黑色素瘤缺乏因子2通过磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、凋亡的作用机制

目的探讨黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)对胰腺癌恶性细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过慢病毒转染技术构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1, 并分别通过定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证AIM2的mRNA及蛋白水平。通过BrdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞凋亡以及细胞周期实验检测过表达AIM2对胰腺癌细胞株功能的影响。通过转录组测序探究AIM2在胰腺癌中的作用机制并进行验证, 使用基因表达差异分析评估多组样本之间的差异, 组间差异采用t检验分析。结果慢病毒转染可成功构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株。BrdU增殖实验结果表明, BxPC-3和PANC-1细胞LV-AIM2-OE组的增殖能力显著低于LV-NC组(吸光度值:0.502±0.006比0.543±0.005、0.956±0.032比1.235±0.091, t=5.568、2.903, P<0.05);划痕及Transwell实验结果表明, 过表达AIM2后BxPC-3、PANC-1细胞的迁移[(51.960±4...     

LINC01287在甲状腺癌中的表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的:探究LINC01287在甲状腺癌中的表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法:收集16例甲状腺癌患者的癌组织及其癌旁组织(距癌组织3 cm)标本,体外培养人正常甲状腺上皮细胞TEC61及人甲状腺癌细胞(BCPAP、TPC-1、FTC-133、8505C、SW1736),qRT-PCR检测甲状腺癌组织和细胞中LINC01287表达情况。利用细胞转染技术分别将LINC01287-shRNA(sh-LINC01287)及其阴性对照(sh-NC)转染至FTC-133细胞中(sh-LINC01287组、sh-NC组),同时设置正常培养的对照(Control)组。MTT实验、克隆形成实验检测各组FTC-133细胞增殖情况;Transwell实验检测各组FTC-133细胞侵袭情况;Western Blot实验检测各组FTC-133细胞增殖、侵袭相关蛋白(细胞周期蛋白D1,Cyclin D1;神经型钙黏附蛋白,N-cadherin;基质金属蛋白酶9,MMP-9)表达情况。结果:LINC01287在甲状腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05);LINC01287在BCPAP、TPC-1、FTC-133、8505C、SW1736细胞中的表达水平均高于TEC61细胞,且在FTC-133细胞中最高(P<0.05),故选取FTC-133细胞进行后续实验;与Control组和sh-NC组比较,sh-LINC01287组FTC-133细胞的增殖率降低,克隆形成数、侵袭数及Cyclin D1、N-cadherin、MMP-9蛋白表达均减少(P<0.05)。结论:LINC01287在甲状腺癌中高表达,敲低LINC01287表达可抑制FTC-133细胞增殖和侵袭,LINC01287可能是甲状腺癌潜在的治疗靶点或预后生物标志物。     

微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

姜黄素调控LINC00491/miR-532-3p轴抑制前列腺癌发生发展的机制研究

目的 探讨姜黄素调控LINC00491/miR-532-3p轴抑制前列腺癌发生发展的机制。方法 取人前列腺癌细胞株22RV1体外培养后分为正常对照组、姜黄素组、姜黄素+si-LINC00491组、姜黄素+si-LINC00491+miR-532-3p inhibitor组。RT-PCR检测LINC00491、miR-532-3p表达水平；双荧光素酶实验检测LINC00491、miR-532-3p的靶向关系；细胞计数试剂盒8(CCK8)、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等肿瘤恶性行为；Western blot检测细胞增殖相关KI67、凋亡相关半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、迁移侵袭相关基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。取60只BALB/c裸小鼠建立前列腺癌皮下移植瘤模型，将建模成功的裸小鼠随机分为空白对照组、姜黄素组、姜黄素+oe-LINC00491组、oe-LINC00491组、姜黄素+sh-LINC00491组和sh-LINC00491组。观察瘤块大小、侵袭、转移和腹腔播散情况，记录动物生存期；RN...     

