补肾方含药血清对软骨细胞增殖的影响

【目的】观察补肾方含药血清对白细胞介素1(IL-1)抑制软骨细胞增殖及诱导软骨细胞产生一氧化氮(NO)作用的影响【方法】新西兰兔4只，每只均灌服1．15kg/L的补肾方2．5mL，连续3d，制备含药血清；取体外培养的兔软骨细胞，分别加入含1、10、20μg/L IL-1的培养液，确定IL-1对软骨细胞增殖的抑制浓度；补骨方组分别加入20μg/L的IL-1和不同浓度的补肾方含药血清．模型组加入20μg/L的IL-1及不同浓度的空白血清，培养3d后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测软骨细胞的增殖，Griess法检测NO的产生。【结果】选择20μg/L浓度的IL-1抑制软骨细胞的增殖；不同浓度的补肾方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，抑制IL-1诱导软骨细胞产生NO。【结论】补肾方能直接拮抗或通过NO介导间接拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，这可能是补肾方治疗骨性关节炎(OA)的机制之一。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

补肾活血方含药血清对大鼠颗粒细胞类PCOS模型的影响

目的 探讨补肾活血方含药血清对体外培养颗粒细胞类PCOS(多囊卵巢综合症)模型的作用机制. 方法 对大鼠颗粒细胞进行体外分离培养,分成正常组、模型组、含药组、孕马血清组诱导培养,观察细胞形态,收集各组培养液检测E2. 结果 含药组中的类PCOS大鼠颗粒细胞生长良好,E2分泌量最高,与正常组比较差异有显著统计学意义(P<0.01). 结论 补肾活血方含药血清通过促进颗粒细胞的生长增殖和分泌E2的功能,来治疗PCOS.     

子宫内膜腺癌组织中miRNA的差异表达

目的 探讨miRNA在子宫内膜腺癌及其癌旁组织中的表达差异.方法 收集子宫内膜腺癌患者癌灶和癌旁内膜组织,分别采用Trizol一步法提取总RNA,利用含有miRNA探针的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 子宫内膜腺癌与癌旁组织中111个miRNA表达存在显著差异,其中腺癌组织中68个miRNA表达上调,43个表达下调.结论 miRNA可能参与子宫内膜腺癌的发生发展过程,这为进一步揭示子宫内膜腺癌发生的分子机制提供了依据.     

补肾方对成骨细胞生长因子TGF-β1 mRNA表达的影响

目的探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子-β1 (TGF-β1)mRNA 表达的影响.方法将体外分离培养的新生SD 大鼠的颅骨成骨细胞加入不同浓度的补肾中药密骨片药液(100～ 10 000 μg·m l- 1) 及阳性对照药物重组碱性成纤维细胞生长因子( rbFGF).24 min后, 利用自行制备的地高辛标记的鼠TGF-β1cDNA 探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析, 以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表TGF-β1 mRNA 的表达水平.结果结果显示随着密骨片药液浓度的增加, 成骨细胞内TGF-β1 mRNA 表达明显高于阴性对照组; 但5 000 和1 000 μg·m l- 1的密骨片药液组的TGF-β1光密度值与5 ng·m l- 1的bFGF 组比较无明显差异(P＞ 0. 05).结论表明补肾中药密骨片可刺激成骨细胞TGF-β1 的分泌和合成, 从而促进骨形成和抑制骨吸收.这可能是该方能有效地防治骨质疏松的疗效机制之一.     

