新型壳聚糖基引导骨再生膜的蛋白缓释性能研究

目的：制备负载牛血清白蛋白的壳聚糖/β-甘油磷酸钠(CS/β-GP)可吸收性膜,探讨其缓释蛋白的性能。方法：利用CS/β-GP体系的温敏相转变特性,同时向其中添加蛋白制成新型生物膜。进行膜厚度及拉伸强度等力学性能测试。利用BCA蛋白浓度试剂盒（加强型）检测不同时点的蛋白浓度,绘制膜的蛋白缓释曲线。结果：利用SPSS16.0统计分析软件进行分析,负载蛋白后复合膜的理化性能均未发生明显变化（P>0.05）。不同浓度的复合膜可缓慢释放蛋白12天以上,并且随着β-GP浓度的升高,蛋白缓释总量增大。结论：新型壳聚糖温敏凝胶膜可以作为蛋白缓释的载体,是在引导骨再生领域具有应用潜力的生物膜材料。     

温敏型壳聚糖/甘油磷酸钠缓释胰岛素凝胶系统的制备

目的:初步探讨制备温敏性壳聚糖/甘油磷酸钠载胰岛素凝胶系统.方法:应用壳聚糖与甘油磷酸钠制备具有温敏性的载有胰岛素的凝胶体系,从凝胶体系的pH值、粘度测定、胶凝时间研究不同配比、不同pH值对壳聚糖/甘油磷酸钠(CS/β-GP) 体系凝胶化性能的影响.结果:壳聚糖凝胶在室温(25℃)下呈液态,56% 甘油磷酸钠(β-GP)与3%壳聚糖(CS)在pH值6.8-7.2,37℃下凝胶化时间(GT) 从1h缩短到8-12min,凝胶形态良好,并且在负载胰岛素溶液后C/GP凝胶形态未受影响.结论:一定配比CS/GPS 体系在37℃具有快速凝胶化性能,在加入胰岛素后并未改变其温敏特性,为后续的温敏性壳聚糖/甘油磷酸钠载胰岛素凝胶系统的体外释药实验打下了基础.     

基质细胞衍生因子-1/壳聚糖/β-甘油磷酸钠复合生物膜体外生物学特性的实验研究

目的 利用温敏凝胶制备基质细胞衍生因子-1(stromall cell derived factor-1, SDF-1)/壳聚糖(chitosan, CS)/β-甘油磷酸钠(β-sodium glycerphosphate, β-GP)复合生物膜并观察其体外生物学特性。方法 制备CS/β-GP溶液并添加SDF-1混匀,观察其37℃时凝胶时间的变化。将凝胶铺膜、干燥形成SDF-1/CS/β-GP复合生物膜,扫描电镜观察其形貌特征。将复合生物膜置于含细胞培养液的六孔板,静置6、12、24、36、48、60 h后提取上清液(n=3),测定溶液SDF-1浓度变化。将Transwell小室上室中加入骨髓间充质干细胞(BMSCs),下室置入复合生物膜,分为4组(n=3):M0组即对照组(CS/β-GP膜);M1、M2、M3组均为SDF-1/CS/β-GP膜组,分别含100、200、400 ng/mL SDF-1。分别于6、12、24 h对膜下细胞Giemsa染色观察和MTT法测定光密度(OD)值计算细胞增殖率。采用SPSS 19.0进行多因素方差分析。结果 CS/β-GP溶液加入一定量的SDF-1...     

石墨烯/壳聚糖/β-甘油磷酸钠温敏凝胶的制备及其性能评价

目的:将氧化石墨烯加入壳聚糖/p-甘油磷酸钠温敏凝胶中,制备石墨烯/壳聚糖/β-甘油磷酸钠复合温敏凝胶,表征其基本理化性质并对生物学特性进行初步评价.方法:将氧化石墨烯(graphene oxide,GO)加至壳聚糖/β-甘油磷酸钠(chitosan/β-glycerophosphate,CS/GP)温敏凝胶体系中,根据GO与CS不同的质量分数,制备了1wt％GO/CS/GP和3wt％GO/CS/GP复合温敏凝胶,以CS/GP温敏凝胶为对照,表征了各凝胶成胶时间、化学结构变化、微观结构和吸水率.将小鼠前成骨细胞MC3T3-E1接种于凝胶中,SEM观察细胞接种24h的粘附现象,CCK-8法检测细胞的增殖,并用荧光倒置显微镜观察细胞的生长情况.结果:凝胶的成胶时间随GO含量增加而缩短,CS/GP的平均成胶时间为(9.05±0.21)min,1wt％GO/CS/GP的平均成胶时间为(6.60±0.22)min,3wt％GO/CS/GP平均成胶时间为(4.50±0.18)min;GO和CS可通过酰胺键结合;凝胶均呈现出均一的相互通联的支架结构,1wt％GO/CS/GP复合温敏凝胶具有更大孔径(44.8±4.3μm)和吸水率(527±21％)以及更好的促成骨细胞增殖生长特性.结论:相比于壳聚糖/β-甘油磷酸钠温敏凝胶,石墨烯/壳聚糖/β-甘油磷酸钠复合温敏凝胶具有更好的理化性质和生物学特性.     

