积雪草酸对肝癌细胞增殖作用的影响

目的: 研究积雪草酸(asiatic acid,AA)对人肝癌细胞株(HepG2)的抑制作用,并探讨其与线粒体之间的关系.方法: 采用MTT法检测AA对HepG2细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态的变化;荧光探针MitoTracker检测线粒体数目;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位;荧光探针DCFH-DA检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;ATP试剂盒检测胞内ATP水平;RT-PCR和Western Blot法分析电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)表达量的变化.结果: AA能够剂量依赖性抑制肿瘤细胞株的增殖,30 μmol/L AA作用细胞24 h后细胞突起消失、胞体皱缩、变圆.AA能够使HepG2细胞线粒体膜电位下降,胞内ROS含量增加,降低胞内ATP水平,50 μmol/L AA能够增加VDAC蛋白的表达量.结论: AA抑制肿瘤细胞增殖的作用与线粒体有关,线粒体VDAC参与人肝癌细胞凋亡的调控过程.     

积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖及自噬水平的影响

目的:观察积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖和自噬水平的影响。方法:用10、30、60、90μmol/L的积雪草酸作用于结肠癌HCT116细胞24、48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率;用MDC自噬特异性荧光染料观察自噬囊泡的形成情况;蛋白质印迹法检测30、60、90μmol/L的积雪草酸作用12 h和90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h的细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、p-m TOR、p-4EBP1的表达。结果:积雪草酸90μmol/L对结肠癌HCT116细胞有明显抑制作用;30、60、90μmol/L积雪草酸均可以诱导结肠癌细胞发生自噬,90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h,自噬蛋白LC3-Ⅱ生成明显增加;90μmol/L积雪草酸与氯喹5μmol/L共同作用于癌细胞12 h,能促进自噬潮的产生;积雪草酸可抑制p-m TOR、p-4EBP1的表达。结论:积雪草酸能明显抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性地抑制m TOR-4EBP1通路来诱导自噬潮的产生。     

白色念珠菌分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞作用机制的初步研究

目的：探讨白色念珠菌（ID16VI）分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞（ARH-77）的作用。方法：荧光染色观察对照组和实验组细胞形态变化；FCM检测凋亡细胞百分率。结果：荧光显微镜下观察到白色念珠菌分泌物处理组的凋亡细胞增多；FCM检测实验组凋亡细胞百分率上升。结论：白色念珠菌分泌物能促进ARH-77细胞凋亡。     

去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266生长调控的影响及其机制的研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对多发性骨髓瘤细胞株的增殖及其凋亡的影响及其可能的机制.方法 四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测5、20、40、80、160μmol/L的NCTD对U266细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同浓度NCTD对细胞周期及细胞凋亡的影响,并应用半定量反转录聚合酶链反应检测survivin基因表达的变化.结果 在20～160μmol/L的浓度内,NCTD对U266细胞的增殖有抑制,抑制与NCTD的浓度呈剂量依赖关系(P<0.05).不同浓度的NCTD能诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,使细胞明显阻滞于G2 /M 期;在NCTD作用下,U266 细胞survivin 及其机制可能与诱导凋亡、细胞周期阻滞有关.结论 NCTD能抑制U266细胞的增殖,并诱导其凋亡的机制可能与抑制survivin的表达及G2 /M 期阻滞有关.     

雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用

目的：应用cDNA芯片研究雄黄作用多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞后对其基因表达的影响。方法：应用包含4096条人类基因的cDNA表达谱芯片,检测雄黄作用于RPMI8226细胞前及48h后基因的表达。结果：在mRNA水平上,164条基因显著改变,53条基因上调,111条基因下调。结论：雄黄作用RPMI8226细胞株后可引起一系列基因改变,许多基因涉及了多发性骨髓瘤的发病机制,其中BTG1,TXNIP及ALK1基因可能与RPMI8226细胞的分化和凋亡有密切关系。     

