HPLC测定复脉灵胶囊中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量

目的: 建立复脉灵胶囊中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量测定方法。方法: 采用HPLC,流动相甲醇-0.5%的三乙胺(70:30),Aglient TC-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长235 nm,流速 1.0 mL·min^-1,柱温室温。结果: 乌头碱的进样量在0.080 8~0.808 0 μg具有良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率98.40%,RSD 2.84%;新乌头碱的进样量在0.866~4.330 μg具有良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率98.04%,RSD 2.05%;次乌头碱的进样量在0.089~0.890 μg具有良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率98.71%,RSD 2.34%。结论: 方法操作简便、灵敏度高、结果准确,可作为复脉灵胶囊的含量测定方法。     

HPLC同时测定生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量

 目的建立同时测定血液、肝组织中新乌头碱(mesaconitine)、乌头碱(aconitine)、次乌头碱(hypaconitine)含量的HPLC分析方法。方法采用Welchrom C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.03%四丁基氢氧化铵(用冰醋酸调至pH9.74)(58∶42)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为230nm。结果生物样品中新乌头碱在0.077～23mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),乌头碱在0.083～25mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),次乌头碱在0.08～24mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9996)。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的回收率不低于83.6%。生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的日内精密度和日间精密度分别在5.1%和9.3%以内。结论本方法简便、灵敏、准确,适用于血液、肝组织中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的分析。     

乌头类双酯型生物碱水解转化规律及含量计算方法研究

 目的 研究乌头类双酯型生物碱水解转化规律,建立LC-MS定性分析及HPLC定量分析乌头类双酯型生物碱及其水解产物方法。方法 通过控制乌头碱、新乌头碱、次乌头碱3种双酯型生物碱的水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,从而推导各水解产物的精确质量浓度。结果 根据LC-MS定性分析结果,乌头类生物碱水解规律为乌头类双酯型生物碱先水解生成焦乌头碱类生物碱,再继续水解生成苯甲酰乌头原碱类生物碱;并根据水解规律分别计算出焦乌头碱类生物碱、苯甲酰乌头原碱类等乌头类生物碱水解产物的精确质量浓度。HPLC 方法学表明,焦乌头碱、焦新乌头碱、焦次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在0.70～44.64 μg·mL-1 (r=0.999 7;0.34～21.77 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.38～24.37 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.48～30.74 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.41～26.38 μg·mL-1 (r=0.999 9;0.42～27.08 μg·mL-1 (r=0.999 7内线性关系良好。结论 本实验得出了乌头类双酯型生物碱水解转化规律,并建立了计算不同水解阶段水解产物的方法,其专属性高、定量简便,为乌头类生物碱及其水解产物的定量分析和乌头类中药材炮制、质量控制等提供了简便可行的方法。     

HPLC测定草乌与瓜蒌配伍前后6种毒性成分量的变化

目的 研究草乌Aconiti Kusnezoffi Radix与瓜蒌Trichosanthis Fructus按照13个不同比例配伍后,苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌头碱成分量的变化。方法 草乌与瓜蒌的干燥粉末,混匀,分别用10倍量蒸馏水和75%乙醇浸润1 h,提取2次,每次1 h,合并提取液,离心,取上清液。HPLC采用Welch Xtimate C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,乙腈-40 mmol/L乙酸铵（氨水调pH 10.0）梯度洗脱;体积流量1 mL/min,检测波长235 nm。结果 草乌与瓜蒌配伍后,随瓜蒌比例增加,药液pH值逐渐降低,单酯型生物碱总量变化不明显,而双酯型生物碱总量增加。结论 草乌与瓜蒌配伍后,从化学成分来看,双酯型生物碱类成分增加导致毒性增加。     

