体外循环对冠脉搭桥手术中性粒细胞凋亡的影响与意义

目的探讨体外循环(CPB)对冠脉搭桥术(CABG)中性粒细胞(PMN)凋亡及其机能的影响和意义。方法将60例行冠状动脉搭桥术患者随机分为体外循环冠脉搭桥(CCABG)组(n=30)和非体外循环冠脉搭桥(OPCAB)组(n=30),分别于麻醉诱导后、CPB(手术)结束时、CPB(手术)后4h、CPB(手术)后8h、术后第1天晨5个时点采集静脉血。用全血细胞计数仪测定PMN数量,流式细胞仪测定PMN凋亡率和PMN表面黏附分子CD11b表达变化,ELISA法测定血浆弹性蛋白酶浓度变化,透射电镜观察PMN凋亡细胞形态学变化。结果CCABG组PMN凋亡率在围CPB期明显降低,PMN数量、CD11b表达、血浆弹性蛋白酶浓度则明显升高,透射电镜下可见典型的PMN凋亡细胞。OPCAB组各指标无明显变化。结论CPB导致PMN的凋亡受抑,PMN数量增加、生存周期延长、CD11b表达上调、脱颗粒释放弹性蛋白酶增加,从而加剧炎症反应扩散和组织损伤。     

中性粒细胞黏附分子表达及细胞因子释放在体外循环炎性反应中的作用

目的探讨中性粒细胞(PMN)黏附分子表达和细胞因子释放对体外循环(ECC)全身炎性反应的影响和意义。方法30例行ECC心脏直视手术患者分别于麻醉诱导后、ECC结束时、ECC结束后4h、ECC结束后8h、术后第1天晨5个时点采集静脉血。用全血细胞计数仪测定PMN数量,流式细胞仪测定PMN表面黏附分子CD11b表达水平,ELISA法测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8水平。结果ECC前的PMN数量和其他时点间差别均有统计学意义(P<0.05);ECC前CD11b、TNF-α、IL-6、IL-8水平和ECC结束时、ECC结束后4h及ECC结束后8h间差别均有统计学意义(P<0.05),与术后第1天间差别无统计学意义(P>0.05)。结论ECC导致PMN数量增多,CD11b表达增高,细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8释放增多,从而加剧炎性反应扩散和组织损伤。     

基质金属蛋白酶-9在体外循环炎性反应中的作用

目的：通过测定血浆基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化及中性粒细胞(PMN)粘附分子CD11b的表达，了解其在体外循环(CPB)炎性反应中的作用。方法：选择20例接受CPB的患者，分别在CPB开始前、开始后5min、结束时、结束后1h和结束后6h采集血标本，采用酶联免疫吸附分析方法检测血浆MMP-9和TNF-α浓度，流式细胞仪测定CD11b。结果：①血浆MMP-9和TNF-α的浓度及粘附分子CD11b的活性在CPB期间逐渐升高，在CPB结束时达到最高峰值，之后呈下降趋势。②围CPB期血浆MMP-9、TNF-α浓度变化与CD11b之间呈正相关性，CPB结束时血浆MMP-9浓度与主动脉阻断时间最有相关性。结论：缺血再灌注损伤在CPB炎性反应中起重要作用，MMP-9可能通过转化TNF-α，调节PMN粘附分子CD11b的表达而参与CPB炎性反应。     