叉头框蛋白O3在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的分析叉头框蛋白O3(FOXO3)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞运动和增殖的影响。方法检索LinkedOmics数据库胰腺癌患者胰腺癌和癌旁组织FOXO3表达。Western印迹和实时定量聚合酶链反应检测胰腺癌细胞系和人胰腺星状细胞HPSC中FOXO3表达。选择低表达FOXO3的PANC-1、MIAPaCa-2胰腺癌细胞, 分别转染FOXO3过表达质粒和阴性对照质粒。克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和细胞周期检测各组胰腺癌细胞运动和增殖能力。结果 LinkedOmics数据库中, 64例胰腺癌患者癌组织中FOXO3蛋白相对表达水平明显低于癌旁组织(t=8.36, P<0.001)。PANC-1细胞过表达FOXO3后细胞克隆数为(30.0±6.6)个(40倍视野下计数), 低于阴性对照细胞的(92.7±6.7)个, 差异有统计学意义(t=11.54, P<0.001)。PANC-1和MIAPaCa-2在上调FOXO3表达后细胞划痕修复率较对照组显著下降。Transwell实验PANC-1细胞FOXO3过表达后(每个100倍视野下)穿膜数(21.0±6...     

长链非编码RNA HOST2对胰腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOST2对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、BxPC-3、HPAC中lncRNAHOST2表达水平。将Panc-1细胞分别转染siRNA-HOST2(si-HOST2组)和阴性对照序列(阴性对照组)后,用MTT法测定细胞增殖,细胞划痕和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,Westernblot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、Snail、Twist的表达。以无转染的Panc-1细胞为空白对照组。结果:与正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7相比,lncRNAHOST2在各胰腺癌细胞系中的表达均明显上调(均P0.05)。与空白对照组比较,si-HOST2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱,vimentin、Twist1、Snail蛋白相对表达量均明显下调(均P0.05),而阴性对照组上述指标均无明显变化(均P0.05)。结论:lncRNAHOST2在胰腺癌细胞中高表达,且与胰腺癌增殖、迁移和侵袭密切相关,其机制可能与调节EMT相关蛋白的表达有关。     

POLE2对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 探讨POLE2对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞侵袭迁移能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人支气管上皮样细胞BEAS-2B和NSCLC细胞A549、SPC-A1中POLE2的表达水平。构建POLE2过表达细胞模型,qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证转染效率。采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验检测NSCLC细胞的增殖能力,Transwell实验检测NSCLC细胞的侵袭迁移能力,qRT-PCR检测MMP9的表达水平。结果 人NSCLC细胞SPC-A1、A549中POLE2的表达水平显著高于人支气管上皮样细胞BEAS-2B（P<0.05）。过表达POLE2促进了A549细胞的增殖和侵袭迁移,上调了MMP9的表达（P<0.05）。结论 过表达POLE2可能通过上调MMP9促进NSCLC细胞的侵袭迁移。     

环状RNA circKDM4B调控肝癌细胞增殖及侵袭迁移的实验研究

目的 探索环状RNA circKDM4B对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响,明确其在肝癌进展中所发挥的调控作用。方法 采用核糖核酸酶R（RNase R）消化实验和荧光原位杂交实验（FISH）验证circKDM4B的环状结构稳定性及其在细胞中的定位;利用小干扰RNA（siRNA）敲减肝癌细胞circKDM4B的表达,并通过qRT-PCR实验验证敲减效率;采用细胞计数方法（CCK-8）实验、EdU增殖实验检测circKDM4B对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞技术检测其对肝癌细胞凋亡的影响;同时应用划痕实验、Transwell实验检测circKDM4B对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果 相较于线性KDM4B mRNA,circKDM4B对RNase R耐受性更加稳定,FISH结果显示circKDM4B主要定位于肝癌细胞质中;在转染了circKDM4B siRNA后,circKDM4B在肝癌细胞表达下调,而亲本基因KDM4B不受影响。CCK-8和EdU增殖实验结果显示,敲减circKDM4B可抑制肝癌细胞的增殖;流式细胞实验显示敲减circKDM4B可明显促进肝癌细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验表明敲减circKDM4B后肝癌细胞的侵袭和迁移能力明显减弱。结论 circKDM4B稳定表达于肝癌细胞质中,并具有促进肝癌细胞增殖、侵袭迁移、抑制肝癌细胞凋亡的能力,这提示circKDM4B有望成为新的肝癌治疗靶点。     

