NADPH氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚

目的 探讨NADPH氧化酶在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化以及细胞外基质积聚中的作用。 方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞，静止24 h后，随机分为以下4组：正常对照组，AngⅡ（10^-7 mol/L）组，AngⅡ+ Los(洛沙坦,10 μmol/L)组及AngⅡ+DPI（NADPH氧化酶活性抑制剂，10 μmol/L）组。应用荧光染料（DCF）及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的产生。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚单位p47phox以及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）1、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、E钙黏蛋白（cadherin） mRNA的表达。Western印迹检测p47phox、α-SMA的蛋白表达。 结果 （1）外源性AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS的产生，刺激15 min后，ROS 的表达较对照组上升了(3.64±0.53)倍。DPI和洛沙坦可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生（P < 0.05）。（2）AngⅡ刺激腹膜间皮细胞后， NADPH氧化酶亚单位p47phox mRNA和蛋白的表达均呈上升趋势。洛沙坦和DPI可阻断由AngⅡ诱导的p47phox表达上调（P < 0.05）。（3） AngⅡ诱导α-SMA表达的上调以及 E-cadherin mRNA的下调, 洛沙坦和DPI可部分逆转AngⅡ的这种作用。（4）AngⅡ刺激8 h后可明显上调PAI-1的mRNA表达，为正常对照组的（3.06±0.77）倍。 洛沙坦和DPI可明显阻断PAI-1的表达上调（P < 0.05）。 结论 NADPH氧化酶依赖产生的ROS介导了AngⅡ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚。阻断AngⅡ的作用及抑制NADPH氧化酶的表达和活性可作为防治腹膜纤维化的潜在治疗靶点。     

丹参注射液对血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞PAI-1表达和ROS含量的影响

目的观察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1（PM-1）表达和活性氧（ROS）含量的影响,探讨丹参注射液抗肾小球硬化的机制。方法将培养的大鼠系膜细胞分为未干预组（N组）、AngⅡ-Ⅲ激组（A组,AnglI浓度为100nmol／L）、AngⅡ＋丹参干预组（按照丹参注射液浓度分为S1、S2和S3组,丹参注射液浓度分别为37．5g／L、75g／L和150g／L）以及单独丹参干预组（S组,丹参注射液浓度为150g／L）。S1、S2和岛组加入丹参注射液作用1h后,再加入AngⅡ（浓度为100nmol／L）共孵育24h。观察各组系膜细胞PAI-1mRNA和蛋白表达以及细胞ROS含量的变化。结果与N组相比,A组PAI-1mRNA和蛋白表达升高（P〈0．01）,S组PAI-1 mRNA和蛋白表达无差异（P〉0．05）;与A组相比,S1、S2、S3组PAI-1mRNA和蛋白表达降低（P〈0．01）。与N组相比,A组细胞R0s含量升高（P〈0．01）,S组细胞ROS含量无差异（P〉0．05）;与A组相比,S1组细胞ROS含量无差异（P〉0．05）,S2、s3组细胞ROS含量降低（P〈0．01）。结论AngⅡ通过刺激系膜细胞产生致肾纤维化因子,丹参注射液能抑制这些因子的产生。     

细胞外基质降解酶与肾脏

本文综述了在细胞外基质降解过程中最为重要的两个蛋白酶系统：纤溶酶原激活物／纤溶酶系统和基质金属蛋白酶系统，介绍这两个系统的组成，功能，调控，二者的相互关系以及二者在肾脏病理生理过程中的作用。     

细胞外基质降解酶与肾脏

本文综述了在细胞外基质降解过程中最为重要的两个蛋白酶系统：纤溶酶原激活物／纤溶酶系统和基质金属蛋白酶系统，介绍了这两个系统的组成、功能、调控、二者的相互关系以及二者在肾脏病理生理过程中的作用。     

血管紧张素Ⅱ在细胞外基质重塑中的作用

具有血管活性作用的八肽—血管紧张素Ⅱ近来被确认为真正的肾脏生长因子，它直接或间接通过其他细胞因子、生长因子、黏附分子，如转化生长因子β、结缔组织生长因子等的作用，刺激细胞增殖、胞外基质沉积，在肾脏的发育和纤维化病变中起重要作用。     

