六味地黄丸改善OLETF鼠肝脏胰岛素抵抗的实验研究

目的探讨六味地黄丸改善2型糖尿病大鼠模型中肝细胞胰岛素抵抗的作用机制。方法以正常LETO鼠为LETO组,
OLETF鼠分为不加药的对照组以及予六味地黄丸加药的干预组,分别于8、32、40周龄随机处死,收集肝组织。制作病理切片观
察各组肝脏组织形态学改变,RT-PCR检测PEPCK表达改变以及免疫印迹（Western blot）检测IRS-1、IRS-2蛋白表达。结果与
LETO组相比,对照组肝脏细胞随着时间延长出现明显的小叶结构破坏以及肝脏脂肪变性,而干预组小叶结构基本正常,仅有轻
度脂肪变性。RT-PCR检测显示对照组PEPCK表达显著高于LETO组(P<0.01),而给予六味地黄丸的干预组PEPCK的表达则
显著低于对照组(P<0.01)。免疫印迹检测对照组p-IRS-1和p-IRS-2蛋白表达水平显著低于LETO组以及干预组（P<0.05）。结
论六位地黄丸通过抑制肝脏中糖异生关键酶PEPCK的活性以及提高胰岛素信号通路中IRS-1和IRS-2的表达,改善肝细胞的
胰岛素抵抗。
     

花生四烯酸对高脂饮食大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出影响的研究

目的 观察花生四烯酸对大鼠全身胰岛素抵抗及肝糖输出紊乱的预防作用.方法 将230～250 g24只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常组(8例),高脂组(8例),高脂+花生四烯酸组即预防组(8例).饲养12周.饲养至第12周实验终点时进行口服葡萄糖耐受实验.断头处死各组处于空腹状态下的大鼠,取肝脏,蒽酮法测定肝糖原含量,并用RT-PCR法检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)及糖原合酶(GS)mRNA水平.结果 高脂组与正常对照组比较,肝糖原含量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数显著升高(P<0.01),但基础状态下体重差异无显著性.预防组和高脂组比较,肝糖原含量(P<0.05)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著降低,但与正常对照组比较,肝糖原舍量(P<0.01)、葡萄糖-胰岛素指数(P<0.01)显著升高.高脂组与正常对照组比较,G-6-Pase mRNA水平显著升高(P<0.01),PEPCKmRNA水平略有升高,但差异无显著性.预防组和高脂组比较,PEPCK mPNA水平(P<0.05)、G-6-PasemRNA水平显著降低(P<0.01),但3组大鼠GS mRNA差异没有显著性.结论 花生四烯酸预防高脂诱导的全身胰岛素抵抗和肝糖输出紊乱作用明显,但不彻底.相关的PEPCK、G-6-Pase mRNA水平显著降低,但GS mRNA水平没有显著性差异.     

脂联素对大鼠肝细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性影响的研究

目的:探讨脂联素对体外培养大鼠肝脏细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性影响,及其在胰岛素抵抗中的意义.方法:以BRL肝脏细胞株为细胞模型,分别用10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml脂联素处理细胞,用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法检测大鼠肝脏细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性.结果:与对照组比较,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶在脂联素处理24h后活性明显降低,且随脂联素浓度升高作用越明显,P＜0.05.葡萄糖激酶在脂联素处理24小时后,活性与对照组比较没有显著性差异,P＞0.5.结论:脂联素对葡萄糖激酶无明显的调节作用,而对于磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶具有显著的抑制作用.脂联素通过对肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性的调节,降低肝脏葡萄糖异生,减少肝糖输出,改善胰岛素抵抗.     

