对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

超声波对小鼠胚泡着床影响的研究

本实验证明频率800kHz,声强1.75W/cm~2连续超声波在着床前单纯照射小鼠子宫部一次(一分钟),可显著地抑制着床,二次照射可完全阻遏着床。用放射免疫法测定小鼠着床前外周血中雌二醇和孕酮含量,结果表明照射组与对照组间无显著性差异。提示抗着床作用与这两种激素在外周血中的浓度无关。光镜、电镜下观察到的子宫内膜形态学变化为大量白细胞浸润;内膜腔上皮微绒毛减少、消失;糖蛋白衣过早地被清除;膜性结构线粒体及内质网的损害等,这些形态学变化可能是影响着床的重要因素。     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

保胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜降钙素表达的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜降钙素水平的影响.方法:采用米非司酮小鼠受精卵着床障碍模型.将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药组和保胎液(高、中、低3种剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予0.9％氯化钠溶液、地屈孕酮和保胎液(高、中、低3种剂量)灌胃治疗.于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg.正常组不予任何处理.于妊娠第5天取小鼠的子宫组织,运用实时荧光定量PCR技术检测小鼠子宫内膜降钙素的含量.结果:模型组降钙素表达量与正常组、中药高剂量组、中剂量组及西药组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).中药高、中剂量组分别与西药组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);中药中剂量组与正常组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);中药中剂量组降钙素水平明显高于高、低剂量组(P＜0.05).结论:保胎液可以调节小鼠子宫内膜降钙素的表达量,特别是中剂量效果最明显,从而改善受精卵着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进受精卵着床.     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜的形态学影响

目的从形态学角度探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法将56只C57小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、阿司匹林组、二补助育汤低、中、高剂量组,每组8只。用吲哚美辛建立胚胎着床障碍动物模型,小鼠妊娠第5日下午脱颈椎处死,计算各组小鼠妊娠率及胚胎着床位点数;光学显微镜下观察各组小鼠子宫内膜形态结构;透射电子显微镜下观察超微结构、胞饮突表达情况,并计算胞饮突评分。结果 (1)模型组平均着床位点数(1.8±2.1)明显低于空白组(8.1±4.2)(P0.05);中药中、高剂量组平均着床位点数(分别为62.5%,75.0%)明显高于模型组(P0.05);与补佳乐组和阿司匹林组间无统计学差异。(2)光学显微镜下形态学观察:正常组内膜间质疏松、腺体和血管丰富、腺体扩张;模型组内膜变薄或消失、腺体和血管减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组内膜均有改善,以二补助育汤中剂量组与正常组最接近。(3)电子显微镜下超微结构观察:空白组子宫内膜上皮细胞及细胞器结构清晰;模型组细胞破坏严重甚至局灶性坏死,线粒体膜不完整、嵴结构消失,胞质中较多空泡样变,核糖体和内质网明显减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组细胞及细胞器有不同程度破坏,与模型组相比有明显改善。(4)胞饮突:空白组胞饮突丰富,绒毛较少;模型组绒毛丰富,但胞饮突很少;二补助育汤各剂量组胞饮突较模型组丰富,见少量绒毛;补佳乐组和阿司匹林组可见少量胞饮突,较模型组增加,绒毛表达稀疏。(5)胞饮突评分:模型组胞饮突评分(1.1±0.3)较空白组低(2.5±0.7)(P0.05);中药中剂量组(2.3±0.9)、阿司匹林组(2.0±0.7)评分高于模型组(P0.05),亦高于补佳乐组(1.3±0.5)(P0.05)。结论二补助育汤能够促进子宫内膜发育及胞饮突,从而提高子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。     

Annexin A1在小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织中的表达及意义

目的:探讨Annexin A1在小鼠胚泡植入期的作用。方法:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析孕d3、d5、d7小鼠子宫内膜蛋白质组,用差异蛋白质组学显示pI约5.1、分子量约38kD的蛋白点在d3、d5上调,且在d5更明显。经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索对此蛋白点进行鉴定;再用RT-PCR、原位杂交、Western blot和免疫组织化学技术进行验证分析。结果:该蛋白点鉴定为鼠源性Annexin A1;d5小鼠子宫内膜组织中Annexin A1的mRNA和蛋白质水平均增加。结论:Annexin A1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