壳聚糖/β-甘油磷酸钠引导骨再生膜的制备及表征

目的：制备壳聚糖温敏凝胶引导骨再生屏障膜并进行结构表征。方法：通过分子自组装技术,合成含不同比例β-甘油磷酸钠的壳聚糖温敏凝胶,在37℃条件下干燥成膜。通过傅里叶红外光谱分析、X-射线衍射分析、扫描电镜分析对膜的结构进行表征并测量膜的拉伸强度。结果：壳聚糖温敏凝胶溶液在37℃条件下快速凝胶、脱水后成膜。红外光谱与X-射线衍射分析,壳聚糖与β-甘油磷酸钠之间产生了化学键结合;扫描电镜观察,膜具有多孔的表面结构和内部结构;β-甘油磷酸钠的含量越高,膜的孔径越大,拉伸强度有所降低,拉伸强度为0.78～1.13MPa。结论：壳聚糖温敏凝胶膜的制备条件温和、方法简便,其结构特征和力学性能符合可吸收引导骨组织再生膜的要求。     

新型壳聚糖基温敏凝胶膜引导骨再生性能的体外实验研究

目的制备负载釉基质蛋白（enamel matrix proteins,EMPs）的壳聚糖/β甘油磷酸钠(chitosan/β-glycerophosphate salt,CS/β-GP)温敏凝胶膜,探讨其体外引导骨再生的能力。方法利用CS/β-GP体系的温敏相转变特性,制备新型生物膜并添加牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）,利用蛋白浓度测定试剂盒（加强型）检测不同时点的蛋白释放浓度,绘制蛋白缓释曲线。添加EMPs的CS/β-GP（1.0 g）复合膜作为A组; 单纯CS/β-GP（1.0 g）复合膜作为B组;同时,设空白对照组即C组,分别与ST2细胞共培养。检测膜的理化性能, MTT法检测复合膜的生物相容性, PNPP法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）的活性。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果不同浓度的复合膜可缓慢释放蛋白12 d以上,并且随着β-GP浓度的升高,蛋白缓释总量增大。负载蛋白后,复合膜的理化性能均未发生显著变化（P>0.05）。MTT检测A、B、C 3组的吸光度（OD）值,组间差异具有显著性,A、B组OD值均高于C组,A组OD值高于B组（P<0.05）。A、B组ALP表达高于空白对照组（P<0.05）,A、B 2组之间ALP活性表达亦具有显著差异,A组高于B组（P<0.05）。结论负载EMPs的新型壳聚糖基温敏凝胶膜在体外实验中表现出一定的引导骨再生活性,是一种具有应用潜力的新型生物膜材料。     

载碱性成纤维细胞生长因子温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化的作用研究

目的:实验合成载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨分化的作用.方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征;检测水凝胶毒性;CCK-8法筛选出载bFGF温敏水凝胶促BMMSCs增殖最适浓度并用于后续研究;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及钙结节半定量分析观察其对BMMSCs成骨向分化能力的作用;实时荧光定量PCR检测其对BMMSCs成骨相关基因表达的影响.结果:(1)成功制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,扫描电镜下冻干后的水凝胶孔径为20～80μm.(2)活/死细胞染色结果显示壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶具有良好的生物相容性.(3)载bFGF温敏水凝胶能显著促进BMMSCs增殖,并呈剂量依赖性,最适浓度为100 ng/mL(P<0.01).(4)载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶表达增多,钙结节形成增多(P<0.05).(5)载bFGF温敏水凝胶组成骨相关基因(ALP、BMP-2、Runx2)表达增高.结论:载bFGF温敏水凝胶能促进大鼠BMMSCs成骨分化.     

