs 1.02±0.09)、迁移(52.32±5.48 vs121.43±12.35)和侵袭(46.33±5.38 vs109.25±10.75),上调miR-133a表达(10μmol/L姜黄素:1.62±0.11 vs 1.00±0.09; 20μmol/L姜黄素:2.96±0.25vs1.00±0.09);与LO2细胞相比,SMCC-7721细胞中miR-133a的表达水平明显降低(0.32±0.03 vs1.03±0.08);上调miR-133a表达后,SMCC-7721细胞的迁移(32.84±3.95 vs 96.35±9.08)和侵袭(42.75±5.06vs119.32±11.71)能力均明显减弱,同时姜黄素对SMCC-7721细胞迁移(29.6±3.32 vs134.62±13.41)和侵袭(31.86±4.05 vs 129.73±12.74)的抑制作用增强.结论姜黄素可通过上调miR-133a表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭.     

VEGF促进肝癌SMMC-7721细胞侵袭性的自分泌机制

目的:探讨促血管内皮生长因子(VEGF)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭力以及对该细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,初步研究VEGF对肿瘤侵袭和转移的影响及可能的作用机制.方法:使用VEGF体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,通过细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,再分别使用30μg/L、10μg/LVEGF培养人肝癌SMMC-7721细胞,以正常培养人肝癌SMMC-7721细胞为空白对照组.使用半定量RT-PCR和Western blot法对3组细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果:细胞体外侵袭实验显示,外加VEGF培养后,细胞侵袭力明显增强(P0.01);MMP-9mRNA和蛋白的表达在外加VEGF组中要明显高于空白对照组(0.479±0.025,0.665±0.024vs 0.315±0.022;0.521±0.026,0.662±0.026vs 0.366±0.025,均P<0.01),且高浓度和低浓度组之间也有明显差别.结论:肝癌SMMC-7721细胞系中存在有自分泌机制,VEGF可通过自分泌机制上调肝癌细胞的MMP-9表达,进而促进肿瘤的浸润转移.     

丹红对大鼠重症急性胰腺炎相关性心肌损害的防治作用

目的: 研究重症急性胰腺炎(SAP)时大鼠心肌损害和心肌组织凋亡基因表达的变化及意义,探讨中药制剂丹红注射液对SAP相关性心肌损害的防治作用.方法: SD大鼠72只随机分为正常对照组(A组,n = 24)、SAP模型对照组(B组, n = 24)和丹红治疗组(C组, n = 24). 采用腹腔注射L-Arg的方法制造SAP模型. 检测血清CTnI、CK-MB含量, 光镜、电镜下观察心肌组织的病理变化,免疫组化法检测术后6、12、18 h各时点心肌bcl-2、bax基因的表达产物.结果: 与A组相比, B组血清CTnI、CK-MB明显升高[CTnI(μg/L): 6 h: 2.18±0.07 vs 0.19±0.02, 12 h: 3.32±0.31 vs 0.21±0.05, 18 h:3.81±0.48 vs 0.20±0.08, 均P<0.05; CK-MB(U/L): 6 h: 3028.8±542.2 vs 178.0±42.2, 12 h:3511.7±1172.2 vs 176.4±39.8, 18 h:4921.2±1822.3 vs 185.2±41.6, 均P<0.05]. 与B组相比, C组血清CTnI、CK-MB也明显降低(均P<0.05). 与A组相比, B组bax表达(PU)产物明显升高(6 h: 4.58±1.07 vs 1.10±0.08, 12 h:8.02±0.31 vs 1.15±0.09, 18 h: 8.81±0.68 vs1.20±0.06, 均P<0.05); bcl-2/ bax比值明显降低(6 h: 0.55±0.11 vs 1.17±0.07, 12 h: 0.33±0.08vs 1.23±0.13, 18 h: 0.43±0.15 vs 0.98±0.19,均P<0.05). 与B组相比, C组bax表达产物明显降低; bcl-2表达产物明显升高(6 h: 3.15±0.92vs 1.25±0.16, 12 h: 4.93±0.52 vs 1.87±0.20,18 h: 4.63±0.82 vs 3.41±0.83, 均P<0.05);bcl-2/ bax比值明显升高(均P<0.05). 光镜、镜下可见SAP大鼠的心肌组织存在明显的变性、坏死等病理变化, C组心肌组织病理损伤明显减轻.结论: SAP可诱发心肌损害, 与心肌组织bcl-2基因表达降低、bax基因表达上调有关. 丹红注射液对SAP合并心脏损害的具有保护作用,其作用机制与下调bax基因在心肌组织中的表达, 上调心肌组织bcl-2基因的表达有关.     

