下调GPM6B基因抑制平滑肌表达特异性标记蛋白

目的 研究糖蛋白M6B（Glycoprotein M6B,GPM6B）基因对间充质细胞C3H10T1/2向平滑肌细胞分化的影响。 方法 将慢病毒感染后的sh-GPM6B细胞作为处理组,慢病毒感染后的sh-Scramble细胞作为对照组进行后续实验。用sh-GPM6B质粒和工具质粒在293T细胞系包装慢病毒。用病毒液感染C3H10T1/2小鼠间充质细胞系制备sh-GPM6B稳转细胞系。荧光显微镜观察病毒转染效率,Western法检测GPM6B基因的干涉效率。慢病毒shRNA干涉抑制GPM6B基因表达后,通过TGF-β1诱导对照组和sh-GPM6B细胞向平滑肌分化。Western blot法检测平滑肌特异标记蛋白SM-MHC和α-SMA表达水平。q-PCR法检测SM-MHC和α-SMA的mRNA转录水平。 结果 慢病毒感染后sh-GPM6B干涉细胞GPM6B基因蛋白表达降低至对照组（40~70）%水平。Sh-GPM6B处理组细胞与sh-Scramble对照组细胞相比,SM-MHC蛋白表达水平显著下调（P<0.05）;SM-MHC和α-SMA mRNA转录水平明显降低（P<0.01）。 结论 下调GPM6B基因可抑制TGF-β1诱导的间充质细胞向平滑肌细胞分化。     

西红花酸对RAW264.7巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及机制探讨

目的探讨西红花酸对RAW264.7巨噬细胞株TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及其机制。方法常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,设计合成My D88 siRNA,用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,同时用西红花酸和My D88 siRNA进行干预。RT-PCR法测定RAW264.7巨噬细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1和IFN-β水平,Western blotting法测定NF-κB/p65和p-JNK1/2的水平,ELISA法检测IL-6和TNF-α水平。结果西红花酸可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1 mRNA的表达,下调p-JNK1/2和p65蛋白表达水平,降低IL-6、TNF-α的分泌水平;My D88 siRNA可以阻断西红花酸对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的作用,但西红花酸和My D88 siRNA对LPS刺激IFN-βmRNA表达的阻断作用不明显。结论西红花酸对RAW264.7巨噬细胞的TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用可能通过My D88信号通路实现。     

芪丹通脉片调节TLR4信号通路抑制巨噬细胞泡沫化的研究

目的 观察益气活血中药芪丹通脉片对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞泡沫化进程、炎症指标及Toll样受体（TLR）4信号通路的影响。 方法 培养RAW264.7细胞，随机分为对照组、ox-LDL组及ox-LDL +芪丹通脉片（QDTM）组，各组细胞干预后进行泡沫化诱导，分析各组细胞油红染色阳性面积，计算各组细胞泡沫化诱导率，收集细胞，ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素（IL）-6、C反应蛋白（CRP）表达水平，Real-time PCR及Western blot分析TLR4、分子核因子（NF）-κB表达水平。 结果 与对照组相比，ox-LDL组细胞泡沫化诱导率、TNF-α、IL-6、CRP水平显著升高（P < 0.05），TLR4、NF-κB表达水平明显上调，QDTM干预后，ox-LDL+QDTM组细胞泡沫化诱导率及TNF-α、IL-6、CRP水平较ox-LDL组显著下调（P < 0.05），同时TLR4、NF-κB表达水平较ox-LDL组明显下降。 结论 QDTM能抑制TLR4信号通路及炎症反应、降低RAW264.7细胞泡沫化诱导率，抑制巨噬细胞泡沫化。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的探讨乌司他丁对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法采用1.0μg/mL的LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10 000 U/mL)共同孵育,采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达。结果高浓度乌司他丁(1 000～10 000 U/mL)可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β表达(P均<0.05),下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-αmRNA和IL-1βmRNA含量(P均<0.05);低浓度乌司他丁(100 U/mL)对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达与LPS单独处理组比较,无显著差异。结论乌司他丁可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应;该抑制作用呈浓度依赖性。     

miR-301a调节小鼠巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。方法高脂喂养Apo E-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301a mimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位。结果在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用。     

