化瘀生脉方对血管吻合术后内皮细胞愈合影响的实验研究

为研究化瘀生脉方对小血管吻合术后内皮细胞愈合机制的影响。采用SD大鼠尾动脉切断后作端端吻合的模型。按用药不同随机分成化瘀生脉组和空白对照组,每组16只。每组再按血管吻合术后22、4、48小时和7天切取标本时间的不同随机分为4组。样本用扫描电镜观察吻合口处内皮细胞的修复过程。结果显示术后2、24、48小时和7天,化瘀生脉组缝线表面完全覆盖率均高于空白对照组,经成组设计两样本比较的秩和检验,统计学上有显著性差异。术后2、24、48小时,化瘀生脉组在针孔及缝线表面的覆盖成分以纤维素、内皮细胞为主,构成比不同于空白对照组,经χ2检验,其差异有非常显著性意义(P<0.01)。表明化瘀生脉方具有抑制血小板在针孔处聚集的作用,能够促进纤维素对针孔及缝线表面的覆盖,能够促进内皮细胞的生长,从而可以防治术后血栓形成。     

生脉成骨胶囊对激素性股骨头坏死血管内皮细胞功能的调节及意义

在组织的发育、改建和修复的过程中,离不开生长因子的参与作用.特别是在骨骼的形成、骨折的愈合与骨骼的改建过程.股骨头坏死是一个十分复杂的过程,在坏死骨的修复与重建的过程之中,血管与骨的新生是一个病理逆转的关键.     

生脉成骨胶囊对大鼠活血化瘀作用的实验研究

目的：通过药效学实验研究，观察生脉成骨胶囊的活血化瘀作用。方法：选取SD雄性大鼠，随机分为正常对照组、模型组、川芎嗪组、生脉成骨胶囊（3个剂量）组，灌胃给药20d,观察生脉成骨胶囊对大鼠肠系膜微循环的影响及对大鼠急性血瘀模型血流变学的影响。结果：生脉成骨胶囊能显著提高微循环障碍状态下血液流速和血流态，能显著降低全血比粘度、血浆比粘度和血沉。结论：生脉成骨胶囊具有改善微循环和改善瘀血状态下血液流变性的作用。     

生脉成骨方对股骨头坏死I型胶原表达的调节作用研究

目的　研究生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原mRNA表达的影响以揭示其作用机制。方法　以内毒素加甲基强的松注射制备兔骨坏死模型 ,分为模型组及生脉成骨方组 ,分批于用药后 4,8,12周处死 ,于原位杂交法测定骨Ⅰ型胶原表达 ,进行病理学检查 ,并与正常对照组比较。结果　模型组各时段成骨细胞及骨髓基质细胞内的Ⅰ型胶原mRNA的阳性表达减少 ;中药组 4周时mRNA的表达信号强度和量稍弱于正常组而稍高于模型组 ,8周和 12周时其信号强度和量以及阳性表达的骨髓基质细胞分布进一步改善 ,接近于正常组。结论　生脉成骨方在股骨头坏死的治疗中能促进成骨细胞功能活跃 ,增加骨髓基质细胞向前成骨细胞的分化 ,促进Ⅰ型胶原的合成     

凉血通瘀方对细菌内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的：研究凉血通瘀方对细菌内毒素致损伤的血管内皮细胞超微结构的影响。方法：应用体外细胞培养方法。以细菌内毒素（LPS）造成人静脉血管内皮细胞（HUVECs）损伤模型,通过MTT法和细胞上清液中NO含量的检测,研究凉血通瘀方对细菌内毒素致损伤的血管内皮细胞的保护作用。结果：给予LPS刺激24h、36h、48h后。HUVECs对MTT的还原能力下降,培养液中的MTT还原产物含量减少,OD值显著低于正常对照组;凉血通瘀方大、中、小剂量组HUVECs对MTT的还原能力均明显优于模型组。同时．凉血通瘀方在不影响细胞存活率的情况下,可以明显降低LPS刺激血管内皮细胞24h后NO的释放量。结论：凉血通瘀方能明显拮抗血管内皮细胞由于LPS刺激引起的直接损伤作用。     

生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原表达的调节作用研究

目的 研究生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原mRNA表达的影响以揭示其作用机制。方法 以内毒素加甲基强的松注射制备兔骨坏死模型。分为模型组及生脉成骨方组。分批于用药后4，8，12周处死，于原位杂交法测定骨Ⅰ型胶原表达，进行病理学检查。并与正常对照组比较。结果 模型组各时段成骨细胞及骨髓基质细胞内的Ⅰ型胶原mRNA的阳性表达减少；中药组4周时mRNA的表达信号强度和量稍弱于正常组而稍高于模型组。8周和12周时其信号强度和量以及阳性表达的骨髓基质细胞分布进一步改善，接近于正常组。结论 生脉成骨方在股骨头坏死的治疗中能促进成骨细胞功能活跃，增加骨髓基质细胞向前成骨细胞的分化，促进Ⅰ型胶原的合成。     