游离脂肪酸与胰岛素抵抗

肥胖是导致胰岛素抵抗、糖尿病发生的重要环境因素,而FFA是沟通肥胖与胰岛素抵抗的重要中间环节。肥胖、尤其是向心性肥胖人群,血清FFA的水平高出正常范围。FFA通过对骨骼肌、肝脏、β-细胞及其他内脏的作用,造成组织对血葡萄糖摄取障碍、胰岛素代偿性分泌增多、产生高胰岛素血     

胰岛素、环磷酸腺苷和皮质激素对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶启动子的顺反式调节

目的观察体外环磷酸腺苷(cAMP)、皮质激素(DEX)和胰岛素对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)550 bp启动子片段的顺反式作用.方法将重组的pGL2-PEPCK-Luc荧光素酶表达质粒通过脂质体转染法与内对照质粒pSV-β-Galactosidase共同转染大鼠肝肿瘤细胞系CBRH7919,通过荧光素酶报告系统观察胰岛素、cAMP和DEX对PEPCK启动子的调控作用.结果cAMP和DEX对PEPCK具有明显兴奋作用,两者同时刺激具有叠加效应.生理浓度下,胰岛素对基础状态及cAMP和DEX激活的PEPCK启动子均有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖性.结论550 bp(-600- 69)PEPCK调控序列在肝细胞内具有较完善的正负反馈调节机制,可以作为糖尿病基因治疗的候选基因.     

胰岛素抵抗模型建立及其应用研究

目的 探讨胰岛素抵抗模型的建立方法和二苯乙烯对血糖的调节作用。方法 1.给予Wistar大鼠自制脂肪乳建立胰岛素抵抗动物模型。2. 给予HepG2 细胞胰岛素,建立胰岛素抵抗(HepG2/IR)细胞模型。3.分别给予模型大鼠和HepG2/IR细胞二苯乙烯,观察二苯乙烯对血糖的调节作用。结果 给予脂肪乳后,大鼠的血糖和TG、TC、LDL、HDL分别升高了72.87%和16.21%、139.93%、56..93%、18.32%,与建模前比,差异具有显著性意义（P<0.01）;给予二苯乙烯, 模型组动物血糖和血脂水平比给药前明显降低（P<0.05～0.01）;HepG2/IR葡萄糖消耗量比对照组(HepG2)明显增加。结论 给予Wistar大鼠自制脂肪乳或给予HepG2 细胞胰岛素,可建立胰岛素抵抗模型;二苯乙烯具有降低模型动物血糖和血脂、增加HepG2/IR葡萄糖消耗量的作用。     

血清游离脂肪酸与2型糖尿病患者胰岛素抵抗的相关性研究

目的探讨空腹及餐后2h血清游离脂肪酸与2型糖尿病（T2DM）患者胰岛素抵抗的相关性。方法共收集T2DM患者85例,按照HbA1c检测值将其分为控制不良组（n=30）、控制一般或者良好组（n=55）。选取同期来我院进行健康体检的健康研究对象38例作为正常对照组。采用酶电极法对葡萄糖进行测定,酶联法对FFA进行测定,化学发光法对胰岛素进行测定,采用高效液相法对HbA1c进行测定,HOMA—IR用稳态模式评估。结果T2DM组与正常对照组比较HbA1c、FPG、2hPG、HOMA—IR、FFA及2hFFA各项指标的检测值均明显较高,差异具有统计学意义（P〈0．05）。与T2DM组中的控制良好组比较,控制不良组患者的HbAIc、FPG、2hPG、HOMA—IR、FFA及2hFFA各项指标均明显较高,差异有统计学意义（P〈0．05）。FFA、2hFFA明显正相关于HbA1c、FPG、2hPG、HOMA—IR（P〈0．05）。结论T2DM患者体内FFA水平的升高与胰岛素抵抗具有密切的关系,在T2DM的发病机制中具有重要的作用。     

游离脂肪酸与胰岛素抵抗关系的研究进展

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)形成的重要因素。IR发生机制十分复杂,目前尚不十分清楚。近年来,大量研究证实游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)是IR形成的重要因素。FFA影响胰岛素分泌、介导IR,并推测FFA为T2DM及IR相关疾病的重要因子,有望成为T2DM及相关疾病的治疗靶点。     

