干细胞样CD8+ T细胞：肿瘤免疫疗法的新生力量

CD8+ T 细胞是抗肿瘤免疫应答的主要执行者。通过重塑CD8+ T 细胞杀伤肿瘤细胞的能力,免疫疗法已在抗肿瘤领域取得重大突破,但临床获益仅局限于部分患者和癌症类型。如何克服CD8+ T细胞功能障碍是肿瘤免疫疗法亟待解决的关键问题。近年来,多项研究揭示了CD8+ T细胞的干性调控机制,发现了干细胞样CD8+ T细胞具有自我更新和增殖能力,阐明了该细胞亚群在维持持续性肿瘤免疫治疗应答中的重要性。本文论述了干细胞样CD8+ T 细胞的分子与功能特征、CD8+ T 细胞干性的细胞内外影响因素,归纳总结了目前靶向CD8+ T细胞的干性重编程策略,进一步展望了靶向CD8+ T细胞干性程序来提高肿瘤免疫疗法疗效的思路和方法。     

CD4+CD25+调节性T细胞与CD4+T、CD8+T细胞在结直肠癌组织中的分布

 目的 分析CD4+CD25+ FOXP3+调节性T细胞（Treg）与CD4+T、CD8+T在结直肠癌（colorectal carcinoma, CRC）组织中的分布及其与临床病理特征之间的关系。方法 收集42例CRC新鲜手术标本,应用冰冻切片、免疫组织化学SP法检测肿瘤组织和癌旁组织中FOXP3+、CD4+T和CD8+T阳性细胞数。结果 CRC患者肿瘤组织中FOXP3表达水平显著升高,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P<0.01）;中低分化组Treg细胞数明显高于高分化组（P<0.01）;淋巴结转移组Treg细胞数明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;癌巢内CD4+、CD8+T细胞数及CD4+/CD8+值显著低于间质（P<0.01）;Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移组癌巢内CD4+/CD8+比值显著低于Ⅰ+Ⅱ期及无淋巴结转移组（P<0.05）;CRC中Treg数量与癌巢内CD4+/CD8+比值显著负相关（r=-0.605, P<0.01）。结论 CRC的发生发展可能与其癌组织局部微环境中Treg数量变化相关,肿瘤局部Treg数量的增多与T淋巴细胞亚群比例失调可能成为肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

CD103+CD8+T细胞在结直肠癌组织中的浸润分布及其临床意义

[摘要] 目的:研究组织驻留CD8+T细胞（CD103+CD8+T细胞）在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）组织中浸润程度及分布特征,分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选用上海芯超生物科技有限公司的88 例结肠癌HColA180Su14和77 例直肠癌HRec-Ade180Sur-03 组织芯片,应用免疫荧光染色法分别检测CRC组织及相应癌旁组织中CD103+CD8+T细胞的浸润分布特征及程度,Wilcoxon 秩和检验比较CRC及癌旁组织中CD103+CD8+T细胞浸润程度,χ2检验分析CRC中CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier 生存分析CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者预后的关系,拟合Cox 模型评价不同指标与患者预后的关系。结果: CRC组织中CD103+CD8+T 细胞浸润程度与癌旁组织比较差异无统计学意义（P>0.05）,有远处转移患者中CD103+CD8+T细胞高度浸润的比率显著低于无远处转移患者（P<0.01）,CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征无明显相关（P>0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示,CD103+CD8+T细胞高度浸润患者的OS较低度浸润患者显著延长（54.42% vs 25.00%,P<0.05）,多因素Cox 显示,病理分级（P<0.01）和CD103+CD8+T细胞高度浸润（P<0.05）均可作为CRC患者预后的独立影响因素。结论: CRC组织中CD103+CD8+T细胞浸润与预后相关,提示其在CRC发生发展过程中发挥重要作用。     

胆固醇代谢调控CD8+T细胞抗肿瘤作用的研究进展

CD8+T细胞又名细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),具有直接杀死病原体感染细胞和癌细胞的作用.然而,CD8+T细胞常常丧失其效应功能,继而限制肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫,因此,如何重新激活CD8+T细胞的抗肿瘤效力是目前需要解决的问题.最近研究发现,胆固醇代谢在肿瘤中发挥重要作用...     

