雷公藤红素诱导人骨肉瘤细胞系HOS凋亡及机制研究

目的探讨雷公藤红素对人骨肉瘤细胞HOS的杀伤作用及其机制。方法将人骨肉瘤细胞HOS用各种不同浓度的雷公藤红素治疗后,采用MTT法检测雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制作用;采用流式细胞术检测HOS细胞凋亡及活性氧簇(ROS)的产生情况;Western blot检测HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平。结果雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制效应呈剂量依赖性,1、2、3、4、5μmol/L的雷公藤红素组细胞活力抑制率分别为(23.6±3.5)%、(43.7±5.4)%、(57.8±6.9)%、(75.5±6.4)%、(83.7±7.3)%,各雷公藤组细胞活力抑制力与对照组的零抑制力比较,差异均有统计学意义(P均0.05);雷公藤红素可显著诱导HOS细胞发生凋亡,与对照组凋亡率(2.3±0.5)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组凋亡率分别为(17.2±2.2)%(P0.05)、(39.5±3.6)%(P0.05)。雷公藤红素可显著诱导HOS细胞ROS的产生,与对照组ROS阳性率(1.3±0.4)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组ROS阳性率分别为(13.6±1.5)%(P0.05)、(29.4±3.3)%(P0.05)。雷公藤红素处理后HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平均显著上升。结论雷公藤红素或通过ROS/JNK途径诱导人骨肉瘤细胞发生caspase依赖的凋亡。     

雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨雷公藤红素诱导人肥大细胞系HMC-1细胞凋亡的基因调节机制。方法：雷公藤红素(0.5umol/L）与HMC-1细胞共育不同时间（4、8或12h）后,用RT-PCR、免疫组化方法检测bcl-2家庭、c-myc、白细胞介素1β转换酶（ICE）基因在mRNA和蛋白质水平表达的变化,并分析它们在细胞凋亡中的作用。结果：HMC-1细胞本已存在Bcl-2、Bax、C-myc蛋白表达;雷公藤红素作用后,Bcl-2蛋白表达受到抑制,Bax、C-myc蛋白表达增加。HMC-1细胞能自发表达bcl-2、bax、bcl-XL和ICE的mRNA,在雷公藤红素作用下,bcl-2、bax、bcl-XL的mRNA表达水平均下降（以bcl-2下降最为明显）,而ICE mRNA3次检测2次上升,1次下降。结论：雷公藤红素诱导HMC-1细胞凋亡可能与其上调促凋亡基因和下调抑凋亡基因的表达有关。     

雷公藤红素促进人类乳腺癌MDA-MB-453细胞HER2蛋白降解及诱导凋亡的机制

[目的]研究雷公藤红素促进人类乳腺癌MDA-MB-453细胞HER2蛋白降解及诱导凋亡的机制.[方法]MTT法检测雷公藤红素对MDA-MB-453的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白变化;免疫荧光检测HER2蛋白在细胞中的定位变化.[结果]雷公藤红素对MDA-MB-453有强大的细胞毒作用,IC50为(5.22±0.29)μmol/L;该化合物可浓度依赖性地诱导MDA-MB-453细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体、sub-G1改变及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Parp的裂解活化.值得一提的是,雷公藤红素作用后,Western Blot检测到HER2蛋白明显降低,并且原先主要表达在细胞膜上的HER2蛋白发生了异位.[结论]雷公藤红素浓度依赖性地诱导MDA-MB-453细胞发生凋亡,并且促进HER2蛋白降解,这可能与改变了HER2蛋白在细胞中的定位有关系.     

雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

探讨雷公藤红素对人急性髓性白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT法、AnnexinV-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤红素作用于两种细胞后对其生长增殖、凋亡、周期及形态等方面的影响。结果表明雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半抑制浓度(IC₅₀)分别为(0.46±1.05)μmol/L和(0.88±1.13)μmol/L。以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G₁期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

雷公藤红素对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响 及作用机制研究

目的 探讨雷公藤红素对人卵巢癌细胞株HEYa8 增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 采 用MTT 法检测不同浓度和时间雷公藤红素对HEYa8 细胞增殖的影响。将HEYa8 细胞随机分为：雷公藤 红素组（0.4 mg/L,培养24 h）和对照组（未处理）。检测两组细胞的生长迁移情况、细胞分裂指数及细胞 数量。利用Western blotting 检测雷公藤红素激活凋亡并抑制肿瘤细胞的现象及分子机制。结果 雷公藤红 素在浓度为0.4 mg/L 培养24 h 时效果最佳。雷公藤红素组侵袭细胞、细胞分裂指数、细胞数量及CD44 及GSDMS-N 双阳性细胞占总细胞百分比较对照组低（P <0.05）,凋亡相关蛋白相对表达量较对照组高 （P <0.05）。雷公藤红素组PI3K/Akt 信号通路关键分子的蛋白表达量较对照组低（P <0.05）。结论 雷公藤 红素能够抑制HEYa8 细胞生长并诱导细胞凋亡,其分子机制可能与PI3K/Akt 信号通路被抑制有关。     

雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株LP-1凋亡的诱导作用

目的研究雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞LP-1凋亡的诱导作用及可能机制。方法通过雷公藤红素体外作用于多发性骨髓瘤LP-1细胞,研究其对于细胞增殖及细胞凋亡的影响。采用EnoGeneCell TM细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)研究雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞株凋亡的诱导作用,采用级联酶底物显色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞Caspase-3酶原活化状态的影响。结果雷公藤红素能明显抑制LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖,其半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为0.881 7μmol/L。雷公藤红素可诱导LP-1细胞发生细胞凋亡,此效应具有剂量依赖性,雷公藤红素60.0μmol/L作用于LP-1细胞24h可诱导细胞凋亡百分率达到80.7%。雷公藤红素可引起LP-1细胞Caspase-3酶原活化。结论雷公藤红素可抑制多发性骨髓瘤细胞株增殖,诱导其凋亡,此作用可能通过Caspase-3酶原活化途径而实现。     

雷公藤红素对体外培养变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响

目的:为了探讨雷公藤红素对变应性接触性皮炎(ACD)小鼠体外培养淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响。方法:以二硝基氯苯制作ACD小鼠模型,体外培养淋巴细胞,雷公藤红素作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及Caspase-8浓度。结果:不同浓度红素对体外培养ACD淋巴细胞凋亡细胞比率均高于对照组;其中中、高浓度组凋亡细胞比率高于低浓度组且具有统计学意义(P分别<0.05和0.01),对ACD淋巴细胞Caspase-8表达与对照组比较差异均具有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。结论:雷公藤红素可以通过升高ACD小鼠淋巴细胞内Caspase-8浓度,从而诱导淋巴细胞的凋亡。     

雷公藤红素对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制

目的：研究雷公藤红素（Celastrol）对肝癌细胞株HepG2增殖活力的影响。方法将人正常肝细胞LO2及人肝癌细胞株HepG2接种在DEME培养基中,传代后取对数生长期细胞进行实验,用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞LO2及肝癌细胞株HepG2增殖的量效关系（1、2、4、8、16、32μmol／L）和在0.5μg／mL浓度的雷公藤红素作用下的时效关系（1、2、4、8、12、24 h）,Hoechst 荧光染色观察凋亡细胞形态变化以及Western blot检测肝癌细胞株HepG2中半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）－3、caspase －8、caspase －9与胞内磷脂酰肌醇3激酶（p－PI3K）、t－胞内磷脂酰肌醇3激酶（t－PI3K）、磷酸化蛋白激酶（p－AKT）、t－AKT、细胞外信号调节激酶（p－ERK）、t－ERK的表达情况。结果经MTT法检测,不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞的增殖没有明显抑制作用,而对肝癌细胞HepG2的抑制率依次为6.83％、15.11％、18.32％、21.77％、23.77％、25.51％,作用强度随着浓度的升高而增强;在浓度为0.5μg／mL雷公藤红素作用下,不同时间抑制率分别为6.66％、10.63％、13.31％、15.50％、20.54％、32.34％,呈时间依赖性;Hoechst 荧光染色在显微镜下均显现凋亡细胞。 Western blot结果显示, caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK显影,caspase－3、caspase－8、caspase－9表达量增加,而p－PI3K、p－AKT、p－ERK表达量降低。结论雷公藤红素通过诱导HepG2凋亡及细胞自噬作用,发挥增殖活力抑制作用,可能与调控caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK等相关因子的表达情况有关。     

