含有生肌液的组织工程皮肤修复兔皮肤缺损

背景：在皮肤开放创面上进行缺损修复与重建是组织修复领域的研究焦点。构建含有中药的组织工程皮肤修复创面缺损的研究并不多见。目的：将含有生肌液的皮肤支架与自体皮肤细胞复合，构建含药组织工程皮肤，修复兔皮肤缺损。设计：自体对照动物实验。单位：实验于2005—02／08在天津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成。材料：同窝大耳白兔8只，体质量1．6～1．8kg。自行提取生肌液（1500g／L），成分为当归、生地、龟板、象皮、血余、生石膏、炉甘在；明胶-壳聚糖支架材为料天津大学提供，分别修剪成1-3cm直径的圆片，60Co照射灭菌；DR无细胞真皮基质由江苏省启动市医疗用品研究所提供。方法：分离培养兔皮肤细胞，获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。延兔脊柱两侧制作直径1．5cm的圆形全层皮肤缺损创面4个。分为4组，阴性对照组（明胶-壳聚糖支架贴附于创面后滴加生理盐水），人工真皮组（DR无细胞真皮基质贴附于创面后接种细胞悬液），非含药组织工程皮肤组（明胶壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液），含药组织工程皮肤组（生肌液明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液）。主要观察指标：①术后13d测量剩余创面面积。②术后7d、10d取材行组织学与免疫组织化学染色检测。结果：①术后13d各组创面面积均有不同程度的缩小，剩余面积阴性对照组〉人工真皮组〉非含药组织工程皮肤组〉含药组织工程皮肤组，非含药组织工程皮肤组、含药组织工程皮肤组与阴性对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。②术后10d，阴性对照组、人工真皮组、非含药组织工程皮肤组均有炎性肉芽组织增生，无表皮组织形成；含药组织工程皮肤组形成接近正常的上皮组织及幼稚的真皮组织。非含药组织工程皮肤组与人工真皮组BrdU标记弱阳性，含药组织工程皮肤组BrdU标记强阳性。结论：实验采用的方法使种子细胞在含有生肌液的明胶壳聚糖支架上增殖，在体修复皮肤损伤，能够有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积，缩短皮肤缺损的愈合时间。     

生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架的细胞相容性水

背景:组织工程皮肤对于大面积皮肤缺损的修复与重建具有重要作用,含有中药的组织工程皮肤支架对于细胞黏附及创面感染控制的作用研究并不多见.目的:利用角质形成细胞与成纤维细胞筛选生肌液应用浓度,观察生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架对细胞黏附及生物相容性影响.设计、时间及地点:以角质形成细胞与成纤维细胞为观察对象,随机对照实验,于2005-02/08在大津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成.材料:健康大耳白兔1只,用于获取皮肤种子细胞;生肌液、当归提取液及生地提取液(自行提取,1.5 g/mL),明胶-壳聚糖支架及生肌液-明胶-壳聚糖支架由天津大学提供.方法:①以dispase Ⅱ-胰蛋白酶-EDTA消化法获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞.②实验分为5组,对照组为普通培养液(含体积分数为0.1胎生血清的基础培养基);生肌液组为含有生肌液质鬣浓度分别为5,6,8,12 g/L的培养液;当归组为含有当归提取液质量浓度为8 g/L.的培养液;生地组为含有生地提取液质昔浓度为8 g/L.的培养液;表皮生长因子组为含有10 μ g/L 表皮生长因子的培养液;分别用于培养第3代角质形成细胞和成纤维细胞,于1,3,5,7d用M1_r法榆测细胞的增殖情况.③制备基质中生肌液质量浓度分别为50,60,80,120 g/L的载药支架组,将上述细胞在支架上培养,分别于7,14 d用半定量方法观察细胞与支架的黏附情况.④60,80 g/L.载药支架组种植角质形成细胞,分别于4,7,14 d取材,进行苏木精一伊红染色和扫描电镜观察.主要观察指标:①生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响.②载药支架对细胞黏附的影响.③细胞与载体的相容性.结果:①MTT检测结果表明,5、6、8g/L的尘肌液组细胞增殖较快,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05).②第3代角质形成细胞与成纤维细胞在60、80 g/L的载药支架上呵获得较多增殖.③支架E的角质形成细胞形态良好,与支架紧密贴附,药物对细胞无明显毒性作用.结论:生肌液质量浓度为60,80 g/L 的明胶-壳聚糖载药支架町有效促进角质形成细胞和成纤维细胞的黏附和增殖.     

