基于RhoA/ROCK通路研究天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响

目的 观察天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响,从Ras同族体基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RhoA）/Rho激酶（Rho-associated kinase,ROCK）通路探究其作用机制。方法 将100只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,天麻素低剂量（16 mg/kg）、中剂量（24 mg/kg）、高剂量（32 mg/kg）组和依那普利组（1.5 mg/kg）,每组15只。采用腹主动脉缩窄法复制左心室肥厚模型。采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）和白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）水平,计算左心室肥厚指数（left ventricular hypertrophy index,LVHI）;苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌的组织形态学变化;qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平显著升高（P＜0.05）,心肌组织纤维化程度升高,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,天麻素低、中、高剂量组和依那普利组尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平均显著下降（P＜0.05）,心肌纤维程度降低,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。依那普利组大鼠心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平最低,天麻素的作用具有剂量依赖性。结论 天麻素能有效降低高血压病大鼠尾动脉血压、LVHI和血清AngⅡ、IL-6水平,改善其心室重构,其机制与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成

目的观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态（VM）形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K 表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌（HCC）转移侵袭的分子机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲 煎丸高（H）、中（M）、低剂量（L）及生理盐水（N）灌胃,4 d后采血,制备药物血清。肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物 血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632（P）干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技 术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量。结果鳖甲煎丸 可显著抑制HepG2 细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组（P<0.01）,Y-27632 完全抑制了HepG2 细胞VM的生成 （P<0.01）;同时,鳖甲煎丸和Y-27632 都能够抑制HepG2 细胞中RhoA、ROCK1 的表达（P<0.05）,降低细胞培养上清中VEcadherin 、PI3K的表达水平（P<0.05）。结论鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的 HepG2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关。     

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的 研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法 构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白的表达。结果 选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降（P<0.01）,凋亡率明显上升（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调（P<0.01）。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升（P<0.01）,凋亡率明显下降（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调（P<0.01）。结论 滋阴明目方含药血清可以...     

RhoA和ROCK蛋白在高脂饮食幼鼠肾小球中的表达及其意义

目的：探讨RhoA和ROCK蛋白在高脂饮食（HFD） C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达,阐明RhoA/ROCK通路是否与HFD诱导的肾小球损伤有关。方法：36只雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常对照组和HFD组,每组18只,正常对照组幼鼠给予标准饲料,HFD组幼鼠给予高脂饲料,分别饲养12周。检测幼鼠体质量和血清总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）水平。HE染色、PAS染色和Masson染色观察2组幼鼠肾组织病理形态表现、肾小球系膜和基底膜相对面积以及肾间质纤维组织相对面积,免疫组织化学法检测2组幼鼠肾小球中RhoA和ROCK蛋白表达水平,免疫蛋白印迹法检测2组幼鼠肾小球中RhoA、ROCK和Vimentin蛋白的表达水平。结果：与正常对照组比较,HFD组小鼠体质量、血清TC和TG水平明显升高（P<0.01）。HE染色,HFD组小鼠肾小球内出现明显脂肪变性;PAS染色,HFD组小鼠出现肾小球系膜基质轻度增生;Masson染色,HFD组小鼠肾小球内蓝色胶原纤维染色物质比正常对照组增多;与正常对照组比较,HFD组小鼠肾小球系膜和基底膜相对面积明显增加（P<0.05）,肾间质纤维组织相对面积增加（P<0.05）;免疫组织化学检测,与正常对照组比较,HFD组幼鼠肾小球中RhoA的ROCK蛋白表达水平升高（P<0.05）;免疫蛋白印迹法检测,与正常对照组比较,HFD组幼鼠肾小球中RhoA、ROCK和Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：给予HFD的C57BL/6J小鼠肾小球中RhoA和ROCK蛋白高表达可能是诱发肾小球损伤的原因之一。     

