microRNA-195-5p在妊娠糖尿病患者血浆中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-195-5p(miR-195-5p)在正常妊娠及妊娠糖尿病患者血浆中的表达差异,并探究其对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo细胞增殖和凋亡的影响。方法选取剖宫产分娩且患妊娠糖尿病的产妇34例作为糖尿病组,以及同期本院进行剖宫产的正常产妇34例作为健康组,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测糖尿病组和健康组血浆中miR-195-5p的相对表达水平。将HTR-8/SVneo细胞随机分为正常组、高糖组(给予1000 mg·L^(-1)葡萄糖处理)、实验组1(转染抑制剂阴性对照后,给予高糖组条件培养)、实验组2(转染miR-195-5p抑制剂后,给予高糖组条件培养)。用qRT-PCR法检测HTR-8/SVneo细胞中miR-195-5p的相对表达水平;用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果糖尿病组和健康组血浆中miR-195-5p的相对表达水平分别为1.63±0.71和0.98±0.46,糖尿病组血浆中miR-195-5p的表达水平显著高于健康组(P<0.05)。正常组、高糖组、实验组1、实验组2的HTR-8/SVneo细胞中miR-195-5p的相对表达水平分别为1.03±0.06,1.79±0.19,1.82±0.12,1.26±0.08;细胞增殖率分别为(97.24±4.13)%,(53.51±6.78)%,(47.39±3.25)%,(71.56±6.49)%;凋亡率分别为(5.36±0.42)%,(14.79±1.25)%,(15.38±0.76)%,(8.64±0.56)%。高糖组与正常组比较、实验组2与实验组1比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-195-5p在妊娠糖尿病患者血浆中高表达,下调miR-195-5p的表达可以促进高糖诱导的HTR-8/SVneo细胞增殖,并抑制细胞凋亡。     

MicroRNA-501-5p在乳腺癌中的作用

目的 探讨microRNA-501-5p(miR-501-5p)在乳腺癌中的作用。方法 选取2020年3月至2021年3月牡丹江市肿瘤医院收治的40例初次诊断为乳腺癌的患者为乳腺癌组,选取同期在牡丹江医学院附属红旗医院体检的40名体检者为健康对照组,收集两组患者的血清,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-501-5p的表达水平;运用免疫组化技术检测LAMTOR5在组织中的表达情况;绘制ROC曲线分析血清miR-501-5p、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原153(CA153)、糖类抗原125(CA125)诊断乳腺癌的价值。结果 乳腺癌组织中miR-501-5p的表达水平为（1.12±0.23）,高于癌旁组织的（0.96±0.15）,差异有统计学意义（P<0.05）。乳腺癌组患者血清中miR-501-5p的表达水平为（0.96±0.67）,高于健康对照组的（0.88±0.12）,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-501-5p在淋巴结转移、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者中的表达水平高于未发生淋巴结转移、TNM分期Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义（P<0.05）...     

围生期缺血缺氧性脑病的微 RNA生物标志物筛选研究

目的研究围生期缺血缺氧性脑病( HIE)的微 RNA(miRNA)生物标志物的筛选情况。方法通过动态队列研究法获取 2020年 1月至 2021年 1月深圳市龙华区中心医院 144例 HIE病儿作为受试者。将其根据病情严重程度的差异分作轻度 HIE组 42例、中度 HIE组 62例以及重度 HIE组 40例,另取同期该院 50例健康新生儿作为对照组。分别采集所有新生儿脐带血进行测序比较分析差异表达 miRNA,筛选 3个和 HIE相关的 miRNA作为早期预测 HIE的生物标志物,并分析各组新生儿上述 3个 miRNA表达情况的差异。采用 Spearman相关性分析明确 HIE病情严重程度和 miRNA表达的关系。此外,将所有 HIE病儿按照是否合并脏器损伤分为合并脏器损伤组 102例以及未合并脏器损伤组 42例,比较两组上述 3个 miRNA表达情况的差异。此外,检测并比较 HIE组和对照组血清诱导型一氧化氮合酶( iNOS)、内皮素 -1水平。结果 miRNA芯片通过扫描、分析以及标准化处理,结果发现 miRNA芯片共检测 miRNA达 921种。相较于对照组, HIE病儿血浆中有 29种 miRNA表达异常升高, 26种 miRNA表达异常下降,选择差异有统计学意义的 miRNA实施生物学信息分析,发现了 miR-4472、miR-5195-3p以及 miR6794-5p可能具有潜在的预测 HIE作用。重度 HIE组 miR-4472、miR-5195-3p以及 miR-6794-5p表达水平分别为 0.71±0.12、2.34±0.28、2.24±0.24,均高于对照组的 0.20±0.04、0.78±0.15、0.47±0.11和轻度 HIE组的 0.37±0.08、0.92±0.18、0.89±0.15以及中度组的 0.55±0.09、1.45±0.23、1.46±0.20,且轻度 HIE组、中度 HIE组 miR-4472、miR-5195-3p以及 miR-6794-5p表达水平均高于对照组,中度 HIE组 miR-4472、miR-5195-3p以及 miR-6794-5p表达水平均高于轻度 HIE组(均 P<0.05)。 HIE病儿病情严重程度和 miR-4472、miR-5195-3p、miR-6794-5p表达均呈正相关关系(均 P<0.05)。合并脏器损伤 HIE病儿 miR-4472、miR-5195-3p、 miR-6794-5p表达水平分别为 0.60±0.09、2.05±0.18、1.70±0.31,均高于未合并脏器损伤组的 0.46±0.03、1.58±0.12、1.37±0.23(均 P<0.05)。 HIE组血清 iNOS及内皮素 -1水平均高于对照组(均 P<0.05)。结论 HIE的 miRNA生物标志物包括 miR-4472、miR5195-3p、miR-6794-5p,且上述 miRNA表达水平和病儿病情严重程度以及脏器损伤有关,值得临床重点关注。     

