胰岛素作用对胰岛β细胞磷脂酶Cγ1表达的影响

目的：观察胰岛素对大鼠胰岛β细胞内磷脂酶Cγ1（PLCγ1）表达的影响.方法：大鼠胰岛分离纯化.通过HE染色观察纯化胰岛的形态特征,采用免疫组织化学方法并结合激光扫描共聚焦显微镜和图像分析技术对胰岛β细胞表达不同时间（0,30,60,120,240min）内的PLCγ1进行半定量分析.结果：PLCγ1在胰腺的内外分泌部均有表达.与0min比较,胰岛素作用30,60min时胰岛β细胞表达的PLCγ1荧光强度有明显降低（P〈0.05）;而在240min时PLCγ1荧光强度与0min比较无明显差别.结论：胰岛素作用60min内可使PLCγ1表达下调;胰岛素-PLCγ1途径参与了胰岛素的信息传递.     

GDM孕妇胎盘组织IGF-1及受体表达与新生儿胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的相关性

通过比较妊娠期糖尿病(GDM)孕妇和正常妊娠孕妇胎盘组织中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达,以及新生儿胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),从而探讨胎盘组织IGF-1和IGF-1R表达与新生儿HOMA-β和HOMA-IR的相关性。结果显示:GDM组孕妇胎盘组织IGF-1和IGF-1R的mRNA和蛋白表达均显著高于对照组(P＜0.05);GDM组孕妇分娩新生儿HOMA-IR显著高于对照组(P＜0.05),而HOMA-β明显低于对照组(P＜0.05);Spearman分析显示孕妇胎盘组织IGF-1和IGF-1R表达与新生儿HOMA-β呈负相关,而与HOMA-IR呈正相关。说明妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织IGF-1和IGF-1R表达增加,导致新生儿胰岛β细胞功能受损和胰岛素抵抗。     

外源性胰岛素对于胰岛素一相分泌的影响

目的：探讨外源性胰岛素对离体大鼠胰岛第一时相胰岛素分泌的影响．方法：雄性SD大鼠胰腺采用V型胶原酶经胰管灌注消化分离得到胰岛，用100μU／mL外源性胰岛素分别孵育0，60，120和240min（n=8）后，给予葡萄糖刺激，分别测定0，3，5，10和30min胰岛素分泌量．结果：不同时间胰岛素预处理后，各组在葡萄糖刺激时均产生胰岛素第一时相分泌（P〈0．05），但随着胰岛素孵育时间的延长，胰岛素第一时相分泌峰值降低（P〈0．01）．结论：100μU／mL外源性胰岛素损害胰岛素第一时相分泌，且孵育时间越长，抑制程度越明显．     

宫内缺氧对成年大鼠胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响

目的研究宫内慢性缺氧对成年大鼠胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响。方法SD孕鼠16只随机分为对照组和宫内慢性缺氧组。观察子鼠生长发育状况,于12周龄每窝随机选取雄性子鼠各1只,采用稳态模式评估胰岛素抵抗（HOMA-IR）;胰腺切片H-E染色观察胰岛形态;免疫组织化学染色及图像分析检测胰岛中胰岛素、Bcl-2、Bax、NF-κB表达。结果宫内慢性缺氧组子鼠出生时及12周龄胰腺质量／体质量比值明显低于对照组;成年大鼠HOMA-IR明显高于对照组;胰岛多数增生肥大;胰岛胰岛素的表达明显减弱;胰岛Bax、NF-κB的表达高于对照组,Bcl-2的表达差异无统计学意义。结论宫内慢性缺氧可导致子代大鼠胰腺发育受损;大鼠成年后存在胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍,后者可能与胰岛β细胞胰岛素抵抗、凋亡增加有关。     

GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca2+浓度及胰岛素分泌的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化。结果与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P<0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P<0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P<0.05)。结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌。     