乌头碱与大黄素配伍对结肠Cajal间质细胞生物膜的影响

目的: 研究大黄素与乌头碱配伍对原代培养正常小鼠乳鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)生物膜的影响。 方法: 采用酶解消化法原代结肠间质细胞培养技术,分别将浓度为1,0.3,0.08 mg·L^-1的大黄素高、中、低剂量药效浓度与1 g·L^-1乌头碱配伍作用于昆明种小鼠乳鼠结肠间质细胞30 min,测定其对细胞丙二醛(MDA)含量、酸性磷酸酶(ACP)活力的影响。 结果: 1 g·L^-1乌头碱单独作用30 min后,与正常组细胞相比,其MDA含量(0.313±0.019 nmol ·mL^-1和ACP(386.63±57.89) U·g^-1活力增加(P<0.01);大黄素高、中剂量药效浓度分别与乌头碱配伍作用后,相对于乌头碱单独作用组,细胞介质中MDA含量[(0.299±0.029),(0.280±0.024)nmol·mL^-1]和细胞中ACP活力[(264.31±37.21),(312.23±46.86)U·g^-1]有所降低(P<0.05),但仍高于正常组细胞。 结论: 大黄素与乌头碱配伍后能降低细胞膜的脂质过氧化损伤程度,且大黄素能减轻乌头碱对ICC溶酶体膜的损伤作用。     

制川乌《中华人民共和国药典》含量测定方法的改进

目的 改进《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版中制川乌含量测定方法,进一步优化固相萃取技术,建立同时测定制川乌中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的高效液相色谱方法。方法 采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对制川乌进行纯化,制备供试品溶液;使用COSMOSIL C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇、乙腈和0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^–1,柱温为25 ℃,检测波长为232 nm。结果 6个成分分别在各自范围内线性关系良好（r=0.999 9）,平均加样回收率分别为101.8%、100.2% 、100.8%、99.0%、99.7%、98.2%, RSD分别为0.9%、1.2%、0.9%、1.3%、1.5%、1.0%。结论 改进了《中国药典》2020年版中制川乌含量测定的方法,解决了样品前处理复杂、使用有毒有害试剂较多的问题。建立了同时测定制川乌6个生物碱成分含量的方法,该方法准确、简便、快速、重复性好,对不同仪器和不同色谱柱的适应性好,可用于制川乌的质量控制。     

甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞的作用

目的: 研究甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞的作用。 方法: 利用细胞培养技术体外培养大鼠大脑皮质神经细胞,运用MTT法测定甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞存活率的影响,采用比色法测定甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞内Na⁺,K⁺含量,钠-钾三磷酸腺苷酶(Na⁺,K⁺-ATPase)活力的影响。 结果: 1,2,4 g·L^-1的甘草酸分别与2 g·L^-1乌头碱配伍作用神经细胞30 min后,能不同程度拮抗乌头碱所致活细胞数降低,以及拮抗乌头碱所引起的神经细胞内Na⁺含量降低,K⁺含量和Na⁺,K⁺A-TPase活力的升高。 结论: 甘草酸能降低乌头碱所致神经细胞毒性,拮抗乌头碱所引起的神经细胞内环境的紊乱,乌头碱与甘草酸以1:2配伍为佳。     

SPE-LC-ESI-MS/MS测定人血浆中咪达普利拉浓度及其在药动学研究中的应用

 目的 建立测定人血浆中咪达普利拉浓度的固相萃取高效液相串联质谱电喷雾检测法(SPE-LC-ESI-MS/MS)。方法 以美国 Agilent Eclipse plus C₁₈（4.6 mm×150 mm,3.5 μm）为色谱柱,流动相为甲醇-水（含 0.005 mol·L-1 甲酸铵,含 0.1% 甲酸）（87∶13）;流速：0.5 mL·min-1;柱温：40 ℃。样品用Agilent C8固相小柱净化。经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM )对咪达普利拉(m/z 378.2→206.2)和内标依那普利拉(m/z 349.1→206.1)进行测定。结果 咪达普利拉的高(20 μg·L-1)、中(10 μg·L-1 )、低(1 μg·L-1。)3个质量浓度的方法回收率分别为102.44％,102.46％和105.69％,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15％;分析方法的最低定量限为0.5 μg·L-1。线性范围为0.5~25 μg·L-1,回归方程为y=0.480 7x+0.008 7×10-4,r=0.997 6（n=6）。结论 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血药浓度监测和药动学研究。     