MiR-497-5p对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-497-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞的影响,并探讨其作用机制。方法取乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇。将MCF-7/紫杉醇细胞,分别转染miR-497-5p模拟物(miR-497-5p mimics组)、miR-497-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-497-5p抑制剂(miR-497-5p inhibitor组)及miR-497-5p抑制剂阴性对照(NC组)。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-497-5p表达,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的表达。结果miR-497-5p在MCF-7/紫杉醇细胞中表达水平0.44±0.02,显著低于MCF-7细胞的0.73±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后miR-NC组、miR-497-5p mimics组、NC组及miR-497-5p inhibitors组细胞增殖抑制率分别为(19.67±2.08)%,(46.33±5.86)%,(17.33±1.53)%,(9.33±3.51)%;细胞凋亡率分别为(4.18±0.07)%,(16.37±1.10)%,(5.56±0.41)%和(2.44±0.13)%,以上指标,miR-NC组与miR-497-5p mimics组相比,NC组与miR-497-5p inhibitors组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-497-5p mimics组中PD-L1蛋白表达显著较miR-NC组低;miR-497-5p in-hibitor组中PD-L1蛋白表达显著较NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-497-5p通过调控PD-L1表达抑制乳腺癌紫杉醇耐药细胞增殖并促进细胞凋亡。     

MiR-192-5p在支气管哮喘气道炎症中的作用北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-192-50(miR-192-5p)在支气管哮喘(简称哮喘)患者血浆中的表达,及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、炎性因子的表达以及细胞周期相关蛋白的影响。方法将本院收治的65例急性哮喘患者作为哮喘组,并选取同时期年龄相仿的65例健康人员作为健康对照组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测哮喘患者血浆中miR-192-5p的表达水平。将ASMCs随机分为空白组(常规培养,不做任何处理)、模型组(20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)、转染对照组(转染模拟物阴性对照mimic-NC后,用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)和转染组(转染miR-192-5p mimic后用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)。用噻唑蓝(MTT)法检测ASMCs的增殖活力;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测ASMCs细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平;用蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6蛋白的水平。结果miR-192-5p在健康对照组和哮喘组血浆中的相对表达分别为1.01±0.09,0.44±0.05,与健康对照组相比,哮喘组血浆中miR-192-5p显著低表达(P<0.05)。空白组、模型组、转染对照组、转染组ASMCs上清液中IL-1β的水平分别为(132.58±17.41),(519.48±38.94),(509.41±20.34)和(204.14±28.71)pg·mL^(-1),IL-6的水平分别为(86.99±6.83),(639.21±56.25),(656.72±69.35)和(301.86±34.98)pg·mL^(-1),Cyclin D1蛋白的表达水平分别为0.36±0.02,0.95±0.08,0.97±0.09和0.48±0.03;CDK6蛋白的表达水平分别为0.11±0.01,1.04±0.09,1.01±0.08和0.16±0.02。模型组与空白组,转染对照组与转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-192-5p在支气管哮喘患者血浆中表达下调,过表达miR-192-5p抑制TNF-α诱导的ASMCs增殖、炎症和细胞周期相关蛋白。     