结直肠癌组织中miRNA的差异表达研究

目的：寻找并鉴定在结直肠癌及癌旁正常组织中差异表达的miRNA,为进一步阐明其在结直肠癌发生、发展机制中的作用奠定实验基础。方法：收集10例新鲜的结直肠癌及癌旁正常组织,抽提总RNA,利用miRNA芯片技术寻找结直肠癌及癌旁正常组织中差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术进行验证。结果：与结直肠癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中上调2.3倍以上的miRNA有32个,下调2倍以上的miRNA有10个;real-time PCR结果与miRNA芯片结果较吻合。结论：筛选得到结直肠癌miRNA差异表达谱,其可能与结直肠癌的发生、发展相关。     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B（INHB）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）mRNA表达的影响。方法 向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10%空白血清（对照组）、人转基因重组促卵泡激素（hFSH）含药血清（阳性对照组）、补肾调冲方含药血清（补肾调冲方组）,培养48 h,以闪烁计数器测定3H-TdR掺入DNA的量,流式细胞仪测定细胞周期分布,放射免疫法测定培养液中雌二醇（E2）和孕激素（P）水平,并采用RT-PCR法测定INHB、IGF-1 mRNA的表达量。结果 补肾调冲方含药血清可剂量相关地促进3H-TdR掺入颗粒细胞DNA的量。与对照组相比,补肾调冲方各含药血清组G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞则明显增多;E2、P的量明显升高;颗粒细胞INHB、IGF-1 mRNA表达量均明显增多,且呈剂量相关性。结论 补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖、增强甾体激素的分泌功能,该作用可能通过增强INHB、IGF-1基因的表达,从内分泌和自分泌两条途径调节卵巢功能而实现的。     

神经母细胞瘤miRNA的差异表达及其生物信息学分析

目的 利用生物信息学分析神经母细胞瘤差异miRNA,并分析其生物学功能、相关信号通路.方法 通过GEO数据库获取神经母细胞瘤miRNA芯片GSE121513,获得95个神经母细胞瘤样本和正常胎儿肾上腺神经母细胞样本数据,筛选差异miRNA.对|logFC|≥4的差异miRNA进行靶基因预测,并行KEGG和GO分析,构建...     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。     

补肾活血中药对成骨细胞的影响

骨质疏松是以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变,成骨细胞与破骨细胞的动态平衡是维持正常骨量的关键,其中成骨细胞起到主要作用。中医认为骨质疏松的发病以肾虚为本,血瘀为标,治疗上予以标本兼治,补肾活血为法,多用补肾活血中药治疗取得良好的疗效。现对补肾活血中药对成骨细胞增殖分化及活性的影响研究进行总结,为今后的进一步深入研究提供科研思路。     

补肾活血方对精索静脉曲张性不育大鼠血浆血栓素、6-酮-前列腺素的影响

目的 :观察模型大鼠血浆血栓素 (TXB2 )、6 -酮 -前列腺素 (6 -Keto -PGF1a)水平 ,以及补肾活血方对模型大鼠血浆TXB2 、6 -Keto -PGF1a水平的影响。方法 :本实验设 5组 :将 75只 3月龄雄性SD大鼠先随机抽出 15只为假手术组 ,其余 6 0只大鼠采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张性不育病理模型 ,造模完成后再随机均分为模型组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方中剂量组、补肾活血方高剂量组。造模完成后 4 8d开始给药 ,连续给药 6 0d ,摘眼球取血 ,放免法检测血浆TXB2 、6 -Keto -PGF1a水平。结果 :模型大鼠血浆TXB2 水平显著高于假手术组 (P <0 .0 1) ,6 -Keto -PGF1a水平无显著变化 ,但 6 -Keto -PGF1a TXB2 显著低于假手术组 (P <0 .0 1) ;补肾活血方能显著降低血浆TXB2水平 ,提高 6 -Keto -PGF1a TXB2 值。结论 :精索静脉曲张性不育模型大鼠存在血瘀状态 ,补肾活血方能促进模型大鼠的血液循环。     

大鼠心脏移植急性排斥反应期基因表达变化的研究

目的　研究同种异基因大鼠心脏移植急性排斥反应期相关基因表达的改变。方法　采用近交系Lewis和SD大鼠 ,分别建立Lewis(供体 )→SD(受体 )大鼠心脏移植模型为实验组 (n =2 4 ) ;Lewis→Lewis大鼠心脏移植模型为同期对照组 (n =2 4 )。术后 1、3、5d各时点分别处死 ,取移植心脏进行普通病理检查 ;应用基因芯片技术对术后5d移植心脏进行mRNA检测。结果　实验组移植心脏术后 3d开始发生急性排斥反应 ,术后 5d全部发生严重的急性排斥反应 ;而对照组未发生急性排斥反应。共发现差异表达基因总数为 2 1 0条 (下调 96条 ,上调 1 1 4条 ) ;其中已知基因有 33条 (下调 1 3条 ,上调 2 0条 ) ;未知基因 1 77条 (下调 83条 ,上调 94条 )。结论　心脏移植急性排斥反应涉及多基因表达改变 ,分析差异表达的基因 ,有助于进一步了解心脏移植急性排斥反应的发生机制。     