胚泡和内膜发育状态对子宫内膜“着床窗口”形成的影响

本文应用胚泡移植和改进的内膜上皮细胞与胚泡共培养方法研究了胚胎和子宫内膜不同发育状态对子宫内膜对胚泡接受性的影响.实验证明正常胚泡移植到子宫内膜的“着床窗口”出现时间以妊娠d4天上午9时到下午18时.如果被移植的胚泡是取自延缓着床胚泡,则它们的“着床窗口”出现时间有明显缩短,只能到下午14时为止.另外也证明.子宫内膜本身发育状态对内膜的接受性也有影响.以妊娠d5天内膜的胚泡附着数最多.所以.可以认为胚胎和内膜的发育状态都是可以影响内膜“着床窗口”的出现与消失的.     

Ghrelin影响小鼠胚泡着床的体外实验研究

目的:探讨Ghrelin在小鼠妊娠围植入期子宫表达的变化及其对胚胎着床的影响。方法:用免疫组化方法检测Ghrelin蛋白在小鼠妊娠围植入期子宫表达的变化;采用体外胚泡培养方法,观察重组Ghrelin蛋白对胚泡的孵化、黏附与扩展率的影响。结果:在小鼠妊娠的第1至2天,Ghrelin蛋白主要于腔上皮和腺上皮表达,随妊娠进展,其表达水平逐渐下降。体外胚泡培养48h时,与正常对照组相比[孵化率、黏附率和扩展率分别为(61.25±5.27)%、(71.45±6.56)%和(43.26±5.87)%],Ghrelin重组蛋白可明显抑制胚泡的孵化率[(20.36±4.78%),P<0.01]、黏附率[(53.23±4.98)%,P<0.01)]及扩展率[(18.34±7.12)%,P<0.05]。结论:Ghrelin可抑制胚泡孵化、黏附与扩展及抑制胚泡植入。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

Diverse endometrial mRNA signatures during the window of implantation in patients with repeated implantation failure

High endometrial receptivity in the window of implantation (WOI) is essential for successful implantation. However, a diagnostic tool with high specificity for impaired endometrial receptivity remains to be developed. We collected endometrium specimens during the WOI from patients with RIF and women who conceived after one IVF/ICSI attempt. We conducted mRNA microarray on the samples followed by relevant comparative and functional analysis. Microarray analysis revealed 357 dysregulated mRNAs between the two groups. The majority of these mRNAs were found to encode membrane proteins by Gene Ontology (GO) analysis. The major functional biological pathways associated with the down-regulated mRNAs were cytokine-cytokine receptor interaction, the p53 signalling pathway and the complement and coagulation cascades. Up-regulated mRNAs were found mainly to participate in pathways such as PPAR signalling, hematopoietic cell lineage, phosphatidylinositol signalling system, ECM-receptor interaction and notch signalling. AQP3, DPP4 and TIMP3 whose expression patterns were down-regulated in RIF patients both by microarray and real-time PCR had a high correspondence with previous studies demonstrating that these genes may contribute to the defects in endometrial receptivity in RIF patients. Overall, these RIF-associated mRNAs may help devise new diagnostic tools for endometrial receptivity.     

原因不明性原发不孕患者子宫内膜白血病抑制因子基因的表达

目的探讨白血病抑制因子（LIF）基因在子宫内膜的表达与原因不明性原发不孕的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对35例原因不明性原发不孕患者（病例组）和20例继发不孕患者（对组照）的黄体中期子宫内膜行LIFmRNA检测。结果对照组患者黄体中期LIFmRNA表达水平为1.093±0.761（±s,下同）,病例组患者为0.448±0.239,两组相比,差异有极显著性（P<0.01）。结论LIF可能参与了胚泡着床过程。LIF的基因表达缺陷或减弱,可能是导致原因不明性原发不孕的原因之一。     

