酶免法检测HBeAg假阳性原因分析

目的:探讨内源性因素(包括溶血、脂血、纤维蛋白等)对ELISA检测HBV感染的影响,分析HBeAg假阳性出现的原因,尽量避免假阳性的出现。方法:采用模拟对照实验,用人为制造溶血、脂血、纤维蛋白等异常标本与正常标本对照同时检测,从而分析总结溶血、脂血、纤维蛋白等对结果的影响。结果:溶血、脂血、纤维蛋白等都对检测有一定的干扰,特别是溶血和纤维蛋白等对检测的结果影响较大,是造成假阳性的主要原因。结论:标本应按要求处理,待血液凝固完全后,再3000转离心10-15分钟,能尽量防止溶血、脂血和纤维蛋白的干扰,从而能有效降低假阳性的发生。     

酶联免疫吸附分析检测HBsAg假阳性现象的常见原因

酶联免疫吸附分析检测ＨＢｓＡｇ假阳性现象的常见原因王力平，黄开盛，庄惠福目前ＨＢｓＡｇ的检测已广泛使用酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）。在该法检测技术讨论中，人们较多地探讨了由于前带或后带及抗原抗体比例不适而造成高滴度阳性标本漏检的假阴性现象。但在实际...     

多厂家抗-HCV ELISA检测结果分析

探讨多厂家抗-HCV ELISA试剂检测结果不一致的原因.选用4个国产厂家和2个进口厂家试剂对175份样品进行抗-HCV检测,并对其中17份检测结果不一致的样品和1份6个厂家试剂检测均为弱阳性的样品用抗-HCV ELISA分片段试剂进行检测,用SPSS13.0软件对检测结果进行统计分析.结果显示,6个厂家试剂对175份...     

酶联免疫技术在乙型肝炎表面抗原检测中的应用

目的 分析酶联免疫吸附法（ELISA）在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测中的临床应用价值.方法 选择150例乙肝患者和50例健康体检者,分别采用ELISA法、胶体金试纸条法、电时间分辨免疫荧光法（TRFIA）检查血液样本HBsAg,比较三种检查方法检查结果的一致性.结果 三种方法在检测乙型肝炎血清标志物HBsAg结果方面具有很高的一致性.结论 酶联免疫吸附法（ELISA）是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的有效方法,具有较高的临床应用价值,可以用于检验科的常规检查.     

麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料,分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平,比较两者的符合率;同时统计ELISA与NT诊断的耗时、费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于200 IU/L样品,其差异有统计学意义(P0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P0.05),但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹Ig M抗体时具有很高的准确性,且耗时和费用均较低,值得临床推广。     

溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析

目的：探讨溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原结果的影响。方法对400份不同的血清标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的测定,其中阴性标本217份,强阳性标本95份,弱阳性标本88份;用人为方法造成溶血,对溶血标本重新测定,对2次检测结果进行比较。结果217例HBsAg阴性标本和95例HBsAg强阳性标本,非溶血标本和溶血标本血清检测结果(阴性或强阳性)全部一致,非溶血标本和溶血标本血清的HBsAg的OD值无统计学意义;88例HBsAg弱阳性标本,溶血标本血清检测出现假阳性率为7.95%(7/88),非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的OD值具有统计学意义。结论溶血对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)强阳性的标本影响不大,而对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的检验结果具有一定影响,甚至可能造成假阴性。     

进出口植物产品中对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒的研制

目的采用间接竞争ELISA法对进出口植物产品中对硫磷残留量进行快速筛选。方法将对硫磷还原成氨基对硫磷,利用适当的方法将其与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制备免疫原免疫家兔并获得特异性抗体。结果采用传统的盐析法提取特异性免疫球蛋白(IgG)并建立了对硫磷间接竞争ELISA快速检测方法。抑制试验表明其检测范围在(100.0±1.56)ng/mL之间,可用于进出口植物产品中对硫磷的定量检测。该方法与气相色谱检测符合率为96%。样品的平均回收率为103%。交叉反应显示该抗体仅与对硫磷、氨基对硫磷反应,而与甲基对硫磷、马拉硫磷、杀螟硫磷、乐果等结构类似物几乎无交叉反应。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。     

酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原最佳条件探讨

本试验表明:以McAb为包被抗体,HRP-SPA为酶标结合物可以将非特异性反应降低接近于零,以患者血清为第二抗体可提变试验敏感性,以OPD或TMB为底物,每步作用60分钟或40分钟、每孔加样0.1ml或0.05ml,结果无明显区别。     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验在结核性脑膜炎诊断中的初步应用