补肾活血化痰方对AD大鼠学习记忆功能及脑神经元型一氧化氮合酶的影响

目的　探讨补肾活血化痰方改善学习记忆功能的作用机理。方法 15月龄Wistar大鼠 6 0只 ,随机分成 6组 :正常组、假手术组 (PBS组 )、老年性痴呆 (AD)模型组、脑复康组 ,补肾活血化痰方低、高剂量组。大鼠双侧前脑基底核 (BasalnucleusofMeynert,NBM)注射鹅膏覃氨酸 (Ibotenicacid ,IBO)损毁前脑基底核造痴呆模型。动物经治疗处理2 8d后 ,各组大鼠进行Morris水迷宫行为学试验 ,并检测大鼠海马区神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)阳性细胞数。结果　行为学实验显示 :脑复康组、补肾活血化痰方低高剂量组与其它 3组比较有统计学差异 (P <0 0 1) ;模型组nNOS阳性细胞数明显低于正常组和PBS组 (P <0 0 1) ,高剂量组nNOS细胞的表达近似于正常。结论　补肾活血化痰方能抑制痴呆大鼠模型海马区nNOS神经元受损 ,从而达到提高学习记忆水平。     

高凝状态大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库的构建

目的构建高凝状态(prothrombotic states,PTS)大鼠肝脏差异表达基因反向清减cDNA文库．方法用高淀粉饲料喂养制备大鼠PTS模型,从PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取poly A^ mRNA,分别以1．5 μg poly A^ mRNA起始,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成平均大小为400-600 bp的片段。以PTS大鼠cDNA作为Driver,对照大鼠cDNA为Tester。将Tester分为两组,分别连上不同的接头,与Driver进行两次消减杂交和两次抑制性PCR。将第二次PCR产物cDNA克隆至pMD18-T载体上,然后转化细菌,转化后的细菌接种于含50 μg／ml ampicillin、IPTG、和X-gal的LB琼脂平板上,将克隆计数。结果获得的克隆78％为白色克隆,成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库．结论以1．5 μg poly A^ mRNA起始,采用抑制性清减杂交,构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库。     

高凝状态大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库的初筛

且的对本室构建的高凝状态(PTS)大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库进行初步筛选。方法用巢式PCR扩增法制备“正向”和“反向”消减cDNA探针;采用差异筛选方法,用这两种探针对PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库进行筛选;将获得的阳性克隆cDNA进行序列分析;并与GenBank DNA数据库(non—redundant,and non—mouse and non—human EST entries)中的DNA序列进行同源性分析。结果差异筛选获得5个阳性克隆,序列测定及同源性分析表明,其中2个克隆很可能是GenBank DNA数据库中尚没有的新基因或DNA序列,另外3个克隆很可能代表GenBank DNA数据库中已有的基因或DNA序列。结论大鼠肝脏5个PTS相关基因序列、尤其是其中2个GenBank中尚没有的新基因或新DNA序列的发现,为深入探讨PTS发生的分子机制及肝脏在PTS发生中的作用打下了坚实的基础。     