生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架的细胞相容性

背景：组织工程皮肤对于大面积皮肤缺损的修复与重建具有重要作用，含有中药的组织工程皮肤支架对于细胞黏附及创面感染控制的作用研究并不多见。目的：利用角质形成细胞与成纤维细胞筛选生肌液应用浓度，观察生肌液-明胶壳聚糖载药皮肤支架对细胞黏附及生物相容性影响。设计、时间及地点：以角质形成细胞与成纤维细胞为观察对象，随机对照实验，于2005—02／08在天津市犬津医院骨科研究所细胞工程室完成。材料：健康大耳白兔1只，用于获取皮肤种子细胞：生肌液、当归提取液及生地提取液（A行提取，1．5g／mL），明胶-壳聚糖支架及生肌液-明胶壳聚糖支架由天津大学提供。方法：①以dispaseⅡ-胰蛋白酶EDTA消化法获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。②实验分为5组，对照组为普通培养液（含体积分数为0.1胎牛血清的基础培养基）；牛肌液组为含有生肌液质量浓度分别为5，6，8，12g／L的培养液；当归纽为含有当归提取液质量浓度为8g／L的培养液；生地组为含有生地提取液质量浓度为8g／L的培养液：表皮生长因子组为含有10μg／L表皮生长因子的培养液；分别用于培养第3代角质形成细胞和成纤维细胞，于1，3，5，7d用MTT法检测细胞的增殖情况。③制备基质中生肌液质量浓度分别为50，60，80，120g／L的载药支架组，将上述细胞在支架上培养，分别于7，14d用半定量方法观察细胞与支架的黏附情况。④60，80g／L载药支架组种植角质形成细胞，分别于4，7，14d取材，进行苏水精-伊红染色和扫描电镜观察。主要观察指标：①生肌液对皮肤种子细胞增值的影响。②载药支架对细胞黏附的影响。③细胞与载体的相容性。结果：①MTT检测结果表明，5、6、8g／L的生肌液组细胞增殖较快，与对照组相比，差异有显著性意义（P〈0．05）。②第3代角质形成细胞与成纤维细胞在60、80g／L的载药支架上可获得较多增殖。③支架上的角质形成细胞形态良好，与支架紧密贴附，药物对细胞无11月显毒性作用。结论：生肌液质量浓度为60，80g／L的明胶壳聚糖载药支架可有效促进角质形成细胞和成纤维细胞的黏附和增殖。     

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景:白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用.但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚.目的:采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化.方法:将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置.观察刨面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间.各组分别于术后7d在部分创而取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达.结果与结论:含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短.白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱.肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱.说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一.     

表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究

目的探讨表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的可行性。方法（1）用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,用Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化人表皮干细胞,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成人表皮干细胞培养基进行体外培养,测定克隆形成率。（2）将培养人表皮干细胞接种于制备的脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤,移植治疗兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果。（3）取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面,随机分为4组：A、B、C组分别用含表皮干细胞的组织工程皮肤、含角质细胞的组织工程皮肤和单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面;D组用创面空置为对照。观察创面修复情况、局部炎症反应,并记录创面愈合时间。结果体外培养的人表皮干细胞增殖稳定,克隆形成率明显高于角质细胞对照组（P〈0．05）。移植后A组创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较B、C、D组明显缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用于皮肤缺损创面的修复治疗。     

皮肤全层缺损真皮修复不同阶段对表皮再生的影响

背景:当前组织工程研究多着重表皮干细胞和真皮支架材料的研究,而少有真皮新生速度和真皮修复不同时期组织结构对表皮新生和重建影响的报道.目的:观察真皮修复过程中对表皮修复和重建的影响以及是否有促进表皮修复速度的最佳阶段.方法:新西兰大耳白兔10只分别于第0,7,14天在背部制成3个直径约为3 cm的创面,随机分为0,7,14 d组,每组计10个创面,3组创面分别于皮肤全层损伤修复后21,14,7 d植入自体表皮细胞羊膜载体复合膜.7 d后取材,采用大体观察、常规组织学观察(苏木精-伊红染色,Mallory PTAH染色)、Ⅰ型胶原免疫组织化学观察等化学染色动态观察创面愈合情况.结果与结论:0 d组创面与周边正常有毛皮肤齐平,与周边组织连接明显较7 d组及14 d组紧密,7 d组尚有凹面,而14 d组创面凹陷明显较7 d组大而深,与周边组织分界明显,这表明0 d组皮肤缺损的修复效果明显优于其他2组(P<0.05).0 d组Ⅰ型胶原阳性的成纤维细胞、血管及胶原纤维等组成的真皮网状层和乳头层较其他2组明显(P<0.05),创面愈合率高(P<0.05).真皮修复的不同时期,对表皮再生的促进作用存在不同,全层皮肤缺损处于真皮修复的增生晚期与重建初期是促进表皮新生的最佳阶段.     