重组蛋白Rv2346c抑制巨噬细胞对结核分枝杆菌的免疫灭活效应

目的探讨重组蛋白Rv2346c对卡介苗(BCG)感染鼠巨噬细胞(RAW264.7)后的免疫效应的影响及其机制。方法通过DNA合成、基因扩增、载体构建、诱导表达、纯化等过程制备重组蛋白Rv2346c;利用Cell Counting Kit-8(CCK8)方法检测RAW264.7增殖水平;采用菌落形成试验评估BCG生长情况;运用ELISA方法检测BCG和RAW264.7共培养上清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL)-6的浓度;采取Western blot方法检测RAW264.7细胞中核转录因子κB(NF-κB)p65的表达水平。结果 DNA测序及Western blot检测证实成功制备重组蛋白Rv2346c;BCG可以抑制RAW264.7细胞增殖(P0.05),而RAW264.7细胞对BCG有灭活作用(P0.05);重组蛋白Rv2346c可以增强BCG对RAW264.7细胞增殖的抑制作用(P0.05),并降低RAW264.7对BCG的灭活效应(P0.05);Rv2346c还可以抑制RAW264.7分泌TNF-α和IL-6(P0.05),并抑制NF-κB p65的表达(P0.05)。结论重组蛋白Rv2346c可以抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7对BCG的免疫灭活效应,该作用可能与抑制细胞因子分泌和NF-κB p65活化有关,具体机制值得进一步深入探讨。     

IL-1β参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)属多肽类生长因子,主要由单核细胞和巨噬细胞分泌。IL-1β可参与细胞分化、增殖等多种细胞的生命活动,并参与调控细胞凋亡过程。本研究旨在探讨IL-1β参与卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡作用及其机制。方法设计并合成IL-1β的小干扰RNA(si-IL-1β),转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后并用BCG感染,采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-1β的分泌水平,DCF法检测细胞内ROS水平,AnnexinV-FITC/碘化丙啶(propidine iodide,PI)双荧光染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot法检测凋亡相关因子Caspase3、Bad、Bax以及Mcl-1蛋白及其基因(mRNA)的表达。结果 BCG感染巨噬细胞24 h后,IL-1β表达水平极显著上调,并且呈时间梯度依赖性(P<0.01);同时,与对照相比,BCG感染后巨噬细胞存活率下降,约为33%,而凋亡率显著上调到58.56%(P<0.01),并且凋亡关键调控因子Caspase3、Bad、Bax的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而抑凋亡蛋白Mcl-1的表达水平显著下调(P<0.01),细胞内ROS富集(P<0.05),而si-IL-1β处理可显著逆转由BCG诱发的细胞凋亡、ROS含量富集及凋亡相关蛋白表达水平上调等。结论 BCG可诱导细胞内IL-1β的表达;IL-1β通过上调促凋亡蛋白Bad、Bax表达,下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达,上调细胞内ROS的表达并参与调控BCG诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡。这为阐明IL-1β在BCG诱导的细胞凋亡中的作用奠定了分子基础。     

甘丙肽体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究

目的 探讨甘丙肽对小鼠RAW264.7巨噬细胞功能的影响。方法 取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖（LPS）处理组和LPS联合甘丙肽处理组。给予后两组细胞LPS（1μg/ml）刺激2h,使细胞激活,其中一组再加入甘丙肽1000nmol/L继续处理24h,镜下观察各组细胞形态变化;采用荧光定量PCR法检测培养上清TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平;采用Western blot法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg1）蛋白表达水平。结果 LPS处理组IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA分别较对照组升高（7083±432.5）倍、（3106±104.3）倍和（108.0±47.58）倍,而甘丙肽处理组三者水平较LPS处理组下降（1.2±0.2）倍、（0.3±0.08）倍和（19±1.3）倍,差异均有统计学意义（P<0.05）;LPS组iNOS蛋白较对照组升高（19.5±1.964）倍,Arg1蛋白水平较对照组降低（1.6±0.3）倍,而给予甘丙肽混合处理后,iNOS蛋白水平较LPS处理组降低（1.7±0.32）倍,而Arg1蛋白升高（2.31±0.12）倍,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 甘丙肽可抑制LPS诱导的小鼠Raw264.7巨噬细胞的促炎反应。     