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测38例结核性脑膜炎，33例其它脑膜炎在112例非脑膜炎患者脑脊液中的结核杆菌抗原和抗体。结果脑脊液结核抗原阳性率为81．6％，假阳性率为2．8％；结核抗体阳性率为86．6%，假阳性率为3．4％．提示本法可作为结核性脑膜炎有效的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判断提供依据。     

酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体抗体的分析性能评价

目的评价ELISA检测梅毒螺旋体（TP）抗体的分析性能,探讨未知诊断的定性实验的性能评价方法。方法参照临床实验室标准化协会（CLSI）发布的EP12-A2文件对ELISA法测定TP的临界值±20%范围的重复性进行分析,并与TP明胶凝集试验（TPPA）结果进行一致性比较。结果 ＋20%浓度临界值检测阳性率为≥95%,CV为14.8%;-20%浓度临界值检测阴性率≥95%,CV为19.6%;两种方法的一致程度百分比为99.6%,一致程度95%可信区间为98.8%~99.6%。结论 TP-ELISA法检测TP抗体的临界值±20%浓度范围之外标本,可得到可靠的检测结果。TP-ELISA法与TPPA法结果一致性好,可代替其作为TP诊断试验。     

酶联免疫吸附试验检测HIV抗体的质量控制方法探讨

目的寻找一种适用于HIV抗体酶联免疫吸附实验室内质量控制（IQC）的方法。方法采用Levey-Jennings质控图法、即刻法和控制变异系数（CV）的方法（改良即刻法）同时统计规范操作前和规范后的两批各30个质控数据，制作质控图。结果规范前检测采用即刻法和Levey-Jennings质控图法考核显示在控．改良即刻法显示失控；规范后检测3种方法考核均为在控。结论采用即刻法考核，前3次结果对后续质控结果影响较大，前3个质控数据的cV值较大时，随后的结果会出现假在控。Levey-Jennings质控图法如果不对CV值进行考核，前3个质控数据的CV值较大时，随后的结果也会出现假在控。采用改良即刻法统计，只要设定好一个实验室或一个地区的允许CV值，就没有假失控和假在控的结果，因此改良即刻法较为适用于HIV抗体ELISA检测的室内质量控制。ELISA检测手工操作步骤较多，操作细节都对实验结果有很大影响，因此需要规范实验操作，并严格按照要求执行。     

细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进

目的：通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进，以降低实验假阳性率，提高敏感性。方法：THP-1细胞接种96孔培养板，分别用脂多糖（LPS）刺激或不刺激作为处理组和对照组，将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用，洗脱未结合的噬菌体，加入HRP标记的抗M13单克隆抗体，分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性，在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果：酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆，经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合，并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论：本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案，具有较好的应用前景。     

ELISA法筛查临床样本中梅毒螺旋体抗体假阳性结果分析

目的:分析酶联免疫吸附试验(ELISA)从临床样本中检测出梅毒阳性结果中的假阳性及应对措施。方法:把5886例分为老年组和中青年组,用TP-ELISA从检出阳性91例,再用蛋白印迹法(WB)进行确认。结果:TP-ELISA法从老年组的梅毒抗体检出53例(2.64%),WB法确证45例,假阳性率15.09%;TP-ELISA法从中青年组的梅毒抗体检出38例(0.98%),WB法确证37例,假阳性率2.63%。且出假阳性时TP-ELISA法的S/CO值与真阳性时的S/CO值无显著性意义。结论:为提高老年人梅毒检测准确性,实验室使用WB法对有疑问的TP-ELISA法检测阳性样本进行确认是较好的选择。     

改良酶联免疫吸附试验检测抗磷脂抗体及其临床意义

应用改良的酶联免疫吸附试验拾测抗磷脂抗体。该法特异性强,经心磷脂抑制试验,其抑制率达67%,经心磷脂吸附纯化后,各类抗心磷脂抗体(ACL)与相应的抗人IgG、IgA、IgM均无反应,沉淀线消失。该法重复性好,三次重复实验附合率达87%。本文对111例系统性红斑狼疮(SLE)患者检测IgG、IgA、IgM三类抗心磷脂抗体及抗磷脂酰丝氨酸、抗磷脂酰肌醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸等五种负电性磷脂抗体,分析其阳性率及该抗体与疾病的相关性。本文发现各种抗磷脂抗体(APL)在SLE的阳性率十分接近,33～45%。但各类抗不同磷脂抗体的阳性率差异较大,5～32%。SLE患者的血栓形成与阳性抗磷脂抗体显著相关,分别是IgG-ACL(P=0.002),IgG-APA(P<0.05),IgG-APG(P<0.05)。抗磷脂抗体的升高还与SLE患者的血小板减少,中枢神经系统病变有关(P<0.05);但异常APL与自发性流产的关系尚无统计学意义。本文还发现抗ds-DNA(Farr试验)的升高和阳性直接Coomb′s试验与升高水平的APL显著相关(P<0.05)。抗心磷脂抗体较其他四种负电性磷脂抗体的阳性率高且敏感。因此ACL可作为临床血栓形成的危险标志性检测。     

酶联免疫吸附试验在丙型肝炎抗体检测中质量控制探讨

寻找适合酶联免疫吸附试验对丙型肝炎抗体检测的室内质量控制(internal quality controlling,IQC)的方法。采用Levey-Jennings质控图法、即刻法、加强即刻法(CV30%)对相同的20例数据进行处理。再用双质控法处理更换试剂批号和血清质控。和传统的质控方法比较,Levey-Jennings质控图法和即刻法对数据监控上均存在假失控和假在控。而加强即刻法显示良好效果。配合双质控法处理更换试剂批号和血清质控也很优秀。依据提出的质控方法进行室内质控,其当年室间质评结果全部合格。课题组的结论是控制变异系数的加强即刻法配合L-J质控图法更适用于酶联免疫吸附试验的IQC。     

重组多肽酶联免疫吸附法检测抗LKM-1抗体的初步应用

目的：制备人自身抗原细胞色素P4502D6（CYP2D6）257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性。方法：以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定。表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,经GST亲和层析法进行纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测抗LKM-1抗体阳性血清及部分其他结缔组织病患者血清中的抗LKM-1抗体。结果：重组融合蛋白在宿主菌中获得表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗LKM-1抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应。在26份抗LKM-1抗体阳性血清中,6份抗HCV抗体阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,其余20份血清用重组多肽ELISA检测均呈阳性；20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性。结论：重组的257-351位氨基酸片段是CYP2D6抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础。     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验在结核性脑膜炎诊断中的初步应用

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测38例结核性脑膜炎、33例其它脑膜炎和112例非脑膜炎患者脑脊液中的结核杆菌抗原和抗体。结果脑脊液结核抗原阳性率为81.6％,假阳性率为2.8％;结核抗体阳性率为86.6％,假阳性率为3.4％,提示本法可作为结核性脑膜炎有效的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判断提供依据。     

922例女性RV-IgM的检测分析

目的为了解子宫肌瘤、输卵管妊娠、不孕和胎儿畸形妇女风疹病毒（RV）近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对380例子宫肌瘤、312例输卵管妊娠、85例不孕、35例胎儿畸形和110名孕前检查的健康妇女的静脉血标本进行了RV-IgM检测。结果在子宫肌瘤、输卵管妊娠、不孕、胎儿畸形妇女中,分别检测出RV-IgM阳性标本,5例、6例、2例和4例,阳性率分别为1.32%（5/380）、1.92%（6/312）、2.35%（2/85）和11.43（4/35）;在110例健康妇女中未检测出RV-IgM阳性标本。结论孕妇感染风疹病毒是引起胎儿畸形的原因之一。     

TMB-酶联免疫吸附方法检查特异性抗核抗体应用的研究

本文应用TMB-酶联免疫吸附试验(TMB-ElISA)对380例连续受检的病人血清中的特异性抗核抗体进行了检查。结果显示ANA与抗DNP,抗ECA及抗DNA的符合率为70％。SLE的阳性率为100％,而且抗体效价高。其它疾患的阳性率在40～54％,再障患者几乎无显著阳性病例。TMB-ELISA方法操作简便、灵敏度高,不需特殊设备,可以目测,有利于推广。可为自身免疫病的诊断提供依据。     

梅毒检测假阳性的探讨

目的探讨现有条件下梅毒检测方法的选择,以减少和降低假阳性。方法应用RPR、ELISA,TPPA法检测。结果在54例RPR阴性、ELISA阳性的样本中,TPPA法有49例阳性(91.2%),5例阴性(8.8%)。结论可以用ELISA法作为常规检测筛选方法,对阳性样本必须作TPPA、RPR法检测,TPPA法阳性时方可报告。