高凝状态大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库的构建与初筛

目的构建高凝状态(prothrom botic states,PTS)大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库并进行初步筛选。方法从PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取po ly A mRNA,分别以po ly A mRNA为模板,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成400~600 bp大小的片段。以PTS大鼠cDNA作为T ester,对照大鼠cDNA为D river,进行抑制性消减杂交。将消减杂交第二次PCR产物cDNA克隆至pM D 18-T载体上,然后转化细菌,获得PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库。用巢式PCR扩增法制备“正向”和“反向”消减cDNA探针;采用差异筛选方法,用这两种探针对PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库进行筛选;将获得的阳性克隆cDNA进行序列分析;并与G enB ank DNA数据库中的DNA序列进行同源性分析。结果成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库,初步筛选发现两条PTS差异表达cDNA片段。结论成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库。     

补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响

目的 探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号转导通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响。方法 采用线栓法复制右侧大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组和益气活血方组。脑缺血2 h后,持续灌注7 d。采用PCR检测额顶叶皮质Nurr1、SMO mRNA表达水平,采用Western blot检测其蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达水平均明显上调（P<0.05）;益气活血方组和补肾生髓方组Nurr1 mRNA及其蛋白、SMO蛋白相对表达水平均较模型组明显下调（P<0.05）;模型组、益气活血方组和补肾生髓方组SMO mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;益气活血方组与补肾生髓方组Nurr1、SMO蛋白表达水平有显著差异（P<0.05）。结论 补肾生髓方和益气活血方促进脑组织修复的作用与其下调Notch信号转导通路中Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达有关。     

补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫内膜微环境的影响

目的:探讨补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫内膜微环境的影响。方法:选用未成年雌性Wistar大鼠75只,随机分为空白对照组、已烯雌酚组、补肾健脾固冲高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组15只,空白对照组给予等体积去离子水,己烯雌酚组给予已烯雌酚0.067 mg·kg~(-1),补肾健脾固冲高、中、低剂量组给药剂量分别为30 g·kg~(-1)、15 g·kg~(-1)、7.5 g·kg~(-1)(以生药量计)。各组每日灌胃给药1次,均连续给药4周。末次给药后,测定血清及子宫内膜组织前列腺素E2含量、子宫内膜微血管密度以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。结果:与空白对照组比较,己烯雌酚组、补肾健脾固冲高剂量组、中剂量组血清及子宫内膜组织中前列腺素E2表达均较低,差异有统计意义(P0.05);空白对照组子宫内膜微血管密度显著低于己烯雌酚组及补肾健脾固冲高、中、低剂量组,差异均有统计学意义(P0.01),补肾健脾固冲高、低剂量组与己烯雌酚组比较,差异有统计学意义(P0.05);空白对照组子宫内膜功能层腺上皮细胞和间质细胞VEGF蛋白表达程度显著低于己烯雌酚组及补肾健脾固冲高、中、低剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾健脾固冲方可以降低大鼠血清和组织中的前列腺素E2含量,增加子宫内膜微血管密度,提高VEGF蛋白表达,从而调节子宫内膜微环境。     

左归丸含药血清对成骨细胞IL-1、IL-6和COX-2表达的影响

目的通过观察左归丸含药血清对成骨细胞白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和环加氧酶-2(COX-2)表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组:正常血清组、卵巢切除(OVX)血清组和OVX含药血清组。采用免疫组化法,检测成骨细胞IL-1、IL-6和COX-2的表达。结果OVX血清组成骨细胞IL-1、IL-6和COX-2的表达明显强于正常血清组,而OVX含药血清组的表达较OVX血清组明显减弱,与正常血清组比较,则无显著性差异。结论在去势状态下,左归丸可能是通过抑制成骨细胞IL-1、IL-6和前列腺素E2(PGE2)的分泌,进而达到治疗骨质疏松的作用。     

补肾活血方联合子午流注纳支法穴位敷贴对轻度认知功能障碍患者事件相关电位P300的影响

目的:观察子午流注纳支法穴位敷贴联合补肾活血方治疗轻度认知功能障碍的临床疗效.方法:将90例轻度认知功能障碍患者按1∶1∶1随机分为对照组、中药组及子午组各30例.对照组给予盐酸多奈哌齐片,中药组给予补肾活血方治疗,子午组在中药组治疗基础上给予子午流注纳支法穴位敷贴,3组均治疗12周.比较各组患者治疗前后中医证候积分、...