二十碳五烯酸抑制棕榈酸诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及机制

目的 探讨二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)对棕榈酸（palimitate,PAL）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 以PAL诱导的乳鼠心肌细胞为模型,分为对照组、PAL组、EPA+PAL组、EPA+PAL+Compound C组;采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测乳鼠心肌细胞cleaved caspase 3、动力相关蛋白(Dynamin-related protein,Drp)1表达水平和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）的磷酸化水平。结果 不同浓度PAL刺激细胞24 h,与对照组相比,400 μmol/L PAL诱导后细胞活性显著降低,凋亡率明显增加（P<0.05）,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3活性上调(P<0.05),同时AMPK磷酸化水平降低(P<0.05),Drp1表达增加(P<0.05)。但50 μmol/L EPA处理却通过激活AMPK磷酸化,抑制Drp1的表达,进而逆转PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。AMPK阻断剂Compound C则通过抑制AMPK,激活Drp1活性,增加凋亡相关蛋白cleaved caspase 3的活性,从而削弱了EPA抵抗PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。结论 EPA可通过激活AMPK,减少Drp1表达水平,从而抑制PAL诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,这些结果为深入认识EPA的心肌保护作用提供了新的实验依据。     

Ghrelin对棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨Ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡。方法大鼠主动脉内皮细胞分别在含0.3 mmol/L棕榈酸的脂性培养基中孵育24 h,培养基中加或不加Ghrelin,应用MTT法检测细胞活性,Ho-echst 33258及流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性,Western Blot检测Bcl-2和Bax表达。结果棕榈酸降低细胞活性,使细胞凋亡增加至30.03%,与对照组(5.01%)相比差异有统计学意义(P<0.01),棕榈酸增加Caspase-3活性,使Bcl-2/Bax比率下降。Ghrelin能够浓度依赖性增加细胞活性,10 nmol/L是最低有效浓度,100 nmol/L时作用最显著。Ghrelin能抑制棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡,使凋亡率降至10.03%(P<0.05)。同时Ghrelin降低Caspase-3活性并增加Bcl-2/Bax比率。结论 Ghrelin可以抑制棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡,可能在棕榈酸诱导的内皮细胞损伤中发挥保护作用。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响

目的 研究丹参酮Ⅱ A(1、SN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响。方法 培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10^-6mol／L)、TSN(10^-6mol／L、AngⅡ(10^-6mol／L) TSN(10^-5mol／L)36h，检测心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和^3H亮氨酸掺入率。结果 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和^3H亮氨酸掺入率的显著增高。结论 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大。     

GRP78在肝癌细胞抵抗棕榈酸诱导凋亡中的作用

目的探讨内质网应激(ER stress)信号调控对棕榈酸(PA)诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞SMMC-7721,在采用ER stress抑制剂4-苯丁酸(PBA)和过表达葡萄糖调节蛋白(GRP)78的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析ER stress以及GRP78对PA诱导肝癌细胞凋亡的影响。结果 PA诱导肝癌细胞发生ER stress,PBA抑制ER stress并减弱了PA诱导的肝癌细胞凋亡(P0.05)。PA和ER stress诱导剂衣霉素(Tun)对ER stress分子标志的诱导水平差异显著(P0.05),其中PA诱导的GRP78远低于Tun的诱导作用。过表达GRP78明显抑制了PA诱导的肝癌细胞凋亡(P0.05)。结论 GRP78的诱导表达不足在PA介导的肝癌细胞凋亡中起重要作用。     

ERp46在棕榈酸诱导的内质网应激中的保护作用

探讨新发现的内质网蛋白ERp46对棕榈酸诱导的βTC6细胞“内质网应激-凋亡”通路的可能调控作用,为治疗2型糖尿病提供新思路.结果显示ERp46对内质网应激的三条通路均有抑制作用,进而减少βTC6细胞的凋亡率,对细胞起保护作用(P＜0.01).     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