环加氧酶在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达及莫比可的作用机制研究

目的 观察环加氧酶(COX)在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达,比较选择性(COX-2抑制剂莫比可与消炎痛对COX、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)基因转录的影响。方法 将输尿管梗阻大鼠随机分成不用药组(U)、消炎痛组(I)和莫比可组(M),设假手术组(C)为对照。4周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-1、COX-2、PAI-1及TIMP-1的mRNA表达,免疫组织化学检测COX-1和COX-2的蛋白水平,并采用放射免疫法测定术侧肾脏残余尿液的血栓烷素B2(TXB2)浓度。结果 COX-1的mRNA和蛋白水平在4组间差异无显著性意义。U组大鼠尿TXB2浓度急剧上升,术肾PAI-1和TIMP-1的mRNA表达明显上调,COX-2的基因表达和蛋白质合成大幅增加。莫比可能够显著抑制上述基因的转录(P<0.05),而I组的数值则与U组相仿。M组和I组的尿TXB2浓度明显下降,尤以M组为著。结论 COX-2参与了UUO发生、发展的病理过程。选择性COX-2抑制剂能够从抑制COX-2活性、下调COX-2、PAI-1及TIMP-1的基因转录等多方面发挥其积极的治疗作用。     

脂联素拮抗血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞细胞外基质产生

Objective To investigate the effects of adiponectin on angiotensinⅡ-induced extracellular matrix production of mesangial cells (MCs) and its possible signaling pathway. Methods RT-PCR and indirect immunofluorescence examination were performed to detect the adiponectin receptors in MCs. Quantitative real-time PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to observe the effects of adiponectin on angiotensinⅡ-induced transforming growth factor β1 (TGF-β1) and fibronectin production of MCs. Western blotting was used to measure the ratio of p-AMPK to total AMPK. Results (1)Adiponectin receptors 1 and 2 were found in MCs. (2)The up-regulated mRNA and protein expression of TGF-?茁1 and fibronectin in MCs induced with 10-7 mol/L angiotensinⅡ (AngⅡ) was significantly inhibited by 10 mg/L adiponectin (P<0.05). (3)The p-AMPK/AMPK ratio was significantly increased after incubation with adiponectin for 15 min and 30 min (vs 0 min, P<0.05), which suggested that adiponectin could activate the AMPK signaling pathway in MCs. The activation of AMPK signaling pathway was blocked by 40 ?滋mol/L compound C, a specific inhibitor of AMPK. (4)The inhibitory effects of adiponectin on angiotensinⅡ-upregulated TGF-β1 and fibronectin expression in MCs were significantly relieved by 40 ?滋mol/L compound C (P<0.05). Conclusions There are adiponectin receptors 1 and 2 in MCs. Adiponectin has inhibitory effects on the angiotensinⅡ-upregulated TGF-β1 and fibronectin expression in MCs. AMPK signaling pathway may play an important role in the effects of adiponectin above-mentioned.     

血管紧张素Ⅱ在细胞外基质重塑中的作用

具有血管活性作用的八肽—血管紧张素Ⅱ近来被确认为真正的肾脏生长因子 ,它直接或间接通过其他细胞因子、生长因子、黏附分子 ,如转化生长因子β、结缔组织生长因子等的作用 ,刺激细胞增殖、胞外基质沉积 ,在肾脏的发育和纤维化病变中起重要作用。     

高糖对基质金属蛋白酶2及其抑制剂在人腹膜间皮细胞中表达的影响

目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)基质金属蛋白酶2(MMP2)及其组织抑制剂(TIMP)1、TIMP2基因及蛋白表达的影响,以及对人腹膜间皮下细胞外基质(ECM)降解的可能作用。方法 利用腹膜透析(腹透)患者腹透流出液标本原代培养HPMC并进行传代,采用半定量RT-PCR方法研究高糖高渗对HPMC的MMP2、TIMP1、TIMP2基因表达的影响。利用免疫组织化学(组化)及Zymography方法检测HPMC的MMP2、TIMP1、TIMP2蛋白表达。结果 HPMC存在MMP2、TIMP1、TIMP2基因及蛋白表达,4.25%葡萄糖显著上调HPMC的TIMP1基因表达(P<0.01),高渗对HPMC的TIMP1基因表达无明显影响(P>0.05),高糖高渗对HPMC的MMP2、TIMP2基因表达无明显影响(P>0.05)。结论 HPMC能够通过MMP/TIMP系统影响到腹膜ECM的降解,高糖可能通过诱导HPMC的TIMP1与MMP间表达失衡,在促进腹膜纤维化的进展中发挥一定作用。     