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．     

极低频率电磁场下Fe3O4纳米磁流体对小鼠种植性肝癌杀伤作用研究

目的 探讨在极低频率电磁场(ELF-EMF)下Fe₃O₄纳米磁流体对小鼠种植性肝癌的杀伤作用。方法 建立Bel-7402肝癌细胞裸鼠种植肿瘤模型,然后将荷瘤裸鼠随机分成对照组、磁场组和纳米磁流体组,每组20只。在对照组不行任何处理,在磁场组仅接受磁场作用下处理,在纳米磁流体组,给予裸鼠瘤内直接注射PEG-PEI/Fe₃O₄纳米磁流体0.1 ml,并接受0.7 mT的磁场下干预1 h,2次/d,作用15 d。采用放射免疫法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、白细胞介素 2受体(sIL-2R)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。结果 在处理后7 d和15 d,纳米磁流体处理组裸鼠肿瘤体积分别为(113.5±12.2)mm³和(97.6±9.7)mm³],显著小于对照组 [(204.6±13.5)mm³和(452.8±16.5)mm³或磁场组(146.7±13.4)mm³和(118.8±13.6)mm³,P<0.05];对照组、磁场组和纳米磁流体处理组裸鼠肿瘤质量分别为[(2.0±0.2) g、(1.4±0.1)g和(0.8±0.1) g ,P＜0.05],差异显著,磁场组和纳米磁流体组抑瘤率分别为26.2%和56.9%(P<0.05);纳米磁流体组血清VEGF、HIF-1α、sIL-2R和MMP-2水平分别为[(127.4±14.2)pg/ml、(32.4±5.2)ng/L、(227.5±23.7)ng/L和(132.4±15.7)pg/ml,显著低于对照组[分别为(294.6±18.6)pg/ml、(107.5±12.7)ng/L、(823.6±38.7)ng/L和(453.6±25.4)pg/ml,P<0.05]或者磁场组[分别为(215.7±14.3)pg/ml、(72.4±7.5)ng/L、(426.3±24.4)ng/L和(214.3.±18.4)pg/ml,P<0.05];对照组肿瘤细胞生长旺盛,细胞密度极大,排列紊乱,磁场组细胞生长受限,细胞排列稀疏,纳米磁流体干预组肿瘤组织呈大片坏死,肿瘤细胞显著减少。结论 在ELF-EMF下Fe₃O₄纳米磁流体对裸鼠种植性肝癌细胞血管生成有着显著的抑制作用,可显著抑制肿瘤生长,促进肝癌细胞凋亡。     

基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用

目的:基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用。方法:制备肝癌细胞转移瘤，将裸鼠分为空白组(不制备肝癌裸鼠模型)、模型组(肝癌小鼠模型组)、胡椒碱组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱干预组)、miR-132组(肝癌小鼠模型给予miR-132类似物组)、联合组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱联合miR-132类似物组)。比较各组裸鼠的瘤体积和肿瘤抑制率；比较肿瘤组织病理学变化；用ELISA检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量；比较微血管密度(MVD)数量；用蛋白质印迹法检测肝组织中miR-132、GP73表达。结果:和模型组相比，miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠的瘤体积均显著降低，且联合组瘤体积较胡椒碱组和miR-132组降低更明显(P<0.05)。和模型组相比，miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肿瘤生长抑制率显著增加(P<0.05);联合组裸鼠的肿瘤生长抑制率明显高于miR-132组和胡椒碱组(P<0.05)。模型组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量和空白组相比显著增加(P<0.05);和模型组相比，miR-132组、胡椒碱组和联合组裸...     