糖原合成酶激酶-3β对巨噬细胞系RAW264.7活化的影响

目的探讨糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）对巨噬细胞系RAW264.7活化的影响。方法将生长状态良好的RAW264.7细胞分为3组：实验对照组、脂多糖（LPS）组和GSK-3β特异抑制剂SB216763干预组,在12 h、24 h进行指标检测。采用Western印迹法检测细胞GSK-3β、p-GSK-3β^ser9蛋白的表达,ELISA试剂盒法检测细胞上清IL-10、TNF-α的变化,RT-PCR检测细胞中5-LO mRNA变化,免疫荧光法检测ED1表达,电镜下观察RAW264.7细胞形态变化。结果12 h和24 h LPS组与对照组相比,p-GSK-3β^ser9表达减少,GSK-3β表达不变,活性升高;TNF-α、IL-10及5-LO mRNA表达增多（P〈0.05）;ED1表达绿色荧光明显增多;透射电镜观察LPS组巨噬细胞形态不规则,吞噬坏死物质细胞变多。12 h和24 h SB216763干预组与LPS组进行比较,p-GSK-3β^ser9表达明显增多,GSK-3β表达不变,活性降低;TNF-α及5-LO mRNA表达减少（P〈0.05）,IL-10表达明显增多（P〈0.05）;ED1绿色荧光表达减少;透射电镜观察细胞形态较规则。结论 GSK-3β对于RAW264.7细胞活化发挥重要的作用。     

游离脂肪酸抑制AMPK信号通路促进小鼠巨噬细胞葡萄糖酵解和M1极化

[目的]探讨游离脂肪酸对小鼠巨噬细胞葡萄糖酵解和M1极化的影响,从巨噬细胞代谢重编程和M1极化阐明非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发病机制,为NASH的防治提供新的思路。[方法]以油酸/棕榈酸(O/P)处理RAW264.7细胞建立游离脂肪酸处理巨噬细胞模型;转染AMP活化蛋白激酶(AMPK)特异siRNA抑制AMPK表达;使用阿卡地新(AICAR)激活AMPK活性。采用qPCR检测巨噬细胞M1型分子标志物(TNF-α、IL-6和MCP-1)、M2型分子标志物(CD206和IL-10)以及葡萄糖酵解相关基因(PGM1、PGK1、GPI1、LDHA、ALDOA、GLUT1和HK2)mRNA水平,采用Western blot检测p-mTOR/mTOR、p-Raptor/Raptor、p-Akt/Akt、p-AMPK和AMPK蛋白水平。[结果] O/P处理RAW264.7细胞后,p-mTOR/mTOR和p-Akt/Akt蛋白水平升高(P<0.05),p-Raptor/Raptor、p-AMPK和AMPK蛋白水平降低(P<0.05),葡萄糖酵解相关基因PGM1、PGK1、GPI1、L...     

敲低GPM6B促进白色脂肪细胞向棕色脂肪表型转变

目的 研究糖蛋白M6B(GlycoproteinM6B,GPM6B)在白色脂肪细胞向棕色脂肪表型转变中的作用.方法 ①Western blot和qPCR检测小鼠白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中GPM6B的表达.②分别用对...     

脂多糖诱导巨噬细胞中核受体协同抑制因子启动子甲基化对炎症因子的调控作用

目的探讨核受体协同抑制因子(NCOR)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应中的作用及其调控机制。方法 1μg/ml的LPS分别处理小鼠巨噬细胞RAW264.7 24 h和48 h,应用Western blot和Real time-PCR检测NCOR的表达水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平,荧光素酶报告基因检测核因子-κB(NF-κB)的启动子活性。LPS处理细胞48 h后,应用MSP检测NCOR启动子是否发生甲基化以及Western blot检测DNMT3b的表达变化。Real time-PCR检测5'-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA的表达水平;转染DNMT3b siRNA后,分别应用Western blot和Real time-PCR检测DNMT3b的表达水平,以及DNMT3b siRNA和LPS联合作用下NCOR、TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性。结果 LPS干预细胞24、48 h后,NCOR蛋白和mRNA表达显著下调(P0.05),而TNF-α、IL-6 mRNA表达水平、DNMT3b蛋白的表达水平以及NF-κB的启动子活性显著上升(P0.05)。MSP检测说明LPS可介导NCOR的启动子甲基化。用5'-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA水平较LPS组有显著上升(P0.05)。采用DNMT3b siRNA可显著下调DNMT3b蛋白和mRNA水平,并可部分逆转LPS介导的抑制NCOR表达的效应,抑制TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性(P0.05)。结论 NCOR启动子的甲基化是LPS介导巨噬细胞炎症反应发生、发展的关键步骤,其可作为治疗ALI/ARDS的潜在靶点。     

