桃红四物汤醇提液的薄层分离与定性鉴别

目的：桃红四物汤醇提液的薄层分离与定性鉴别。方法：采用薄层色谱法,选用硅胶G 薄层板,以正丁醇- 冰乙酸- 水（4∶1.5∶5,上层）为展开剂,置紫外灯（365 nm）下检视,观察桃红四物汤醇提液中化学成分的展开情况,再选用碘蒸气对各斑点进行显色,并将薄层板置于薄层扫描仪进行扫描,记录各斑点的吸收光谱图与比移值,与对照品进行观察对比。结果：桃红四物汤醇提液共分离得到5 个斑点,其中定性鉴别出3 个斑点,分别为来自红花的羟基红花黄色素A、来自白芍的芍药苷、来自当归和川芎的阿魏酸;其它2 个斑点在组成桃红四物汤的六个单味药中均未检出。结论：薄层色谱法能实现对桃红四物汤醇提液中化学成分的分离,可在此基础上进一步进行新成分的确定,分离方法简单快速、稳定可行。     

桃红四物汤中6种指标性成分的含量测定

目的 建立超高效液相色谱法同时测定桃红四物汤中6种指标性成分（羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯）的含量。方法 采用Agilent Technologies 1290 Infinity超高效液相色谱系统、DAD检测器。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相A为0.05%乙酸水（含7.84 mmol/L乙酸铵）,B为甲醇溶液,采用梯度洗脱程序和多波长融合检测方法,流速0.2 μL/min,进样量2 μL,柱温25 ℃。结果 6种指标性成分的线性、分离度、稳定性、重复性与精密度良好;该方法能够快速、稳定地定量羟基红花黄色素A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯。结论 该方法稳定、可靠、重复性高,可适用于桃红四物汤的质量控制。     

桃红四物汤对血管平滑肌细胞FAK/P38MAPK信号表达的影响

目的:研究桃红四物汤药物成分对血管平滑肌细胞(VSMC)FAK/P38MAPK信号表达的影响,并探讨其在抑制VSMC的迁移及增殖中的相关机理。方法:制备桃红四物汤含药血清,体外分离培养大鼠颈总动脉VSMC,将VSMC分为正常对照组(A组,正常大鼠血清培养)与干预组(B组,桃红四物汤含药血清干预)分别进行处理,采用免疫细胞化学方法检测各组FAK的表达情况,采用Western blot法检测各组不同时间及不同浓度含药血清干预下P38MAPK表达的变化。结果:大鼠VSMC在含药血清干预后,FAK及P38MAPK的表达均降低(P<0.01),P38MAPK的表达随含药血清干预时间的延长及作用浓度的增加而降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤药物成分对FAK/P38MAPK信号的表达产生负性影响,此影响可能参与了对VSMC的迁移及增殖的抑制作用。     

正交试验法优选桃红四物汤醇提工艺

目的：优选桃红四物汤的醇提工艺。方法：以总黄酮含量和浸膏得率为考察指标,以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交试验优选桃红四物汤的最佳醇提工艺。结果：桃红四物汤的最佳醇提工艺为加6倍量80％乙醇提取三次,每次1．5h。结论：优选出的桃红四物汤的醇提工艺合理、稳定,可为其工业化生产提供参考。     

LC-MS/MS鉴定大鼠血浆中桃红四物汤有效成分

目的 研究桃红四物汤有效成分体内作用的物质基础。方法 利用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography technique coupled with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）提供的色谱及离子碎片信息,对大鼠灌胃桃红四物汤中入血成分进行分析鉴定。结果 通过保留时间比对、离子碎片解析等综合分析,鉴定桃红四物汤中6个入血成分（梓醇、藁本内酯、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷和苦杏仁苷）均为原形成分,入血成分可能为桃红四物汤体内直接作用的有效成分。结论 本实验确定了桃红四物汤经口服后可被胃肠道吸收入血的6个有效成分,为后期桃红四物汤的药物代谢动力学研究提供了参考依据。     

桃红四物汤对产后血瘀证大鼠Rho/ROCK通路RhoA、p-RhoA及PAI-1蛋白表达的影响

目的探讨桃红四物汤治疗产后血瘀证的作用机制。方法采用米非司酮(8.3mg/kg)和米索前列醇(0.1mg/kg)灌胃早孕鼠,复制血瘀证产后大鼠模型,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组(法舒地尔,10mg/kg)及桃红四物汤组(9.0g/kg),并设立正常对照组;通过观察大鼠子宫形态及血液流变学指标变化评价桃红四物汤治疗产后血瘀证的疗效,采用免疫印迹法测定ras同源基因A(ras homolog gene,member A,RhoA)、磷酸化RhoA(phospho-RhoA,p-RhoA)蛋白及纤溶酶原激活剂抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的表达水平。结果桃红四物汤能够明显减轻模型大鼠子宫的炎性反应及红细胞的渗出和聚集,降低全血黏度和血浆黏度(P0.05,或P0.01),下调p-RhoA及PAI-1蛋白的表达水平(P0.01)。结论桃红四物汤治疗产后血瘀证的机制与下调Rho/ROCK通路相关蛋白的表达水平有关。     