南蛇藤乙酸乙酯提取物对肝癌原位荧光动物模型肿瘤VEGF表达影响的研究

目的建立裸鼠原位人荧光蛋白肝癌移植瘤模型,研究不同处理组肿瘤组织VEGF的表达变化,探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对人肝癌生长抑制作用的相关机制。方法BALB／c裸鼠肝脏接种荧光蛋白标记的人肝癌细胞（RFP-HepG2）,建立肝癌动物模型并随机分为空白对照组（G1组）、奥沙利铂阳性对照组（G2组,25mg/kg）、南蛇藤小剂量治疗组（G3组,20mg／kg）、南蛇藤大剂量治疗组（G4组,40mg／kg）和南蛇藤预防治疗组（G5组,20mgNg）。奥沙利铂为尾静脉注射给药,南蛇藤为灌胃给药,G1组用等渗盐水替代,G3组、G4组自RFP．HepG2细胞接种第20天开始每日给药1次,连续4周。G5组自RFP-HepG2细胞接种第2天开始给药至治疗结束。治疗结束后组织标本进行VEGF免疫组织化学染色,采用Image．proplus6．0（IPP）软件分析,用平均光密度评估各图片免疫组织化学染色程度。采用RT-PCR方法检测标本VEGF表达。结果南蛇藤可抑制体内、外肿瘤细胞的生长,G4组、G5组对肿瘤的抑制更明显,与之结果相一致,G2组的VEGF阳性表达率最低,G4组、G5组的vEGF阳性表达率显著低于G3组与G1组（t=4．657、6．440、7．712、8．900,P=0．0037、0．0031、〈0．001、〈0．001）。各实验组肿瘤组织VEGFmRNA水平与免疫组织化学显示VEGF表达呈平行关系。奥沙利铂治疗组的VEGFmRNA水平最低,G4组、G5组的VEGFmRNA水平显著低于G1组、G3组（t=6．320、7．563、12．907、12．545,P=0．0002、0．0003、〈0．001、〈0．001）。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物可抑制裸鼠原位人荧光蛋白肝癌移植瘤模型肿瘤的生长及人肝癌细胞中VEGF表达,提示南蛇藤可能通过抑制人肝癌细胞中VEGF的表达来抗肝癌血管形成,从而抑制肝癌细胞的生长和转移。     