凉血通淤方对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 通过离体细胞实验观察凉血通淤方对H2O2氧化损伤的血管内皮细胞(VEC)的保护作用.方法 建立体外H2O2氧化损伤模型,采用MTT法观察凉血通淤方对VEC增殖的影响,流式细胞仪检测凉血通淤方对VEC的影响,并通过光镜和电镜进行形态学观察.结果 MTT结果显示凉血通淤方大剂量组OD值比H2O2组明显增高(P<0.01);光镜结果显示凉血通淤方大剂量组的细胞形态基本正常;电镜结果显示凉血通淤方大剂量组的细胞空泡明显减少.流式细胞仪检测结果显示凉血通淤方组的细胞碎片率较H2O2模型组明显降低.结论 凉血通淤方可一定程度保护氧化损伤的血管内皮细胞.     

生脉成骨方与动脉灌注川芎嗪对兔股骨头坏死促成骨作用及DR评价

目的：探讨x线检查评价生脉成骨方与动脉灌注川芎嗪联合用药对兔股骨头坏死促成骨的疗效。方法：新西兰大白兔股骨头坏死模型经生脉成骨方灌胃给药与动脉灌注不同剂量川芎嗪联合用药,观察各组股骨头坏死修复程度的x线表现。结果：各实验组坏死股骨头DR均表现骨小梁增粗,增多,股骨头塌陷程度不同,以川芎嗪中、高剂量组坏死骨修复程度最佳。结论：生脉成骨方具有促成骨疗效,与动脉灌注川芎嗪联合用药疗效更佳。     

通络生骨胶囊对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察通络生骨胶囊（TLSGC）对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路初步探索其作用机制。方法 取正常SD大鼠胸主动脉环,用甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 g·L^-1）和（或）血管内皮细胞生长因子（VEGF,20 μg·L^-1）体外干预,加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）连续作用5 d,观察血管环芽出的微生血管数目、长度和面积;此外,以甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 μg·L^-1）加入由VEGF（20 μg·L^-1）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,再加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）,然后分别采用transwell迁移,transwell侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的迁移、侵袭及管腔形成能力,并以硝酸还原酶法检测细胞上清中一氧化氮（NO）含量,干粉法检测细胞上清中内皮素-1（ET-1）含量,蛋白免疫印迹法检测细胞中血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）,ERK,磷酸化（p）-ERK,MEK和p-MEK蛋白表达量。结果 与正常组比较,MPS能明显抑制由VEGF诱导的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,降低NO并升高ET-1含量,MPS还能明显减少由VEGF诱导的VEGFR2,p-MEK和p-ERK在HUVEC中的蛋白含量（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,TLSGC能剂量依赖地改善由MPS降低的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,提高HUVEC中的NO,VEGFR2,p-MEK和p-ERK蛋白含量并降低ET-1含量（P<0.05,P<0.01）。结论 TLSGC对糖皮质激素所致血管内皮细胞血管生成和分泌功能的损伤具有保护作用,其机制可能与活化MEK/ERK信号通路有关。     

降糖通脉方对葡萄糖、胰岛素和氧化低密度脂蛋白诱导损伤的血管内皮细胞ET-1、NO的影响

目的:观察降糖通脉方对由葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐带静脉内皮细胞损伤模型为受试对象,观察降糖通脉方(JTTMF)对该损伤细胞膜型的保护作用。各实验组细胞分别施加不同处理因素48小时后,观察各组细胞活性及细胞培养液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量的变化。结果:各组细胞继续培养48小时后,模型组细胞活力较正常组明显下降(P<0·01),NO含量明显下降(P<0·05),ET-1含量明显升高(P<0·05),而不同剂量的JTTMF用药后可以显著地改善细胞活力(P<0·05),显著升高NO含量(P<0·01),抑制ET-1分泌(P<0·05)。结论:降糖通脉方具有一定的保护血管内皮细胞的作用,可能与调节血管舒缩功能有关。     