能量限制诱导的Sirt1高表达对胰岛β细胞的寿命及胰岛素分泌功能的影响

目的:研究能量限制(CR)对大鼠胰岛及胰岛β瘤细胞(NIT-1细胞)寿命和胰岛素分泌功能的影响,为2型糖尿病(T2DM)的发病机制及防治提供实验依据和理论基础。方法:①18月龄健康雄性SD大鼠12只随机分为CR组和对照组,饲养6个月后取胰尾组织进行实验,用免疫组化染色检测胰岛中Sirt1和insulin表达水平,β-半乳糖苷酶(-βGal)染色反映胰岛细胞衰老情况;②NIT-1细胞亦分为对照组和CR组;用RT-PCR、免疫细胞化学染色检测Sirt1的表达变化,用放射免疫及免疫细胞化学检测胰岛素的分泌及表达量的变化,用细胞计数法检测细胞倍增周期的变化。结果:①Sirt1在SD大鼠胰岛及NIT-1细胞的胞浆胞核中均有表达,CR组Sirt1表达量均增加;②CR可使大鼠胰岛-βGal染色阳性率下降、NIT-1细胞倍增周期延长;③CR可使大鼠胰岛及NIT-1细胞胰岛素表达量明显减少,NIT-1细胞胰岛素分泌量亦明显减少。结论:CR通过上调Sirt1基因的表达而延缓β细胞的衰老,CR还通过减少胰岛素的表达及分泌从而减少胰岛素信号的刺激,减轻β细胞的负荷并改善胰岛素的分泌功能,因此CR有利于防止T2DM的发生发展。     

功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子机制

目的：探讨功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子调控机制.方法：SD大鼠40只,实验组配戴模拟临床功能矫治器,强制大鼠下颌后退,对照组不戴模拟矫治器,实验后3天、1、2、3周处死大鼠取髁突,HE染色观察组织学变化,免疫组织化学方法结合图像分析检测TGF-β1、TGF-β R1、IGF-1在髁突中的表达及分布.结果：实验组大鼠下颌后退1～2 mm,镜下见颞下颌关节髁突软骨厚度增加,以生发层和过渡层增加明显,细胞数增多,细胞体积增大,核肥大深染.髁突各层软骨细胞均有TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达,免疫组织化学阳性染色相对面积和积分灰度的比较显示：在功能矫形后退下颌后,实验组TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达较对照组明显增强,其差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：功能矫形后髁突软骨表现为增生改建、分化功能增强,其发生与TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达密切相关.     

大鼠胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子超微结构定位的研究

目的: 观察大鼠胰腺β细胞内钙离子在亚细胞水平的分布情况.方法: 用胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含100 mL/L胎牛血清、11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640培养基中培养过夜后,离心,将胰岛细胞团分为实验组(外源性胰岛素100 mU/L孵育240 min)和对照组(外源性胰岛素100 mIU/L孵育0 min),采用改进的焦锑酸钾沉淀的细胞化学方法对胰腺β细胞分泌颗粒内钙离子进行超微结构定位.结果: 超微结构显示胰腺β细胞内钙离子呈高电子密度的黑色颗粒状.对照组的胰岛素分泌颗粒内钙离子沉积明显高于实验组,并伴有钙离子外排.实验组胰腺β细胞靠近细胞膜区钙离子沉积增加.结论: 离子细胞化学定位法是研究组织中钙离子分布的有效方法.胰腺β细胞的分泌功能可能与胰岛素分泌颗粒内钙离子浓度密切相关.     