MYPT1通过RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探讨实肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）在结直肠癌发生发展中的作用及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测结直肠癌细胞迁移能力,生物信息学软件筛选可与MYPT1相互作用的蛋白质,通过TCGA数据库分析MYPT1表达水平及与RAS同源基因家族成员A（RhoA）和锌离子相关的RhoA蛋白1（ROCK1）的相关性。根据实验方案进行分组,分为空白对照组、阴性对照组、MYPT1过表达组、RhoA过表达组、MYPT1过表达+RhoA空载组和MYPT1过表达+RhoA过表达组。结果 和癌旁正常组织及正常肠粘膜细胞相比,MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达（P＜0.05）。过表达MYPT1可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1负调控RhoA和ROCK1的表达（P＜0.05）。过表达RhoA促进结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1通过下调RhoA的表达抑制ROCK1表达（P＜0.05）。MYPT1通过负调控RhoA抑制细胞增殖和迁移（P＜0.05）。结论 MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达,其通过RhoA/ROCK信号通路调控结直肠癌细胞增殖和迁移。     

化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响

【目的】观察化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)信号通路中RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响,探讨其防治机制。【方法】将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。西药组予以单硝酸异山梨酯水溶液(剂量为3.125 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,中药低、中、高剂量组予以化瘀祛痰方水煎液(剂量分别为10.4、20.8、41.6 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,空白组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,给药7 d。预灌胃7 d后,除正常组外,其余各组大鼠给予腹腔注射异丙肾上腺素(Iso)复制急性心肌缺血模型。观测大鼠心电图ST段总偏移值。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织结构,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清内皮素1(ET-1)含量,qPCR法检测心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA的表达。【结果】与空白组比较,模型组心肌纤维大片断裂,间质出现明显出血,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1 mRNA表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,各给药组心肌纤维断裂情况改善,间质出血减少,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1的mRNA表达水平均降低(P0.05)。【结论】化瘀祛痰方可改善心肌缺血状态,其机制可能与降低心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达,从而抑制心肌收缩,改善心肌血流量有关。     

全反式维甲酸对高糖环境下HK-2细胞转分化的影响及其可能机制

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对高糖环境下正常人肾小管上皮 HK‐2细胞株转分化的影响及其可能机制。方法将体外培养的 HK‐2细胞按随机数字表法分为以下7组：空白组、高糖组、高渗组、高糖＋低浓度ATRA组、高糖＋中浓度ATRA组、高糖＋高浓度ATRA组、Rho激酶抑制剂Y27632干预组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组细胞RhoA及ROCK1 mRNA表达水平,采用细胞免疫荧光检测高糖环境下 HK‐2细胞α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）及E‐钙黏蛋白的表达变化。结果 RT‐PCR结果显示：空白组与高渗组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平较空白组、高渗组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后, RhoA及ROCK1 mRNA表达较高糖组减少,差异均有统计学意义（P＜0．05）,且呈现ATRA浓度依赖性。相关性分析示,高糖组及各ATRA干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（P＜0．05）。细胞免疫荧光检测结果显示：空白组与高渗组α‐SMA及E‐钙黏蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组α‐SMA表达水平较空白组高,E‐钙黏蛋白表达水平较空白组低,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后,α‐SMA表达明显减少,E‐钙黏蛋白表达明显增多,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 ATRA可部分逆转高糖环境下 HK‐2细胞转分化的过程,其机制可能与抑制RhoA／ROCK信号通路有关。     