壳聚糖温敏凝胶及其在口腔医学中的应用前景

壳聚糖（Chitosan,CS）/甘油磷酸钠（Glycerophosphate salt,GP）温敏凝胶具有在生理体温发生溶胶-凝胶相变的特性,加之良好的生物相容性、制备工艺简单等优点,已经逐渐被应用于生物载药、组织工程等领域。近年来,CS/GP温敏凝胶体系的研究主要表现在对其性能的改进及其在相关医学领域中的应用。本文对CS/GP温敏凝胶体系的研究进展及其在口腔医学领域的应用前景作一综述。     

黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备及释药性能检测

目的:将黄芩苷和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)载入壳聚糖温敏凝胶,构建双缓释体系,检测凝胶对药物的体外释放情况。方法:采用乳化缩聚法制备黄芩苷-明胶微球(gelatin microspheres,GMS);用不同配比的壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液制备壳聚糖温敏凝胶,观察在37℃的成胶情况,选择最佳配比;在此基础上,将不同浓度的黄芩苷-GMS与BSA共混于壳聚糖凝胶溶液,测定载药后的成胶情况及黄芩苷和BSA的体外释放情况。结果:成功制备了黄芩苷-GMS,载药率5.62%,包封率72.05%;1.8%壳聚糖溶液与9%的β-GP混合10min后可获得状态良好的凝胶;加载两种药物后的凝胶溶液相转变时间未发生改变;30d时低浓度组累积释放了63.79%,两个较高浓度组分别释放了74.86%、77.63%。结论:壳聚糖温敏凝胶可以同时负载黄芩苷-GMS和BSA两种药物,在室温下呈溶液状态,37℃下经过10min可转变成半固体凝胶,在体外释药可达30d。黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备和释药性能检测为牙周组织修复再生药物的研制提供了基础。     

高温高压对壳聚糖／甘油磷酸钠温敏凝胶释药性能的影响

目的：研究高温高压后的壳聚糖／甘油磷酸钠凝胶温敏、释药性能。方法：观察不同比例的壳聚糖和甘油磷酸钠混合液的凝胶时间、pH值变化。粘度测试比较不同比例壳聚糖／甘油磷酸钠混合液粘度变化。在37℃形成凝胶后,观察该体系作为奥硝唑药物模型载体的释药性能。结果：随着壳聚糖／甘油磷酸钠混合液中甘油磷酸钠的比例增加,溶液pH值增加,在37℃下,壳聚糖／甘油磷酸钠凝胶时间缩短,但当壳聚糖／甘油磷酸比例为2：1、1：1时,溶液不凝胶。粘度实验表明,4种比例（9：1、8：1、7：1、6：1）壳聚糖／甘油磷酸溶液随着时间增加,粘度明显增加,到10 min后粘度基本不变化,9：1比例组粘度最大为（53±0．9）Pa·s。药物释放实验表明,以奥硝唑为释药模型,该凝胶可持续释放200 min以上。结论：改进消毒方法后的壳聚糖／甘油磷酸钠,增加甘油磷酸钠比例可以提高溶液pH值,可在37℃下快速形成凝胶。该凝胶具有温敏性,具有缓慢释放药物能力。     

PLGA/胶原双层引导骨再生膜对成骨样细胞增殖的体外研究

目的：制备一种新型结构的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物（poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA）/胶原复合引导骨组织再生膜,对其进行表征,并探索其对成骨样细胞体外增殖的影响。方法：使用PLGA及I型胶原制备一种双层结构的引导骨组织再生膜,通过傅里叶变换红外光谱仪、场发射扫描电镜、接触角仪对其表面基团、形貌及亲水性进行测试。将MC3T3-E1成骨细胞系接种到复合膜上,通过流式细胞术、甲基噻唑基四唑（MTT）法检测其细胞增殖,并与对照组进行比较。结果：红外光谱显示胶原被成功结合到PLGA表面,并且在扫描电镜下呈现出特有的纤维网状特征性微结构,同时其表面亲水性大大改善。MTT及细胞周期检测也表明胶原改性后的复合膜上生长的细胞活力及增殖指数明显高于纯PLGA组。结论：本方法制备的PLGA/胶原复合膜很好地组合成了一个功能整体,结合了高分子合成材料和天然材料的优势。     

硅酸钙生物陶瓷对牙髓细胞体外增殖分化的影响

目的:应用硅酸钙(CaSiO3,CS)生物陶瓷作用于人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs),研究其对hDPCs增殖及向成牙本质细胞方向分化的影响。方法:从年轻健康患者(18²0岁)拔除的智齿或前磨牙牙髓组织中获取hDPCs进行培养。将质量浓度为0.2 g/mL的CS浸提液按1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64和1/128倍比稀释后作用于hDPCs。MTT实验检测不同质量浓度CS浸提液对hDPCs增殖的影响,进而筛选出最佳浓度。以最佳质量浓度(1/64倍比稀释)CS浸提液培养hDPCs 2、4 d后,Real-Time PCR检测以下hDPCs成牙本质相关基因的表达:牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein 1,DMP-1),Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN);培养7、14 d后碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及半定量检测ALP活性。结果:最佳质量浓度(1/64倍比稀释)CS浸提液能够促进hDPCs的增殖,对牙髓细胞DSPP、DMP-1、COL-1、OPN等成牙本质相关基因的表达有较为明显的促进作用。ALP染色及半定量分析显示该浓度的CS浸提液能够提高hDPCs分泌ALP的活性。结论:最佳质量浓度(1/64倍比稀释)CS浸提液能够明显促进hDPCs的增殖,提高成牙本质相关基因的表达,进而促进hDPCs向成牙本质细胞方向分化,为后期hDPCs结合CS支架材料进行牙本质再生的研究打下基础。     