非酒精性脂肪肝患者胰岛β细胞功能的表达

目的：探讨非酒精性脂肪肝患者胰岛β细胞的功能和胰岛素抵抗的特征。方法：研究对象收集于青岛大学医学院附属医院和即墨市人民医院,共60例,分为非酒精性脂肪肝组30例,正常对照组30例,对两组体重指数、糖化血红蛋白、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血糖、胰岛素水平进行比较,同时采用胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评估胰岛素抵抗性,胰岛素曲线下面积反映胰岛β细胞在葡萄糖刺激下总体分泌胰岛素情况,早相胰岛素分泌指数（△I30/△G30）、胰岛β细胞功能（HOMA-β）评估早时相和晚时相胰岛素分泌功能,并对各指标和影响因素之间进行相关性分析。结果：非酒精性脂肪肝病（NAFLD）组的BMI、TC、TG、HDL-c、LDL-c、HbA1c、0 min、30 min、120 min血糖均高于对照组（t=4.877,3.677,2.388,3.589,2.616,2.21,3.850,2.254,3.913,P=0.001,0.001,0.020,0.002,0.031,0.001,0.014,0.001,0.02）,NAFLD组HOMA-IR高于对照组（t=4.482,P=0.001）,两组间的早相分泌和晚相分泌、曲线下面积无差异（P〉0.05）。HbA1c、TC、0 min、60 min、120 min血糖与胰岛素抵抗相关（R=0.542、R=0.675、R=0.832、R=0.499、R=0.974,P〈0.05）;HDL-c、0 min血糖、0 min胰岛素与早时相分泌相关（R=-0.556、R=0.519、R=0.529,P〈0.05）;0 min血糖、0 min胰岛素与晚时相相关（R=-0.771、R=0.767,P〈0.05）。结论：非酒精性脂肪肝组存在胰岛素抵抗,胰岛β细胞功能在早期尚未受损。     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

肢端肥大症患者糖代谢异常和相关指标分析

目的:评估肢端肥大症患者糖代谢异常及相关生化指标,探讨临床特点、生化指标和糖代谢的联系。方法:回顾性分析天津医科大学总医院内分泌代谢科51例初治肢端肥大症患者病历资料[女31例,男20例,平均年龄（49.51±12.07）岁],所有患者均接受75 g口服葡萄糖糖耐量试验（OGTT）,根据血糖水平将患者分为正常糖代谢（NGT）组、糖调节受损（IGR）组以及糖尿病（DM）组,比较3组患者的临床特点及生化指标,计算稳态模型评估-胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及稳态模型评估-胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）,分析年龄、家族史、生长激素（GH）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）与血糖（Glu）、HOMA-IR、HOMA-β、血糖处置指数（DI）和松田指数（MI）的相关性,并通过Logistic回归分析肢端肥大症患者发生糖尿病的相关危险因素。结果:NGT组14例,占27.4%,IGR组13例,占25.4%,DM组24例,占47.1%。DM组年龄高于NGT组、IGR组,但差异均无统计学意义。DM组糖化血红蛋白（HbA1c）水平高于IGR组、NGT组（F=8.12,P=0.000）,且DM组胰岛素抵抗最严重。与IGR组、NGT组相比,DM组HOMA-β、30 min血糖处置指数（DI30）、120 min血糖处置指数（DI120）、松田指数（MI）和早期胰岛素分泌（AUC Ins 30/AUC Glu 30）、总胰岛素分泌（AUC Ins 120/AUC Glu 120）较NGT组、 IGR组均明显下降（F=21.12、50.50、55.53、5.54、13.52、15.77,均P<0.05）;3组之间GH、IGF-1差异无统计学意义（F=2.27、2.12,均P>0.05）。3组OGTT后0、30、60、120、180 min Glu差异有统计学意义,在30、60、120 min胰岛素差异有统计学意义,而在各个时间点GH水平均无统计学差异;GH、IGF-1水平与HOMA-β以及HOMA-IR未见相关性;年龄与HOMA-β呈负相关（r=-0.560,P=0.000）,与OGTT 120 min Glu呈正相关（r=0.340,P=0.013）。Logistic回归分析显示,糖尿病家族史比无家族史OGTT 120 min 血糖水平高（β=4.76,P=0.032）。结论:年龄和糖尿病家族史是肢端肥大症发生糖代谢紊乱的危险因素。GH和IGF-1水平与糖代谢紊乱没有相关性。     