川崎病(KD)患者血清中抵抗素对人冠状动脉内皮细胞(HCAEC) ET-1及NO/eNOS的作用

 目的  探讨抵抗素与川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿冠状动脉内皮细胞ET-1及NO/eNOS的关系。方法  收集川崎病患儿和健康儿童血清,加入人冠状动脉内皮细胞培养体系,分为4组:KD患儿血清组(KD组)、抵抗素组(Re组)、正常人血清组(N组)、KD患儿血清加抵抗素抗体组(KD+antiRe组)。干预24 h后,硝酸酶还原法测定细胞上清液中NO水平,real-time PCR测定细胞ET-1及eNOS的mRNA表达,ELISA检测细胞上清抵抗素及eNOS蛋白的表达水平。结果  各组抵抗素水平:与N组比较,KD组与Re组抵抗素水平明显增高(P<0.05),KD+antiRe组抵抗素水平明显下降(P<0.05),KD组较Re组降低(P<0.05)。各组NO水平:与N组比较,KD组和KD+antiRe组NO水平明显升高(P<0.05),Re组下降(P<0.05);KD+antiRe组较KD组NO水平升高更明显(P<0.05)。各组ET-1mRNA表达水平:与N组及KD+antiRe组比较,KD组、Re组的ET-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),N组与KD+antiRe组间差异无统计学意义,KD组与Re组间差异无统计学意义。各组eNOS mRNA及蛋白表达水平:KD组、Re组与KD+antiRe组较N组均降低(P<0.05),KD组较Re组及KD+antiRe组降低(P<0.05),Re组较KD+antiRe组降低(P<0.05)。结论  抵抗素参与了KD患儿冠状动脉内皮细胞损伤,其机制可能与调节ET-1及NO/eNOS表达有关。     

肿瘤坏死因子-α抑制剂己酮可可碱对糖尿病大鼠阴茎海绵体RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的：研究糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中RhoA/Rho激酶信号通路改变以及肿瘤坏死因子（TNF）吨抑制剂己酮可可碱（PTX）对该信号通路和阴茎勃起功能的影响。方法：SD大鼠分为对照组、糖尿病组和糖尿病药物干预组;高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素注射诱导糖尿病;腹腔埋置微渗透泵持续慢性给药;在体记录阴茎海绵体窦内压（ICP）：ELISA检测血清TNF-α浓度;Western blot检测海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和神经型一氧化氮合酶（nNOS）以及RhoA/Rho激酶信号通路分子的蛋白表达水平。结果：与糖尿病组比,糖尿病药物干预组血清TNF-α浓度明显下降（P〈0.01）,阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1和p-MYPT1表达下调（P〈0.05）,eNOS和nNOS表达增加（P〈0.05）,阴茎ICP指数显著升高（P〈0.05）。结论：TNF-α促进阴茎海绵体组织RhoA/Rho激酶信号通路的激活与表达上调,参与糖尿病性勃起功能障碍的发病机制：PTX对糖尿病大鼠的勃起功能有保护作用。     

加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞表达VEGF的影响

目的 探讨加减驻景方含药血清对AKT基因转染后人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）细胞表达VEGF的影响。方法 制备SD大鼠加减驻景方含药血清及空白血清,建立AKT基因转染ARPE-19细胞模型,体外培养,分为5个组,正常组为ARPE-19细胞常规培养,转染模型组（模型细胞,常规条件培养）,含药血清组（模型细胞,给予含药血清干预培养）、空白血清组（模型细胞,给予空白血清干预培养）和阳性对照组（模型细胞,给予康柏西普干预培养）。设立不同时间和不同浓度,通过CCK-8法检测各组血清及阳性组药物对细胞毒性、增殖的影响;通过ELISA检测各组细胞上清液中VEGF的表达。结果 蛋白质印迹法（Western blot）显示,转染模型组与正常组比较,AKT蛋白的表达量明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8示,细胞培养24、48h后,AKT基因转染可促进ARPE-19细胞增殖（P<0.05）,培养72h后,对细胞增殖影响不大（P > 0.05）。10、20μg/ml康柏西普及5%、10%的含药血清对模型细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,各浓度空白血清组对模型细胞组的增殖影响不大（P > 0.05）。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测显示：转染模型组细胞上清液中VEGF表达量高于正常组（P<0.05）,康柏西普组与含药血清组均显著低于模型组（P<0.05）,其中康柏西普组低于含药血清组,差异有统计学意义（P<0.05）。空白血清组与模型组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 AKT基因转染后可诱导ARPE-19细胞的增殖,促进VEGF的表达。加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞的增殖及VEGF的表达有抑制作用。加减驻景方可能通过抑制VEGF的过度表达发挥干预CNV生成的作用。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。