CX3CR1+ CD8+ T细胞在肿瘤免疫治疗中作用的研究进展

趋化因子是免疫系统的重要组成部分,趋化因子CX3CL1因其独特的分子结构和双重的存在形式与其受体CX3CR1 共同影响免疫细胞的募集和归巢,参与多种肿瘤发生和肿瘤免疫过程。趋化因子受体CX3CR1响应CX3CL1的趋化作用。同 时,CX3CR1的表达指示CD8+ T细胞的效应分化状态,CX3CR1+ CD8+ T细胞具有细胞毒性和抗原特异性。在肿瘤微环境中,相比 CX3CR1- CD8+ T细胞,CX3CR1+ CD8+ T细胞表面的共抑制分子表达少、杀伤功能活跃。因此,CX3CR1对于CD8+ T细胞等淋巴 细胞的多重意义使其在肿瘤的细胞免疫治疗,如CAR-T细胞治疗中具有应用前景。在肾细胞癌、黑色素瘤和非小细胞肺癌的 PD-1靶向治疗中,外周血CX3CR1+ CD8+ T细胞的占比与疗效正相关,提示CX3CR1也是早期预测免疫治疗疗效的分子标志物。 尽管CX3CR1+ CD8+ T细胞功能活跃,但此群细胞处于终末分化状态,增殖能力和记忆效应差,不具有长久的保护作用。如何使 CAR-T 细胞在体内维持抗肿瘤作用一直是研究者积极探索的方向,也是将 CX3CR1 应用于 CAR-T 细胞免疫治疗需要克服的 难关。     

肿瘤外泌体对CD8+T细胞功能的影响及机制研究进展

外泌体（exosomes）是介导细胞间通讯的细胞外囊泡。它携带来源细胞的多种生物活性分子,并可将其输送给受体细胞,进而影响细胞功能。肿瘤来源外泌体可通过多种机制介导肿瘤的免疫逃逸。本文就肿瘤外泌体对肿瘤杀伤主力军CD8+T细胞的调控作用进行总结,分析其相关作用机制,以期为肿瘤免疫治疗的研发提供新的思路。     

CD4+CD25+CCR6+调节性T细胞在小鼠乳腺癌模型中对CD8+T细胞的抑制作用

目的：观察CD4+CD25+CCR6+调节性T细胞（简称CCR6+Tregs）体内对CD8+T细胞功能的抑制作用,并探讨其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法：建立4T1乳腺癌细胞荷瘤裸鼠模型,FACS分选CCR6+Tregs,检测其Foxp3的表达;FACS分选4T1特异性CD8+T细胞,CFSE标记后分别与CCR6+Tregs或CCR6Tregs共同过继转输入4T1荷瘤裸鼠体内,观察荷瘤裸鼠肿瘤生长情况和小鼠存活时间;FACS检测肿瘤组织中CD8+T细胞的增殖、细胞因子IFNγ的产生和颗粒酶B的表达情况。结果：CCR6+Tregs和CCR6Tregs均高表达Foxp3;CCR6+Tregs和CD8+T细胞共转输组4T1荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显快于CCR6Tregs共转输组和CD8+T细胞单转输组,同时该组荷瘤裸鼠生存时间也明显缩短（P<0.05）;CCR6+Tregs和CD8+T细胞共转输组CD8+T细胞的增殖、IFNγ的产生和颗粒酶B的表达均明显低于CCR6Tregs共转输组和CD8+T细胞单转输组（P<0.05）。结论：CCR6+Tregs在体内可以有效抑制CD8+T细胞的功能,其在肿瘤免疫逃逸和肿瘤发生、发展中发挥重要作用。     