HPLC-荧光检测法测定大鼠血浆伊伐布雷定浓度

 目的 建立测定血浆中伊伐布雷定浓度的高效液相-荧光(FLU)测定方法,用于临床血浆伊伐布雷定浓度的测定。方法 血浆样品经Varian C₂柱固相萃取后采用HPLC-FLU法在Kromasil C₁₈柱分离,流动相采用乙腈-10 mmol·L - 1磷酸二氢钾（含0.3%10 mmol·L-1盐酸）（28∶72）,流速为1 mL ·min- 1,柱温为25 ℃,荧光检测波长：λ₁=328 nm,λ₂=283 nm。结果 内源性杂质不干扰测定,伊伐布雷定在0.5～50 μg·L-1内线性良好（r=0.999 6）,最低定量限为0.5 μg·L-1。萃取回收率为78.74%～90.77%（n=5）,批内和批间精密度（RSD%）分别为2.53～6.33（n=6）和6.38～8.91（n=3）。结论 建立的固相萃取-HPLC-FLU方法简便、灵敏、准确、所需血浆量少,可以用于临床血药浓度测定。     

HPLC测定雪上一枝蒿中3种生物碱的含量

目的：建立HPLC测定雪上一枝蒿中乌头碱、新乌头碱和雪上一枝蒿甲素的含量。方法：Thermo C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,柱温30 ℃,流动相甲醇-0.01%三乙胺（73：27）,流速1.0 mL·min^-1,检测波长240 nm。结果：乌头碱、新乌头碱和雪上一枝蒿甲素的平均加样回收率分别为98.88%（RSD 0.86%）,98.68%（RSD 0.48%）,98.94%（RSD 0.65%）。结论：该方法简便、准确、重复性好,可用于雪上一枝蒿中3种生物碱的含量测定。     

液相色谱-串联质谱联用测定人血浆中伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬和苯海拉明的浓度

 目的建立同时测定人血浆中伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的液相色谱-串联质谱方法。方法血浆中加入内标酚妥拉明后,进行固相萃取,以甲醇-0.5%甲酸水溶液(55∶45)为流动相,经C₁₈柱分离后;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z 166.4→m/z 115.2(伪麻黄碱),m/z258.2→m/z157.1(O-去甲基右美沙芬),m/z256.2→m/z167.2(苯海拉明),m/z282.2→m/z212.2(内标,酚妥拉明)。结果线性范围为伪麻黄碱1.0～200μg·L^-1(r=0.9993),O-去甲基右美沙芬为0.05～10μg·L^-1(r=0.9991),苯海拉明为1.0～200μg·L^-1(r=0.9988);提取回收率为伪麻黄碱在67.4%～73.4%之间,O-去甲基右美沙芬在74.6%～75.7%之间,苯海拉明在81.9%～83.9%之间,日内、日间RSD均小于6.2%,伪麻黄碱、苯海拉明和O-去甲基右美沙芬的最低定量浓度分别为1.0,1.0和0.05μg·L^-1。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确,适用于伪麻黄碱、O-去甲基右美沙芬、苯海拉明的临床药动学研究。     