雷公藤红素与非小细胞肺癌研究进展

正非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是呼吸系统最常见的恶性肿瘤,具有极高的发病率和死亡率~([1])。肺癌患者术后的复发转移率高,且NSCLC对化疗药物敏感性不高,长期生存率较低~([2])。因此,积极寻找治疗NSCLC的有效药物刻不容缓。天然植物药物具有低毒、有效、     

雷公藤诱导细胞凋亡的研究进展

雷公藤Tripterygium wilfordii提取物在临床上常用于治疗类风湿关节炎等多种疾病，其疗效已被广泛认可，近5年来国内外学者从其提取物诱导细胞凋亡的角度，对其药理机制进行了细胞分子水平的探讨，现对其研究进展进行综述。     

雷公藤红素对Raji细胞表面超微结构与增殖活性的影响

目的 研究雷公藤红素对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji的表面超微结构及其增殖活性的影响.方法 选用不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0μg/ml)的雷公藤红素作用于Raji细胞,用CCK8法测定细胞增殖情况,用原子力显微镜观察细胞形貌和表面超微结构变化,用Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞的凋亡,用流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果 CCK8测定表明,经不同浓度的雷公藤红素作用24 h后,细胞存活率从(80.67±2.08)％下降至(38.53±2.25)％,48 h后,细胞存活率从(74.17±3.20)％下降至(33.22±1.64)％,雷公藤红素对Raji细胞存活率的影响呈时间和浓度依赖性.原子力显微镜扫描示:正常Raji细胞呈圆形,表面光滑,经浓度为2.0 μg/ml的雷公藤红素处理24 h和48 h后,Raji细胞开始坍塌,超微结构显示细胞膜表面粗糙、凹凸不平.Hoechst 33258染色可见凋亡细胞;流式细胞术检测显示不同浓度的雷公藤红素作用Raji细胞24 h后,细胞凋亡率从(3.50±1.73)％增加到(38.27±6.05)％,雷公藤红素对Raji细胞凋亡率的影响呈浓度依赖性.流式细胞术对细胞周期的检测表明1.5 μg/ml雷公藤红素作用Raji细胞24 h,可使S期细胞增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 雷公藤红素可改变Raji细胞膜超微结构,可通过诱导Raji细胞凋亡而抑制其增殖.     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的探讨柔红霉素在体外诱导Jurkat细胞发生凋亡的规律.方法应用DNR体外作用于Jurkat细胞,研究DNR诱导Jurkat 细胞凋亡的规律,Annexin V/PI双标法流式细胞仪检测Jurkat细胞凋亡率,PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 0.1～2.0μmol/L浓度范围DNR作用一定时间后,Jurkat细胞的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.DNR作用后Jurkat细胞G2/M期比例明显增加.结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,在一定的剂量范围内,呈现剂量-效应、时间-效应关系,其机制可能与DNR抑制细胞有丝分裂有关.     