游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响

目的探讨游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响及可能机制。方法胶原酶原位灌注法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞,将细胞分为对照(NC)组和混合游离脂肪酸(FFA)处理组,并制备肝细胞条件培养液(CM),以CM干预巨噬细胞株RAW264.7。油红O染色检测肝细胞内脂质沉积情况,Real-time PCR检测肝细胞脂质代谢相关基因和巨噬细胞M1/M2型极化基因表达,ELISA检测肝细胞培养上清细胞因子水平。Western Blot检测巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。计量资料两组间比较采用独立样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果与NC组相比,FFA孵育诱导肝细胞内大量脂滴沉积,细胞内甘油三酯和总胆固醇含量明显升高(t值分别为15.65、3.49,P值均<0.05)。FFA显著上调肝细胞脂质合成基因固醇调节元件结合蛋白1C和脂肪酸合酶的mRNA表达(t值分别为2.89、2.82,P值均<0.05),并降低脂质分解基因脂酰辅酶A氧化酶1和肉碱棕榈酰转移酶1A的mRNA表达(t值分别为14.30、3.36,P值均<0.05)。FFA诱导肝细胞培养上清炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNFα的水平明显增加(P值均<0.05)。相比CM-NC,CM-FFA显著增加巨噬细胞M1型基因诱生型一氧化氮合酶2、TNFα和IL-6 mRNA表达(P值均<0.05),降低M2型基因IL-10 mRNA表达水平(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,CM-FFA显著增加巨噬细胞TLR4、磷酸化NF-κBp65和磷酸化NF-κB抑制因子表达水平(t值分别为2.88、3.69、3.54,P值均<0.05)。结论FFA诱导的肝细胞脂肪变性和炎症反应可促进巨噬细胞M1型极化,启动和触发非酒精性脂肪性肝病发生发展。     

间断人工重力在模拟失重所致胸主动脉炎症反应中的对抗作用

目的 观察模拟失重大鼠胸主动脉炎症反应变化以及间断人工重力对抗模拟失重所致变化的作用.方法 采用尾部悬吊方法建立模拟失重大鼠模型,将45只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组15只(n=15).即对照(CON)组、4周尾部悬吊(HU)组和1 h/d间断人工重力(IAG)组.建模成功后,分离大鼠胸主动脉...     

AcSDKP体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究*

目的 探讨N-乙酰-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能的影响。方法 取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖（LPS）组和LPS加不同浓度的AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组。采用荧光定量PCR法检测细胞肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞素（IL）-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）mRNA相对水平;使用Transwell小室检测RAW264.7细胞的趋化能力;采用Western blot法检测细胞iNOS、磷酸化的蛋白激酶复合体抑制物(p-IKK)、磷酸化的κB抑制蛋白(p-IκB)和磷酸化的P65（p-P65）蛋白表达水平。结果 LPS处理组TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于对照组【分别高出（41±2.1）倍、（1073±80.8）倍和（1726±110.2）倍,P<0.01】;AcSDKP（10 nmol/L和100 nmol/L）处理组TNF-α水平显著低于LPS处理组【分别降低19.0% 和39.3%,P<0.01】;AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组IL-1β水平显著低于LPS处理组【分别降低22.08%、35.8%和38.2%,P<0.01】;AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组IL-6水平显著低于LPS处理组【分别降低15.8%、35.7%和43.3%,P<0.01】;LPS处理组穿过小室的细胞数为（136±5.3）个/HP,显著高于对照组【（64±5.3）个/HP,P<0.01】,而AcSDKP处理组穿过小室的细胞数【分别为（105±4.8）、（85.3±5.0）和（73.7±5.6）个/HP】,显著低于LPS组【（136±5.3）个/HP,P<0.05】;LPS处理组iNOS mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组【分别为（21±2.5）倍和（5.9±0.4）倍,P<0.01】,而AcSDKP处理组iNOS mRNA显著低于LPS处理组【分别降低37.8%、23.3%和33.1%,P<0.05】;在10 nmol/L和100 nmol/L浓度AcSDKP处理组,两种蛋白水平显著低于LPS处理组【分别降低27.0%和40.2%,P<0.05】;LPS处理组p-IKK、p-IκB和p-P65表达量均显著高于对照组【分别为（25.9±4.8）倍、（9.5±0.6）倍和（2.1±0.2）倍,P<0.01】,而AcSDKP（10 nmol/L）处理组三者水平较LPS处理组显著下降【分别为42.5%、17.8%和29.7%,P<0.05】。结论 AcSDKP可抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,这一效应可能与阻断IKK/ IκB/NF-κB通路有关。     

热休克预处理对脂多糖所致RAW 264.7细胞迁移的影响

目的 观察热休克预处理对脂多糖所致巨噬细胞迁移的影响.方法 采用ELISA观察脂多糖预处理对RAW264.7巨噬细胞中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β释放的影响;采用趋化实验观察脂多糖处理对RAW264.7巨噬细胞迁移的影响;采用趋化实验观察热休克预处理对RAW264.7巨噬细胞迁移的影响.结果 用500μg/L脂多糖作用RAW264.7巨噬细胞1 h,肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的释放较对照组明显增加(P<0.05);用500μg/L脂多糖处理细胞24 h, RAW264.7巨噬细胞的迁移较对照组明显增加(P<0.05);给予细胞42.5℃热休克预处理1 h后,再予500μg/L脂多糖处理细胞,RAW264.7巨噬细胞迁移较单纯脂多糖处理组明显减少(P<0.05).结论 热休克预处理能抑制脂多糖所致RAW264.7巨噬细胞迁移.     