控制性卵巢刺激中黄体期添加雌激素对小鼠子宫内膜组织胞饮突变化和白血病抑制因子表达的影响

目的 研究控制性卵巢刺激(COS)中黄体期添加雌激素对子宫内膜容受性的影响,探讨COS中不同黄体期支持方案对小鼠子宫内膜中胞饮突发育情况、白血病抑制因子(LIF)表达的影响.方法 将正常雌性昆明小鼠随机分为A组(单纯COS)、B组(COS+黄体酮)、C组(COS+黄体酮+雌激素)和D组(自然周期,未应用药物)共4组,扫描电镜下观察各组小鼠妊娠第3～5天子宫内膜胞饮突的发育情况;采用免疫组化方法 检测LIF蛋白在各组小鼠妊娠第3～5灭子宫内膜中的表达情况.结果 (1)B、C、D组小鼠妊娠第3天子宫内膜出现发育中的胞饮突,妊娠第4天出现完全发育的胞饮突,妊娠第5天出现退化的胞饮突;A组小鼠妊娠第3天可见少量完伞发育的胞饮突,妊娠第4天可见退化的胞饮突.(2)妊娠第3～5大小鼠子宫内膜LIF蛋白表达水平的平均值,C组(138.5±20.3)、D组(143.1±19.0)均明显高于A组(103.2±5.0),差异均有统计学意义(P<0.05),C、D组妊娠第4天LIF蛋白表达均最强,呈强阳性;B组表达水平(123.5±10.8)高于A组,但低于C、D组,差异也均有统计学意义(P<0.05),B组妊娠第4天LIF蛋白表达最强,呈阳性;A组小鼠妊娠第3天LIF蛋白表达最强,呈弱阳性.A组妊娠第3天小鼠与B组、C组和D组妊娠第4天小鼠子宫内膜中LIF蛋白表达水平之间两两比较,差异均有统计学意义(F=55.76,P<0.01).结论 COS中黄体期支持时添加雌激素能改善小鼠子宫内膜中胞饮突的发育及LIF蛋白的表达,从而增加子官内膜容受性.     

A preliminary study comparing the endometrial expression of inhibin, activin and follistatin in women with a history of implantation failure after IVF treatment and a control group

The aim of this study was to evaluate the expression of activin: beta A and beta B subunit and follistatin in endometrium of women with implantation failure ( n = 10) and compare it with a fertile control group ( n = 7). Immunohistochemical staining intensity for follistatin in the endometrial glandular epithelium from women with implantation failure were significantly lower than that in control women ( P = 0.03). The decreased expression of follistatin in epithelial cells in the endometrium of women with implantation failure after in vitro fertilisation (IVF) may suggest that follistatin may play a role in the implantation process.     

HOXA10基因在子宫内膜组织中的表达及与不孕的关系

目的　探讨HOXA10基因在正常育龄妇女及不明原因不孕患者子宫内膜中的表达 ,在着床过程中的作用及与不孕的关系。方法　采用原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 2例正常育龄妇女及 38例不明原因不孕患者子宫内膜组织中HOXA10基因mRNA的表达。其中 ,正常育龄妇女子宫内膜周期为 10例增殖早期、10例增殖晚期、9例分泌早期、16例分泌中期、7例分泌晚期 ,不明原因不孕患者子宫内膜周期为增殖早期 7例、增殖晚期 8例、分泌早期 6例、分泌中期 11例、分泌晚期 6例。结果　 (1)HOXA10基因mRNA在正常育龄妇女子宫内膜腺体及间质中均有表达。原位杂交法检测 (以显色区灰度阳性单位表示 )显示 ,分泌中期腺体为 5 6 9± 0 5 7、间质为 7 48± 0 6 7,分泌晚期腺体为 5 99± 0 40、间质为 7 98± 1 0 8,显著高于增殖早期 (腺体 3 0 4± 0 30 ,间质3 2 5± 0 31)、晚期 (腺体 3 35± 0 2 0 ,间质 3 2 0± 0 37)和分泌早期 (腺体 3 0 7± 0 2 6 ,间质 3 18± 0 2 7)(P <0 0 1) ;分泌中、晚期间质表达高于腺体 (P <0 0 1)。RT PCR法检测显示 ,HOXA10基因mRNA表达 ,分泌中期为 (5 7 0± 3 4) %、晚期为 (5 6 2± 2 9) % ,显著高于增殖早期的 (31 8± 2 6 ) %、晚期的(32 2± 2 3) %和