脂联素对PDGF诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨脂联素（adiponectin,ADPN）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的影响。方法：脂联素预孵系膜细胞,采用PDGF-BB刺激系膜细胞,应用MTT法检测细胞增殖,应用Western法检测增殖细胞核抗原PCNA、凋亡抑制蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果：（1）脂联素抑制PDGF-BB所致的系膜细胞增殖,与单用PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。（2）脂联素抑制PDGF-BB所致系膜细胞Bcl-2的表达,促进Bax蛋白的表达,与PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：PDGF-BB能够促进系膜细胞增殖,使凋亡抑制蛋白Bcl-2表达增加,而促凋亡蛋白Bax表达减少。加入脂联素干预后通过下调Bcl-2,上调Bax的表达而抑制了由PDGF-BB引起的系膜细胞增殖。     

醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂（ARI）影响血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）促体外培养大鼠系膜细胞（MsC）增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路（ERK、JNK及p38）抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂（ARI）对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果（1）ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用（P〈0.05）,而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;（2）ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。（3）PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化（P〈0.05）,对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

细胞外信号调节激酶和转化生长因子β1在哮喘气道重塑中的作用以及糖皮激素的调控

目的 研究细胞外信号调节激酶（ERK）和转化生长因子β1（TGF—β1）在哮喘气道重塑中的作用,探讨糖皮质激素对ERK、TGF—β1及哮喘气道重塑的调控。方法建立慢性哮喘动物模型,将30只SD大鼠随机分对照组、哮喘组、地塞米松干预组（DM组）。免疫组化测定肺组织中磷酸化的ERK（P-ERK）,ELISA测定血清中TGF—β1含量。体外培养大鼠气道上皮细胞,以BB型血小板源性生长因子（PDGF—BB）、U0126、布地奈德（BUD）作为工具药干预细胞,Western印迹检测细胞ERK磷酸化水平,ELISA法检测细胞上清液TGF—β1含量。结果哮喘组P—ERK平均吸光度和TGF—β1含量[分别为（31．1±2．2）和（28．1±7．4）μg/L]均较对照组[（12．8±2．4）和（13．6±2．7）μg/L]高（P〈0．01）,DM组[分别为（18．7±3．1）和（15．0±3．2）μg/L]较哮喘组低（P均〈0．01）。ERK的磷酸化与PDGF—BB存在浓度依赖关系,50μg/L时ERK磷酸化水平最高,高于对照组（P〈0．01）;U0126和BUD均可抑制ERK的磷酸化;各处理组细胞上清TGF—β1差异无统计学意义。结论ERK磷酸化、TGF—β1在支气管哮喘气道重塑中起重要作用;PDGF—BB不能通过ERK磷酸化诱导正常大鼠气管上皮细胞产生释放TGF—β1;糖皮质激素能抑制ERK磷酸化。     

Ripasudil对PDGF-BB诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的：研究ripasudil对血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）-BB诱导人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary arterial smooth cells,HPASMCs）增殖和迁移的影响及其相关机制。方法：培养HPASMCs,随机分为control组、PDGF-BB组、PDGF+ripasudil组、ripasudil组。采用CCK-8法检测细胞活力;EdU掺入法检测HPASMCs增殖;Transwell实验检测HPASMCs迁移;Real Time PCR检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2 mRNA表达;Western blot检测MMP-2蛋白表达以及肌球蛋白磷酸酶目标亚基1（myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1）、细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellar regulated protein kinases 1/2,ERK1/2）、p38激酶和蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/Akt）的磷酸化。结果：与control组相比,ripasudil能显著抑制PDGF诱导HPASMCs增殖及迁移（P＜0.01）,降低MMP-2 mRNA及蛋白的表达（P＜0.05）,下调MYPT1、ERK1/2、p38及Akt的磷酸化（P＜0.05）。结论：Ripasudil抑制PDGF-BB诱导的HPASMCs增殖和迁移,可能与下调MYPT1、ERK1/2、p38及Akt的磷酸化有关。Rho激酶抑制剂ripasudil可能是治疗肺动脉高压的潜在药物。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca~(2 )]_i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。　方法以体外培养的系膜细胞为研究对象 ,激光共聚焦显微术结合Fura- 3染色法 ,动态测定细胞 [Ca2 ]i,MTT法测定细胞增殖。　结果血小板衍生生长因子 (PDGF) -BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高 ,并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF -BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时 ,对细胞游离钙却无影响。　结论肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高和细胞增殖之间存在着正性关联 ,但 [Ca2 ]i 的升高并非细胞增殖的唯一途径     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞[Ca2+]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系. 方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法,动态测定细胞[Ca2+]i,MTT法测定细胞增殖. 结果血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高,并促进细胞增殖.钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖.中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时,对细胞游离钙却无影响. 结论肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联,但[Ca2+]i的升高并非细胞增殖的唯一途径.     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

蟾蜍灵对PDGF—BB诱导的系膜细胞纤溶系统的影响

目的观察蟾蜍灵对血小板源性生长因子（plate derived growth factor-BB,PDGF-BB）诱导的系膜细胞（mesangial cell,MC）PAI-1、u—PA、t—PA的表达影响,探讨其对系膜细胞纤溶酶原／纤溶酶系统的作用。方法PDGF（20ng/ml）刺激体外培养的系膜细胞12h后,加入0．08μM蟾蜍灵干预12h,用ELISA法检测细胞上清培养液中PAI-1的表达量;RT-PCR法测定PAI-1、u—PA、t—PA基因表达变化。结果PDGF—BB可诱导MC中PAI-1的mRNA表达上调,并且表达增加,u—PA、t—PAmRNA转录下调;0．08μM蟾蜍灵可下调PDGF诱导的系膜细胞的PAI-1mRNA,上调μ-PA、t-PAmR-NA的转录,并抑制PAI—1的表达。0．08μM蟾蜍灵对正常系膜细胞无明显影响（P〉0．05）。结论蟾蜍灵可通过促进细胞外基质降解来抑制PDGF—BB诱导的肾小球硬化。     

紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。     

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达;同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平,并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低,且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌,从而发挥抗肾纤维化作用。     

益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的调节作用

①目的观察自拟中药复方益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）分泌细胞外基质的抑制作用。②方法将1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1mg/mL益肾蠲湿合剂的提取液作用于含10%血清DMEM培养的GMC,分别于24、48和72h后收集培养上清,采用Elisa法检测上清中透明质酸（hyaluronic acid,HA）、纤维连结蛋白（FN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。③结果 10%血清促进了GMC分泌HA、FN和ColIV,但这种作用可明显被不同浓度的益肾蠲湿合剂所抑制,并且其抑制程度随药物浓度的增加而增加。④结论益肾蠲湿合剂可以抑制体外培养的GMC分泌HA、FN和ColIV,推测这种作用是其治疗慢性肾小球疾病的主要机制之一。     

丹参素对PDGF-BB刺激下肝星状细胞的抑制作用

目的观察丹参素对PDGF-BB刺激下大鼠肝星状细胞活化增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成与分泌,ERK1/2和PI3K通道蛋白表达的影响,探讨丹参素抑制肝纤维化的分子机制。方法用不同浓度丹参素(0.250、0.125、0.062 mmol/L)、ERK通道特异性抑制剂UO126(20 nmol/L)和PI3K通道特异性抑制剂LY294002(20 nmol/L)分别作用于经血小板衍生生长因子PDGF-BB(10 ng/ml)处理的大鼠肝星状细胞(HSC)48 h,CCK8法检测HSC增殖活性,免疫化学染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌,Western blot测定ERK1/2、p-ERK1/2、AKT和p-AKT蛋白表达。结果 PDGF-BB 10 ng/ml处理后,HSC增殖明显增加(0.139±0.009),丹参素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用,并随丹参素浓度增加(0.062、0.125、0.250 mmol/L)细胞增殖受到的抑制作用越强(0.102±0.008、0.083±0.007、0.066±0.014,P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌均显著减少(P<0.05),p-ERK1/2和p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论丹参素可通过抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖和活化,同时抑制与肝纤维化密切相关的MAPK、PI3K途径中ERK、AKT蛋白的磷酸化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能与抑制ERK1/2和PI3K信号转导通路有关。     

RNA干扰下调Gremlin表达对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌FN、ColⅣ的影响

目的探讨在高糖培养条件下,应用慢病毒介导的RNA干扰下调Gremlin表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)分泌纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响及机制。方法构建Gremlin基因特异性的短发夹双链RNA(shRNA)慢病毒GREM1-RNAi-LV,感染RMCs后,分为5.5 mmol/L葡萄糖组、30 mmol/L葡萄糖组、30 mmol/L葡萄糖+GREM1-RNAi-LV组及30 mmol/L葡萄糖+NC-GFP-LV(感染携带绿色荧光蛋白的阴性对照慢病毒)组,分别处理48 h,RT-PCR检测Gremlin mRNA表达,Western Blot检测Gremlin蛋白表达,ELISA法检测细胞上清FN、ColⅣ蛋白表达变化。结果与5.5 mmol/L葡萄糖组相比,30 mmol/L葡萄糖组Gremlin mRNA和蛋白水平显著升高(P均<0.05),细胞外基质分泌FN、ColⅣ蛋白增加(P均<0.05),而RNA干扰能下调高糖诱导的Gremlin mRNA与蛋白高表达(P<0.05),降低细胞外基质FN、ColⅣ蛋白分泌(P<0.05)。结论慢病毒介导的RNA干扰可明显抑制高糖诱导的Gremlin高表达,降低细胞外基质分泌,改善肾脏纤维化,可能是一个预防和治疗糖尿病肾病新型的潜在靶点。     

银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用

目的: 探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法: 高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00 mg·L^-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果: MTT检测,与高糖对照组比较, 50.000 mg·L^-1GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000 和50.000 mg·L^-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000 mg·L^-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00 mg·L^-1GBE 组Col Ⅳ和FN水平均明显降低(P<0.01), 0.50 mg·L^-1GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00 mg·L^-1总黄酮组Col Ⅳ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1总内脂组Col Ⅳ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1内脂 C 组FN水平降低(P<0.05)。结论: GBE在高浓度时(50.000 mg·L^-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500 mg·L^-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。     

莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的 研究莪术醇（curcumol）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法 用不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）处理瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）作为不同浓度莪术醇组;用20 μmol/L 蛋白激酶（ERK）信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐（ISO）和160 mg/L莪术醇处理KF细胞,记为curcumol 160 mg/L+ISO组,Western blot检测KF细胞中增殖蛋白（Cyclin D1、PCNA）、纤维化标记蛋白（Col1A1、Col3A1、α-SMA）、凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3）、ERK信号通路蛋白（p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf）表达水平,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果 不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量,抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达,抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达,提高Bax、cleaved caspase-3表达量,抑制KF细胞增殖、胶原合成,促进细胞凋亡,抑制ERK信号通路（P<0.05）。ERK信号通路激活剂ISO（20 μmol/L）可逆转莪术醇（160 mg/L）对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论 莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。