脂质运载蛋白2促进胶原沉积和炎症反应参与川崎病导致心肌损伤的实验研究

目的 探讨脂质运载蛋白（Lcn）2在川崎病(KD)时心肌损伤的作用和相关机制。 方法 将40只（1月龄）SD大鼠随机分为对照组和干酪乳杆菌细胞壁成分（LCWE）模型组。建立KD大鼠模型4周后酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测KD大鼠血浆和心肌组织匀浆中Lcn 2的含量；心脏超声检测大鼠心脏收缩舒张功能；Masson染色评估心肌胶原产生的程度；荧光实时定量PCR法检测心肌组织中白介素（IL）-6、CD3、CD45和胶原蛋白（Collagen）I的mRNA表达；Western blot方法检测心肌组织中核因子（NF）-кB和其抑制蛋白IкB的磷酸化水平和Collagen I的蛋白表达变化。采用IкB的抑制剂BAY 11-7082（2.5 μmol/L）处理可有效抑制Collagen I的表达。 结果 LCWE注射28 d后，成功诱导KD大鼠冠状动脉损伤（P<0.05）。在此基础上发现，KD大鼠心脏左室舒张末期内径（LVIDd）增加，左室射血分数（LVEF）降低（P<0.05）。Masson染色显示KD大鼠心肌出现一定程度心肌纤维化和胶原沉积。心肌中的IL-6、CD3和CD45等炎症相关分子的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）。KD大鼠心脏组织和循环中Lcn 2水平升高（P<0.05）。给予心肌成纤维细胞Lcn 2（10 ng/ml）处理48 h，心肌成纤维细胞Collagen I 的mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）。并且Lcn 2处理可显著上调心肌成纤维细胞NF-кB和IкB的磷酸化水平。采用IкB的抑制剂BAY 11-7082（2.5 μmol/L）处理可有效抑制Lcn 2对Collagen I蛋白的上调作用。 结论 KD状态下Lcn 2显著升高，Lcn 2通过激活NF-кB信号途径诱发心肌成纤维细胞胶原合成增加和产生炎症反应，进而造成心肌损伤。     

Anti-inflammatory Effects of PMX205 in Mouse Macrophage Periodontitis Model

Background: C5areceptor antagonistPMX205 is a synthetic hexapeptidecapable of blocking C5a-C5a receptor (C5aR) axis by simulating C5a active C-terminal amino acid residues. This hexapeptide presents good anti-inflammatory effects in a myriad inflammation models. The anti-inflammatory effect of PMX205 on periodontitis is yet to be fully fathomed. Objective: To examine the anti-inflammatory effects of PMX205 on RAW264.7 murine macrophages exposed togingipain extracts and Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis). Methods: MTT assay was carried out so as to specify the cytotoxicity of PMX205. RAW264.7 cells were co-cultured in vitro with gingipain extracts or P. gingivalis to simulate the periodontitis inflammatory milieu. Real-time quantitative PCR, ELISA and Griess assay were performed in order to detect tumor necrosis factor-α (TNF-α), IL-6, IL-23, nitric oxide (NO), IL-10, transforming growth factor-β1 (TGF-β1), andarginase-1 (Arg-1). Furthermore, phagocytosis assay was done to evaluate the phagocytic capacity of RAW 264.7 cells. Finally, western blot analysis was conducted to evaluate myeloid differentiation factor 88 (MyD88). Results: PMX205 increased the expression levels of bacteriostatic substances (NO and IL-23) and anti-inflammatory cytokines (TGF-β1, IL-10 and Arg-1); however, it reduced the expression levels of proinflammatory cytokines TNF-α and IL-6once RAW 264.7 macrophages were stimulated via gingipain extracts or P. gingivalis. In addition, PMX205 promoted the macrophage phagocytosis and down-regulated protein expression of MyD88. Conclusion: PMX205 has recognizable anti-inflammatory effects in RAW 264.7 cell inflammation model, a finding which probably opens doors to future investigations on new targets for the prevention and treatment of chronic periodontitis.