HPLC-MS/MS测定人体内齐墩果酸血药浓度

 目的 建立快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中的齐墩果酸。方法 血浆样品定量加入内标液,经乙酸乙酯液液萃取后,以甲醇-0.1%醋酸铵缓冲溶液（93∶7）为流动相,采用Zorbax Extend-C₁₈（4.6 mm×250 mm, 5 μm）柱分离。使用电喷雾离子化,负离子SRM检测。用于定量的离子反应分别为m/z 455.1→455.3（齐墩果酸）;m/z 469.1→469.3（内标甘草次酸）。结果 测定血浆中齐墩果酸的线性范围为0.1～40.0 μg·L-1,定量限为0.1 μg·L-1,批内、批间精密度（RSD）均小于20.0%,方法学回收率94.0%～102.0%,符合相关规定。单个样品的分析时间为6.5 min。本法已用于齐墩果酸口服制剂的人体生物等效性研究。结论 本方法灵敏度高,选择性强,分析测试时间较短,适用于人血浆样品中齐墩果酸的测定。     

高效液相色谱-质谱联用测定大鼠体内西罗莫司血药浓度

 目的 建立测定SD大鼠体内雷帕霉素（RAPA）血药浓度的HPLC-MS/MS联用方法。方法 色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈（2.0 mm×250 mm,5 μm）;以甲醇-水（90∶10）为流动相;流速0.25 mL·min-1;柱温55 ℃。选用ESI源,以多反应采集模式（MRM）进行正离子检测,RAPA m/z 936.6→409.2和丙酸睾酮（内标）m/z 345.4→109.1。取全血样品经液-液萃取后,HPLC进样10 μL。结果 RAPA的线性范围为0.54～108.00 μg·L-1,定量下限为0.54 μg·L-1,日内、日间精密度（RSD）均小于12％。结论 本方法精密、准确,适用于RAPA在大鼠体内的药动学研究。     

LC-ESI-MS/MS测定人血浆中氨氯地平的含量

 目的建立高灵敏度的LC-ESI-MS/MS测定人血浆中氨氯地平浓度的方法。方法血浆样品经氢氧化钠溶液碱化,乙醚液-液萃取后进行分析。色谱柱COSMOSIL C₁₈柱(2.0mm×150mm,5μm),流动相甲醇-水-甲酸(60∶40∶0.1),流速0.25mL·min^-1,通过电喷雾离子化四极串联质谱,以选择离子反应监测(SRM)扫描方式进行检测。用于定量分析的监测离子分别为m/z409→238(氨氯地平)和m/z237→194(内标,卡马西平)。结果回收率为86%～95%,线性范围为0.1～6μg·L^-1,定量下限为0.1μg·L^-1,检测限为0.01μg·L^-1,应用此法测定了20名健康受试者交叉口服5mg氨氯地平剂量的试验制剂和参比制剂后的血药浓度经时过程。结论该法具有更高的灵敏度,适用于测定口服低剂量药物后人血浆中氨氯地平的浓度。     

HPLC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮浓度及人体药动学

 目的建立测定人血浆中丁螺环酮的LC-MS/MS方法,并用于缓释盐酸丁螺环酮胶囊的临床药动学试验。方法血浆样品经固相萃取后,以10mmol·L^-1的甲酸铵溶液-含0.5‰甲酸的乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,经Symmetry C₁₈色谱柱(2.1mm×150mm,5μm)分离。通过电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 386→121.7(丁螺环酮)和409→237.7(内标,氨氯地平)。结果LC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮的线性范围为0.025～12.8μg·L^-1,r=0.9993。该方法的绝对回收率为74.97%～77.83%,相对回收率为93.67%～102.0%,日内、日间精密度(RSD)分别为0.9%～5.1%和1.9%～6.7%。在临床药动学研究中,应用此法测试了10名受试者口服盐酸丁螺环酮缓释胶囊后血浆中丁螺环酮的浓度。结论本法快速、准确,灵敏度高,重现性好,可以满足本试验低浓度药物测定及药动学研究要求。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氟桂利嗪