体外循环对小儿中性粒细胞凋亡及其调控蛋白的影响

目的动态观察患儿在体外循环（extracorporeal circulation,ECC）各时段外周血中性粒细胞（polymorphonu-clear neutrophil,PMN）的凋亡率,及其脂肪酸合成酶（Fas）、B细胞淋巴瘤（Bcl-2）蛋白表达的变化规律,为临床从PMN凋亡调控入手防治ECC引发的全身炎性反应（SIRS）提供实验室依据。方法选择择期ECC下行室间隔缺损修补术的患儿30例,采用流式细胞术检测ECC前（T0）,ECC开始后30 min（T1）,停ECC后30min（T2）,术后24 h（T3）各时点静脉血中PMN的凋亡率、Fas和Bcl-2的表达。结果与T0比较,PMN凋亡率在T2达最低值（P〈0.05）,与ECC持续时间呈负相关（r=-0.648,P〈0.05） 与T0比较,PMN膜上Fas阳性表达百分数在T2时点降低（P〈0.05）,与PMN凋亡率呈正相关（r=0.546,P〈0.05） 与T0比较,T1、T2、T3时点PMN胞内Bcl-2阳性表达百分数升高（P〈0.05）,与PMN凋亡率呈负相关（r=-0.569,P〈0.05）。结论小儿ECC触发全身炎性反应的过程中产生的多种凋亡抑制因素使PMN凋亡受到抑制,其机制与PMN的Fas表达下调和Bcl-2表达上调有关。     

两种心脏手术方式对中性粒细胞 CD11b、丙二醛及心肌酶影响的对比研究

目的探讨停跳和不停跳心内直视手术对外周血中性粒细胞(PMN)CD11b表达、血浆丙二醛(MDA)和血清心肌酶水平的影响。方法32例先天性心脏病患者分为不停跳组(n=15)和停跳组(n=17)。在不同时间点采静脉血测定PMN CD11b表达、血浆MDA水平和血清心肌酶水平。结果两组PMN CD11b和血浆MDA水平在体外循环开始后均显著升高,在体外循环结束后停跳组显著高于不停跳组。术后血清心肌酶水平停跳组显著高于不停跳组。结论体外循环本身可导致PMN CD11b和血浆MDA的升高,而缺血再灌注损伤可使PMNCD11b、血浆MDA进一步增高;不停跳手术的心肌保护效果优于停跳手术。     

急性下肢深静脉血栓形成患者CD62L和CD11b/CD18表达的意义

目的:探讨急性下肢深静脉血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)患者中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)表面粘附分子CD62L和CD11b/CD18表达及其意义.方法:选取急性DVT患者及正常对照人群外周血,运用流式细胞仪对所有对象检测外周血中PMN表面粘附分子CD62L和CD11b/CD18表达.结果:相对于正常组粘附分子CD62L平均抗体阳性表达率,DVT组显著降低(P＜0.001);相对于正常组CD11b/CD18平均阳性表达率,DVT组显著升高.DVT组内部CD62L、CD11b/CD18相关分析,二者呈明显负相关.结论:在下肢DVT的急性期,PMN处于活化状态,以细胞粘附为表现的PMN活化加快了血栓的进程,可能是血栓形成的重要发病原因之一.     

体外循环对小儿血浆细胞因子水平及中性粒细胞凋亡的影响

目的通过检测小儿体外循环(CPB)引起的致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)和抗炎细胞因子白介素-10(IL-10)的水平及中性粒细胞(PMN)凋亡率的动态变化,探讨CPB前后PMN凋亡及致炎和抗炎细胞因子水平的变化与规律。方法选择于CPB时行室间隔缺损修补术的患儿30例,分别于麻醉诱导前(T0)、麻醉诱导后(T1)、复温前(T2)、停CPB即刻(T3)、术后24h(T4)及48h(T5)6个时间点取外周血,ELISA法检测血浆TNF-α、IL-8和IL-10水平,流式细胞仪测定PMN凋亡率,进行比较分析。结果血浆TNF-α水平、IL-8水平及PMN凋亡率在T2与T0间差异有统计学意义(P<0.05);T3与T0间差异亦有统计学意义(P<0.01);T4、T5与T0间差异均无统计学意义(P>0.05)。血浆IL-10水平在T2、T3、T4与T0间差异均有统计学意义(P<0.01);T5与T0间差异无统计学意义(P>0.05)。CPB结束时,血浆TNF-α水平与PMN凋亡率呈负相关(r=-0.578,P<0.05);血浆IL-8水平与PMN凋亡率呈负相关(r=-0.455,P<0.05);血浆IL-10水平与PMN凋亡率呈正相关(r=0.374,P<0.05)。结论CPB引起致炎细胞因子TNF-α、IL-8水平升高,抗炎细胞因子IL-10水平升高,PMN凋亡率下降;致炎细胞因子TNF-α、IL-8可能抑制PMN的凋亡;抗炎细胞因子IL-10可能促进PMN的凋亡。     

昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的实验研究及CD11b在HL-60细胞株的表达

目的 研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的影响及CD11b在HL-60细胞株的表达。方法 用MTT法测定不同浓度LAMS对HL-60细胞株的增殖抑制作用；流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率，免疫组化法测定MMS对HL-60细胞株NP-κB家族P65亚单位的作用及CD11b表达。结果 HL-60细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关；HL-60细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高；在LAMS浓度为0．75μg/ml作用下，P65在12h表达呈强阳性，24h几乎不表达，而IKbα在6h表达呈强阳性，CD11b不表达。结论 LAMS可以诱导体外HL-60细胞凋亡，其中对凋亡的调控作用可能为负调控；LAMS能够调控NF—κB的表达，其表达有时间差异性。说明LAMS已作用于分子水平，且对CD11b在HL-60细胞株的表达无影响。     

慢性静脉功能不全粘附分子CD11b/CD18、ICAM-1表达及意义

目的：探讨CVI粘附分子表达与皮肤损伤的关系。方法：采用ELISA法，免疫组织化学法（SP法）和电镜超微结构研究32例CVI患者和8例正常对照组。结果：①class2～3级EC—ICAM-1和PMN—CD11b阳性表达率显著高于class1级和对照组（P〈0．05），class2-3级和classl级PMN—CD18阳性表达率明显高于对照组（P〈0．05）；②相关分析显著，ICAM-1表达与CD11b和CD18表达呈显著正相关；③电镜超微结构证明；PMN与Ecs粘附导致皮肤微血管病变。结论：CVI血浆TNFα、IL-1β增高，上调ICAM-1和CD11b／CD18表达，并介导PMN粘附于ECs，导致ECs和组织损伤，可能是静脉溃疡重要的发病机制之一。     

褪黑素对NB4细胞作用的研究

目的观察褪黑素对人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡、分化及细胞周期的影响。方法以不同浓度的褪黑素(0.1、0.5、1mmol/L)加入NB4细胞中,继续培养24、48、72h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞膜表面抗原CD33和CD11b的表达阳性率,及细胞周期的变化情况。结果MLT有促进NB4细胞凋亡的作用,且呈时间和浓度依赖性增加(P<0.05);CD33的细胞阳性率没有变化(P>0.05),CD11b的细胞阳性率在浓度为1mmol/L,48h和72h有轻度增加(P<0.05);细胞周期检测则显示随着浓度和时间的增加,G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。结论褪黑素有促进NB4细胞凋亡,影响细胞生长周期的作用,诱导分化作用则不明显。     

大鼠体外循环模型的建立及其效果评价

目的探讨大鼠动-静脉体外循环(extracorporeal circulation,ECC)模型是否能模拟临床体外循环造成的特征性炎性反应和器官损伤。方法 SD大鼠麻醉,右颈总动脉、左股静脉插管建立循环通路后随机分为2组:ECC组大鼠采用右颈总动脉-左股静脉转流2h,观察2h;Sham组大鼠插管后仅进行血液稀释而不行旁路循环,观察4h。实验结束后取标本测定血常规、血浆炎性细胞因子含量、动脉血气、支气管肺泡灌洗液中炎性因子和肺组织含水量;并使用流式细胞术测定循环内皮细胞数量;另取肺组织做HE染色。结果 ECC后2h,ECC组大鼠仍能保持正常红细胞数量,而白细胞数量、血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平、循环内皮细胞数量均高于Sham组(P<0.05)。肺损伤指标显示:ECC组动物肺氧合指数低于300 mmHg(1mmHg=0.1333kPa),并低于Sham组(P<0.05),达到临床急性肺损伤诊断标准;而支气管肺泡灌洗液内TNF-α、肺水含量均高于Sham组(P<0.05),肺组织内可见大量炎性细胞浸润,肺泡膜明显增厚。结论经右颈总动脉、左股静脉插管能成功建立大鼠ECC模型,该模型影响因素单一,成功率高,仅转流2h即能诱导出全身炎性反应综合征和炎性相关急性肺损伤,因此适于研究ECC炎性反应对组织器官功能的影响。     

乌司他丁对体外循环中激活的白细胞和血小板作用的研究

目的研究体外循环（extracorporeal circulation,ECC）下心脏直视手术中乌司他丁对激活的白细胞和血小板功能的作用。方法30例择期ECC下冠状动脉搭桥患者随机分为两组：对照组（C组,n=15）和乌司他丁组（U组,n=15）。对照组ECC中不给予乌司他丁,试验组围ECC期给予乌司他丁100万单位（其中30万为麻醉诱导前给予,40万预充ECC机内,30万为开放升主动脉后给予）。分别于麻醉诱导后（T1）、阻断升主动脉后30 min（T2）、再灌注3 h（T3）、6 h（T4）及12 h（T5）各时间点取静脉血测定中性粒细胞弹性蛋白酶（PMNE）的水平;并于麻醉诱导后（Ta）、ECC结束后给鱼精蛋白前（Tb）、鱼精蛋白中和后1 h（Tc）、术后24 h（Td）提取全血标本测定CD62p的表达。此外,于ECC前、后抽取动脉血气监测肺泡动脉血氧梯度（A-aDO2）。结果两组血清中PMNE的浓度在T2、T3、T4、T5各时间点都明显高于T1时间点（P〈0.01）,U组的PMNE水平明显低于对照组（P〈0.05）。Tb、Tc、Td时间点两组CD62p的表达明显高于Ta时间点,但是两组之间没有明显差异。相比较对照组,U组的A-aDO2明显低于对照组,且患者机械通气时间低于对照组。结论在ECC过程中乌司他丁可以通过PMNE的释放从而减轻肺脏的缺血再灌注损伤,但是并没有起到抑制血小板激活的作用。     

足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及影响因素的初步观察

目的　探讨足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及其影响因素。②方法　以健康成人为对照 ,采用凋亡细胞计数和片段DNA电泳观察足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性 ;用免疫荧光法、ELISA法分别检测足月新生儿CD2 5,CD3 8表达率和IL 2 ,IL 6产生能力 ,并分析其与凋亡率的相关性。③结果　经PHA刺激培养 2 4,48h足月新生儿T淋巴细胞凋亡率明显高于成人组 (t=32 .2 5 8,2 1.6 80 ,P <0 .0 1) ;足月儿组培养 0 ,48h的CD3 8表达率与T淋巴细胞凋亡率呈正相关 (r=0 .894,0 .774,P <0 .0 1) ,而培养 48h的CD2 5表达率与T淋巴细胞凋亡率呈负相关 (r =- 0 .886 ,P <0 .0 1) ;足月儿组IL 6产生水平明显低于成人组 (t=6 .741,P <0 .0 1) ,而T淋巴细胞凋亡率与IL 2 ,IL 6产生水平皆无相关性。④结论　凋亡过剩是新生儿T淋巴细胞功能不成熟的重要特征之一。     

急性脑梗死患者中性粒细胞活化的研究

目的探讨中性粒细胞活化在急性脑梗死疾病患者中的意义。方法抽取急性血栓形成性脑梗死患者及健康志愿者外周血，运用流式细胞技术检测中性粒细胞表面黏附分子CD62L和CD 11b／CD18表达。运用放射免疫分析检测血浆IL-6、IL-8、TNF-α水平，用酶联免疫吸附试验检测血浆IL-10水平。结果相对于正常组，脑梗死组中性粒细胞CD11b／CD18平均阳性表达率显著升高（P〈0．001）；CD 62L平均阳性表达率明显降低；细胞因子水平均明显升高（P〈0．001）。结论在急性血栓形成性脑梗死的急性期，中性粒细胞处于活化状态。以细胞黏附为表现的中性粒细胞活化加快了血栓的进程，可能是血栓形成的重要发病原因之一。     