微小RNA-197-3p对鼻窦黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究微小RNA-197-3p(miR-197-3p)通过靶向kruppel样因子4(KLF4)对过敏性鼻炎鼻窦黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 选取32例过敏性鼻炎(AR)发作期患者以及30例进行鼻中隔矫正术患者的下鼻甲黏膜组织作为实验标本。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-197-3p在两种组织中的相对表达量。从AR患者鼻甲黏膜组织中分离鼻窦黏膜上皮细胞培养，并随机分为miR-NC组(转染阴性对照)和miR-197-3p组(转染miR-197-3p模拟物)。用噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的增殖能力；用原位末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡率；用蛋白质印迹法检测各组细胞中KLF4蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验检测miR-197-3p与KLF4的靶向关系。结果 AR患者和正常鼻甲黏膜组织中miR-197-3p相对表达量分别为0.44±0.15,0.75±0.21,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-NC组和miR-197-3p组72 h的细胞增殖抑制率分别为(52.05±0.67)%和(42.60±2.30)%,细胞凋亡率分别为...     

miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者血清中的表达及临床意义北大核心CSCD

目的探讨miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者血清中的表达水平,分析其表达与胃癌临床特征的相关性,评估其单项及与CA19-9和CEA联合检测对胃癌临床诊断的应用价值。方法以实时定量聚合酶链反应法检测胃癌组及对照组血清miR-4485-3p和miR-1469的相对表达量;分析二者血清表达水平的相关性及其与胃癌临床因素的相关性;以受试者工作特征(ROC)曲线分析临床诊断效能;通过计算ROC曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度、阳性预测值(PPV)及阴性预测值(NPV),评估单项及联合检测的临床应用价值。结果胃癌组和对照组血清miR-4485-3p表达量分别为0.94±1.34,1.66±2.43,差异有统计学意义(P<0.01),而miR-1469的表达量2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌组和健康对照组中miR-4485-3p与miR-1469的表达水平不相关(r=0.021,P>0.05)。胃癌血清中miR-4485-3p的表达水平与患者年龄、性别、饮酒以及肿瘤TNM分期等均不相关。miR-4485-3p独立诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.702,敏感度和特异度分别为88.6%和26.5%,PPV和NPV分别为55.4%和69.2%。miR-4485-3p与CEA、CA19-9联合检测可将敏感度和NPV分别提高至91.4%和80.0%。结论miR-4485-3p在胃癌血清中低表达,可能成为胃癌临床诊断的潜在血清学标志物。     

缺氧预处理诱导大鼠心肌细胞差异表达microRNA的芯片筛选与生物信息学分析

目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,HPC组细胞经历10 min缺氧和30 min再给氧,提取心肌细胞总RNA,行miRNA芯片筛选,qRT-PCR验证芯片结果。利用软件预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果与CON组相比,HPC可诱导大鼠心肌细胞miRNA表达谱发生明显改变,共有12个miRNA上调,14个miRNA下调(P<0.01,FDR<0.05);选择其中荧光信号值>500的7个miRNA,用于生物信息学分析。qRT-PCR检测miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示差异表达miRNA所调控的靶基因功能明显富集于27个GO和6条信号通路。结论 HPC可诱导成年大鼠心肌细胞miRNA表达谱明显改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因参与HPC介导的心肌细胞保护作用。     

长链非编码RNA FOXD3-AS1对黑色素瘤细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FOXD3-AS1靶向miR-128-3p/PDK1对黑色素瘤细胞增殖和侵袭的调控作用。方法转染组-1,转染组-2,转染组-3分别转染pcDNA-FOXD3-AS1、pcDNA-FOXD3-AS1与miR-128-3p mimics的阴性对照(mimic NC)、pcDNA-FOXD3-AS1与miR-128-3p mimics,以未进行转染的细胞作为对照组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测黑色素瘤细胞和正常人表皮黑色素细胞FOXD3-AS1和miR-128-3p的表达差异;用双荧光素酶报告基因实验验证FOXD3-AS1与miR-128-3p的相互作用;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的侵袭;用蛋白质印迹法检测3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白的表达水平。结果对照组、转染组-1,转染组-2,转染组-3细胞24 h的增殖率分别为(100.00±0.00)%,(168.03±15.71)%,(163.58±6.24)%,(124.62±8.93)%;侵袭的细胞数分别为(21.33±2.08),(38.33±4.89),(40.00±2.65),(25.33±2.52)个;PDK1的表达水平分别为0.36±0.02,1.19±0.08,1.24±0.11,0.48±0.03。转染组-1与对照组比较,转染组-3与转染组-2比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论FOXD3-AS1通过靶向miR-128-3p/PDK1轴,促进黑色素瘤细胞的增殖与侵袭。     