化痰活血法改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制研究

目的:研究化痰活血法对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯丙醇羧激酶(PEPCK)的影响与作用机制。方法:将健康的SD大鼠随机分为正常对照空白组和造模组,采用文献法建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型;模型鼠又随机分成三组,即胰苏灵组、罗格列酮组、模型组,分别于给药后测定血糖、血脂、胰岛素、胰岛素受体数目与结合力,4周后禁食处死大鼠,留取血清并剪取肝组织以检测GK、PEPCK。结果:胰苏灵在改善胰岛素敏感指数,降糖、降脂、降低FFA等指标方面与罗格列酮无显著性差异(P>0.05),且胰苏灵可减轻大鼠体质量,胰苏灵组大鼠GK、PEPCK活性与罗格列酮组无显著性差异(P>0.05)。结论:胰苏灵可通过增加肝脏细胞葡萄糖激酶的mRNA及其蛋白质的表达达到改善胰岛素抵抗,发挥治疗糖尿病的作用。     

2型糖尿病患者血清内脂素、游离脂肪酸与胰岛素抵抗的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清内脂素、游离脂肪酸（FFA）与胰岛素抵抗的相关性.方法 对119例T2DM患者和65例正常糖耐量对照者（NGT）,均测定血清内脂素、FFA和相关的临床指标,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和腰臀比,并对影响因素行相关分析.结果 T2DM患者血清内脂素、FFA水平高于NGT者[（4.7±2.5）与（1.7±0.9）ng/L,t=-11.831,P＜0.01;（1.65±0.69）与（0.61±0.21） mmol/L,t=-9.239,P＜0.01];T2DM伴胰岛素抵抗者（61例）血清内脂素、FFA水平明显高于T2DM不伴胰岛素抵抗者（58例）、正常对照者[（6.3±2.3）与（3.0±1.4）、（1.7±0.8）ng/L,F=133.306,P＜0.01;（2.16±0.45）与（1.12±0.46）、（0.61±0.21）mmol/L,F=260.169,P＜0.01].多元线性逐步回归分析显示FFA、空腹胰岛素、腰臀比是内脂素的独立相关因素（r值分别为0.564、0.267和0.188,均P＜0.05）.结论 T2DM患者内脂素和FFA水平显著升高,且与胰岛素抵抗关系密切.     

糖调节受损者早期胰岛素分泌功能与血清游离脂肪酸水平的关系

目的　研究糖调节受损 (IGR)者糖负荷后游离脂肪酸变化的特点及其与胰岛素分泌功能、胰岛素抵抗的关系。方法　将 35 4例研究对象分为正常糖耐量 (NGT)组 (2 4 0例 )和IGR组 (114例 ) ,IGR组再分为空腹血糖受损 (IFG ,13例 )、糖耐量受损 (IGT ,83例 )、合并IGT和IFG(IGT +IFG ,18例 ) 3个亚组。分别采用稳态模式评估法胰岛素抵抗指数 (HOMA IR)估测胰岛素抵抗 ,以糖负荷 30min净增胰岛素与净增葡萄糖的比值(△I30 /△G30 )评估早期胰岛素分泌能力 ,以糖负荷 30min及 12 0min血清游离脂肪酸 (FFA)下降百分率评价内源性胰岛素抑制脂解能力。结果　校正年龄、性别、体重指数 (BMI)后 ,IGR各亚组HOMA IR均较NGT组显著升高 (P <0 .0 1)。校正HOMA IR后 ,IGT亚组及IFG +IGT亚组的△I30 /△G30均显著低于NGT组 (P<0 .0 1) ,而IFG亚组与NGT组的差异无显著性。IGT亚组及IFG +IGT亚组糖负荷后早期FFA降低比率显著低于NGT组 (P <0 .0 5 ) ,但各组糖负荷 2h的FFA下降百分率的差异无显著性。糖负荷后早期FFA降低比率与糖负荷后胰岛素增加比率成负相关 (r =- 0 .4 6 ,P <0 .0 0 1)。结论　糖负荷后早期FFA的代谢与胰岛素的早期分泌功能密切相关 ,中国人IGT和IFG +IGT者存在糖负荷后早期FFA代谢异常 ,反映其存在早期胰     

Genistein reverses free fatty acid-induced insulin resistance in HepG2 hepatocytes through targeting JNK