羟基积雪草酸的镇痛活性及其作用机制研究

目前对积雪草的功效成分研究主要集中在三萜皂苷类成分,对其他成分的药理活性研究较少。本研究采用小鼠醋酸扭体实验、热板法实验和福尔马林实验,对羟基积雪草酸的镇痛活性进行探究。实验分为对照组、阳性药阿司匹林组和低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量的羟基积雪草酸(MA)组。同时,还采用阿片受体阻断实验,辣椒素和谷氨酸诱导的小鼠舔爪实验,对其镇痛机制进行研究。结果显示：MA在醋酸扭体实验和福尔马林实验的Ⅱ阶段表现出显著的镇痛活性;在醋酸扭体实验和福尔马林实验中,MA的镇痛活性没有被纳洛酮明显减弱;中、高剂量的MA均能有效地减轻由辣椒素所引起的疼痛,抑制率分别为29.5%和64.4%,还能有效地缩减由谷氨酸所引起的舔爪时间,抑制率分别为30.9%和56.1%。研究结果表明：MA可通过作用于外周神经系统发挥较好的镇痛作用;该化合物产生的镇痛活性可能涉及谷氨酸能系统和TRPV1的调节,但不涉及阿片能系统。     

多发性骨髓瘤细胞凋亡及其靶向治疗研究进展

多发性骨髓瘤是一种恶性浆细胞疾病。其发生和发展是瘤细胞增殖异常和凋亡受抑的结果。肿瘤细胞凋亡是凋亡相关基因通过启动凋亡信号传导系统来实现。本文主要是从骨髓瘤细胞凋亡的线粒体途径及靶向治疗作一综述。     

苦参碱对多发性骨髓瘤细胞的体外作用机制研究

目的:阐明苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)细胞的作用和内在机理。方法:MTT法检测苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和多发性骨髓瘤原代细胞增殖的影响;根据中效原理分析苦参碱联合亚砷酸对RPMI8226细胞株的联合作用;应用DAPI染色检测细胞凋亡。结果:M1TT比色法检测结果显示,苦参碱对RPMI8226细胞及MM原代细胞均有生长抑制作用,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。体外联合亚砷酸作用RPMI8226细胞抑制率>50%时联合指数(CI)<1。DAPI荧光染色,荧光显微镜下观察苦参碱以终浓度2.0g/L作用于RPMI8226细胞12h后可见明显的凋亡小体出现。结论:苦参碱对RPMI8226细胞和MM原代细胞均有生长抑制作用,体外联合亚砷酸作用MM细胞株RPMI8226细胞,抑制率>50%时呈协同作用。苦参碱通过诱导细胞凋亡抑制RPMI8226细胞的增殖。     

积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞凋亡

目的 探讨积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 凋亡的作用。方法 用乳酸脱氢酶 (LDH) 法和 MTT 法检测积雪草酸对 HSC-T6 细胞的细胞毒性和增殖的影响。不同浓度积雪草酸作用外源性β-转化生长因子 (TGF-β) 激活的 HSC-T6 细胞,通过 Western blotting 方法检测 HSC-T6 细胞凋亡信号分子 Caspase-3 以及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 积雪草酸 (≤30 μmol/L) 对 HSC-T6 细胞无显著的细胞毒性且对细胞增殖无明显作用。积雪草酸可上调 HSC-T6 细胞 cleaved-caspase-3,同时抑制Ⅰ型胶原蛋白表达。结论 积雪草酸可通过诱导 HSC-T6 细胞凋亡达到抑制肝纤维化的作用。     

Bcl-2反义RNA对人多发性骨髓瘤凋亡影响的研究

目的　探讨 bcl- 2反义 RNA对人多发性骨髓瘤内源性Bcl- 2蛋白水平及细胞调亡的影响 ,以期为转基因治疗人多发性骨髓瘤提供实验依据。　方法　利用 DNA重组技术 ,构建反义 bcl- 2逆转录病毒表达载体 ,并将其导入人多发性骨髓瘤细胞株 U2 6 6细胞。通过 RT- PCR检测 bcl- 2反义RNA是否导入了细胞 ,应用 Western Blot检测内源性 Bcl- 2蛋白表达的改变 ,应用形态学、流式细胞术、片段化 DNA电泳及定量分析和 TUNEL 法检测靶细胞的凋亡。　结果　(1)成功地构建了反义 bcl- 2逆转录病毒载体 ,获得的重组病毒上清滴度为 4.5 X10 5 CF…     

2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞作用机制的实验研究

目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对骨髓瘤细胞作用的机制.方法 对1例复发性和难治性骨髓瘤细胞进行分离、培养,予0、1、2、4、8和16 μmol/L的2-ME对骨髓瘤细胞处理48h（以0 μmol/L的2-ME作为对照组）.后采用酶联免疫法检测培养上清中的血管内皮细胞生长因子（VEGF）和IL-6的表达水平,同时采用免疫组化法检测c-myc和bcl-2蛋白阳性表达的骨髓瘤细胞.结果 随着2-ME浓度的增加,培养上清中VEGF和IL-6的表达水平均较对照组明显降低（均P〈0.01）,且骨髓瘤细胞中c-myc和bcl-2蛋白表达阳性率均较对照组明显降低（均P〈0.01）.结论 2-ME对难治性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞具有抑制VEGF、IL-6分泌和C-myc、bcl-2蛋白表达水平的作用.     

三溴丙酮酸对MCF-7 细胞增殖、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨三溴丙酮酸（3-BrPA）对MCF-7 细胞增殖、侵袭,以及对真核转录起始因子5A2（eIF5A2）、c-myc 基因、转移相关蛋白1（MTA1）表达的影响。方法 实验分为5 组：加入等量PBS 的对照组,75、100、125 和150μmol/L 3-BrPA 组。分别将3-BrPA 作用于MCF-7 细胞24、48 和72 h,利用MTT、Transwell 法检测3-BrPA 对MCF-7 细胞存活率和侵袭的影响。采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和Western blot 检测eIF5A2、c-myc、MTA1 基因和蛋白的变化。结果 与对照组比较,3-BrPA 作用于乳腺癌MCF-7 细胞后,细胞存活率降低（P <0.05）,并且具有时间和剂量依赖性。Transwell 结果显示,3-BrPA 作用于MCF-7 细胞24 h 后,与对照组相比,穿过小室的细胞数减少（P <0.05）。RT-PCR 和Western blot 检测结果提示,eIF5A2、c-myc、MTA1 基因和蛋白表达水平随着药物浓度的增加而降低（P <0.05）。结论 3-BrPA 可以抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖及侵袭,其作用机制可能与降低eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白的表达有关。     

熊果酸对多发性骨髓瘤细胞株U266的凋亡作用及机制

目的 探讨三萜类化合物熊果酸（ursoIic acid,UA）对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株U266的凋亡诱导作用及分子机制.方法 用熊果酸处理U266细胞,Cell Counting Kit-8法检测细胞增殖抑制情况;用20μmol/L熊果酸处理U266细胞24 h,瑞氏法染色后在光学显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin-V标记,在流式细胞仪上检测细胞凋亡率变化;用实时荧光定量PCR方法及Western blot方法检测FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC及p53的表达变化.结果 经熊果酸处理后,U266细胞的增殖受到抑制,光学显微镜下可观察到细胞形态不规则样改变,胞膜小泡状形成,细胞质内空泡增多,细胞核染色质浓缩、固缩;流式细胞术检测Annexin-V阳性细胞比例随用药浓度增加及用药时间延长而增加;细胞内FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC的mRNA和蛋白质表达随用药浓度增加及用药时间延长呈显著下降趋势,而p53的mRNA及蛋白表达逐渐增高.结论 熊果酸可抑制U266细胞的增殖并诱导其凋亡,体外有抗多发性骨髓瘤细胞作用,为多发性骨髓瘤选择新的靶向治疗方案提供实验依据.     

桦木酸通过调控JAK2/STAT3信号通路对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨桦木酸(BA)通过介导Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子(STAT3)信号通路对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:骨髓瘤U266细胞给予不同浓度(0、20、40、60、80、100、120和160μmol·L-1)BA作为不同浓度BA组,同时设置空白组(不加入BA且无细...     

沉默NUPR1基因对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及机制研究

目的：探讨沉默核蛋白1（nuclear protein 1,NUPR1）对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法：以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自噬相关基因（ATG5和Beclin1）mRNA水平。构建含有靶向抑制NUPR1基因表达的小发夹RNA（small hairpin RNA,shRNA）序列的NUPR1-shRNA慢病毒载体,并将其转染人多发性骨髓瘤U266细胞。实验分为未转染组、阴性对照转染组和转染组,qRT-PCR、Western Blot检测NUPR1干扰效果、3组细胞自噬相关指标（ATG5、Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ） 及相关通路蛋白（p-AKT/T-AKT、p-mTOR/T- mTOR）的表达;单丹磺酰戊二酸（monodansylcadaverine,MDC）染色后,荧光显微镜下观察自噬囊泡的聚集。结果：人多发性骨髓瘤U266细胞较正常人骨髓单个核细胞及转染组细胞NUPR1（F=7.747,P=0.004）、Beclin1（F=5.548,P=0.013）和ATG5（F=4.031,P=0.034） mRNA水平明显增高。转染组NUPR1（F=9.798,P=0.013）、ATG5（F=7.017,P=0.027）、Beclin1（F=7.213,P=0.025）和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ（F=7.040,P=0.027）蛋白表达较未转染组和阴性对照转染组明显降低,而P62（F=52.622,P=0.000）、p-AKT/T-AKT（F=6.584,P=0.031）和p-mTOR/T- mTOR（F=7.950,P=0.021）蛋白表达明显增高;转染组细胞胞质内自噬囊泡聚集明显减少（F=12.172,P=0.008）。结论：人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1高表达,自噬水平较正常人骨髓单个核细胞高。沉默NUPR1可下调U266细胞自噬水平。NUPR1基因可能通过AKT/mTOR通路调节U266细胞自噬。     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制研究

目的分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制。方法利用0.1、0.2、0.5、1.0及2.0μmol/L丁酸钠(NaBut)对U266细胞株48 h进行处理,使用0.5μmol/L丁酸钠对细胞8、16、24、36、48 h进行处理,使用1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6μmol/L NaBut、6μmol/L VPA对细胞48 h进行处理,另在对照组中加入同等剂量的溶剂,使用MTT法对细胞存活率进行检测,对其检测结果进行比较。结果 (1)与对照组比较,不同浓度丁酸钠处理细胞48 h后细胞存活率逐渐降低,差异显著(P0.05);丁酸钠浓度越高,细胞存活率则越低。(2)与对照组比较,0.5μmol/L丁酸钠处理细胞16、24、36、48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05);处理花费时间越长,细胞的存活率则越低。(3)与对照组比较,1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6 mmol/L NaBut及6 mmol/L VPA处理48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut有效的抑制了多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡,在抗癌方面有着良好的应用前景。     

吡柔比星调控原钙黏蛋白10的表达对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡诱导的作用机制研究

目的探讨吡柔比星(THP)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 2014年4月-2019年3月在郴州市第一人民医院实验室进行实验。应用终浓度为0.1mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5 mg/L吡柔比星处理多发性骨髓瘤细胞KM3,记为THP 0.1mg/L组、THP 1 mg/L组、THP 2.5mg/L组、THP 5mg/L组;未经任何处理的KM3细胞作空白对照(Con)组;转染pcDNA3.1为pcDNA3.1组,转染pcDNA3.1-PCDH10为pcDNA3.1-PCDH10组,转染si-NC后用1 mg/L的THP处理为THP 1 mg/L+si-NC组,转染si-PCDH10后用1 mg/L的THP处理为THP1 mg/L+si-PCDH10组。MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot法检测蛋白表达。结果不同浓度THP处理后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax、PCDH10蛋白的表达水平显著升高(P <0.05);过表达PCDH10后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);抑制PCDH10表达后,THP处理的KM3细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,p21、Bax蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论吡柔比星可抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PCDH10表达相关。     

小豆蔻明对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其机制

探讨小豆蔻明（CAR）对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,并阐明其可能的作用机制。