对家兔糖尿病模型胰岛素治疗的实验观察

目的以胰岛细胞的变化和凋亡程度为判断标准,探讨家兔糖尿病模型胰岛素用药治疗的适宜方案。方法利用四氧嘧啶制作家兔糖尿病模型,设计了多次胰岛素治疗组（A组）、50R预混胰岛素治疗组（B组）、30R预混胰岛素治疗组（c组）3种治疗方案,共治疗30d,记录血糖达标时间及达标时Ins剂量,并与未治组、对照组比较血糖、胰岛素抗体及组织病理学变化;用苏木素-红染色（HE染色法）标记观察胰岛组织片及胰岛凋亡细胞。结果B组的达标胰岛素用量为（5．62±0．67）U／kg,较A、C少,C达标时胰岛素用量最多为（8．83±1．17）U／kg,差异有统计学意义（P〈0.01）。A组血糖达标时间最短为（7．00±1．31）d、C组血糖达标时间最长为（19．63±1．41）d,各组间比较差异有统计学意义（P〈0．001）。胰岛素抗体结合率C组最高,与A、B组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。C组胰岛损害最轻,胰岛凋亡细胞最少。各治疗组胰岛受损和凋亡严重程度A〉B〉C。结论30R预混胰岛素治疗方案最佳。提供一个较高的基础胰岛素浓度加少量餐时胰岛素峰值量治疗糖尿病,血糖平稳缓降,对糖尿病胰岛细胞有治疗和保护作用。多次胰岛素3短加1中的强化治疗及太短时间达标的方法不可首选。     

糖尿病胰岛素及胰岛β细胞功能的研究

目的比较新诊断的老年2型糖尿病患者与中年2型糖尿病患者胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能。方法将113名40岁以上新诊断的T2DM患者分为两组，其中40-59岁（中年组）64例，60岁以上（老年组）49例。分别测量体质指数、腰臀比、检测口服葡萄糖耐量试验、甘油三酯、总胆固醇，观察指标为OGTF各点血糖和胰岛素，根据血糖和胰岛素计算HOMA-IR、HOMA-IS、△Ins30／△Glu30等。结果新诊断老年组OGTF2～3h血糖高于中年组同点血糖（P〈0．05），老年组OGTF2-3h胰岛素值高于中年组同点胰岛素值（P〈0．05）。老年T2DM患者与中年T2DM患者相比HOMA-IR、HOMA-IS、△Ins30／△Glu30均有明显差异。结论与中年发病的糖尿病患者相比，老年2型糖尿病患者在胰岛素抵抗及胰岛素早期分泌缺陷方面有明显的差异。     

小剂量地塞米松诱发的胰岛素抵抗大鼠模型

【目的】用小剂量地塞米松诱发大鼠出现胰岛素抵抗,建立胰岛素抵抗动物模型,并对模型的稳定性进行初步评价。【方法】大鼠4组,给药组皮下注射20、60、120μg/kg 3种不同剂量地塞米松溶液,2次/d,对照组皮下注射等量的生理盐水。【结果】20μg/kg组大鼠在21 d时空腹血糖升高,胰岛素耐量实验结果表明其存在胰岛素抵抗,体重只有轻度下降,停药7 d后,胰岛素敏感性从抵抗状态恢复到正常水平。【结论】小剂量的地塞米松连续皮下注射将诱发大鼠出现一过性的胰岛素抵抗,模型动物的一般状态好。     