癌相关CD8+记忆T细胞在过继免疫治疗中的应用

针对癌症患者的过继免疫治疗是临床肿瘤治疗研究中的热点话题。癌症患者体内天然存在着能够对恶性肿瘤细胞进行识别、攻击和杀伤的癌相关CD8+记忆T细胞,它们具有对少量肿瘤细胞产生快速免疫应答和持续长期发挥抗癌作用的优点。癌相关CD8+记忆T细胞主要存在于骨髓中,如将骨髓中的这部分T细胞分离出来,并以特定手段激活并回输体内,将可发挥强大的免疫治疗作用。为了帮助临床癌症治疗研究者们更加清晰地认识癌相关CD8+记忆T细胞的生物学特性、肿瘤杀伤能力和临床治疗效果,并妥善处理实际应用过程中遇到的各种问题,本文对近年有关癌相关CD8+记忆T细胞在肿瘤免疫治疗中应用的研究进展加以介绍。     

组织驻留记忆T细胞及其在三阴性乳腺癌中的研究进展

T淋巴细胞在实体肿瘤的抗肿瘤反应中起着重要作用,在多种实体肿瘤中,肿瘤特异性记忆T细胞可能在控制肿瘤细胞生长、限制肿瘤细胞扩散方面发挥重要作用。在三阴性乳腺癌中,肿瘤浸润淋巴细胞表现出与组织驻留记忆T细胞（tissue-resident memory T cells,TRM）相关的分子表型和免疫功能特征,包括组织特异性归巢分子和免疫衰竭标志物的表达。高水平TRM与三阴性乳腺癌患者更好的预后相关,表明TRM类似于肿瘤浸润淋巴细胞,可能有助于抗肿瘤反应。全文重点讨论CD8+TRM的特征及临床意义,以及靶向这些细胞以提高三阴性乳腺癌患者免疫治疗方法成功率的潜在途径。     

肺癌患者外周血白细胞介素-17+CD4+T细胞和白细胞介素-17+CD8+T细胞表达的意义

目的 检测白细胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD8+ T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平,探讨二者在肺癌免疫中的作用及临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测60例肺癌患者及40例健康对照者外周血中Th17和Tc17细胞占CD;T细胞的比例.结果 肺癌组外周血中Th17细胞[(1.795±0.623)％]和Tc17细胞[(0.865±0.357)％]比例分别高于对照组[(1.405±0.256)％、(0.640±0.204)％],(t=28.944,P＜ 0.001;t=14.051,P＜ 0.001).两组内Th17细胞与Tc17细胞的表达水平均呈正相关(肺癌组r=0.770,P＜0.05;对照组r=0.532,P＜0.05).Th7细胞和Tc17细胞表达均与临床分期有关(F值分别为4.882、3.633,均P＜0.05),但与病理类型无关(均P＞0.05).结论 肺癌患者体内Th17细胞和Tc17细胞表达升高,二者可能参与了肺癌的发生、发展;Th17与Tc17细胞的表达水平可作为评价肺癌患者免疫功能状态的新指标,能为病情监测提供参考.     

干细胞样CD8+T细胞在抗肿瘤免疫治疗中的地位与演进效应

以抗细胞程序性死亡-1/细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death-1/programmed cell death-ligand 1,PD-1/PD-L1)为代表的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗显现了CD8⁺T细胞在治疗和可能治愈恶性肿瘤方面的潜力。但仅约20%的患者对ICIs治疗获益,因此阐明CD8⁺T细胞在免疫微环境中的有效抗肿瘤功能,及其分子和空间的决定因素尤为重要。具有自我更新、增殖分化和杀伤肿瘤细胞能力的干细胞样CD8⁺T细胞亚群,在介导抗肿瘤免疫效应方面扮演极为重要的角色。本文就干细胞样CD8⁺T细胞在抗肿瘤免疫循环中的地位与演进效应进行综述。     