含V-Set免疫球蛋白域蛋白2对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响及机制

目的探究含V-Set免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及具体机制。方法质粒转染构建VSIG2敲低和过表达细胞系, 分为sh-VSIG2#1/sh-VSIG2#2组和oe-VSIG2组, 并分别以sh-NC和Vector组作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆测定胰腺癌细胞增殖能力。Transwell和划痕实验检测侵袭及迁移能力。KEGG对VSIG2相关基因进行通路富集分析, Western blot检测通路关键指标的表达量。以VSIG2过表达细胞系进行功能回复, Western blot检测通路指标表达量变化。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果 CCK-8结果显示, sh-VSIG2#1比sh-VSIG2#2组72 h吸光度值低于sh-NC组(1.122±0.056比0.997±0.063比1.561±0.072, t=8.876、8.994, P<0.05);oe-VSIG2组72 h吸光度值高于Vector组(2.103±0.102比1.604±0.089, t=12.21...     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

长链非编码RNA 909靶向调控miR-194-5p/DACH1轴对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景与目的:长链非编码RNA 909(LINC00909)是一个新发现的长度约为2 kb的长链非编码RNA(lncRNA),在胶质瘤和白血病中被报道发挥癌基因的作用.然而LINC00909在胰腺癌中的作用鲜有报道.本研究旨探讨LINC00909在胰腺癌中的表达及其对患者预后的影响,以及LINC00909与其调控网络对胰...     

分选蛋白17对胰腺癌细胞生物学性状的影响

目的:探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法:采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本,自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属医院肝胆外科,用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-...     

MAPK13调控胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化进程的机制研究

目的 本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用。方法 通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹及免疫组化染色验证MAPK13在肿瘤组织和细胞中的表达情况。进一步通过细胞转染构建MAPK13敲低(si-MAPK13)后,通过细胞活力实验检测胆管癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭性。最后,通过裸鼠成瘤实验检测MAPK13对体内成瘤及相关蛋白表达的影响。结果 本研究通过微阵列分析发现MAPK13在肿瘤组织中的表达存在显著差异,进一步通过qRT-PCR、蛋白印迹和免疫组化染色分析发现,与癌旁组织比较,MAPK13在mRNA和蛋白质水平的表达情况在肿瘤组织及细胞中均显著升高且差异具有统计学意义(t=27.92,6.90;均P<0.01)。进一步细胞活力检测表明,抑制MAPK13的表达后细胞增殖数量明显减少(F=32.13,P<0.01)。Transwell实验则显示细胞迁移和侵...     

沉默前列腺特异性膜抗原促进前列腺癌LNCAP细胞上皮-间质转化及迁移、侵袭的研究

目的 利用RNAi技术沉默LNCAP细胞中前列腺特异性膜抗原（PSMA）表达并检测表达情况,检测沉默PSMA后LNCAP细胞迁移及侵袭等生物学行为的变化情况,以及LNCAP细胞中上皮-间质转化标志蛋白的变化情况。方法 培养LNCAP细胞,分为si-PSMA组,阴性对照（negative control siRNA）组,抑制剂LY294002组和LY294002+si-PSMA组,采用qRT-PCR和Western blot技术检测沉默PSMA后LNCAP细胞中PSMA的mRNA和蛋白表达情况,通过Transwell小室穿透实验检测LNCAP细胞迁移及侵袭能力改变,通过Western blot蛋白印迹法检测E-cadherin、β-cadherin、vimentin,snail等细胞上皮-间质转化标志蛋白的表达情况以及p-Akt(ser473)蛋白表达情况。结果 与阴性对照组相比,si-PSMA组PSMA的mRNA和蛋白表达水平都明显降低（P<0.05）,Transwell结果显示迁移及侵袭细胞增多（P<0.01）,LY294002组细胞迁移及侵袭下调（P<0.05）,...     