miR-3529-3p通过下调E2F3基因表达抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-3529-3p抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的作用机制。方法研究时间为2021年1月至5月。分别转染NC mimic(NC组)和miR-3529-3p mimic(miR-3529-3p组)至卵巢癌SKOV-3细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效率。CCK-8法检测每组细胞的光密度值。集落形成实验检测每组细胞的集落形成数。miRNAMap数据库预测miR-3529-3p的靶基因。qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测靶基因的表达。采用独立样本t检验。结果 miR-3529-3p组和NC组SKOV-3细胞中miR-3529-3p表达分别为(1.01±0.07)和(9.55±1.50), NC组miR-3529-3p表达显著低于miR-3529-3p组(t=5.68, P<0.01)。CCK-8法显示miR-3529-3p过表达抑制SKOV-3细胞增殖(P<0.05)。与NC组相比, miR-3529-3p组集落形成数显著减少(P<0.05)。miR-3529-3p的靶基因可能是E2F转录...     

MiR-26a-5p对人主动脉内皮细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)中的表达和作用。方法将HAECs随机分为对照组(正常培养);模型组(用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h);转染组-1(转染mimic NC后用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h);转染组-2(转染miR-26a-5p mimic后用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h)。以实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-26a-5p的表达水平;以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;以流式细胞术检测HAECs的凋亡情况。结果对照组、模型组、转染组-1、转染组-2细胞中miR-26a-5p的相对表达量分别为1.03±0.14,0.56±0.03,0.51±0.07,2.31±0.17;24 h的细胞增殖率分别为(47.71±4.35)%,(31.64±2.83)%,(30.23±1.47)%,(41.62±2.85)%;凋亡率分别为(8.24±0.59)%,(14.56±1.63)%,(15.48±1.24)%,(8.54±0.68)%。模型组与对照组比较,转染组-2与转染组-1比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-26a-5p在ox-LDL诱导的HAECs中低表达,上调miR-26a-5p可以促进HAECs增殖并抑制细胞凋亡。     

幽门螺杆菌感染病儿胃黏膜组织微小 RNA-497-3p表达及与 Toll样受体 8/Toll样受体 10/核因子 κB信号通路的相关性

目的 观察微小RNA(miR)-497-3p在幽门螺杆菌(Hp)感染病儿胃黏膜组织中表达水平,并探讨其与核因子(NF)-κB信号通路的相关性.方法 选取2014年1月至2018年11月黄冈市中心医院就诊的病儿210例为研究对象,分为Hp感染组(n=100)和Hp非感染组(n=110).实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-497-3p、Toll样受体8(TLR8)、Toll样受体10(TLR10)和NF-κB mRNA的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测病儿胃黏膜组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-10(IL-10)水平.结果 Hp感染组的胃黏膜组织中miR-497-3p mRNA相对表达量显著低于Hp非感染组[(1.53±0.16)比(2.46±0.14)],TLR8[(1.84±0.15)比(1.05±0.23)]、TLR10[(1.92±0.06)比(1.38±0.09)]和NF-κB[(2.56±0.03)比(1.40±0.02)]相对表达量均高于Hp非感染组,差异有统计学意义(均P<0.05);Hp感染组的胃黏膜组织中TNF-α[(21.18±1.35)比(11.50±2.37)]、IL-6[(1.74±0.15)比(1.05±0.23)]、IL-8[(1.92±0.06)比(1.38±0.09)]和IL-10[(2.56±0.03)比(1.40±0.02)]的表达水平均高于Hp非感染组,均差异有统计学意义;Pearson相关分析显示,Hp感染组病儿胃黏膜组织中miR-497-3p与TLR8、TLR10和NF-κB mRNA相对表达量、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10水平均呈负相关(均P<0.05).miRNA-497-3p诊断Hp感染的ROC曲线下面积(AUC)为0.926,根据SPSS统计结果计算miR-497-3p在最佳临界值处诊断Hp敏感度和特异度分别为91.8％和93.7％.结论 miR-497-3p在Hp感染组的胃黏膜组织中异常低表达,其可能通过影响TLR8/TLR10/NF-κB信号通路介导的炎性反应,从而在Hp感染的致病过程中发挥作用,为临床下一步的治疗提供思路.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

