脑络欣通对大鼠脑缺血再灌注后海马mRNA的特异性表达及Wnt/β-catenin的影响

目的研究脑络欣通对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护的作用机制。方法雄性SD大鼠144只,随机分为假手术组、模型组、对照组、治疗组,每组36只,各组随机数字表法分成1、3、7 d组,每个时间节点12只。复制脑缺血再灌注(MCAO/R)大鼠模型。治疗组造模后分别于1、3、7 d给予脑络欣通,对照组造模后分别1、3、7 d给予通心络。脑络欣通配制成浓度为0.26 g/m L的溶液,通心络配制成浓度为0.02 g/m L的溶液,均按10 m L/(kg·d)灌胃给药。假手术组及模型组分别1、3、7 d予以等量生理盐水灌胃。采用激光多普勒血流仪(LDF)测定大鼠缺血侧局部脑血流量(r CBF)。解剖大鼠取出脑组织并分离海马,采用HE染色法检测大鼠海马DG区;采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)测定miRNA9a、miRNA15a、miRNA124的表达;采用Western blot法检测Wnt3a、Wnt5a、β-catenin的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠脑组织明显缺血,脑血流量显著降低(P0.01),海马中miRNA9a、miRNA15a表达均显著降低(P0.01),miRNA124显著增高(P0.01),Wnt3a、Wnt5a、β-catenin表达显著增高(P0.01);与模型组比较,脑络欣通1、3、7 d组大鼠脑血流量恢复明显,海马中miRNA9a、miRNA15a表达显著增高(P0.01),miRNA124表达水平显著降低(P0.01),Wnt3a、Wnt5a、β-catenin表达显著增高(P0.01)。结论脑络欣通对于MCAO/R大鼠脑损伤有明显疗效,可通过提高局部脑血流量,提高海马miRNA9a、miRNA15a表达,降低海马miRNA124表达,提高Wnt3a、Wnt5a、β-catenin的表达,起到抑制缺血再灌注对大鼠脑组织损伤的作用。     

脑络欣通方对大鼠脑缺血后纹状体中5-HT、DA、NE、5-HIAA的影响

目的研究脑络欣通方对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠100只,随机分为假手术组、模型组、预处理组、治疗3 d组、治疗7 d组,每组20只。复制MCAO(脑中动脉栓塞)/R大鼠模型。治疗3 d组造模后连续给予脑络欣通方3 d、治疗7 d组造模后连续给予脑络欣通方7 d,预处理组造模前给予脑络欣通方药7 d,3组每天灌胃给药2次,8.54 m L/kg。假手术组及模型组予以等量生理盐水灌胃7 d。解剖大鼠并取出脑组织,分离纹状体。采用激光多普勒血流仪(LDF)测定梗死侧纹状体局部脑血流量(r CBF);采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)测定5-HT(5-羟色胺)mRNA、DA(多巴胺)mRNA、NE(去甲肾上腺素)mRNA、5-HIAA(5-羟吲哚乙酸)mRNA的表达含量。结果与假手术组比较,模型组发生明显缺血现象,脑血流量显著降低,脑梗死体积显著升高(P0.01),其纹状体中的5-HT mRNA、DA mRNA、NE mRNA、5-HIAA mRNA表达水平显著降低(P0.01);与模型组比较,脑络欣通方预处理组、治疗3 d、治疗7 d组脑血流量明显恢复,脑梗死体积显著下降(P0.01),纹状体中的5-HT mRNA、DA mRNA、NE mRNA、5-HIAA mRNA表达水平显著升高(P0.01)。结论脑络欣通方具有明显预防和治疗MCAO大鼠脑损伤的作用,通过增加MCAO/R大鼠的脑血流量,降低MCAO/R大鼠脑梗死体积,提高MCAO/R大鼠的纹状体组织中5-HT mRNA、DA mRNA、NE mRNA、5-HIAA mRNA单胺类递质的表达,从而起到抑制缺血后再灌注对大脑纹状体的损伤作用。     

益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响

目的 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2h后持续灌注7d.采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达.结果 在缺血侧海马区,与假.手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P＜0.01).结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复.     

