人胎盘与脐动、静脉血造血干/祖细胞归巢相关黏附分子表达的研究

为了评价人胎盘组织造血干/祖细胞(hematopoieticstem/progenitorcell,HSPC)的归巢能力,采用机械法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用流式细胞术分析胎盘组织及脐动、静脉血有核细胞中CD34+细胞及其亚群的含量,检测三者来源的CD34+细胞表面归巢相关黏附分子CD44、CD11a、CD62L、CD49d、CD49e和CD54的表达水平。结果显示,胎盘组织CD34+细胞及CD34+CD38-细胞百分率明显高于脐动、静脉血;脐动脉与脐静脉血中HSPC百分率没有明显差异。胎盘来源CD34+细胞高度表达黏附分子CD11a、CD49d、CD44、CD49e及CD54,其中表达CD49e及CD54水平明显高于脐动、静脉血CD34+细胞。胎盘来源的CD34+CD62L+细胞百分率为(64.58±15.52)%,低于脐静脉血来源的表达。结论:人胎盘富含HSPC。胎盘来源的CD34+细胞多数黏附分子的表达水平近似或高于脐血,提示胎盘HSPC的归巢能力有可能强于脐带血。     

脐血单个核细胞的分离及冻存

研究脐血采集后的放置,单个核细胞的分离,冻存等的影响因素。方法为血液采集后,离心分离单个核细胞,进行冷冻保存及复苏后洗涤,结果优选为采集后4℃或室温放置24小时内,羟乙基淀粉2次离心法分离单个核细胞,50%二甲亚砚加自身血浆为保护剂冻存,复苏后洗涤等程序,结论：本研究的优化方法可有效地保存脐血单个核细胞。     

不同冻存保护剂对外周血单个核细胞的影响

目的观察不同冻存保护剂对外周血单个核细胞(PBMC)冻存后生物学特性的影响。方法新鲜血液分离和液氮冻存后1、7、30d,用MTT法检测单个核细胞活性,同时用酶联免疫吸附法(ELISA)检测冻存后其在脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(ConA)刺激下分泌γ-干扰素(IFN-γ),比较DMSO10%+FBS90%、DMSO10%+Dextran-4010%+FBS80%、DMSO10%+HES6%+FBS84%、FBS不同冻存保护剂对PBMC的保护作用。结果不同低温保护剂冻存对PBMC存活率的影响:二甲基亚砜(DMSO)+小牛血清(FBS);DMSO+FBS+右旋糖苷-40(Dextran-40);DMSO+羟已基淀粉(HES)+FBS;FBS分别为65.3±2.5、79.7±1.5、71±2.6、29.7±0.58;30d细胞增殖活性的影响(OD值)分别为0.21±0.19、0.28±0.15、0.23±0.13、0.10±0.17。冻存的PBMC对LPS刺激产生INF-γ的量不同,而对ConA刺激产生INF-γ量的变化不明显。结论 DMSO+FBS+Dextran-40联合使用是一种较理想的外周血单个核细胞低温保护方法 ,并对其生物学特性产生一定影响。     

外周血单个核细胞表面表达MHC分子的研究

外周血单个核细胞(periphera l b lood m ononuclearce ll,PBM C),主要为淋巴细胞和单核细胞,其中绝大多数为淋巴细胞。主要组织相容性复合体(m a jor h istocom pati-b ility com p lex,MHC)结构十分复杂,其多样性由基因性和多肽性两方面构成。多基因性指复合体由多个位置相邻     

哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子检测及意义

目的 探讨共刺激分子在哮喘发病免疫学机制中的作用。方法 选取28例哮喘患者和15名对照者,采用三色标记的流式细胞术检测哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子的表达水平。结果 与对照组相比,哮喘患者T细胞各亚群所占比例及B细胞、单核细胞占外周血单个核细胞的比例差异未见显著性,但CD4／CD8明显高于对照组（P〈0．05）。CD4和CD8阳性T细胞表达的CD28及cTLA_4分子在两组间差异无显著性。哮喘组单核细胞（CD14阳性）CD80表达水平低于对照组（P〈0．05）。而B细胞（CD19阳性）表面表达的CD86低于对照组（P〈0．05）。结论 哮喘患者体内存在的T淋巴细胞功能紊乱可能与T淋巴细胞活化过程中共刺激信号的异常有关。     

哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子检测及意义

目的探讨共刺激分子在哮喘发病免疫学机制中的作用。方法选取28例哮喘患者和15名对照者,采用三色标记的流式细胞术检测哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子的表达水平。结果与对照组相比,哮喘患者T细胞各亚群所占比例及B细胞、单核细胞占外周血单个核细胞的比例差异未见显著性,但CD4/CD8明显高于对照组(P<0.05)。CD4和CD8阳性T细胞表达的CD28及CTLA-4分子在两组间差异无显著性。哮喘组单核细胞(CD14阳性)CD80表达水平低于对照组(P<0.05)。而B细胞(CD19阳性)表面表达的CD86低于对照组(P<0.05)。结论哮喘患者体内存在的T淋巴细胞功能紊乱可能与T淋巴细胞活化过程中共刺激信号的异常有关。     

隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中microRNA-31表达及相关免疫分子水平研究

目的 探讨隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中micorRNA-31表达情况及与疾病的相关性.方法 收集2007年9月-2012年8月期间,在上海长海医院和上海长征医院确诊的隐球菌脑膜炎患者和同期健康对照各30例,使用密度梯度离心法,分离30例隐球菌脑膜炎患者和30例健康对照外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,采用实时荧光定量PCR检测microRNA-31（miR-31）的表达,并分析其与患者临床特征（血清中IgG,IgA,IgM）和细胞因子（IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-α）的相关性.结果 与健康对照相比,隐球菌脑膜炎患者PBMCs中miR-31表达（0.856±0.231 vs 0.470±0.242）增高,差异有统计学意义（t=6.320,P＜0.001）且与血清IL-4水平正相关（r=0.644,P＜0.001）,与IgG,IFN-γ负相关（r=0.645, 0.671;P值均＜0.001）.结论 提示miR-31可能通过调节炎症性细胞因子的产生,参与了隐球菌脑膜炎的发病机制,这为进一步研究隐球菌脑膜炎患者的表观遗传学调控提供了新的线索.     

肝癌患者外周血单个核细胞HLA-G表达研究

目的了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原G（HLA—G）的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应（PCR）和流式细胞术（FCM）检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94．7％、84．0％和87．5％,差异无统计学意义（P=0．359）;HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义（P=0．002）。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^＋细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。     

不同来源的造血干/祖细胞表面归巢相关分子表达谱的比较研究

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源的CD34bright细胞均高度表达黏附分子CD4 4、CD11a、CD18、CD6 2L、CD31及CD4 9d ;但UCB来源的CD34bright细胞及CD34brightCD38-细胞黏附分子CD4 9e、CD4 9f、CD5 4及趋化因子受体CXCR 4的表达水平显著低于mPB及BM来源者 ;上述不同来源的造血干 /祖细胞均不表达其他趋化因子受体 ,包括CCR 1、CCR 2、CCR 3、CCR 5、CXCR 1、CX CR 2、CXCR 3及CXCR 5 ;更为有意义的是 ,只有mPB来源的CD34bright细胞表达基质金属蛋白酶MMP 2及MMP 9。CD34brightMMP 2 及CD34brightMMP 9 细胞百分率分别为 (11.4± 4 .9) %及 (2 7.6± 7.8) %。结论　UCB来源的造血干 /祖细胞低表达或不表达某些HRM ,这可能是UCB移植后造血重建延迟的原因之一。     

幼儿外周血造血干／祖细胞采集方法的建立

本研究探索采集体重低于20kg幼儿外周血造血干／祖细胞的方法及安全性。在采集外周血造血干／祖细胞时，在患儿股静脉处放置7F双腔导管作为采血及回输通道，采用COBE Spectra血细胞分离机的自动干／祖细胞采集程序及管路，在预冲管路完成后，向管路中灌注体外辐照的异体悬浮红细胞，采集后仅回输管路中的红细胞成分。对采集物计数单个核细胞、CD34^＋细胞和细胞存活率。结果表明：对7例低体重幼儿采集外周血造血干／祖细胞13次均获得成功。获得单个核细胞平均数为4．44×10^8／kg[（3．46—6．45）×10^8／kg]，CD34^＋细胞平均计数为2．20×10^6／kg[（1．34—3．79）×10^6／kg]，细胞存活率98．45％（97％-100％）。在采集过程中患儿生命体征平稳。结论：采用COBE Spectra血细胞分离机，可以在保持低体重幼儿生命体征平稳的前提下获得含有足够数量CD34^＋的单个核细胞。     

外周血造血干/祖细胞动员与采集时动态快速监测造血祖细胞的意义

为了获得高效的外周血干/祖细胞采集,探索一种简便、快速的外周血干/祖细胞监测方法，采用Sysmex XE-2100血细胞分析仪的幼稚细胞信号（IMI）检测通道识别和计数外周血造血祖细胞（HPC）。对25例行异基因外周血造血干细胞移植动员的供和11例自体外周血干细胞动员的患的外周血造血干/祖细胞进行了动态观察。于动员过程中取外周血进行HPC，CD34^ 细胞和CFU-GM的检测，对采集物也进行上述检测。结果表明：在外周血标本中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM二间均呈良好的正相关性。所有检测病例外周血CD34^ 细胞与HPC同时上升，同时达高峰。供的峰值出现在动员的第5天，快速升高晚于白细胞。而患外周血干/祖细胞的快速升高早于白细胞。采集物中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM呈正相关性。采集当日外周血中HPC和CD34^ 细胞计数与采集所得CD34^ 细胞数量亦具有良好的线性相关。结论：造血祖细胞的监测是一种快速、简便又经济的监测外周血干细胞采集时机和预测成功采集的可靠指标。     