单酰甘油脂肪酶对人肝细胞癌裸鼠移植瘤的影响及其机制

目的探讨单酰甘油脂肪酶(MAGL)在人肝细胞癌(HCC)裸鼠移植瘤生长中的作用和机制。方法移植的SMMC-7721细胞株分为SMMC-7721~(WT)组(未处理)、SMMC-7721~(MAGL-KD)组(MAGL沉默)、SMMC-7721~(MAGL-OE)组(MAGL过表达)和SMMC-7721~(Vector)组(空载体转染) 4组。将27只雄性BALB/c裸鼠分为4组建立裸鼠皮下移植瘤模型,即A组(注射SMMC-7721~(WT)组细胞株,n=12)、B组(注射SMMC-7721~(MAGL-KD)组细胞株,n=5)、C组(注射SMMC-7721~(MAGL-OE)组细胞株,n=5)及D组(注射SMMC-7721~(Vector)组细胞株,n=5),其中A组又分为A1(正常饲喂,n=4)、A2[(高脂饲喂(HFD)+JZL184(MAGL的特异性抑制剂,n=4)和A3 (HFD饲喂,n=4) 3个亚组。观察并比较4组肿瘤体积变化,瘤体内增殖细胞核抗原(PCNA)、金属基质蛋白酶(MMP) 2、血浆溶血性磷脂酸(LPA)和前列腺素E2(PGE2)的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 MMC-7721~(WT)组、SMMC-7721~(MAGL-KD)组、SMMC-7721~(MAGL-OE)组3组间MAGL蛋白相对表达水平比较差异有统计学意义(0. 377±0. 026 vs 0. 182±0. 055 vs 0. 689±0. 019,F=33. 382,P 0. 001),SMMC-7721~(MAGL-KD)组MAGL蛋白表达水平显著低于SMMC-7721~(WT)组(P 0. 05),SMMC-7721~(MAGL-OE)组显著高于SMMC-7721~(WT)组(P 0. 05); A、B、C、D 4组间裸鼠皮下移植瘤大小比较差异有统计学意义[(4236. 125±1284. 283) mm~3vs (1883. 375±552. 977) mm~3vs (10 146. 061±1842.264) mm~3vs (4307. 452±2070. 708) mm~3,F=6. 804,P=0. 023],C组的裸鼠皮下移植瘤的生长速度比A组更快(P 0. 05),而B组比A组慢(P 0. 05); A、B、C 3组间PCNA和MMP2水平比较差异均有统计学意义(PCNA:25 843. 821±4201. 310 vs 17 426. 95±5139. 202 vs 39 753. 103±5721. 444,F=21. 482,P 0. 001; MMP2:52 841. 621±4339. 253 vs 35 511. 451±8251. 423 vs 68 274. 731±6418. 594,F=11. 526,P 0. 001),B组PCNA和MMP2水平均明显低于A组(P值均0. 05),而C组均高于A组(P值均0.05); A1、A2、A3 3组间肿瘤体积比较差异有统计学意义[(23 476. 289±483. 872) mm~3vs (18 593. 851±1385. 805) mm~3vs (37 703.198±2925. 254) mm~3,F=47. 371,P=0. 004],与A1组相比,A3组的裸鼠皮下移植瘤体积增长速度更快(P 0. 05),A2组明显受到抑制(P 0. 05); A1、A2、A3 3组间PGE2水平比较差异有统计学意义[(0. 109±0. 023)μmol/L vs (0. 056±0. 010)μmol/L vs(0. 168±0. 024)μmol/L,F=16. 492,P 0. 001],A3组PGE2水平明显高于A1组(P 0. 05),A2组明显低于A1组(P 0. 05);B、C、D 3组间PGE2水平比较差异有统计学意义[(0. 069±0. 025)μmol/L vs (0. 175±0. 023)μmol/L vs (0. 096±0. 019)μmol/L,F=31. 550,P 0. 001],B组PGE2水平明显低于D组(P 0. 05),C组明显高于D组(P 0. 05)。结论 MAGL可能通过调控PGE2促进裸鼠HCC皮下移植瘤的生长,提示MAGL可能成为未来治疗HCC的潜在靶点。     

20(S)-原人参二醇抑制肝癌血管内皮生长因子及其基因的表达

目的 探讨20（S）-原人参二醇（Ppd）对肝癌血管内皮生长因子（VEGF）及其基因表达的抑制作用。方法 建立肝癌动物模型，将实验动物分为5组：对照组、环磷酰胺组、Ppd25、50、100mg／kg给药组，每组10只，给药2w后处死动物，制成组织切片以备免疫组化及原位杂交。结果 对照组肿瘤间质血管密度增高，VEGF及其mRNA呈高表达，且VEGF蛋白及mRNA的表达同肿瘤间质血管密度呈正相关，而Ppd给药组各指标均降低，且呈剂量依赖性，较对照组存在显著差异（P〈0．01），且50mg／kg以上剂量的抑制作用较环磷酰胺强（P〈0．01）。结论 Ppd能够抑制肿瘤组织中VEGF及其mRNA的表达，而抑制肿瘤血管的形成。