通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达的影响

目的 探究通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型（middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R）大鼠脑保护及血管新生的作用。方法 将150只SD大鼠随机分为假手术组、通督调神针灸组、常规针刺组、通心络药物组和模型对照组,每组30只。通督调神针灸组取百会穴艾灸,大椎穴刺络放血;常规针刺组选取风池、曲池、合谷、足三里、三阴交针刺治疗;通心络药物组予以通心络胶囊,每日每次1.0 g/kg灌胃。假手术组、模型对照组不予治疗;其余各组每日治疗1次,共28 d。治疗第7、14、21、28天处死大鼠立即取脑,脑组织石蜡包埋后切片,免疫组织化学法检测缺血皮质区CD34、CD133阳性表达,采用ELISA法检测VEGFR-2的表达。结果 MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达量在第7天较高,随后逐渐降低;通督调神针灸法、常规针刺及通心络药物均可不同程度促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达（P<0.05）,且通督调神针灸法促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达水平高于常规针刺及通心络药物（P<0.05）。结论 通督调神针灸法能有效促进MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达。     

梅花鹿茸Ⅰ型胶原对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探索SDC-I对骨质疏松大鼠的保护作用机制。方法应用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分成空白组,模型组, SDC-I低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 g/kg),灌胃给药90 d后取材。应用X线仪及骨骼强度仪检测大鼠股骨密度(BMD)和最大载荷量;采用ELISA法检测大鼠血清中血清骨钙素(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平;应用Real Time PCR(RT-PCR)技术检测Wnt/β-Catenin信号通路中β-链蛋白(β-Catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)的mRNA表达水平。结果与模型组相比,SDC-I作用的各组大鼠BMD、最大载荷量显著增高;血清中BGP水平增高而TRACP水平减低;Wnt通路相关β-Catenin、LRP5的mRNA表达水平显著增高。结论 SDC-I可显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,其保护机制与上调骨质疏松大鼠骨中β-Catenin、 LRP5的m RNA表达,激活Wnt/β-Catenin信号通路相关。     

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。     

经典 Wnt 信号通路在大鼠脑缺血后血管新生中的作用

目的研究缺血性脑卒中大鼠缺血周边脑组织的经典Wnt信号通路活性及干预该通路活性对缺血周边血管新生的影响。方法随机将50只雄性Wistar大鼠分为4组:假手术组(Sham组,n=10),脑缺血对照组(MCAO组,n=20),氯化锂干预组(Li Cl组,n=10),DKK1干预组(DKK1组,n=10)。免疫印迹法检测经典Wnt信号通路成分,FITC-dextran检测血管密度,多普勒血流仪检测血流量。结果脑缺血1 d后,与Sham组相比,MCAO组缺血周边脑组织细胞核蛋白及细胞浆蛋白中β-catenin表达水平显著下降(P<0.05),7 d时明显恢复,14 d时接近正常水平。与MCAO组相比,Li Cl组β-catenin表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值提高(P<0.05),并且缺血周边血管密度及血流量增加(P<0.05);DKK1组变化相反,β-catenin表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值降低(P<0.05),血管密度及血流量下降(P<0.05)。结论经典Wnt信号通路参与调节缺血性脑卒中后缺血周边的血管新生。     

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β—Catenin表达的影响

目的：观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顸叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法：大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果：皮质LRP5的平均吸收光密度值（A值）,模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著（P〈0．05）,模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异（P〈0．01）;皮质LRP5的阳性面积值（Area值）,模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异（P〈0．05）,补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异（P〈0．05）,益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性（P〈0．05）,补肾组与益气组之间无明显差异。结论：益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。     