灵芝对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的抗脂质过氧化作用

目的 观察灵芝对培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的抗脂质过氧化作用，探讨其在抗动脉粥样硬化(AS)中可能的作用机制。方法 分别用脂质过氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒测定灵芝对VSMC培养液中LPO含量、SOD活性的影响。结果 灵芝能降低LPO含量，增强SOD活性，并有一定的量效关系。结论 灵芝对VSMC有抗脂质过氧化作用，其抗AS的作用机制可能与其对抗活性氧引发的脂质过氧化反应，增强体内抗氧化酶的活性有关。     

补虚化瘀方对联合化疗荷瘤小鼠骨髓造血功能的影响

目的观察补虚化瘀方对联合化疗荷瘤小鼠骨髓造血的作用。方法采用P388瘤株造成荷瘤小鼠模型后,再以环磷酰胺、阿糖胞苷腹腔注射获得联合化疗荷瘤小鼠骨髓抑制模型,实验分为正常组、模型组及补虚化瘀方组,进行血常规、骨髓有核细胞(BMC)计数、粒单系祖细胞(CFU-GM)集落计数、骨髓细胞增殖能力测定。结果联合化疗可致荷瘤小鼠血红蛋白(Hb)、白细胞计数(WBC),BMC、CFU-GM集落计数及骨髓细胞增殖能力明显低于正常组(P<0.01),补虚化瘀方可提高联合化疗荷瘤小鼠外周血Hb、WBC数,提高BMC、CFU-GM集落计数及骨髓细胞增殖能力(P<0.01)。结论补虚化瘀方对联合化疗荷瘤小鼠骨髓抑制模型具有保护造血细胞和促进其化疗损害后的修复作用。     

槲皮素对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究槲皮素对高糖损伤血管内皮细胞(VECs)的保护作用。方法:实验分对照组,损伤组和槲皮素保护组。用含10 mg/ml葡萄糖、20％胎牛血清的DMEM培养基离体培养 VECs。MTT比色法测细胞存活数量,荧光分光光度法测细胞释放一氧化氮(NO)量及细胞内脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成量,分光光度法测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量。结果:10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5)mg/ml槲皮素可促进高糖损伤的VECs增殖,10~(-2)、10~(-3) mg/ml槲皮素,可抑制高糖损伤的VECs释放LDH,减少MDA生成量,促进其释放NO。结论:槲皮素对高糖损伤VECs有保护作用。     

黄芪多糖对有核细胞分泌造血细胞因子的影响

目的 研究注射用黄芪多糖对分离的人外周血单个核细胞(PBMC)分泌造血细胞因子的影响，以支持黄芪多糖的造血活性。方法 取正常人浓缩白细胞，分离出人PBMC单细胞悬液，进行细胞培养，采用酶联免疫吸附方法(EUSA)，测定上清液中的粒细胞集落刺激因子(G—CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CM—CSF)等造血细胞因子。结果 注射用黄芪多糖能刺激人PBMC产生大量的G—CSF和CM—CSF，表现出明显的量效关系和时效关系。结论 注射用黄芪多糖在体外能刺激人PBMC产生G—CSF和CM—CSF造血细胞因子，且呈明显的量效关系和时效关系，提示其有升高白细胞的作用，展示其临床应用前景。     

大鼠血管内皮祖细胞培养及鉴定

目的探索骨髓来源的血管内皮祖细胞的分离培养方法,为缺血性疾病治疗找到新的移植细胞来源。方法采集SD雄性大鼠骨髓细胞,用梯度密度离心法分离单核个细胞,种植于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿中培养,将血管内皮生长因子（VEGF）、重组纤维细胞生长因子（bFGF）和重组上皮生长因子（EGF）作为诱导剂,将72h后贴壁细胞（A组）和非贴壁细胞（B组）分别培养,观察细胞形态的变化以及数量变化,取A组在第14天,应用免疫组化和免疫荧光技术鉴定内皮祖细胞系列标志。结果A组细胞经过体外诱导后大量扩增,在28d时仍有强大扩增的活力,呈铺路石样,而B组细胞短期内可以大量增殖,呈长索样,之后逐渐变少;在细胞迁移实验中,A组细胞可以相互融合形成血管结构,而B组细胞之间则不能融合,随着时间推移,逐渐凋亡;A组经过CD34免疫荧光、CD133、FLK-1免疫组化鉴定呈阳性,并能特异性吸附FITC-UEA-和内吞DIL-Ac-LDL。结论自体骨髓细胞通过贴壁换液后可以分离培养出内皮祖细胞,取贴壁细胞经过体外诱导后大量扩增,并通过表面标记物鉴定可以确认为内皮祖细胞,而非贴壁细胞不能大量增殖,故将贴壁分离方法来筛选内皮祖细胞,此方法简易,并能满足细胞移植的需要,因而,在移植治疗脑缺血引起的内皮损伤应该有较好的临床应用前景。     