壳聚糖/磷酸化壳聚糖纳米复合物的制备及细胞相容性研究

目的:由壳聚糖(chitosan,CS)和磷酸化壳聚糖(phosphorylated chitosan,PCS)通过静电自组装仿生合成一种新型骨修复材料并体外评价其细胞相容性。方法:对CS进行磷酸根接枝,合成PCS,然后将PCS溶液逐滴滴加到CS的醋酸溶液中,得到壳聚糖/磷酸化壳聚糖复合物(CS/PCS)。将CS/PCS水胶体置于饱和的Ca(OH)_2溶液中矿化供细胞培养用。第3～5代成骨细胞与矿化后的CS/PCS复合物共同培养,以羟基磷灰石组为对照组。倒置显微镜下观察细胞的黏附、生长情况。MTT法检测细胞的增殖;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测细胞的分化。结果:CS/PCS复合物呈多孔网状结构,矿化后的CS/PCS可以促进成骨细胞的增殖和分化。结论:仿生合成的CS/PCS复合水胶体矿化后显示了良好的细胞相容性,可以促进成骨细胞的增殖和分化,可作为一种新型的骨修复材料。     

HPC和L929细胞在修复粘结剂体外毒性评价中灵敏度的比较研究

目的：通过原代培养的人牙髓细胞（HPC）和L929细胞系,对两种树脂改良型玻璃离子粘结剂的体外细胞毒性评价,比较两种细胞的灵敏度,为口腔材料的体外评价建立更接近临床的评价体系。方法：制取Fujiplus和RelyX Luting两种材料浸渍液,实验组为材料的浸出原液、50%原液、25%原液,对照组为DMEM培养基,分别利用原代培养的牙髓细胞和L929细胞系对实验组和对照组进行细胞形态观察、MTT测定细胞相对增值率。结果：树脂改良型玻璃离子粘结剂的体外细胞毒性评价中,和选择的细胞有关,原代培养的牙髓细胞较L929细胞系敏感。结论：原代培养的人牙髓细胞可能较L929细胞系更适用于口腔粘材料的体外毒性评价。     

不同镀膜钕铁硼磁体细胞毒性的体外实验研究

目的：比较不同镀膜钕铁硼磁体对L929小鼠成纤维细胞的增殖及凋亡的影响,以评价其细胞毒性。方法：制备100%、50%、25%这3种浓度未镀膜钕铁硼磁体,氮化钛（TiN）镀膜钕铁硼磁体,类金刚石（DLC）镀膜钕铁硼磁体浸提液。以上述9组浸提液和阴性对照液,阳性对照液分别进行L929小鼠成纤维细胞培养后以MTT法检测各组细胞相对增殖率。采用流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同镀膜磁体组中正常活细胞和凋亡细胞数量差异。结果：MTT结果显示TiN组、DLC组、未镀膜组、阳性对照组的细胞毒性分别为1级,0～1级,2级,4级。流式细胞仪散点图显示,空白对照组中以正常活细胞为主;DLC组和TiN组中主要为正常细胞和早期凋亡细胞;未镀膜组中主要为早期凋亡和晚期凋亡、坏死细胞。结论：未镀膜钕铁硼磁体具有一定的细胞毒性,TiN镀膜和DLC镀膜磁体的细胞毒性符合细胞毒性测验制定的安全标准。     

三七总皂苷对兔BMSCs的成骨分化及TGF-β1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对兔骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化及TGF-β1在基因水平表达变化的影响。方法:体外分离培养兔BMSCs,观察不同浓度PNS(50、100、200 mg/L)对兔BMSCs的影响,采用MTT法检测细胞增殖,茜素红染色观察钙结节形成,qRT-PCR检测TGF-β1表达水平。结果:各浓度PNS培养下的细胞增殖无明显差异(P>0.05);100、200 mg/L PNS组的钙结节数量和TGF-β1的表达水平均高于阴性组(P<0.05)。结论:PNS可促进兔BMSCs的成骨分化并刺激其分泌TGF-β1,但无明显促细胞增殖作用。     

PLGA/PCL/nHA生物支架复合兔BMSCs体外培养的实验研究

目的:研究新型复合支架聚乳酸-聚乙醇酸/聚己内酯/纳米羟基磷灰石(PLGA/PCL/nHA)的生物相容性,探讨其作为细胞培养材料和骨组织工程支架的可行性.方法:将兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)接种于PLGA/PCL/nHA复合支架上,体外共同培养后,MTT法检测BMSC...