结直肠腺癌侵袭性前缘的生长方式及肿瘤细胞巢出芽和CD8+T淋巴细胞浸润与其临床病理学特征的关系*

  目的  观察结直肠腺癌侵袭性前缘的生长方式,计数肿瘤细胞巢出芽的数量和CD8+T淋巴细胞浸润的数量,探讨以上参数与相关临床病理学特征的关系。  方法  收集2008年1月至2019年12月在河西学院附属张掖人民医院院行手术切除的126例原发性结直肠腺癌患者的石蜡包埋样本,运用免疫组织化学方法对126例病理切片进行染色,广谱CK用于标记肿瘤细胞巢出芽,CD8标记T淋巴细胞进行评估。  结果  结直肠腺癌侵袭性前缘的浸润性生长方式,高级别肿瘤细胞巢出芽与肿瘤大小病理分期（pT）（P=0.029,P < 0.001）,淋巴结转移病理分期（pN）（P < 0.001,P=0.023）及脉管浸润相关（P < 0.001,P < 0.001）;高级别肿瘤细胞巢出芽与肿瘤组织学低分化程度相关（P < 0.001）;高级别CD8+T淋巴细胞浸润可能与阻碍肿瘤细胞淋巴结转移相关（P=0.050）。  结论  结直肠腺癌侵袭性前缘的浸润性生长方式,高级别肿瘤细胞巢出芽与患者预后相关,两种组织学形态特征易于观察,可重复性好,借助于广谱CK免疫组织化学染色,可作为判断患者预后的指征。      

A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤组织和CD8+T细胞上的表达和预后价值的研究

  目的  探讨A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）组织和CD8+T细胞上的表达及与患者临床病理特征和预后的相关性。  方法  回顾性分析2010年1月1日至2015年12月31日就诊于天津医科大学肿瘤医院初治的72例DLBCL患者临床病理资料。采用多重免疫组织化学法检测组织中A2aR、CD8的表达,采用χ2检验分析其与患者临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier法进行生存资料分析。  结果  DLBCL组织中A2aR总表达阳性率为41.7%（30/72）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+组患者总生存期（overall survival,OS）较A2aR-组差（P < 0.05）。DLBCL组织中CD8+T细胞上A2aR表达阳性率为22.2%（16/58）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、结外受累数目、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+CD8+组患者OS较A2aR-CD8+组显著更差（P < 0.001）。  结论  A2aR总表达及CD8+T细胞上A2aR表达与DLBCL患者临床病理特征及预后密切相关。检测CD8+T细胞上A2aR表达可更好地评价DLBCL患者的预后。      

CD34^＋细胞的体外定向诱导分化

目的：研究CD34^ 细胞的体外定向诱导分化。方法：利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统（MACS）从外周血中分离CD34^ 细胞,加入白细胞介素-3（IL-3）、粒细胞-单核巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及G-CSF培养3天及7天后取出用于细胞总数,CD34^ 细胞比例及粒系祖细胞检测。结果：CD34^ 细胞在IL-3、G-CSF、GM-CSF刺激下3天细胞总数扩增51倍,7天细胞总数扩增110倍,IL-3、G-CSF、CM-CSF可使粒=单核巨噬系祖细胞（CFU-GM）在3天和7天时分别比对照组增加8.44wuk t 35.08倍。结论：含有IL-3、G-CSF、GM-CSF的细胞因子组合。可诱导CD34^ 细胞定向生成大量的粒系祖细胞和成熟粒细胞,输注后将可使患者白细胞得以迅速恢复,减少感染的发生率。     