基质金属蛋白酶在糖尿病肾病作用中的研究

目的 探讨2型糖尿病及糖尿病肾病患者血清基质金属蛋白酶水平的变化及其相关影响因素.方法 选取2型糖尿病患者94例,其中2型糖尿病无蛋白尿组患者37例;微量蛋白尿组(尿白蛋白/肌酐为30 ～ 300 mg/g)27例;显著蛋白尿组患者(尿白蛋白/肌酐＞300mg/g)30例.健康体检者32名作为对照组.所有检测对象于清晨空腹抽肘静脉血,应用酶联免疫吸附法测定血清基质金属蛋白酶2及血浆纤溶酶原激活物抑制物1.结果 (1)微量蛋白尿组患者血清基质金属蛋白酶2水平为(4.3±4.1)μg/L,显著蛋白尿组患者为(4.6±4.1)μg/L,与正常对照组[2.8±0.4)μg/L]比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)微量蛋白尿组患者血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平为(69±19)μg/L,显著蛋白尿组患者为(69±18)μg/L,与正常对照组[(52±30)μg/L]比较差异有统计学意义(P＜0.05);(3)相关分析结果表明,血清基质金属蛋白酶2与血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平无相关(r =0.077,P=0.468);(4)在2型糖尿病患者中血清基质金属蛋白酶2水平与尿素氮、肌酐水平相关(r分别为0.370及0.468,P分别为0.00、0.000),血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平与空腹血糖、甘油三酯、高密度脂蛋白、尿酸呈正相关(r分别为0.196、0.342、-0.167、0.203,P分别为0.004、0.000、0.016、0.003).结论 2型糖尿病合并蛋白尿患者血清基质金属蛋白酶2及血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平升高,是2型糖尿病患者合并肾病的危险因素.     

血管紧张素Ⅱ对小鼠足细胞小窝蛋白1表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激及氯沙坦干预对足细胞小窝蛋白1（caveolin-1）表达的影响,探讨caveolin-1在足细胞损伤中的作用.方法 体外培养永生化小鼠足细胞（MPC）,AngⅡ（10-6mol/L）刺激不同时间（3 h、6h、12 h和24 h）;Losartan（10-6 mol/L）提前预处理3h后与AngⅡ（10-6 mol/L）共孵育6h,Hoechst-33342检测足细胞凋亡率,Western-blot法检测各组细胞caveolin-1蛋白表达,免疫荧光检测caveolin-1及其磷酸化水平.结果 ①AngⅡ刺激3h,足细胞即开始发生凋亡,随着刺激时间的延长,足细胞凋亡明显增多（P＜0.05）.②AngⅡ刺激不同时间caveolin-1表达总量无明显改变（P＞0.05）,从3h开始,caveolin-1磷酸化水平明显增高（P＜0.05）.③Losartan干预后caveolin-1磷酸化水平明显降低（P＜0.05）.结论 caveolin-1可能在AngⅡ诱导的足细胞损伤中发挥着重要的作用.     