桃红四物汤对产后血瘀证大鼠血清溶血磷脂酸的影响

目的探讨桃红四物汤对产后血瘀证大鼠血清溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)水平的影响。方法采用米非司酮(8.3mg/kg)和米索前列醇(0.1mg/kg)灌胃早孕鼠,复制血瘀证大鼠模型,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、益母草颗粒组(4.3g/kg)及桃红四物汤高(18.0g/kg)、中(9.0g/kg)、低(4.5g/kg)剂量组,并设立正常对照组;测定血液流变学指标以判定桃红四物汤治疗血瘀证的疗效,采用酶联免疫吸附试验测定血清LPA含量。结果模型组全血黏度、血浆黏度、血清LPA均较正常对照组显著增高(P0.05,或P0.01);桃红四物汤中剂量组及益母草颗粒组大鼠全血低切变率黏度和高切变率黏度显著降低(P0.05),各药物组大鼠血浆黏度显著降低(P0.05,或P0.01);桃红四物汤中剂量组及益母草颗粒组大鼠LPA水平显著降低(P0.05)。结论桃红四物汤祛瘀作用显著,其治疗作用可能与降低血清LPA的水平有关。     

不同提取方法的桃红四物汤特征图谱研究

目的 对比不同提取方法提取的桃红四物汤HPLC特征图谱的差异及不同提取方法对其化学成分变化的影响。方法 采用色谱柱Welch Materials C18（4.6nm×250nm,5μm）,流动相乙腈（A）—0.05%磷酸水溶液（B）梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温40℃,进样量20μL,波长切换法检测。结果 分别建立了传统煎煮提取法和90%乙醇—水提法的特征图谱,通过比较两者的特征图谱发现两者的共有峰数目和面积存在较大差异。结论 建立的特征图谱可操作性强,重复性好,为桃红四物汤的质量控制、工艺研究和成分与药效的相关性提供了有益信息。     

不同生理状态下银荷方药物制备物黄酮类成分的质量表征特性研究

目的建立银荷方药物制备物及大鼠血浆中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量测定方法,以研究银荷方药物制备物黄酮类成分的质量表征特性。方法制备物和血浆样品均加酸进行水解,并用乙醚-丙酮(14∶1)萃取法处理血浆样品,采用HPLC分析,以C_(18)为固定相,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,在270 nm检测黄酮类苷元槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量。结果经方法学考证,槲皮素、山奈酚、异鼠李素的线性范围分别为1.49~29.70 mg/L(r=0.999 3),0.65~12.90mg/L(r=0.999 5),0.47~9.40 mg/L(r=0.999 0),日内、日间精密度RSD≤5.85%,血浆样品冻融稳定性良好,室温放置10 h,在-80℃条件下保存1个月的稳定性均良好,符合生物样品分析要求。槲皮素、山奈酚、异鼠李素在正常组中的血药浓度分别为7.25、1.71、3.73 mg/L,在血栓组中血药浓度分别为8.53、2.64、5.69 mg/L,在抗凝组中血药浓度分别为8.32、2.76、4.56 mg/L。结论本文所建立的检测方法适用于银荷方药物制备物黄酮类成分槲皮素、山奈酚和异鼠李素的体内含量测定,并可应用于分析黄酮类成分质量表征特性,为基于黄酮类成分的银荷方药物质量精准控制提供科学依据。     

桃红四物汤总生物碱缓释片的制备及其体外释放度的研究

目的：确定桃红四物汤总生物碱缓释片的制备工艺,并进行其释放特性的研究。方法：以羟丙甲基纤维素为骨架材料,湿法制粒压片制备缓释片,采用紫外分光光度法测定主药的含量,检测波长为302nm;通过正交试验法,根据体外释放速率进行筛选与优化处方,确定最佳处方。结果：所制备的桃红四物汤总生物碱缓释片质量稳定,体外释放性能好,持续释药12h,符合设计要求。结论：本法简便,结果可靠,可作为桃红四物汤总生物碱缓释制剂生产过程的质量控制方法。     