卵巢癌患者腹水及外周血CD4+ CD25+调节性T细胞含量及抑制功能的研究

  目的   研究卵巢癌患者腹水及外周血单个核细胞（PBMC）中CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）的表达差异、免疫调节功能及其含量与化疗、复发的关系,探究其在卵巢癌腹腔微环境中发挥免疫调节的具体作用及意义。   方法   采用流式细胞术分别检测27例卵巢癌患者腹水及28例卵巢癌患者PBMC中CD4+ CD25+/CD4+ T细胞百分比,并根据收集标本时患者临床特征进行分组,比较处于初治（PD）、化疗后（AC）及复发（RD）3个阶段卵巢癌患者腹水及PBMC中Treg含量的差异。应用免疫磁珠分选卵巢癌患者腹水及外周血Treg,与经羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记的自CD4+CD25- T细胞按不同比例（0:1,1:1,1:2及1:4）共培养,检测Treg免疫抑制功能。   结果   卵巢癌患者腹水中CD4+ CD25+/CD4+ T细胞百分比（28.25±14.06）%较PBMC中（14.6±4.74）%显著增高（P < 0.000 1）。卵巢癌患者PD、AC及RD 3个阶段腹水及PBMC中Treg含量均显示为AC>RD>PD,且均有显著统计学意义（P < 0.000 1）。体外实验结果显示,卵巢癌患者腹水中CD4+ CD25+ Treg可有效抑制CFSE标记的自体CD4+ CD25- T细胞增殖,且抑制功能较外周血显著增强（P < 0.01）。   结论   卵巢癌腹腔微环境中存在CD4+ CD25+Treg,且其含量及免疫抑制功能较外周血PBMC显著增高,提示卵巢癌腹腔内更易发生免疫逃逸作用。卵巢癌患者化疗后及复发阶段腹水及PBMC中CD4+ CD25+ Treg含量均大于原发阶段,提示化疗可能促进卵巢癌患者体内Treg含量升高,而Treg升高可能参与促进肿瘤复发。       

多发性骨髓瘤患者外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞数量及凋亡相关蛋白水平

  目的  探讨外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）治疗中的作用。  方法  采用流式细胞术检测30例初治、27例完全缓解（CR）MM患者以及25例健康成年人外周血CD4+ T细胞、Tregs数量,并检测Tregs表面功能分子CTLA-4及其凋亡相关蛋白CD95、bcl-2、Caspase3的表达,分析其与临床特点及疗效的关系。  结果  初治组CD4+ T细胞占外周血单个核细胞的比例低于对照组（P < 0.05）,Ⅲ期初治患者CD4+ T细胞明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者（P < 0.05）;初治MM组Tregs占CD4+ T细胞比例显著高于CR组和正常对照组（P < 0.05）,初治Ⅲ期患者Tregs占CD4+ T细胞比例明显高于初治Ⅰ、Ⅱ期患者（P < 0.05）。初治组、CR组和正常对照组Tregs的表面CD95表达无统计学差异（P > 0.05）,初治组CTLA-4表达高于CR组（P < 0.05）和对照组（P < 0.01）,CR患者CTLA-4高于对照组（P < 0.05）,初治组Tregs胞浆内bcl-2水平高于CR组（P < 0.05）和对照组（P < 0.01）,CR组高于对照组（P < 0.05）,初治组和CR组Tregs胞内Caspase3的水平低于对照组（P < 0.05）。初治组Tregs占CD4+比例与骨髓瘤数量呈正相关（P < 0.05）,且Tregs比例与治疗前后浆细胞下降值成反比（r=0.735,P < 0.05）。  结论  MM患者外周血Tregs水平升高,与瘤细胞负荷及疾病的分期呈正相关,与疗效呈负相关;Tregs水平增高与其抗凋亡能力增强有关。      

碳离子(^(12)C^(6+))抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8^(+)T细胞浸润的研究北大核心CSCD

目的探索碳离子(^(12)C^(6+))照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8+T细胞的浸润差异。方法基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径(氯硝柳胺)对肺癌中CD8+T细胞浸润进行分析。结果碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8+T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8^(+)T细胞浸润的协同作用。结论碳离子(^(12)C^(6+))可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。     

碳离子（12C6+）抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8+ T细胞浸润的研究

目的 探索碳离子（¹²C⁶⁺）照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8⁺T细胞的浸润差异。方法 基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径（氯硝柳胺）对肺癌中CD8⁺T细胞浸润进行分析。结果 碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8⁺T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8⁺T细胞浸润的协同作用。结论 碳离子（¹²C⁶⁺）可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。