新生儿窒息后血清髓鞘碱性蛋白、 促红细胞生成素受体、胰岛素样生长因子-1的表达及临床意义简

目的 研究血清髓鞘碱性蛋白（MBP）、促红细胞生成素受体（EPOR）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在诊断新生儿窒息的意义,以及MBP、EPOR、IGF-1之间的相关性及其临床意义.方法 选择74例有窒息病史的新生儿为观察组,37例无窒息病史的新生儿为对照组,均于出生后24 h内采集静脉血,离心取上清,ELISA法检测其EPOR、MBP、IGF-1含量,并作统计学分析.结果 足月窒息组血清MBP [（5.8 1±1.83）μg/L]及EPOR [（404.98±152.75）ng/L]较足月新生儿组血清MBP[（2.57 ±0.77） μg/L]及EPOR[（269.58±51.36）ng/L]显著升高（t=6.974,P＜0.01;t=3.541,P＜ 0.01）;血清IGF-1[（36.29± 11.43） μg/L]较足月新生儿组血清IGF-1[（62.25±11.97） μg/L]显著降低（t=7.529,P＜ 0.01）.早产窒息组血清MBP[（7.81±2.38）μg/L]及EPOR[（338.85± 104.64）ng/L]较早产儿组血清MBP[（3.41±1.32）μg/L]及EPOR[（216.14±45.70） ng/L]显著升高（t=7.676,P＜0.01;t=4.995,P＜ 0.01）;血清IGF-1[（26.99±8.65）μg/L]较早产儿组血清IGF-1[（52.56± 15.36） μg/L]显著降低（t=8.262,P＜0.01）.IGF-1与MBP、EPOR呈明显的负相关（r=-0.694,P＜0.01;r=-0.489,P＜ 0.01）,MBP与EPOR呈明显的正相关（r=0.687,P＜0.01）.结论 EPOR、MBP、IGF-1早期的联合检测对评估新生儿缺血缺氧程度具有一定的意义,对脑损伤的早期诊断有一定的辅助意义.     

葡萄糖和胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响

目的本实验模拟2型糖尿病病程中葡萄糖、胰岛素的浓度改变,研究不同浓度的葡萄糖、胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响。方法体外培养SW480肿瘤细胞。依据培养液中加入葡萄糖、胰岛素浓度的不同,将实验细胞分为六组：0组（对照组）：RPMI1640细胞培养液;第1组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第2组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和125gIU／ml胰岛素;第3组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和125uIU／ml胰岛素;第4组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第5组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和1．25uIU／ml胰岛素。每个组设3个复孔,于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养48h,培养结束后,收集细胞培养上清,用ELISA方法检测IGF-1的浓度。结果在高浓度的胰岛素组（第2组、第3组,培养液中均含有125uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（286．85±23．51）ug／L、（293．43±30．57）ug／L]高于对照组0组[（197．99±22．50）ug／L],差异有统计学意义（F=9．726,P〈0．01）;而第1、4、5组（培养液中分别含有5uIU／ml、5uIU／ml、1．25uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（203．22±28．89）ug／L、（209．47±25．77）ug/L、（195．33±20．88ug/L）]与对照组0组相比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高浓度的胰岛素能够上调SW480肿瘤细胞IGF-1的表达。     

IGF-1及其受体在子宫平滑肌瘤中的表达以及与雌、孕激素关系

目的探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）及其受体（IGF-1R）在子宫肌瘤发病中的作用,以及与雌、孕激素的关系。方法采用ELISA方法测定23例子宫肌瘤患者平滑肌瘤、正常子宫平滑肌组织及血清中IGF-1、IGF-1R的表达;同时用E IA方法测定血清雌二醇（E2）、孕酮（P）水平。选择30例健康妇女作为血清指标测定的对照组。结果（1）子宫平滑肌瘤组织IGF-1、IGF-1R的表达较正常子宫平滑肌高（P〈0.01）。（2）子宫肌瘤组血清IGF-1表达与对照组无统计学差异（P〉0.05）：IGF-1R表达较对照组增强（P〈0.01）。（3）观察组血清增生期、分泌期E2、P水平均与对照组无统计学差异（P〉0.05）。结论子宫平滑肌瘤组织中IGF-1、IGF-1R过度表达可能是子宫肌瘤发生的机制之一,雌、孕激素介导IGF-1对子宫肌瘤的作用,IGF-1对雌、孕激素诱导肌瘤细胞生长、分化主要以自分泌、旁分泌方式在局部起作用,IGF-1可能是子宫肌瘤生长的调节因子。     

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到。GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01%vs0.26±0.02%,P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡。