亳菊花中β-葡萄糖苷酶的提取和酶学性质研究

目的 测定亳菊花中β-葡萄糖苷酶的活性,研究亳菊花中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质。方法 采用对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG）法考察亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件及其酶学性质。结果 当0.2 mL酶液、20 mmol/L pNPG 0.2 mL、0.6 mL pH值为4.0的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液在温度为50 ℃的水浴中反应45 min时,酶活性最高。在此条件下对亳菊花的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质进行初步研究,结果表明该酶在30～50 ℃时,随着温度升高,酶活力有上升趋势,其热稳定性较好;pH值在3.2～5.4之间时,相对酶活性均在80%以上;酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 本研究所测定的亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件及酶学性质可为亳菊花炮制原理研究奠定基础。     

中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:研究2种中药提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。方法:以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,用分光光度法测定反应体系的吸光度值,判定对α-葡萄糖苷酶活性的影响作用。结果:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为89.1%和84.0%,IC50值分别为2.4μg/mL和3.0μg/mL,天麻素抑制机制为混合性而川芎嗪抑制机制为竞争性。结论:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶均具有较强的抑制作用。     

棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性研究

目的 研究棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性. 方法 将棘托竹荪菌盖胞外酶冻干粉以缓冲液进行溶解,经透析、离心后,以DNS为显色剂,以水杨苷为底物,采用分光光度法,对β-葡萄糖苷酶的主要酶学特性和不同抑制剂、激活剂对酶活性的影响进行研究. 结果 β-葡萄糖苷酶的最适反应pH为4.0,最适反应温度为65℃;Hg2＋、Cu2＋对酶起抑制作用,Fe2＋、Zn2对酶具有激活作用;棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶对水杨苷的米氏常数（Km）为1.320×10-2 mol/L,最大反应速度Vmax为0.143 7μmol/min,比活力为2.874 U/mg. 结论棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶偏好酸性环境,其温度适应范围较宽,温度升高可提升酶催化活性,但影响酶的稳定性.     

β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷的研究

目的 采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷,并对其酶水解动力学进行初步研究。方法 以HPLC-ELSD法检测水解液中黄芪甲苷及水解产物环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷（CMG）的量,以黄芪甲苷的水解转化率为指标,考察各反应因素对转化率的影响,并对该反应进行动力学研究。结果 最佳反应条件为反应温度50 ℃,溶液pH值5.0,酶浓度460 U/mL,底物初始浓度0.1 mmol/L,反应时间48 h;在此条件下,水解转化率达到90%以上。在最佳反应条件下,该水解反应过程符合单底物Michaelis Menten方程,其中最大反应速率（V_m）值为0.037 mmol/(L?min),米氏常数（K_m）值为5.8 mmol/L。结论 采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷制备CMG可行;商品化的β-葡萄糖苷酶并非黄芪甲苷的特异性水解酶。     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的工艺研究

目的：研究栀子苷元最佳制备工艺。方法：采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将栀子苷转化为苷元，以栀子苷元转化率为指标，正交试验优化β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的工艺。结摹：最佳水解条件为：水解介质pH4．5、反应温度50℃、酶用量9600U·ml^-1，水解时间1h，栀子苷元转化率为44．7％，纯度为97．3％。结论：选取的水解工艺条件合理、可行，栀子苷元转化率高。     

γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁,经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后,采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25～35℃的温度范围有很好的耐受性,在碱性条件下保持一定的活性,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0,Ca2＋、Mg2＋等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。     

Thermotoga neapolitana 葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及其酶学性质

目的：从新阿波罗栖热袍菌Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中克隆葡萄糖苷酶基因,并将其转化进大肠杆菌中进行体外表达,研究重组酶的酶学性质。方法：以Thermotoga neapolitana基因组DNA为模板,根据该基因序列设计引物,采用PCR法扩增出葡萄糖苷酶基因,将其连接到pET-28a(+)载体上,转化入E.coli BL21 (DE3 )宿主菌中。经IPTG诱导体外高效表达。研究重组酶的最适反应温度、pH值和底物特异性。结果：PCR扩增得到825 bp的片段,编码274个氨基酸,并连接到载体pET-28a(+)上,成功转化到宿主菌中,并在体外进行了高效表达。丙烯酰胺凝胶电泳,目标蛋白相对分子质量约为63 000。重组酶的最适反应温度为75℃,在70℃～85℃范围内仍保持60%以上活力。最适反应pH值为5.0,在pH 3.0～6.0范围内仍能保持70%以上活力。最适底物为海藻糖,其次为龙胆二糖,其他糖苷键连接的二糖的活力均很低或没有活力。结论： Thermotoga neapolitana (DSM 4359)中葡萄糖苷酶基因成功克隆并表达于大肠杆菌中。葡萄糖苷酶能特异性水解α- (1→1)糖苷键。     

β- D- 葡萄糖苷酶对5种菊花总黄酮的影响

目的 基于菊花传统加工过程中“杀酶保苷”的炮制原理,研究在不同炮制过程中,β- D- 葡萄糖苷酶对不同药用菊花总黄酮的影响。方法 模拟抑制酶、激活酶、杀灭酶的加工炮制原理,分别与不同药用菊花总黄酮进行反应,并以乙腈- 0.2%醋酸水为流动相进行梯度洗脱,通过高效液相色谱法分别对不同炮制后的药用菊花总黄酮进行含量测定。结果 与激活酶组相比,黄酮苷类成分木犀草苷、芹菜素苷、香叶木苷在抑制或灭活酶组所测得含量升高,其相应的次级苷元类成分木犀草素、芹菜素、香叶木素、金合欢素含量降低。结论 5种菊花总黄酮在抑制或灭活酶的条件下有利于黄酮苷的保存。     

中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺的研究

目的 探讨中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺.方法 以愈创木酚为底物,采用分光光度法测定菊花过氧化物酶的酶学特性,并比较不同加工工艺下菊花过氧化物酶学特性及总黄酮含量.结果 菊花反应时间不宜超过2 min,最适pH 7.0,最适温度36℃,100℃处理30 s后,过氧化物酶活性完全丧失.过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=1.58×10-2 mol/L,Vmax=14.278 U/min.四种炮制工艺比较过氧化物酶的抑制效果为水蒸汽>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.分光光度计法测定样品总黄酮含量,蒸制干燥>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.结论 菊花过氧化物酶适应温度范围广,20~80℃,相对耐热性好.本研究可为中药菊花炮制工艺的改善提供理论参考.     

茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用及酶动力学研究

目的 探讨不同浓度茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性,及其酶促反应动力学特性。方法 采用体外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性筛选模型,测定不同浓度的茯苓三萜类对两种酶的抑制作用,采用Lineweaver-Burk双倒数法分析其酶动力学性质。结果 体外酶活性抑制试验显示,不同浓度的茯苓三萜类在体外对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均有抑制作用,其最大半数抑制浓度(IC₅₀)分别为1.40μg/mL、10.43μg/mL,茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶的抑制作用为可逆非竞争性抑制,对α-淀粉酶的抑制作用为可逆混合抑制类型。结论 茯苓三萜类物质有降血糖活性,且浓度越高抑制效果越明显。本研究可为茯苓降血糖药物的研究和开发提供科学依据。     

市售川产水豆豉分离株中高产蛋白酶与β-葡萄糖苷酶菌株的菌属鉴定与产酶能力评价

目的 筛选并鉴定72株川产水豆豉分离株中高产蛋白酶及β-葡萄糖苷酶的菌株,为深入研究水豆豉的营养价值及开发其发酵菌株提供实验依据。 方法 采用酪蛋白法和对硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(pNPG)法分别测定菌株产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶的能力,选出优势菌株,通过形态学、生化特征、16S rRNA和基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。绘制菌株生长曲线和产酶曲线并测得其遗传稳定性。 结果 选择产蛋白酶能力前10名菌株中β-葡萄糖苷酶活力最高者(0.084 U/L)作为优势菌株,表型及分子生物学法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株生长曲线、产酶曲线符合枯草芽孢杆菌特性,遗传稳定性结果显示其产酶能力能稳定遗传至第9代并于第10代开始下降。 结论 从72株川产水豆豉分离株中筛选出的高产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌。     

苍术提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的：研究苍术不同提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。方法：分别用水、60%乙醇、乙酸乙酯为溶剂提取苍术的活性成分,以PNPG（4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷）为底物,测定各提取物对α-葡萄糖苷酶活性的作用。结果：苍术的水、乙醇、乙酸乙酯提取物对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为62.23%、100%和55.6%,IC50值分别为0.25mg.mL、0.38mg.mL和0.41mg.mL-1。结论：苍术提取物对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用,其中乙醇提取物抑制作用最强。     

酶水解对亳菊总黄酮中黄酮苷元的影响

目的 体外研究烘干过程中酶对亳菊总黄酮成分的影响,为亳菊产地加工和炮制工艺提供前期研究基础。方法 模拟亳菊烘干过程,采用β-D-葡萄糖苷酶酶解亳菊总黄酮,以金合欢素、芹菜素、木犀草素3种黄酮苷元含量为指标,分析酶解反应对3种黄酮苷元含量变化的影响。结果 酶解反应后,亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种黄酮苷元的含量升高。结论 β-D葡萄糖苷酶可酶解亳菊中黄酮类成分,使其中黄酮苷元含量升高,β-葡萄糖苷酶水解亳菊总黄酮是烘干过程中黄酮苷元含量升高的原因之一。     

内毒素调节血细胞释放β-葡萄糖苷酸酶的实验研究

目的研究内毒素可否增加小鼠血清β-葡萄糖苷酸酶(β-GD)的活性,以及内毒素对正常人外周血单核细胞(PBMC)产生β-葡萄糖苷酸酶的影响。方法按每公斤体重5mg内毒素(实验组)和生理盐水(对照组)腹腔注射BALB/c小鼠,并于注射后的1/2、2、4和24h取血液抗凝离心,上清液冻存;以1μg/mL内毒素(实验组)和生理盐水(对照组)刺激体外培养的外周血单核细胞,并分别于培养的2、4、8、12和24h取上清液;采用酶促动力学方法于pH值4.5条件下检测上清液β-GD活性。结果与对照组BALB/c小鼠比较,腹腔注射内毒素1/2、2和4小时后,血清β-葡萄糖苷酸酶活性显著增高,依次为(2.14±1.46),(3.96±0.88),(4.40±0.55),(5.65±0.58)Fishman单位,t值分别为2.548、2.896和4.474,P<0.05。正常人PBMC在与LPS共培养的4、8、12和24h,实验组β-GD活性显著高于对照组,分别为(1633.3±65.0)和(1106.7±48.6),(1926.0±147.1)和(1067.7±133.1),(1743.3±66.8)和(1016.7±147.7)...     

大鼠溶酶体及微粒体β—葡萄糖苷酸酶性质的研究

本文采用高速离心等方法从鼠肝中分别获得溶酶体及微粒体,然后对溶酶体及微粒体β—葡萄糖苷酸酶的性质进行了研究。结果表明,此二种细胞器中该酶的最适PH、Km及分子量基本相同,而热稳定性、pH稳定性及等电点不同。     

虎杖提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的研究虎杖水溶性提取物对α-葡萄糖苷酶的作用。方法采用大孔吸附树脂柱色谱法进行虎杖水溶性总提取物初步分离,研究其总提取物和不同组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响及其抑制反应的类型。结果虎杖总提取物(RRPC)与30%醇洗脱物(RRPCⅡ)对α-葡萄糖苷酶的IC50分别为74、15μg/mL,而蒸馏水(RRPCⅠ)、50%乙醇(RRPCⅢ)、70%乙醇(RRPCⅣ)、95%乙醇(RRPCⅤ)洗脱物的IC50均大于200μg/mL。结论RRPC及RRPCⅡ能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,RRPCⅡ的抑制机制为可逆性的非竞争性抑制。     

酶转化三七叶总皂苷制备人参皂苷C-K的工艺优化

目的 研究以三七叶总皂苷制备人参皂苷C-K的酶转化工艺。方法 利用4种工业酶制剂对三七叶总皂苷进行转化，筛选出最佳酶制剂；以人参皂苷C-K的含量为指标，采用正交试验法进行酶转化工艺的优化；采用TLC及HPLC法检测酶转化产物。结果 酶转化三七叶皂苷的最佳工艺条件为：20％p葡聚糖苷酶，pH5．4，反应温度55℃，反应时间48h。反应时间的影响最大，其次是酶的体积分数。结论 β-葡聚糖苷酶对三七叶总皂苷的转化作用最强。     

胆汁中内源性β-葡萄糖苷酸酶活性与棕色素结石之间的关系

目的 探讨内源性β-葡萄糖苷酸酶活性与胆管棕色素结石之间的关系.方法 收集21份胆管棕色素结石患者与5份健康志愿者胆总管胆汁,检测比较二者之间内源性β-葡萄糖苷酸酶活性及胆红素差异,再次检测置于37℃温箱中避光保存24 h以后的胆汁胆红素的量,并与温育前的检测结果进行比较分析.结果 棕色素结石组胆汁内源性β-葡萄糖苷酸酶活性(32 800.0±11713.2)Fishman单位,显著高于对照组(10 880.0±2 917.5)Fishman单位;两组胆汁在温育24 h后非结合胆红素都显著升高.结论 内源性β-葡萄糖苷酸酶有可能在胆红素结石的形成中起一定的作用.     

不同处理方法及影响因素对地黄中梓醇量的影响

目的 分析不同贮藏方式、炮制方法、温度、pH值和酶对梓醇量的影响。方法 采用HPLC法测定鲜地黄不同炮制品及不同贮藏条件下梓醇量的变化,并在不同温度、pH值及酶的条件下,放置一定时间后测定梓醇量。结果 鲜地黄中梓醇量明显高于其炮制品,抽真空冷冻下梓醇量几乎不变,而梓醇受pH影响较大,强酸或强碱条件下均不稳定,并随着温度升高而加剧这种变化,同时易受β-葡萄糖苷酶的影响。结论 梓醇对热稳定,对酸、碱及β-葡萄糖苷酶不稳定。