血管紧张素Ⅱ诱导Toll样受体4在腹膜间皮细胞的表达及其对脂多糖诱导CD40表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对原代培养大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在脂多糖（LPS）诱导的核转录因子κB （NF-κB）活化及CD40表达中的作用。 方法 分离及培养RPMC。用不同浓度AngⅡ（10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L）刺激细胞及用10-7 mol/L AngⅡ刺激细胞不同时间（mRNA为1、2、4、8、12、24、48 h和蛋白为6、12、24、36、48 h），观察血管紧张素1型受体（AT1R）阻滞剂洛沙坦（10－5 mol/L）和血管紧张素2型受体（AT2R）阻滞剂PD123177（10-5 mol/L）对AngⅡ诱导TLR4表达的影响。将细胞随机分为下列4组：对照组、AngⅡ (10－7 mol/L)组、LPS(1 mg/L)组、AngⅡ (10－7 mol/L)+LPS(1 mg/L)组，观察AngⅡ对LPS诱导的NF-κB激活和CD40表达的影响。RT-PCR检测TLR4、CD40 mRNA表达；Western印迹检测TLR4、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB（p-p65）蛋白表达；免疫荧光检测细胞NF-κB p65亚单位的表达及分布。 结果 (1)10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L AngⅡ作用RPMC 12 h，TLR4 mRNA表达分别增加70.5%、89.5%、102.9%和121.9%；作用24 h TLR4蛋白表达分别增加12.1%、27.7%、51.2%和41.6%。AngⅡ（10－7 mol/L）作用RPMC不同时间，TLR4 mRNA表达高峰为8 h和12 h（P < 0.01），蛋白表达高峰为12 h和24 h（P < 0.01）。(2)洛沙坦阻断后，AngⅡ诱导的TLR4表达与未阻断组比较，下调33.5%（P < 0.05）。PD123177对AngⅡ诱导的TLR4表达无显著影响（P > 0.05）。(3) 与正常对照组比较，LPS作用60 min p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调362.6%（P < 0.01）和67.4%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调299.9%（P < 0.01）；与LPS组比较，AngⅡ预刺激24 h加LPS作用60 min，p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调49.1%（P < 0.01）和29.3%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调56.8%（P < 0.01）。(4)免疫荧光结果显示正常对照组与AngⅡ组细胞中，p65信号定位于细胞胞质；LPS作用60 min，p65信号从胞质进入胞核；AngⅡ+LPS组NF-κB p65胞核信号显著增强。 结论 AngⅡ呈浓度、时间依赖性诱导RPMC TLR4表达，并显著增强LPS诱导NF-κB激活及CD40的表达。提示腹膜组织局部产生的AngⅡ可能对LPS诱导的腹膜组织炎性反应具有放大作用。     

血管紧张素Ⅱ对肿瘤发生发展影响的研究进展

肿瘤的发生发展与新生血管生成、细胞外基质降解密切相关。近年来有较多研究显示血管紧张素Ⅱ与肿瘤发生发展之间有密切关系,现就此进行综述。     

血管紧张素Ⅱ与腹膜纤维化的研究进展

腹膜纤维化为腹膜透析（PD）的主要并发症之一，可导致包裹性腹膜硬化（EPS）及超滤衰竭的发生，是长期PD患者技术失败并最终退出PD的主要原因。非生理性腹膜透析液的慢性刺激和反复腹膜透析相关感染引起腹膜问皮细胞损伤是腹膜纤维化发生的始动因素，但具体发病机制不明。肾素一血管紧张素系统（RAS）具有调节血压的作用，其过度活化会引起靶器官损伤。体内和体外研究皆证实，在不同器官如肾脏和心脏的纤维化过程中RAS皆发挥重要作用。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是RAS的主要效应因子，AngⅡ在腹膜纤维化发病过程中所起的作用是近年来人们开始重视的问题。     

纤溶酶原激活物抑制因子1在腹膜透析患者中的表达变化及对基质金属蛋白酶-2/血管内皮生长因子/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的调控作用

目的 揭示纤溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)在腹膜透析患者中的表达及其功能.方法 选择100例腹膜透析患者作为研究对象,透析7个月后,根据腹膜平衡试验结果将患者分为高转运组和低转运组.透析1个月时和7个月时,使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测所有患者透...     

血管紧张素Ⅱ诱导足细胞c-Abl的表达改变

目的 探讨血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导下大鼠肾脏及条件永生性小鼠足细胞c-Abl的表达变化.方法 采用AngⅡ泵(400ng·kg-1·min-1)植入SD大鼠皮下的方法建立AngⅡ输注模型,24只大鼠成模后被随机分为AngⅡ输注2周组、AngⅡ输注4周组、AngⅡ输注+替米沙坦(ARB,3 mg·kg-1·min-1)干预2周组及4周组,同时设生理盐水输注组和健康对照组,每组6只.分别于成模后2周末、4周末处死大鼠取肾.电镜下观察肾脏足细胞超微结构的改变;免疫荧光法检测肾脏c-Abl表达;实时PCR及Western印迹检测c-Abl mRNA及蛋白水平的改变.对于体外培养条件永生性小鼠足细胞,免疫荧光法检测足细胞肾脏c-Abl的表达,实时PCR及Western印迹法检测足细胞在AngⅡ不同作用浓度(10-9 mol/L～10-6 mol/L)及不同作用时间点(0h、3h、6h、12 h、24 h)c-Abl mRNA和蛋白水平的变化.结果 (1)免疫荧光检测结果显示肾脏足细胞有c-Abl表达;实时PCR及Western印迹结果显示AngⅡ输注2周组和4周组大鼠肾脏c-Abl表达增加(P＜0.05),ARB干预组大鼠肾脏c-Abl表达较同期AngⅡ输注组均有降低(P＜0.05).(2)体外培养的条件永生性小鼠足细胞胞质及胞核有c-Abl表达.AngⅡ可诱导培养的小鼠足细胞c-Abl mRNA及蛋白表达增加(P＜0.05),且呈时间和剂量依赖性.结论 c-Abl在肾足细胞及体外培养足细胞均有表达,AngⅡ可诱导c-Abl表达上调.c-Abl可能参与了AngⅡ诱导的足细胞损伤.     