IFITM1在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:干扰素诱导的跨膜蛋白1(IFITM1)是一种在淋巴细胞中转导同型黏附信号的膜复合物,在胰腺癌组织中表达量异常,但是其在胰腺癌中的作用机制则仍不清楚,因此,本研究初步探讨IFITM1的表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法:用Western blot法检测78例胰腺癌患者(32例转移,46例未转移)的癌组织和...     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

肿瘤相关巨噬细胞通过PI3K/Akt途径促进胰腺癌浸润迁移的研究

目的研究PI3K/Akt信号通路对胰腺癌细胞PANC-1浸润迁移能力的影响,进一步探讨肿瘤相关巨噬细胞促进胰腺癌发生发展的分子机制。 方法通过密度梯度离心法从健康成人外周血中分离单个核细胞,用IL-4体外诱导选择性激活的巨噬细胞(M2)。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平的变化,利用Transwell侵袭实验与划痕实验观察细胞浸润迁移能力的变化。 结果体外模拟胰腺癌微环境,将胰腺癌PANC-1细胞与不同激活状态的巨噬细胞共培养,证明M2可显著上调胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt的mRNA和蛋白水平,共培养20 h后可明显促进胰腺癌PANC-1细胞的浸润与迁移能力。 结论肿瘤相关巨噬细胞可通过PI3K/Akt信号通路促进胰腺癌细胞的浸润与迁移。     

长基因间非蛋白质编码RNA525在结直肠癌组织的表达及其对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响

目的观察长基因间非蛋白质编码RNA525(LIN00525)在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞体外增殖、侵袭的影响。方法收集2018年8月至2018年12月于复旦大学附属肿瘤医院大肠外科诊治患者的50对结肠癌及癌旁组织,通过实时定量聚合酶链式反应(Real time-PCR)检测50对样本中LINC00525的表达并分析其表达水平与临床病理参数的相关性;将LINC00525的过表达质粒转染SW480细胞,敲减质粒转染HCT-8细胞,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验、Transwell侵袭实验观察LINC00525对SW480及HCT-8细胞体外增殖、侵袭力的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)实验检测增殖相关分子增殖细胞核抗原(PCNA)及侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达探索LINC00525调控结直肠癌细胞增殖、侵袭的分子机制;应用SPSS 20.0统计软件分析,临床资料分析使用χ²检验,两样本均数间的比较采用Student’t检验。结果50对结直肠癌组织中LINC00525的表达显著高于癌旁组织(0.721±0.028比0.204±0.016,t=15.860,P<0.01),差异有统计学意义;LINC00525的表达水平与结直肠癌淋巴转移呈正相关(χ²=10.092,P<0.01),差异有统计学意义;CCK-8实验结果显示LINC00525高表达组的吸光度(A)值显著高于对照组(2.163±0.101比1.250±0.035,t=8.525,P<0.01),差异有统计学意义;敲减LINC00525组的A值显著低于对照组(0.717±0.102比1.483±0.103,t=5.305,P<0.01),差异有统计学意义;Transwell侵袭实验结果提示过表达LINC00525组的侵袭细胞数量显著高于对照组(45.670±6.936比87.670±4.910,t=4.942,P<0.01),差异有统计学意义;敲减LINC00525组的细胞侵袭数量显著低于对照组(81.670±8.570比43.330±5.364,t=3.791,P<0.05),差异有统计学意义;Western blot显示过表达LINC00525组PCNA及MMP-2的的表达量分别高于对照组(1.72比1.00,t=5.971,P<0.01;1.58比1.00,t=7.197,P<0.01),差异有统计学意义;敲减LINC00525组PCNA及MMP-2的表达量分别低于对照组(0.39比1.00,t=7.739,P<0.01;0.33比1.00,t=12.170,P<0.01),差异有统计学意义。结论LINC00525在结直肠癌组织中高表达,LINC00525通过调控PCNA及MMP-2的表达影响结直肠癌细胞增殖和侵袭。