微小 218?5p调控 Wnt家族成员 2B抑制骨肉瘤细胞 143B的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨肉瘤细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法 2016年1月至2019年1月,实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在骨肉瘤与正常骨组织及正常成骨细胞株与骨肉瘤细胞株的表达差异.应用CCK-8法检测过表达miR-218-5p对人骨肉瘤细胞株143B增殖的影响;细胞划痕实验检测和Transwell小室实验检测过表达miR-218-5p对骨肉瘤细胞143B迁移能力的影响.同时,应用在线miRNA靶基因预测软件预测miR-218-5p的靶基因,并应用荧光素酶报告实验进行结合位点验证.蛋白质印迹法验证靶基因的蛋白表达水平.结果 miR-218-5p在骨肉瘤组织中的表达水平(0.59±0.21)％明显低于正常骨组织,骨肉瘤细胞系中的表达水平(0.712±0.015)％、(0.685±0.016)％、(0.542±0.021)％、(0.524±0.011)％明显低于正常成骨细胞,P<0.05.同时,与对照组相比,过表达miR-218-5p(miR-218-5p mimic)的骨肉瘤细胞143B的细胞活力t6h(0.274±0.011),t24h(0.514±0.04),t48h(0.828±0.16),t72h(1.212±0.013),侵袭(164±12)个和迁移距离(26±2.4)％明显减弱,P<0.05.应用TargetScan网站进行预测,结果显示Wnt家族成员2B(WNT2B)为miR-218-5p的潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验结果表明miR-218-5p直接靶向WNT2B;蛋白质印迹法证实miR-218-5p过表达组细胞中WNT2B蛋白的表达水平较对照组明显减少.结论 miR-218-5p在人骨肉瘤组织和癌细胞中低表达,其可能通过靶向WNT2B抑制骨肉瘤细胞143B的增殖、迁移和侵袭.     

长非编码RNA LINC00671对胰腺癌细胞Panc-1增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究长非编码RNA LINC00671(long non-coding RNA LINC00671)对胰腺癌细胞增殖与侵袭的调节作用及其可能的下游调控机制。方法取胰腺癌Panc-1细胞系随机分为pc-NC组、pc-LINC00671组、miR-NC组以及miR-221-5p mimic组。pc-NC组转染过表达空载质粒(pcDNA3.0-NC),pc-LINC00671组转染LINC00671过表达质粒(pcDNA-LINC00671),miR-NC组转染阴性对照寡核苷酸,miR-221-5p mimic组转染miR-221-5p模拟物。以实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测组织或细胞中LINC00671以及miR-221-5p的表达。以细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)检测各组细胞的细胞存活率,用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果LINC00671在胰腺癌组织及其相匹配的癌旁组织中的表达量分别为1.01±0.19和0.71±0.18,在人正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)和胰腺癌细胞系(Panc-1)中的表达量分别1.00±0.11和0.45±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。48 h时,pc-NC组和pc-LINC00671组的细胞存活率分别为(92.72±4.97)%和(78.09±6.08)%,miR-NC组和miR-211-5p mimic组的细胞存活率分别为(104.66±4.85)%和(126.01±11.24)%;72 h时,pc-NC组和pc-LINC00671组的细胞存活率分别为(92.29±6.53)%和(68.03±6.17)%,miR-NC组和miR-211-5p mimic组的细胞存活率分别为(102.68±3.09)%和(120.48±9.10)%;pc-NC组和pc-LINC00671组中侵袭细胞数目分别为61.67±3.40和36.67±4.50,miR-NC组和miR-221-5p mimic组中侵袭细胞数目分别为40.67±4.78和60.33±4.50;pc-NC组与pc-LINC00671组相比,miR-211-5p mimic组与miR-NC组相比,pc-LINC00671+miR-211-5p mimic组与pc-LINC00671组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在胰腺癌中,LINC00671可抑制胰腺癌细胞的增殖与侵袭,而miR-221-5p可促进胰腺癌细胞的增殖与侵袭,LINC00671可靶向miR-221-5p促进SOCS1的表达。     