T细胞第二信号受体-CD28分子在HIV/AIDS患者中的异常改变

目的研究T细胞第二信号受体-CD28分子在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者中的异常改变,探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测HIV/AIDS患者外周血CD4 T细胞表面CD28分子的表达,对278例未接受过高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的患者进行横断面研究,对其中59例接受规律HAART的患者于开始治疗前,治疗后第1、3、6、9、12月末进行随访。以56例健康献血员作为正常对照。结果HIV/AIDS患者外周血CD4 T细胞表面CD28分子表达显著下调(P<0.001),且CD28分子表达比例与其CD4 T细胞计数呈正相关(r=0.484,P<0.001),与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.300,P<0.001)。给予HAART1个月后CD4 T细胞的CD28表达比例中位数由75%快速恢复至90%(P<0.001)。HAART期间6个时间点的CD28表达比例中位数与病毒载量中位数呈负相关(r=-0.829,P=0.042),与CD4 T细胞计数中位数之间未发现显著相关性。结论HIV/AIDS患者外周血CD4 T细胞表面CD28分子表达明显减少,HAART可有效重建CD4 T细胞功能亚群(CD4 CD28 T)的数量,HAART后CD28表达上调可能与病毒载量的控制密切相关。     

PMN apoptosis and its relationship with the lung injury after chest impact trauma

Background Polymorphonuclear neutrophil (PMN), one of the most important inflammatory cells, functions throughout the initiation, progression and resolution of inflammation. This study aimed at investigating the relationship between PMN apoptosis and the lung injury after chest impact trauma. Methods PMNs were purified from rabbits subjected to the chest impact trauma and their apoptosis, necrosis, survival and respiratory burst were detected by flow cytometry. Meanwhile, lactate dehydrogenase and (LDH) ［Ca2+］i were measured. Results The delayed apoptosis of PMNs in bronchoalveolar lavage fluid was observed from 2 hours to 12 hours after trauma, and viable cells increased. Respiratory burst of PMNs in bronchoalveolar lavage fluid was increased significantly from 2 hours with the peak at 8 hours. Meanwhile, lactate dehydrogenase in bronchoalveolar lavage fluid was higher than that in control (P&lt;0.05) from 4 hours to 24 hours, and intracellular free Ca2+ in PMN was increased temporarilly. Conclusions Retention of PMN in tissues and the abnormality in apoptotic pathway inevitably generate persistent activation of PMN and excessive release of toxic substances, resulting in tissue injury. The temporary increase of intracellular free Ca2+ may be responsible for the delayed apoptosis of PMN.     

烧伤早期中性粒细胞粘附的改变及其机制的探讨

目的：探讨烧伤早期血液中性粒细胞（PMN）粘附的变化规律及其机制。方法：采用兔30％ TBSA Ⅲ度烧伤,于伤后即刻,2,4,8,16,24,48 h取血分离获得PMN,测定PMN粘附率及其粘附分子CD11a/CD18的变化;同时检测血浆中PLA2和TNF的改变。结果：烧伤早期PMN粘附率及粘附分子CD11a/CD18均明显高于伤前组,尤以伤后8 h为最显著,然后逐渐下降,至48 h后恢复至烧伤前水平,PMN粘附率与CD11a/CD18两者之间呈明显的正相关(r=0.90);烧伤后血浆中TNF,PLA2也开始升高,分别于烧伤后即刻与24 h达峰值。结论：烧伤早期PMN粘附率及粘附分子CD11a/CD18均明显升高;粘附分子CD11a/CD18可能是介导烧伤后PMN粘附的重要因素;烧伤早期TNF,PLA2的变化可能也是PMN粘附改变的原因之一。