基于PTEN研究桃红四物汤治疗产后血瘀证的机制

目的 观察桃红四物汤对产后血瘀证大鼠子宫第10染色体缺失的碱性磷酸和张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10,PTEN）mRNA及其蛋白表达的影响,探讨其祛瘀生新的作用机制。方法 采用米非司酮和米索前列醇灌胃法复制产后血瘀证大鼠模型,将模型大鼠分为模型组,阳性对照组（益母草颗粒4.3 g/kg）,桃红四物汤高剂量（18.0 g/kg）、中剂量（9.0 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组,另设正常对照组。连续灌胃给药7 d后,麻醉大鼠并分离子宫,光镜下观察子宫血瘀状态,分别采用实时PCR和Western blot法检测子宫组织PTEN mRNA及其蛋白表达水平。结果 桃红四物汤能改善产后血瘀证大鼠子宫间质的充血、水肿。与正常对照组比较,模型组PTEN mRNA及其蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;与模型组比较,桃红四物汤高剂量组PTEN mRNA及其蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,桃红四物汤中剂量组仅PTEN蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 桃红四物汤的祛瘀生新作用可能与其下调PTEN的表达有关。     

桃红四物汤治疗原发性痛经实验研究

目的：观察桃红四物汤治疗痛经的作用,探讨其机制。方法：①观察桃红四物汤对热板法所致昆明种雌性小鼠疼痛的影响。②复制缩宫素致Wistar雌性大鼠痛经模型,观察桃红四物汤不同剂量对大鼠扭体次数、扭体发生率、血浆β-内啡肽（β-endorphin,β—EP）及子宫组织前列腺素F2a（prostaglandin F2a,PGF2a）的影响。结果：与模型组比较,桃红四物汤各剂量组小鼠痛阈均显著提高（P〈0．01）,痛经大鼠30rain内扭体次数显著减少（P〈0．01）,扭体发生率降低;大鼠子宫组织PGF2。含量显著降低（P〈0．01）;与模型组比较,桃红四物汤高、中剂量组大鼠血浆β—EP含量显著升高（P〈0．05）,与田七痛经胶囊组及阿司匹林组比较,差异无显著性（P〉0．05）。结论：①桃红四物汤有明显的镇痛作用;②有调节大鼠血浆β—EP及子宫组织前列腺素分泌的作用。     

桃红四物汤联合二甲双胍对2型糖尿病合并骨质疏松大鼠骨折愈合的影响

[目的] 研究桃红四物汤联合二甲双胍对2型糖尿病（T2DM）合并骨质疏松（OP）大鼠骨折愈合的影响。[方法] 选取40只SPF级雌性大鼠随机分为正常组、模型组、桃红四物汤组和联合组,每组10只,除正常组外,其余3组大鼠均建立T2DM合并OP模型,4组大鼠均建立股骨骨折模型。正常组和模型组每日灌胃10 mL/kg生理盐水,桃红四物汤组每日灌胃6 g/kg桃红四物汤药液,联合组在此基础上灌胃100 mg/kg二甲双胍生理盐水混悬液。X射线检查各组大鼠骨折愈合情况;双能X线全身骨密度测量仪检测股骨骨密度（BMD）值;苏木精-伊红（HE）染色观察骨折组织形态;显微电子计算机断层扫描（microCT）扫描股骨标本检测各组大鼠骨痂相关指标[相对骨体积（BV）、骨小梁数（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）、连接密度（Conn.D）、骨体积分数（BV/TV）和骨表面积体积比（BS/BV）];采用力学实验仪检测股骨的生物力学性能;每周定时检测各组大鼠空腹血糖（FBG）;分离血清,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）和纤维蛋白原（FIB）的表达水平,采用速率法检测血清中碱性磷酸酶（ALP）和D-二聚体的表达水平。[结果] X射线可见桃红四物汤组和联合组骨折线不清晰,骨性骨痂连接于骨折端。与模型组相比,桃红四物汤组和联合组的BMD值提高（P<0.05）;与桃红四物汤组相比,联合组BMD值更高（P<0.05）。HE染色可见桃红四物汤组和联合组的骨性骨痂明显增多,软骨和纤维组织减少,编织骨和板层骨开始融合。桃红四物汤组和联合组的Tb.N、Tb.Th、Conn.D、BV/TV均高于模型组（P<0.05）,Tb.Sp、BS/BV低于模型组（P<0.05）;与桃红四物汤组相比,联合组的Tb.N、Tb.Th、Conn.D、BV/TV均较高,BS/BV较低（P<0.05）。桃红四物汤组和联合组的最大载荷和最大载荷恢复率均高于模型组（P<0.05）;与桃红四物汤组相比,联合组最大荷载和最大载荷恢复率较高（P<0.05）。实验期间桃红四物汤组和联合组大鼠FBG平稳下降并接近正常组水平。与模型组相比,桃红四物汤组和联合组VEGF、FIB、ALP、D-二聚体的表达水平均降低（P<0.05）;与桃红四物汤组相比,联合组VEGF、FIB、D-二聚体的表达水平更低,ALP表达水平较高（P<0.05）。[结论] 桃红四物汤联合二甲双胍可有效降低血糖水平,提高BMD值和生物力学性能,改善骨痂的形成,降低VEGF、FIB、ALP和D-二聚体的表达水平,从而有效促进T2DM合并OP大鼠骨折的愈合。     