通心络胶囊对局灶性脑缺血大鼠bFGF表达的影响

目的：观察通心络胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑组织碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响,探讨其对缺血性脑损伤的保护机制。方法：实验大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组、生理盐水组、药物治疗组,除假手术组外其余三组采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞的局灶性脑缺血模型,术后3 d、7 d、14 d应用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测各组缺血皮质中bFGF表达的动态变化。结果：通心络胶囊组缺血皮质中bFGF基因及蛋白的表达与模型组相比明显上调,差异有统计学意义。结论：通心络胶囊可提高脑缺血大鼠脑组织bFGF的表达,从而减轻局灶性脑梗死引起的神经损伤。     

骨痹通方干预凋亡软骨细胞Wnt/β-catenin通路的实验研究

目的探讨骨痹通方通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。方法SD大鼠关节软骨细胞传至第三代后分为空白组,模型组,骨痹通方高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)。除空白组外其余各组用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞凋亡,空白组及模型组培养基中加空白大鼠血清,骨痹通方各组分别加相应剂量的含药血清,并于培养0 h、24 h、72 h时测定各组软骨细胞MTT值,干预后第4天收集软骨细胞,运用PCR及Western Blot法测定Wnt5a、β-catenin mRNA的表达量及蛋白表达水平。结果各组0 h、24 h及72 h所测的MTT值无显著差异(P0.05)。模型组Wnt5a与β-catenin的mRNA表达量与空白组比较明显升高(P0.05),骨痹通方各剂量组能够下调Wnt5a与β-catenin表达,且骨痹通方低剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组与空白组比较Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量上调,差异不显著(P0.05),骨痹通方高、中、低剂量组Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量与模型组比较均有下调趋势,差异不显著(P0.05),骨痹通方各组间Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论骨痹通方可能通过抑制Wnt5a与β-catenin的表达,从而达到延缓软骨细胞凋亡的作用。     

通心络促脑缺血后毛细血管新生的实验研究

目的探讨通心络对大脑中动脉梗塞毛细血管新生的影响。方法以线栓法制成大鼠右侧大脑中动脉梗塞模型(MCAO)，大鼠随机分为假手术对照组、MCAO组、通心络干预组。以免疫组织化学法检测VEGF、EC阳性表达。对毛细血管记数。结果大脑中动脉梗塞后，缺血区神经元变性、坏死，VEGF和EC在半暗带有少量表达，经通心络干预后。VEGF和EC大量表达，毛细血管数目明显增加。结论通心络可通过促VEGF表达上调，内皮细胞增殖，从而保护脑毛细血管内皮细胞。促进毛细血管新生。     

基于Wnt通路下调微小RNA-130a对颅脑损伤模型大鼠神经功能的修复作用

目的 探究基于Wnt通路下调微小RNA(miRNA)-130a对颅脑损伤模型大鼠神经功能的修复作用.方法 将30只SD健康雄性大鼠,随机分为正常组(10只)和干预组(20只),正常组不给予处理,对干预组大鼠采用Feeney自由落体硬膜外撞击法建立颅脑损伤大鼠模型,共有19只大鼠建模成功.将建模成功的大鼠随机分为模型组(9只)和下调miRNA-130a组(10只).下调miRNA-130a组大鼠每日给予经尾静脉注射单唾液酸四己糖神经节甘酯钠注射液,正常组、模型组大鼠每日给予腹腔注射同等剂量的生理盐水.3组大鼠均连续注射7 d.干预7 d后,比较3组大鼠海马组织Wnt3a、β-联蛋白(β-catenin)的mRNA及miRNA-130a相对表达水平;比较3组大鼠的血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平.结果 与正常组相比,模型组、下调miRNA-130a组海马组织Wnt3a mRNA、β-catenin mRNA相对表达水平、血清丙二醛、IL-6、TNF-α、MCP-1、NSE水平均升高,血清SOD、BDNF、NGF水平降低(均P<0.05);与模型组相比,下调miRNA-130 a组海马组织Wnt3 a mRNA、β-catenin mRNA及miRNA-130 a相对表达水平、血清丙二醛、IL-6、TNF-α、MCP-1、NSE水平均降低,血清SOD、BDNF、NGF水平升高(均P<0.05).结论 基于Wnt通路下调miRNA-130 a表达水平对颅脑损伤模型大鼠进行干预,能够降低炎症反应和氧化应激水平,减轻脑组织损伤,促进神经功能修复.     