 目的建立快速、灵敏的液相色谱-质谱法测定人血浆中氟桂利嗪的浓度。方法取0.25 mL血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-水-甲酸(80∶20∶0.5)为流动相,Zorbax SB C₁₈柱分离,通过大气压化学电离源四极杆串联质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。结果测定血浆中氟桂利嗪方法的线性范围为0.2～200.0μg·L^-1,定量下限为0.2μg·L^-1。日内、日间精密度(RSD)均小于6.5%,准确度(RE)在99.1%以内。氟桂利嗪和内标苯海拉明的平均提取回收率分别为75.1%和73.1%;每个样品测试时间为3.1 min。结论该法选择性强,灵敏度高,适用于临床药动学研究。     

HPLC-MS测定人血浆中奥美拉唑浓度及药动学

 目的 建立测定人血浆中奥美拉唑的HPLC-MS方法,并应用于药动学研究。方法 血浆样品经蛋白沉淀法处理后,采用Alltima C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,3 μm）,以乙腈-0.05%甲酸溶液（50∶50）为流动相,流速为0.2 mL·min-1,通过电喷雾电离源,以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,通道分别为m/z 346→198（奥美拉唑）和m/z 324→127（内标,格列齐特）,用非室模型计算药动学参数。结果 奥美拉唑的线性范围为0.002 5～2.0 mg·L-1,最低检测限为0.5 μg·L-1,日内、日间精密度均小于15%。低、中、高3个浓度提取回收率均大于95%,其主要药动学参数t_max为（2.5±0.7）h,ρ_max为（1.3±0.3）mg·L-1,AUC_0-t为（2.8±1.2）mg·h·L-1,t_1/2为（1.1±0.3）h。结论 该法操作简便,分析快速,灵敏度高,可用于人血浆中奥美拉唑的测定和药动学研究。     

LC-ESI-MS/MS 快速测定人血浆中奥氮平的浓度及临床应用

 目的 建立快速测定人血浆中奥氮平浓度的高效液相色谱串联质谱电喷雾检测法 (LC-ESI-MS/MS) 。 方法 以 Dikma diamonsil^TM C₁₈ 反相柱（ 4.6 mm × 150 mm , 5 μm ）为色谱柱,流动相为甲醇 -5 mmol·L^-1 甲酸铵（ 90 ∶ 10 ）,流速为 1 mL·min^-1 ,柱温： 25 ℃ ,以乙酸乙酯 - 二氯甲烷（ 4 ∶ 1 ）为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测（ SRM ）对奥氮平（ <> m/z 313 → 256 ）和内标替米沙坦（ <> m/z 515.3 → 497.3 ）进行测定,并用此法测定 36 例患者稳态血药浓度。 结果 奥氮平的高（ 50 μg · L^-1 ）、中（ 25 μg · L^-1 ）、低（ 1 μg·L^-1 ） 3 个浓度的平均回收率分别为 100.14% 、 100.33% 和 100.21% ,日内（ <> n =5 ）、日间（ <> n =3 ） RSD 均小于 15% ;分析方法的最低定量限为 0.5 μg · L^-1 。线性范围为： 0.5~100 μg · L^-1 ,回归方程为 <> F =1.529 5 <> ρ - 0.014 3 , <> r =0.999 （ <> n =8 ）,权重系数为 1/ <> ρ 。 结论 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中布洛芬

 目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定人血浆中布洛芬。方法血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-甲醇-5 mmol·L^-1醋酸铵-甲酸(450∶450∶100∶0.062 5)作为流动相,采用Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱分离,通过电喷雾电离源以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z205→m/z161(布洛芬)和m/z229→m/z185(内标,萘普生)。结果人血浆中布洛芬测定的线性范围为50.0～25 000μg·L^-1,定量下限为50.0μg·L^-1,日内、日间精密度(RSD)均小于8.5%,准确度(RE)在±2.5%以内,每个样品测试时间仅为4.0 min。结论pH值是影响布洛芬色谱行为和质谱响应的主要因素,优化后的方法具有快速、灵敏等特点,适用于布洛伪麻片中布洛芬的生物利用度和生物等效性研究。