山楂酸减少高糖介导的心肌细胞损伤和凋亡及其机制

目的 探讨山楂酸处理对高糖介导大鼠心肌细胞H9c2损伤和凋亡分子机制影响。 方法 以高糖诱导大鼠心肌细胞 H9c2为模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测AMPK的磷酸化水平以及Bcl-2、Bax的表达水平,免疫荧光检测细胞活性氧（ROS）的生成。 结果 ①与对照组相比,高糖组细胞LDH活性和细胞凋亡比率显著增高（P<0.05）,山楂酸处理却能抑制高糖诱导的H9c2细胞LDH的积累,降低细胞凋亡（P<0.05）。②Western blot检测显示,与对照组相比,高糖组p-AMPK、Bcl-2下调（P<0.05）,Bax上调（P<0.05）;与高糖组相比,山楂酸处理组p-AMPK、Bcl-2上调（P<0.05）,Bax下调（P<0.05）,给予AMPK阻断剂 Compound C后可以抑制山楂酸诱发的这些效应（P<0.05）。③ROS检测显示,山楂酸能够抑制高糖刺激的ROS的产生（P<0.05）,而AMPK拮抗剂compound c却能够拮抗山楂酸对ROS的抑制（P<0.05）。 结论 山楂酸能通过激活AMPK信号通路,从而增强BCl-2表达、抑制Bax和ROS生成,拮抗高糖诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡,对心肌细胞起保护作用。     

神经型一氧化氮合酶在高血压大鼠中棕榈酸依赖的心肌细胞收缩性中的调节机制

目的 探讨神经型一氧化氮合酶（nNOS）在高血压大鼠中棕榈酸依赖的心肌细胞收缩性中的调节机制。方法 制备对照组大鼠和血管紧张素II诱导的高血压模型大鼠,用美国肯特coda多动物多通道尾袖套法无创血压系统监测大鼠血压,采用IonOptix单细胞收缩检测系统检测心肌细胞收缩。结果 ① 4周末对照组收缩压和舒张压为115.4±4.7mmHg和94.8±2.8mmHg,高血压组收缩压为158.6±4.8mmHg和舒张压为128.8±2.9mmHg,4周末与对照组相比高血压组收缩压和舒张压均增高;②棕榈酸增强对照组心肌细胞收缩性,但高血压组无此作用;③依托莫司（ETO）为肉碱脂酰转移酶1抑制剂,ETO能抑制对照组中棕榈酸增强心肌细胞收缩性的作用;④ S-甲基-硫代L-瓜氨酸（SMTC）为nNOS抑制剂,在高血压组中,预处理SMTC可恢复棕榈酸促进心肌细胞收缩的作用。但同时给予ETO和SMTC时棕榈酸增强心肌细胞收缩性的作用又被抑制。结论 在健康大鼠心脏中,棕榈酸通过肉碱脂酰转移酶1增加心肌收缩力。在高血压大鼠心脏中,棕榈酸依赖性心肌细胞收缩被增多的nNOS限制,主要是通过增多的nNOS对肉碱脂酰转移酶1的调控作用。     

线粒体损伤及其在心肌细胞损伤中的作用

<正>重度失血、严重缺氧或酸中毒及脓毒血症均可引起心脏能量代谢障碍,使循环功能急剧减退,组织器官微循环灌流严重不足,导致重要生命器官功能、代谢严重障碍,严重影响治疗及预后,成为危重患者死亡的重要原因之一~(〔1〕)。线粒体损伤已成为心肌细胞结构损伤与功能障碍的基本环节~(〔2〕)。关于线粒体在多种致病因素导致心肌细胞损伤与功能障碍中的作用,目前认为与呼吸链酶类变化、一氧化氮(NO)释放、钙超载、线粒体     

棕榈酸诱导小鼠胰岛 β 细胞株MIN6细胞发生铁死亡的研究

目的:探讨棕榈酸（PA）是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。方法:将小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞分为正常对照组、PA组（1.0 mmol/L）、PA+凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK）组（5 μmol/L）、PA+铁死亡抑制剂（Fer-1）组（5 μmol/L）、PA+坏死抑制剂（Nec-1）组（5 μmo...     