通心络对急性脑梗死大鼠脑组织及胎盘生长因子表达的影响

目的:观察通心络对脑缺血模型大鼠脑组织病理学及胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达水平的影响,探讨其治疗脑梗死的作用机制。方法:以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通心络组及丁苯酞组,分别在造模后1 d和3 d进行神经功能缺损评分,取脑和采集动脉血。采用HE染色方法观察脑组织的病理变化;免疫组织化学及酶联免疫(ELISA)的方法,分别检测脑组织和血清中PlGF的表达水平。结果:与模型组比较,通心络组能显著改善大鼠神经功能缺失症状,减轻大脑皮质及海马神经元的损伤,脑组织和血清PlGF表达均明显增强(P<0.05)。结论:通心络对急性脑梗死损伤具有保护作用,其作用机制可能与增加PlGF的表达有关。     

脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注大鼠热休克蛋白及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的:研究脑络欣通对脑缺血2 h再灌注24 h大鼠热休克蛋白70(heat-shock protein 70,HSP70)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分成5组(n=8):假手术组、模型组、脑络欣通治疗组、脑络欣通预防组、脑安胶囊治疗组.在多因素复合制作气虚血瘀证大鼠模型基础上,用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注大鼠模型.在缺血2 h再灌注24 h取脑,用免疫组化染色法检测缺血侧神经元HSP70和bFGF蛋白表达.结果:与模型组缺血侧比较,脑络欣通预防组和治疗组缺血侧脑组织HSP70的表达明显升高,脑络欣通预防组缺血侧脑组织bFGF的表达有显著增加,且脑络欣通对HSP70和bFGF的作用优于脑安胶囊.结论:脑络欣通可能通过促进缺血侧脑组织神经元HSP70和bFGF的表达而发挥其神经保护作用.     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠Wnt3a蛋白表达的变化

目的：观察局灶性脑缺血-再灌注大鼠Wnt3a蛋白表达的动态变化。方法: 取80只SD大鼠,采用改良的Zea Longa线栓法栓塞大脑中动脉,缺血30 min后再灌注3、6、12、24 h,3、7、14、28 d,按随机数字法分组。假手术组除未栓塞大脑中动脉外,其余操作与模型组相同。免疫印迹法分别检测各组大鼠皮质Wnt3a蛋白表达情况。结果：与假手术组（0.66±0.04）相比,Wnt3a的表达从缺血-再灌注后3 h开始升高,在24 h时达到最高峰（1.57±0.18）,之后7 d内维持较高水平,但14 d后下降,直至28 d时（0.68 ± 0.04）表达仍高于假手术组。结论：局灶性脑缺血再灌注后,大脑皮质区Wnt3a的表达随时间而动态变化,提示可能激活了Wnt3a参与的调节神经发生的信号通路。     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Wnt7a和APC表达的影响

目的观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Wnt7a和APC表达的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO)。将50只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组,模型组,莫诺苷小、中、大剂量组(30 mg/kg、90mg/kg、270 mg/kg)。利用蛋白免疫印迹法检测Wnt7a和APC表达变化。结果造模7 d,模型组大鼠皮层Wnt7a的表达比假手术组显著升高,APC表达显著下降;与模型组相比,莫诺苷大剂量组Wnt7a表达明显升高;莫诺苷小、中、大剂量组APC的表达显著降低。结论莫诺苷可以促进缺血性脑损伤后Wnt7a表达,抑制APC表达,从而激活Wnt信号通路。     