血管紧张素Ⅱ1A型受体基因对糖尿病嵌合体小鼠肾脏细胞外基质重塑的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）IA型（AT1A）受体基因对糖尿病嵌合体（chimeric）小鼠肾脏细胞外基质的影响。方法 嵌合体小鼠全身组织包括肾脏由AngⅡ1A型受体（ATl．）野生型细胞（ATl^＋／＋）和AngⅡ受体AT1A基因敲除细胞（AT1A-／-）两组不同克隆来源的细胞组成。在AT1A嵌合体小鼠腹腔内注射链尿佐菌素（STZ，300mg／kg），诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作连续冰冻切片。β半乳糖苷酶（LacZ）染色区分不同基因型的肾小球。PAS染色检测其细胞外基质的表达。免疫组化方法检测转化生长因子（TGF）β1、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）1、终末糖基化产物（AGE）、硝基酪氨酸（nitrotyrosine）的表达。比较两种基因型肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。结果 在糖尿病状态下，AT1A＋／＋和AT1A-／-小鼠肾小球细胞外基质均较对照组明显增多（P〈0．05）。两种基因型相比，AT1A-／-基因型肾小球的表达绝对值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05）。但从正常状态到糖尿病形成过程中，其升高幅度却显著低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。各种细胞因子在糖尿病状态下的表达均显著增加（P〈0．05），AT1A-／-基因型肾小球的绝对数值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05），但AT1A-／-基因型肾小球细胞因子表达的变化幅度低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。结论 AT1A基因缺失使得部分肾小球代偿性上调TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达。AT1A受体在一定程度上影响了TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达而参与了糖尿病小鼠肾脏细胞外基质的重塑，但并非独立决定因素。     

血管紧张素Ⅱ与肝星状细胞的研究进展

肝星状细胞是肝纤维化和肝硬化发生和发展的中心环节，血管紧张素Ⅱ是一种重要的血管活性物质，本文就血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞生物学行为的影响作一综述。     

血管紧张素Ⅱ与肝星状细胞的研究进展

肝星状细胞是肝纤维化和肝硬化发生和发展的中心环节,血管紧张素Ⅱ是一种重要的血管活性物质,本文就血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞生物学行为的影响作一综述。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对肝星状细胞收缩的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的肝星状细胞收缩的影响。方法采用HSC-T6肝星状细胞系作为活化的肝星状细胞的研究模型。将培养的肝星状细胞随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ(1×10-9～1×10-5)mol／L组、受体拮抗剂组和血管紧张素Ⅱ+受体拮抗剂组,继续培养48 h后,比较胶原晶格收缩面积的变化,并绘制收缩的量效关系曲线和时效关系曲线。结果血管紧张素Ⅱ各浓度组,胶原晶格的收缩面积比较对照组均明显增加(P<0．05)。随着血管紧张素Ⅱ浓度的升高,胶原晶格的收缩面积逐渐增大,量效曲线呈近似直线的正相关关系;而且随着血管紧张素Ⅱ作用时间的延长,胶原晶格的收缩面积逐渐增大,在48 h之内呈时间依赖性。血管紧张素Ⅱ作用48 h后,胶原晶格面积为(379．337±37．755)mm2,同时加入受体拮抗剂,面积为(540．803±70．018)mm2,胶原晶格的收缩程度比较血管紧张素Ⅱ组明显减轻(P<0．05)。结论血管紧张素Ⅱ能够剂量依赖性和时间依赖性地促进肝星状细胞的收缩,而血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂能够抑制血管紧张素Ⅱ引起的肝星状细胞的收缩。