血细胞的粘附分子

在机体内，血细胞间或血细胞与血管内皮间的相互作用主要由粘附分子介导来实现。粘附分子的作用广泛，涉及细胞的粘附、迁移、分化和信号传导等，它们维持血细胞的正常结构并协助血细胞发挥其各种生理功能。但是，粘附分子功能的异常或缺陷则会影响正常生理功能导致疾病发生。本文介绍了多种粘附分子，包括整合蛋白、选择蛋白、免疫球蛋白超家族等，并探讨了一些与粘附分子相关的病理生理过程，如炎症、止血、动脉粥样硬化、血栓形成和干细胞归巢等。因此了解血细胞粘附分子的结构与功能有助于人们深入认识疾病的发病机理，寻找疾病诊断和治疗的新的靶点。     

活性氧影响鼠骨髓造血干细胞凋亡的机制研究

本研究探讨外周血造血干细胞移植中暴露于较高氧浓度环境下的外周血造血干细胞（PBHSC）内的异常增高的活性氧（reactive oxygen species,ROS）对其生物学功能造成损伤的机制.通过模拟骨髓平均氧浓度（5％O2）、静脉平均氧浓度（12％ O2）、动脉平均氧浓度（20％ O2）来培养骨髓造血干细胞（BMHSC）,采用荧光探针检测细胞内ROS水平;流式细胞术分析不同细胞周期的细胞比例;Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡情况;利用PCR技术检测细胞ATM基因表达;利用Western blot方法检测P21蛋白的表达.结果发现：与5％ O2对照组比较,12％ O2、20％O2组、氧浓度连续变化的5％-12％-20％O2组进入G1期、S期、G2/M期的细胞比例显著增加（P＜0.01）;细胞凋亡率显著增加（P＜0.01）;同步检测的ATM基因表达量明显低于对照组（P＜0.01）;P21蛋白表达量明显高于对照组（P＜0.01）.结论：ROS通过ATM基因表达抑制和细胞周期蛋白P21活化,导致BMHSC的凋亡.     

凋亡在脐血造血干/祖细胞冷冻损伤中的作用及其机制研究

为探讨脐血造血干／祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制，应用流式细胞术检测脐血CD34^ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原，用免疫组织化学法检测Bcl—2蛋白表达，用Western blot和caspase-3蛋白活性分析检测caspase-3的表达．以甲基纤维素半固体培养进行造血祖细胞集落分析。研究结果显示，CD34^ 细胞在-196℃冻存2周或4周后凋亡率增加，电泳出现DNA梯形条带，CFUs分别下降了25．2％和30．1％。冷冻过程中细胞内线粒体膜势能下降，Bcl—2蛋白表达下调，而Fas抗原表达无明显改变。新鲜分离的CD34^ 细胞中caspase-3以分子量为32kD的非活性酶原形式存在，冷冻过程中caspase-3被激活，可检测到分子量为20kD的裂解片段，caspase-3蛋白活性分别增加了1．2倍和1.5倍。结论：凋亡在脐血造血干细胞冷冻损伤中起着重要作用，其机制可能是通过线粒体介导的caspase依赖性途径执行，caspase-3是其中一个重要的效应蛋白酶。     

丹参素对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的:探讨丹参素对小鼠外周血造血干细胞的动员作用及其对小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的影响。方法:30只BALB/c小鼠随机分为三组:丹参素组、G-CSF组、生理盐水组,腹腔注射d1～d7,每日1次,第2～8天,采用外周血WBC和MNC计数、流式细胞术、造血祖细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组给药后对外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及小鼠骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率的影响。结果:丹参素组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;丹参素组外周血CD34+、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率分别为(1.03±0.24)%、(12.59±2.64)%和(50.86±8.77)%,均明显高于生理盐水组(P<0.05);其CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(14.90±2.88)%、(12.50±4.06)%和(16.10±6.36)%,均明显高于生理盐水组(P<0.01)。结论:丹参素对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,且这一作用可能与其上调小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的表达有关。     

rhG-CSF体内应用对骨髓和外周血造血干/祖细胞上CXCR-4表达的影响

为了观察rhG-CSF动员对外周血和骨髓造血干/祖细胞上CXCR-4表达的影响,应用三色荧光标记技术对动员前后骨髓和外周血中单个核细胞（MNC）和CD34＋细胞上CXCR-4的表达进行了测定.结果显示,G-CSF动员显著增加了外周血MNC及骨髓CD34＋细胞上CXCR-4的表达,骨髓MNC及外周血CD34＋细胞上CXCR-4的表达无变化,稳态骨髓（SS-BM）中CD34＋细胞比例与G-BM、G-PB中CD34＋细胞比例呈正相关,与采集到的骨髓及外周血中CD34＋细胞/公斤也具有良好的正相关性.结论：G-CSF体内应用后CD34＋细胞上CXCR-4表达的变化可能是动员机制的一部分,CXCR-4的高表达可能有利于MNC的植入,SS-BM中CD34＋细胞的含量可作为动员效果好坏的预测指标.