生脉注射液对Graves病Th1／Th2细胞平衡的调节作用

目的探讨Graves病患者Th1／Th2细胞因子变化及生脉注射液对其的影响。方法新发Graves患者60例随机分为生脉治疗组、他巴唑治疗组。另选30例健康查体者作为对照组。酶联免疫吸附法（ELISA）测定患者治疗前后血清Th1细胞因子干扰素Y（INF—γ）、Th2细胞因子白细胞介素10（IL-10）水平。结果新发Graves患者治疗前INF-γ、IL-10水平与对照组相比显著增高，INF-γ／IL-10比值显著降低（P〈0．05）；治疗前后比较，INF-γ、IL-10水平显著降低，INF-γ／IL-10比值增高（P〈0．05）；治疗后IL-10水平、INF-γ／IL-10比值生脉治疗组、他巴唑治疗组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。结论Graves病患者同时存在Th1、Th2细胞因子增高，但以Th2细胞因子增高占主导地位。生脉注射液可以调节Th1／Th2细胞平衡，从免疫水平治疗Graves病。     

心脉通胶囊保护血管内皮细胞损伤的临床研究

目的：探讨心脉通胶囊对冠心病心肌缺的治疗作用。方法：３８例冠心病心肌缺血患者在常规西药治疗基础上随机分为心脉能组（２０例，加用心脉通胶囊治疗），对照组（１８例），观察治疗前后血浆内皮素（ＥＴ）、降钙素相关肽（ＣＧＲＰ）含量，凡电图ＳＴ段和临床症状等的变化，并与１４名健康人作对比。结果：治疗前两组冠心病心肌缺血患者ＥＴ明显高于健康人（Ｐ〈０．０１），ＣＧＲＰ变化明显（Ｐ〉０．０５）。治疗后两组患者Ｅ     

补肾益智方对卵巢切除大鼠海马长时程增强的影响

目的：观察补肾益智方对卵巢切除大鼠海马长时程增强(LTP)的影响。方法：3月龄SD雌性大鼠，随机分为假手术组、模型组、补肾益智方低剂量组、补肾益智方高剂量组、雌激素对照组，模型组行双侧卵巢切除术，补肾益智方高、低剂量组、雌激素对照组分别在卵巢切除术后予补肾益智方灌胃和结合雌激素皮下注射。运用电生理学检测方法，观察大鼠长期雌激素剥夺对大鼠海马长时程增强的影响以及中药补肾益智方的干预作用。结果与结论：卵巢切除大鼠海马齿状回产生LTP的幅度明显低于卵巢保留组，并且维持的时间也较短；雌激素替代和补肾益智方高剂量组的LTP增幅和维持时间与卵巢保留组相比均无明显降低。说明二者使卵巢切除大鼠的突触易化机制得以保护和维持。     

前列地尔对兔内皮细胞缺氧复氧损伤后抗栓功能的影响

 目的 研究前列地尔（PGE₁对兔内皮细胞缺氧复氧损伤后抗栓功能的影响。方法 采用体外培养的兔内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型, 实验分正常组、模型组、加入不同浓度（0.05,0.20,0.40 μg·mL^-1PGE₁的给药组,将PGE₁分别加入缺氧复氧液中调整至以上终浓度。测PGE₁（0.05,0.20,0.40 μg·mL^-1不同浓度组及模型组、对照组培养上清液中丙二醛（MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD活力和一氧化氮（NO含量、细胞内血管假性血友病因子(vWF的表达。结果 与正常组比较,模型组丙二醛（MDA含量增加,SOD活性、NO含量下降, vWF表达下降（P<0. 05。PGE₁各浓度组与模型组比较,PGE₁各浓度组SOD活性及NO含量有所增加,丙二醛（MDA含量降低,vWF表达增强（P<0. 05。结论 PGE₁对缺氧/复氧损伤后血管内皮细胞的抗栓功能有保护作用。     

淫羊藿醇提物对内皮细胞释放 NO 的影响

为了了解淫羊藿治疗阳瘘的作用机制,采用Geiess试剂检测淫羊藿醇提物及灌服淫羊藿醇提物小鼠清对内皮细胞释放NO的影响.结果显示:淫羊藿提取物直接加入内皮细胞培养液中不影响NO产生,120min,180min采集的含淫羊藿醇提物血清能促进NO的产生,效应高峰的120min.结果提示:促进内皮细胞释放NO可能是淫羊霍治疗阳瘘的作用机制之一.