脑缺血再灌注后大鼠海马Wnt7b的表达

目的   研究成年大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回颗粒细胞下层（SGZ）Wnt7b的表达。方法   将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和脑缺血再灌注组,线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血90min,术后检测神经功能缺失和脑梗死,在脑缺血再灌注后1、3、7、14d取大鼠海马组织。RT-PCR技术检测Wnt7b mRNA表达水平;免疫荧光技术检测海马Wnt7b蛋白及β-catenin蛋白表达水平。结果   脑缺血后,大鼠出现严重的脑梗死和神经功能障碍,随再灌注时间延长,大鼠神经功能得到修复。再灌注7d后,健侧脑组织海马Wnt7b mRNA表达上调（P＜0.05）,缺血侧脑组织海马Wnt7b mRNA的表达明显上调（P＜0.01）。Wnt7b主要分布于SGZ附近,阳性细胞增多（P＜0.01）,且该脑区的细胞内β-catenin阳性细胞数目增多（P＜0.01）。结论   缺血性脑损伤可刺激Wnt7b在成年海马SGZ的表达上调,Wnt7b可能通过经典Wnt通路参与调节脑缺血后成年海马SGZ的神经发生。     

Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用

目的探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况,应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1(Dvl-1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高,各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势(P<0.05),各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势(P<0.05);给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后,Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05)。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中,Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生,对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。     

大鼠脑缺血后缺血区BDNF表达变化及通心络的影响

目的观察大鼠脑缺血后缺血区BDNF mRNA及蛋白表达水平的变化及通心络对其的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、通心络高剂量(2.24g.kg-1.d-1)、低剂量(1.12g.kg-1.d-1)组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)局灶性脑缺血模型,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化法检测脑缺血后3h、24h、72h、7d缺血区BDNF mRNA及蛋白表达的变化以及通心络的作用。结果(1)大鼠脑缺血后缺血区BDNF表达变化:大鼠局灶性脑缺血后3h缺血区BDNF mRNA表达略有上升,而24h表达下降,72h后又开始上升,至缺血后7d达高峰;免疫组化染色显示:在脑组织缺血区,BDNF主要在小神经元阳性表达,表达趋势与mRNA基本吻合。(2)通心络对缺血区BDNF表达的影响:与模型组相比,通心络高剂量组BDNF mRNA的表达水平在缺血后3h、24h、7d均有显著提高(P<0.01,P<0.05);通心络低剂量组BDNF mRNA的表达水平在缺血后3h、24h有明显升高(P<0.01,P<0.05);在缺血后7d,高剂组BD-NF mRNA的表达与低剂组相比明显升高(P<0.01)。在缺血后各时间点,通心络各组BDNF阳性神经元数量增多。结论局灶性脑缺血可促进缺血区内源性神经保护因子BDNF高表达;通心络可增强和延长缺血区BDNF高表达,发挥对脑缺血的保护作用。     

干细胞因子SOX2调控Wnt／β-Catenin信号通路在脑胶质母细胞瘤发生中的机制研究

目的通过检测脑胶质母细胞瘤（GBM）组织中干细胞因子SOX2及β-Catenin蛋白的表达,探讨SOX2及Wnt／β-Catenin信号通路在GBM发生中的作用机制。方法脑立体定向仪定向注射C6细胞至70只SD大鼠脑尾状核建立GBM动物模型,处死大鼠取脑肿瘤组织分离、鉴定GBM干细胞将其传代培养,20只正常SD大鼠脑组织作为对照,应用SP免疫法检测模型组GBM干细胞组织和正常组脑组织大鼠SOX2、β-Catenin蛋白的表达。结果GBM干细胞组织中SOX2和β-Catenin的表达均显著高于正常脑组织（P〈0．01）,二者在GBM干细胞中的表达呈正相关（r=0．372,P〈0．05）。结论干细胞因子SOX可能通过调控Wnt／β-Catenin信号通路,在GBM的发生发展过程中发挥重要作用,为针对GBM干细胞治疗该病提供了新靶点。