DC-CIK 细胞诱导宫颈癌细胞凋亡的研究

目的 探讨树突状细胞（DC）与杀伤细胞（CIK）共培养后对宫颈癌细胞（Hela）凋亡的影响。 方法 采集宫颈癌患者外周血,分离外周血单个核细胞（PBMC）,分别诱导DC 和CIK 细胞,并扩增培养, 显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测DC 细胞表面分子CD8、CD40 及CIK 细胞CD3、CD8、CD56。 采用CCK-8 检测DC-CIK 细胞对Hela 细胞存活率的影响,Annexin V /PI 双染检测Hela 细胞的凋亡,逆 转录聚合酶链反应检测Hela 细胞Bax/Bcl-2 mRNA 比值和c-myc mRNA 水平。结果 DC 细胞培养第7 天时CD8 的阳性表达率为21.62%,CD40 的阳性表达率为76.67%。CIK 细胞培养第14 天时CD3、CD8 及 CD56 的阳性表达率分别为86.85%、82.69% 和47.65%。DC-CIK 细胞与Hela 细胞共培养后,Hela 细胞的存 活率下降58.40%。流式细胞仪检测Hela+DC-CIK 细胞凋亡率增加4.12 倍。Hela+DC-CIK 共培养的Hela 组 Bax/Bcl-2 mRNA 比值为Hela 组的（3.49±0.08）倍（P <0.05）,c-myc mRNA 水平提高60.72%（P <0.05）。 结论 该实验成功构建DC-CIK 共培养体系,初步验证DC-CIK 可能通过调控Bax /Bcl -2 及c -myc 基因的 表达,诱导Hela 细胞凋亡。     

重组人肿瘤坏死因子致肺癌细胞(LC-6)凋亡的研究

目的：探讨重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）引起肺癌细胞（ＬＣ－６）死亡的机制。方法：应用原位细胞毒性分析、ＤＮＡ解降片段琼脂糖凝胶电泳、形态学和流式细胞学测定的动态分析。结果：ｒｈＴＮＦ作用于肺癌细胞（ＬＣ－６）数小时后,引起细胞核ＤＮＡ解成寡聚核苷酸片断,说明肺癌细胞（ＬＣ－６）以细胞凋亡的方式死亡,并且细胞凋亡的程度与重组人肿瘤坏死因子作用的时间及浓度呈正相关。单纯应用放线菌素Ｄ后则肺癌细胞（     

HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量

目的建立高效液相色谱法测定独子藤中雷公藤红素的含量,为雷公藤红素的药用植物资源开发提供依据。方法采用Supelco Discovery C18柱（25 cm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-5%（体积分数）H3PO4水溶液（体积比80∶20）,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为426 nm。结果雷公藤红素在40～200μg.mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 1）。独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为0.055 5%,雷公藤红素的平均回收率为97.6%,RSD=1.78%（n=6）。结论该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于独子藤中雷公藤红素的含量测定;独子藤中雷公藤红素含量较高,可作为雷公藤红素的资源植物加以开发利用。     

三氧化二砷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响.方法 采用MTF法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法 检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响.结果 MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性.12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P<0.01).同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用.结论 As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一.     

红霉素促进鼻息肉上皮细胞凋亡的实验研究

目的:观察红霉素对上皮细胞凋亡的影响,探讨上皮细胞凋亡在鼻息肉组织形成中的意义。方法:将30例鼻息肉及6例下鼻甲上皮细胞均分成2组,1组加红霉素,培养原代上皮细胞,另1组不加红霉素,1、35、d时用TUNUL法检测细胞凋亡。结果:红霉素组培养1、3、5 d的上皮细胞凋亡指数分别为(33.23±6.50)%、(38.21±7.22)%和(52.63±7.86)%,不加红霉素组为(31.02±5.60)%、(32.13±7.15)%和(39.64±7.48)%,培养5 d的上皮细胞凋亡指数两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:红霉素有明显的促鼻息肉上皮细胞凋亡的作用。     

鬼臼毒素衍生物OAMDP诱导HeLa细胞凋亡

鬼臼毒素衍生物OAMDP对人宫颈癌HeLa细胞显示了细胞增殖抑制活性,并呈现一定的时间和剂量的依赖性,对其作用机制进行初步研究。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察发现OAMDP能诱导HeLa细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin Ⅴ-FITC/PI荧光双染流式细胞术检测亦证实OAMDP可以诱导HeLa细胞发生凋亡;Rhodamine123染色线粒体膜电位检测发现OAMDP会引起HeLa细胞线粒体膜电位的下降。Western Blot分析显示OAMDP上调HeLa细胞凋亡相关蛋白Bax,下调Bcl-2的表达。此外OAMDP能使HeLa细胞阻滞于S期。总之,OAMDP能够诱导HeLa细胞凋亡和S期阻滞,可能成为一种新型的抗肿瘤药物。