This study investigated the effects and molecular mechanisms of genistein in improving insulin resistance induced by free fatty acids (FFAs) in HepG2 hepatocytes. A model of insulin resistance in HepG2 cells was established by adding palmitic acid (0.5 mmol/L) to the culture medium and the cells were treated by genistein. Glucose consumption of HepG2 cells was determined by glucose oxidase method. The levels of c-jun N-terminal kinase (JNK) phosphorylation, insulin receptor substrate-1 (IRS-1) Ser307 phosphorylation, JNK, IRS-1, phosphatidylinositol-3-kinase p85 (PI-3K p85) and glucose transporter 1 (GLUT1) proteins were detected by Western blotting. The results showed that after the treatment with palmitic acid for 24 h, the insulin-stimulated glucose transport in HepG2 cells was inhibited, and the glucose consumption was substantially reduced. Meanwhile, the expressions of IRS-1, PI-3K p85 protein and GLUT1 were obviously reduced, while the levels of JNK phosphorylation and IRS-1 Ser307 phosphorylation and the expression of JNK protein were significantly increased, as compared with cells of normal control. However, the aforementioned indices, which indicated the existence of insulin resistance, were reversed by genistein at 1-4 μmol/L in a dose-dependent manner. It was concluded that insulin resistance induced by FFAs in HepG2 hepatocytes could be improved by genistein. Genistein might reverse FFAs-induced insulin resistance in HepG2 cells by targeting JNK.     

己酮可可碱对人肝癌HepG2细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的 研究己酮可可碱(pentoxifylline, PTX)对人肝癌HepG₂细胞的放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法 应用MTT法检测PTX药物毒性实验,用克隆形成实验观察PTX对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析X射线照射对HepG₂细胞周期分布和PTX对放射引起的细胞周期阻滞的影响。结果 不同浓度的PTX作用于肝癌HepG₂细胞24 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,最适浓度为2 mmol/L。PTX能显著降低放射后HepG₂细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.31±0.16。单纯照射组照射可以导致HepG₂细胞G₂期阻滞,单纯照射组及照射6 Gy加2 mmol/L PTX组的细胞20 h G₂-M期比例分别为32.15%和19.52%,PTX能够去除放射引起的HepG₂细胞G₂期阻滞。结论 PTX对HepG₂细胞有放射增敏作用,其机制可能与PTX去除放射引起的G₂期阻滞等因素有关。     

短链脂肪酸对HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢的影响

目的:揭示肠道菌群产物短链脂肪酸(Short-chain fatty acids, SCFAs)对HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢的影响。方法:通过油红O染色法观察油酸钠建立的HepG2细胞脂质堆积模型,使用不同浓度的SCFAs(乙酸、丙酸、正丁酸)干预HepG2细胞脂质堆积模型,MTT法检测HepG2细胞存活率;TC、TG试剂盒检测HepG2细胞脂质堆积模型中TC、TG含量;Western blot检测HepG2细胞AMPK、p-AMPK、ACC和p-ACC等蛋白的表达量。结果:随着三种SCFAs浓度的升高,HepG2细胞活性逐渐降低(P<0.05);SCFAs干预HepG2细胞脂质堆积模型后TC、TG含量降低(P<0.05),并抑制脂质堆积模型组细胞内AMPK、ACC的磷酸化表达。结论:SCFAs对HepG2细胞活性、HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢以及蛋白表达均有影响,不同浓度不同种类的SCFAs干预结果有差异。     

半夏醇提取物对人肝癌HepG2细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨半夏醇提物对人肝癌细胞(HepG2)的抑制作用及其机制。方法:用半夏醇提物(PTE)与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,采用MTT比色法测定不同剂量组PTE对HepG2细胞生长的影响;采用流式细胞术分析PTE对其细胞周期分布的影响;免疫细胞化学法观察细胞周期调控相关蛋白cyclin D1、c-myc和β-catenin的表达。结果:PTE作用24 h、48 h和72 h对HepG2细胞的增殖均有显著抑制作用(P     

地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制研究

目的研究地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制。方法运用RT-PCR技术,检测地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、胰岛素受体(IR)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和2(GLUT2)基因表达的影响。结果地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表达;能够明显降低GLUT2基因mRNA的表达。结论地黄寡糖对HepG2胰岛素抵抗具有明显的改善作用,其机制可能与激活PPAR-α、调节HepG2内IR及GLUT2 mRNA的表达有关。