卒中后认知障碍患者血清miR-210-3p水平与认知障碍相关性分析

目的:探讨轻中度缺血性卒中后认知障碍(PSCI)患者血清miR-210-3p的表达水平及与认知障碍的相关性。方法:选取2019年1月—2021年11月某院收治的轻中度缺血性卒中后认知障碍患者30例为研究组，并选取同期该院健康体检者30例作为对照组。采用蒙特利尔认知量表(MoCA)对受试者进行认知评估，采用荧光定量PCR检测患者血清中miR-210-3p表达水平，针对miR-210-3p表达水平与MoCA评分进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-210-3p表达水平对PSCI的诊断价值。结果:研究组患者血清中miR-210-3p表达水平为(0.045±0.035),低于健康对照组的(0.380±0.475),差异有统计学意义(P<0.001);研究组患者血清中miR-210-3p表达水平与MoCA评分呈正相关性(r=0.486,P<0.05);ROC曲线分析表明，miR-210-3p在轻中度缺血性PSCI中具有良好的诊断性能，灵敏度0.815,特异度0.875,曲线下面积(AUC)为0.937(95%CI 0.831～0.986),截断值0.095(P&...     

miRNA-1246通过NF-κB介导乳腺癌细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的 探讨微小RNA-1246(miR-1246)在乳腺癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用及相关机制。方法 以SK-BR-3细胞构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX作为SK-BR-3/PTX组,以正常SK-BR-3细胞作为SK-BR-3组;CCK-8实验检测两组细胞活力并计算凋亡指数;RTFQ-PCR检测miR-1246表达水平;免疫荧光实验和Western blot法检测P-gp蛋白表达。SK-BR-3/PTX细胞转染miR-1246 inhibitor和阴性对照(NC)inhibitor,分别设为miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组;Western blot法检测p-NF-κB p65、IκBα和P-gp蛋白表达。PTX处理miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 成功构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX,耐药指数为51.3。与SK-BR-3细胞相比,SK-BR-3/PTX细胞miR-1246表达水平显著升高(P<0.01),P-gp和p-NF-κB p65蛋白显著上调,...     

WEE1 G2检查点激酶对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究WEE1 G2检查点激酶(WEE1)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、迁移以及侵袭的影响及失调机制。方法取RL95-2细胞系培养,并分别转染WEE1小干扰RNA(si-WEE1组)、NEAT1小干扰RNA(si-NEAT1组)、WEE1过表达质粒(pc-WEE1组)、NEAT1过表达质粒(pc-NEAT1组)、miR-139-5p模拟物(miR-139-5p mimic组)、miR-139-5p抑制剂(miR-139-5p inhibitor组),并设立相应对照组(si-NC、pc-NC以及NC mimic)。以实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测子宫内膜癌组织和细胞中WEE1 mRNA表达水平,以CCK-8实验检测细胞增殖,以Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,以Western blot检测WEE1表达。结果子宫内膜癌患者癌组织和对应癌旁组织中WEE1的表达量分别为1.19±0.21和1.01±0.20;EC细胞系(RL95-2)和人正常子宫内膜细胞(h EEC)中WEE1的表达量分别为1.95±0.15和1.00±0.10;si-NC组和si-WEE1组48 h时细胞光密度值分别为0.68±0.05和0.50±0.02;72 h时为1.12±0.09和0.75±0.05;细胞侵袭数目分别为109.33±8.06和67.67±5.25。癌组织与癌旁组织相比,EC细胞系与人正常子宫内膜细胞系相比,si-WEE1组与si-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在子宫内膜癌中,NEAT1通过miR-139-5p/WEE1促进EC恶性进展,这可能成为子宫内膜癌的诊断性生物标志物和治疗靶点。     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

miR-579-3p过表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-579-3p在宫颈癌HeLa细胞中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，及其潜在机制。方法 将细胞分为H8组[正常培养正常宫颈上皮永生化细胞(H8细胞)]、HeLa组[正常培养宫颈癌细胞(HeLa细胞)]、HeLa+mimic-NC(HeLa细胞转染mimic-NC)和HeLa+mimic-miR-579组(HeLa细胞转染mimic-miR-579-3p)。用细胞计数试剂盒检测各组细胞的增殖情况，用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-579-3p和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因mRNA的表达水平，用迁移实验和侵袭小室法检测细胞的迁移和侵袭情况。结果 H8组中miR-579-3p mRNA相对表达水平(1.00±0.04)显著高于HeLa组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P<0.001)。HeLa+mimic-NC组和HeLa+mimic-miR-579组的miR-579-3p mRNA相对表达水平分别为0.13±0.01和0.83±0.10,第2天的增殖能力分别为165.91±9.46和111.35±9.66,侵袭细胞数分别为(124....