正交试验法优选桃红四物汤的水提工艺

目的优选桃红四物汤的水提工艺。方法以芍药苷和浸膏得率为考察指标,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交试验优选桃红四物汤的最佳水提工艺。结果桃红四物汤的最佳水提工艺为加12倍量水提取3次,每次1.5h。结论优选出的桃红四物汤的水提工艺合理,可为其工业化生产提供依据。     

知柏地黄汤合桃红四物汤对CsA肾毒性的防护作用

目的:观察知柏地黄汤合桃红四物汤对CsA肾毒性模型大鼠的肾保护作用。方法:予30mg/kg剂量的CsA灌胃制作大鼠CsA肾毒性模型,同时分别予10mg/kg贝那普利、2g/mL中药药液大鼠灌胃以预防肾毒性。予4周末分别观察各组大鼠肾功能、肾组织病理变化,免疫组化观察各组大鼠肾组织TGFβ1的表达变化。结果:与模型组相比,中药组大鼠血肌酐降低(28.3±3.8 VS 33.1±5.2,P=0.052),病理显示中药组大鼠肾组织空泡变性较模型组改善[变性范围(8.2±2.2)%VS(15.6±3.7)%,P<0.05],炎症细胞浸润及间质纤维化亦减轻;免疫组化显示,中药组大鼠肾组织TGFβ1的表达降低。结论:知柏地黄汤合桃红四物汤具有保护和改善CsA慢性肾毒性大鼠肾功能的作用。其机制有可能与降低肾组织TGFβ1的表达有关。     

桃红四物汤促进产后血瘀大鼠子宫修复的作用

目的 观察桃红四物汤对产后血瘀大鼠子宫修复的促进作用,探讨其与内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2）的关联性。方法 选取产后血瘀模型复制成功的大鼠40只,将其随机分为桃红四物汤高剂量（18.0 g/kg）、中剂量（9.0 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组,阳性对照组（益母草颗粒4.3 g/kg）和模型组（蒸馏水）,另取正常雌性大鼠作为正常对照组。连续给药7 d后,腹主动脉取血,分离子宫,苏木精-伊红染色法观察子宫血瘀状态,免疫组织化学法检测子宫VEGFR-2表达情况;酶联免疫吸附法检测血清中ET-1、iNOS及VEGF水平。结果 桃红四物汤可明显改善子宫血瘀程度,促进子宫组织中VEGFR-2的表达;桃红四物汤高、中剂量组大鼠血清VEGF及iNOS水平明显升高（P＜0.05）,ET-1水平明显降低（P＜0.05）。结论 桃红四物汤可促进产后血瘀大鼠子宫修复,其修复作用可能与调节子宫血管舒缩功能及促进子宫血管新生有关。     

脑缺血再灌注大鼠海马区神经营养因子的表达及桃红四物汤的干预

目的 观察脑缺血再灌注后大鼠海马区不同时间神经营养因子表达的变化及桃红四物汤的干预作用。方法 采用大脑中动脉线栓法构建大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将实验动物随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用TTC染色法检测脑梗死体积,酶联免疫吸附法测定大鼠海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor, BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、神经营养因子3（neurotrophin-3,NT-3）的表达水平。结果 与假手术组相比,模型组术后12 h、24 h、7 d、14 d脑梗死体积明显增大。与模型组相比,桃红四物汤组在术后7 d和14 d脑梗死体积显著减小,尼莫地平组术后12 h、24 h、7 d和14 d脑梗死体积显著减小。与假手术组相比,模型组术后12 h海马区BNDF表达水平显著提高,术后24 h海马区NGF表达水平显著提高,各时点NT-3表达水平的差异无统计学意义;与模型组比较,术后7 d和14 d,桃红四物汤组、尼莫地平组BDNF表达水平显著提高,术后24 h和7 d,尼莫地平组NGF表达水平显著提高,桃红四物汤组NGF和NT-3各个时间点的表达水平无明显差异。结论 大鼠脑缺血再灌注一定时间后海马区BDNF和NGF的表达水平增高,有利于受损的神经细胞恢复,桃红四物汤通过促进BDNF的表达而保护神经细胞。     

加减桃红四物汤治疗腰腿痛

[目的]观察加减桃红四物汤治疗腰腿痛的效果。[方法]对312例腰腿痛患者给予加减桃红四物汤治疗。[结果]治愈190例,有效73,显效25例,无效24例。治愈率60.9%,总有效率92.3%。[结论]加减桃红四物汤治疗腰腿痛取得较为显著的疗效,活血化瘀通络止痛法作为重要的治疗手段运用于痹证的治疗很有意义。