葡萄糖调节蛋白78在棕榈酸诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白(GRP)78在棕榈酸(PA)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法选取人肝癌细胞SMMC-7721,分为对照组和PA组;采用光学显微镜观察两组细胞死亡情况,采用反转录PCR检测两组GRP78 mRNA表达;同时将肝癌细胞分为对照组、空白载体组和GRP78载体转染组,其中GRP78载体转染组转染高表达GRP78质粒,空白载体组转染空白质粒,采用Western印迹检测GRP78蛋白表达情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞SMMC-7721在PA刺激下,24 h后死亡细胞明显增多;PA组肝癌细胞SMMC-7721 GRP78 mRNA相对表达量为(3.014±0.447),明显高于对照组的1.012±0.322(P<0.05);GRP78载体转染组GRP78蛋白相对表达量明显高于对照组和空白载体组,细胞凋亡率明显低于对照组和空白载体组(均P<0.05)。结论高表达GRP78可抑制PA诱导的肝癌细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡与肥大

目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大、凋亡的影响。方法培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10-6)、TSN(10-6、AngⅡ(10-6mol/L) TSN(10-5mol/L)36 h,检测心肌细胞的凋亡蛋白p53的表达、心肌细胞直径和3H-亮氨酸掺入率。结果TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡蛋白p53(AngⅡ TAN:99 890±338比AngⅡ:389 712±270,P<0.05),抑制心肌细胞直径[(AngⅡ TAN:21.3±2.5比AngⅡ:28.5±3.8)μm,P<0.05]和3H-亮氨酸掺入率[(AngⅡ TAN:1 302±96比AngⅡ:1 900±100)计数/min,P<0.05]。结论TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大。     

丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡与肥大

目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大、凋亡的影响.方法培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10-6)、TSN(10-6、AngⅡ(10-6mol/L) TSN(10-5mol/L)36 h,检测心肌细胞的凋亡蛋白p53的表达、心肌细胞直径和3H-亮氨酸掺入率.结果 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡蛋白p53(AngⅡ TAN:99 890±338比AngⅡ:389 712±270,P＜0.05),抑制心肌细胞直径[(AngⅡ TAN:21.3±2.5比AngⅡ:28.5±3.8)μm,P＜0.05]和3H-亮氨酸掺入率[(AngⅡ TAN:1302±96比AngⅡ:1900±100)计数/min,P＜0.05].结论 TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大.     

丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究活血药丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响,探讨其抑制心肌肥大的作用机制.方法收集各组心肌培养细胞,PI染液,于流式细胞仪上进行检测.结果 AngⅡ能诱导心肌细胞凋亡,AngⅡ组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）,并随着时间的延长其凋亡率不断增高,于第7天达到高峰;洛沙坦明显抑制AngⅡ所诱导各个时间段的心肌细胞凋亡率（P〈0.01）,而活血药丹参素和川芎嗪也明显抑制AngⅡ所诱导各个时间段的心肌细胞凋亡率（P〈0.05或P〈0.01）.结论丹参素和川芎嗪能通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡而产生心肌保护作用,具有防止心肌细胞肥大作用,从而防治心室肥厚.     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响.方法培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10-6mol/L)、TSN(10-6mol/L、AngⅡ(10-6mol/L)+TSN(10-5 mol/L)36 h,检测心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和3H亮氨酸掺入率.结果TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡率、心肌细胞直径和3H亮氨酸掺入率的显著增高.结论TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大.     

诱导分化促进DNA损伤的肺癌细胞凋亡

本试验的目的是探讨诱导分化剂和ＤＮＡ损伤性化疗药对肺腺癌细胞凋亡的影响。材料与方法（１）材料：人肺腺癌细胞Ａ５４９购自武汉大学典型培养物保藏中心,常规培养传代。诱导分化剂全反式维甲酸（ＲＡ）和ＤＮＡ荧光染料ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３２５８购自美国Ｓｉｇｍａ...     

黄连素对缺氧／复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的拮抗作用

目的探讨黄连素（BR）对大鼠H9e2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法：将培养的H9c2心肌细胞随机分为：正常对照（NC）组、单纯BR组、H／R组、药物低剂量BR（1．5×10-6moVL）组及高剂量BR（1．5×10-4moL／L）组。处理结束后,用MrITr比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Cytochrome-C（Cyt-C）,Caspase-9蛋白的表达。结果：与NC组比较,单纯BR组对H9c2心肌细胞无影响。与H／R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力分别为（60．8±1．9）％和（81．2±1．9）％明显上升（P〈0．01）,心肌细胞的凋亡率明显减少,Western blot的结果显示,BR可抑制凋亡相关蛋白Cyto-chrome-C、Caspase-9的表达。结论：BR对H9c2心肌细胞H／R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,其可能的机制与抑制的Cyt-C的释放和抑制Caspase-9的表达有关。     

棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法培养于含0.5 mM棕榈酸的培养基中的MIN6细胞为实验组,仅含5%BSA的培养基培养的MIN6细胞为对照组,采用流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测两组MIN6细胞凋亡情况。实验组于培养12(实验1组)、24(实验2组)、36(实验3组)h后,对照组于培养36 h后,采用Western blot法检测MIN6细胞中的凋亡诱导因子(AIF)及survivin。构建survivin过表达载体并转染实验组细胞,36 h后,同前法检测转染及未转染survivin过表达载体的MIN6细胞在含棕榈酸培养基中的凋亡情况。结果培养36 h后实验组MIN6细胞凋亡率为30.27%±3.15%,明显高于对照组的4.61%±0.51%(P<0.01)。实验1、2、3组MIN6细胞核中的AIF的相对表达量高于对照组,sur-vivin相对表达量低于对照组(P均<0.05)。棕榈酸培养36 h后,转染survivin过表达载体的MIN6细胞凋亡率为11.6%±2.09%,低于未转染者的31.27%±2.97%(P<0.01)。结论棕榈酸可诱导小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡,可能与下调survivin表达和激活AIF凋亡信号通路有关;survivin表达上调可抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡。     

生长阻滞和DNA损伤诱导基因153在慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡中的表达

目的研究慢性缺氧诱导心肌细胞发生凋亡的情况,探讨生长阻滞和DNA损伤诱导基因(CHOP/GADD153)蛋白表达变化与心肌细胞凋亡的关系。方法将体外培养的心肌细胞置于95%N_2/5%CO_2混合气体培养箱内进行慢性缺氧处理,随机将心肌细胞分为对照组及缺氧6、12、24、48、72 h组。采用流式细胞术及DNA梯度技术检测心肌细胞凋亡情况.RT-PCR检测CHOP/GAD153 mRNA水平变化,western blot检测细胞凋亡过程中CHOP/GADD153蛋白表达变化。结果缺氧6 h组心肌细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,缺氧12、24、48、72 h组心肌细胞凋亡数量明显增多(P<0.05):CHOP/GADD153 mRNA和蛋白表达水平也明显增加(P<0.05)。结论慢性缺氧可诱导心肌细胞发生凋亡,CHOP/GADD153可能参与了慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡的信号传导通路。     

姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的探讨姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法以0、250、500μmol／L棕榈酸干预小鼠巨噬细胞RAW264．724h,观察细胞形态,逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中受体相互作用蛋白140（RIPl40）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA水平,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清中TNF-a、IL-6水平;噻唑蓝法（MTr）确定姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间和浓度;细胞分为姜黄素组和对照组,分别给予20μmol／L姜黄素和二甲基亚砜（DMSO）预处理1h后,均给予500μmol／L棕榈酸作用24h,观察细胞形态并检测细胞中RIPl40、TNF-a、IL-6mRNA水平和上清中TNF-a、IL-6浓度。采用单因素方差分析和t检验对研究数据进行统计检验。结果500μmol／L棕榈酸组RIPl40mRNA表达较0μmol／L组显著升高（3．40±0．51比1．01±0．21,t=7．436,P〈0．01）;0、250、500μmol／L棕榈酸组TNF-amRNA（1．00±0．03、1．79±0．12、2．16±0．13）和蛋白[（197±25）、（371±10）、（485±17）ng／L]、IL-6mRNA（1．00±0．51、2．55±0．15、2．59±0．17）和蛋白[（953±66）、（1081±36）、（1182±18）ng／L]与棕榈酸剂量明显相关（F=99．308、187．049、152．958、26．594,均P〈0．01）;棕榈酸处理后,细胞变圆、皱缩甚至崩解;姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间为1h,最佳浓度为20ixmol／L;姜黄素组与对照组相比,RIPl40mRNA（1．00±0．05比0．63±0．01,t=一13．79,P〈0．01）、TNF-amRNA（0．64±0．11比1．00±0．07,t=一4．532,P〈0．05）和蛋白[（322±12）比（485±17）ng／L,t=一13．577,P〈0．01]、IL-6mRNA（0．57±0．05比1．00±0．02,t=一14．167,P〈0．01）和蛋白[（241±47）比（1182±18）ng／L,t=一44．810,P〈0．01]均显著降低,而细胞形态正常,细胞问仍有连接融合。结论RIPl40可能参与姜黄素抑制棕榈酸诱导的炎症反应过程。