复合人工皮肤修复猪全层皮肤缺损

目的:探讨复合人工皮肤在修复中国小型猪全层皮肤缺损中的作用。方法:16头中国实验用小型猪于背部正中分别切除全层皮肤至深筋膜的3个创面,3个创面以数字表法分成复合皮移植组(实验组),刃厚皮移植组(对照组1)及全厚皮移植组(对照组2),术后定期留取创面组织进行组织学检测。结果:人工复合皮肤具有表皮,真皮双层结构,在愈合过程中表皮细胞逐步增殖、分化、发育形成基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层。结论:表皮细胞悬液与脱细胞真皮基质重组的复合皮由于含有真皮与表皮双层结构,其组织学形态与超微结构与天然皮肤极为相似;通过表皮细胞培养可扩大皮源,为大面积深度烧伤患者提供了皮源。利用组织工程技术构建人工复合皮肤,可用于皮肤缺损者的治疗,解决了自体供皮不足。     

人工真皮修复急性创伤后足背皮肤软组织缺损14例

背景:人工真皮具有硅胶膜和胶原海绵双层结构,是最早开发和应用于临床的组织工程化皮肤替代物,主要应用于皮肤软组织缺损修复.目的:评价人工真皮在足背严重皮肤软组织缺损中的应用.方法:选择北京积水潭医院烧伤科于2009-06/2010-12收治的14例急性外伤后足背严重皮肤软组织缺损患者,均有肌腱或骨外露.所有患者经清创后,以人工真皮移植,待人工真皮成活后以自体断层皮片移植,观察人工真皮和自体皮的成活情况.结果与结论:所有植皮成活,创面愈合良好,供区未见明显瘢痕增生.提示人工真皮联合自体断层皮片移植可以有效修复足背严重皮肤缺损创面,减少供区损伤.     

自制羊膜载体复合物植入表皮细胞修复全层皮肤缺损

背景:利用组织工程和细胞培养技术研制的复合皮肤距理想的人工皮肤尚有一定的差距,如局部皮肤薄弱、抗拉及抗摩擦能力差、无皮肤附属器等.目的:观察含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物对皮肤缺损局部真皮组织的修复作用,寻找真皮组织修复重建促进表皮生长的最佳时期.方法:取新西兰大耳白兔36只,在每只背部建立皮肤全层缺损模型3处,分别植入含有缓释碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物、单纯羊膜载体复合物及油纱覆盖.随机分为3组,分别于术后21,14,7 d植入自体表皮细胞混合液,1周后行大体、组织学、免疫组织化学、墨汁灌注等观察.结果与结论:术后21 d植入表皮细胞组皮肤缺损局部新生皮肤瘢痕轻、形态结构较满意,创面愈合速度和质量均优于术后14,7 d 植入表皮细胞组,并且植入含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物组创面皮肤新生真皮组织完全被新生的表皮覆盖,而且表皮几乎均变为复层,其生长速度及质量优于单纯羊膜载体复合物移植组和油纱覆盖组.说明含有碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物植入皮肤全层缺损后,能加速真皮的修复和重建;真皮组织修复增生晚期和重建初期为促进表皮生长的最佳时期.     

应用表皮干细胞构建组织工程皮肤及移植实验

目的:探讨应用人表皮干细胞和猪脱细胞真皮构建组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性。方法:实验于2004-06/2005-12在南昌大学医学院烧伤研究所完成。①取环状切除后幼儿包皮(家属知情同意)用中性蛋白酶与胰蛋白酶混合消化液消化,收集细胞,接种在已包被Ⅳ型胶原的培养皿中,快速黏附,保留快速黏附细胞继续培养,培养体系为低钙高糖DMEM培养基,待融和状态时,再次消化,离心收集细胞,再次经过Ⅳ型胶原快速黏附,保留黏附细胞,培养20d左右,用作构建表皮干细胞并进行细胞鉴定。②将第2代细胞接种于铺好Ⅳ型胶原的猪无细胞真皮上,每3天换液。10d后将其转移至不锈钢网架上,行气液界面培养5d左右,构建复合皮。③取SD大鼠20只,随机分2组。于动物背部尾侧正中作2.5cm×2.5cm的全层皮肤至肌筋膜的切除。实验组10只创面覆盖表皮干细胞构建的复合皮移植物,对照组10只覆盖无细胞真皮移植物。④移植后7,10,14,21和35d,两组动物均活检取材,进行创面大体观察、组织学观察及免疫组织化学、免疫荧光鉴定等。结果:①表皮干细胞的分离、扩增及鉴定:在扩增的细胞拟接种于无细胞真皮前,进行角蛋白19免疫组织化学鉴定、以流式细胞术进行α6、CD71鉴定。经胶原Ⅳ黏附的细胞培养后形成较大集落,拟接种的种子细胞中α6briCD71dim细胞占总细胞的(39±7)%;鼠抗人角蛋白19阳性细胞率为(53±6)%。②组织工程皮肤的建立结果:表皮干细胞种植于无细胞真皮上1d后,细胞便贴壁并开始生长增殖,8d左右透过间隙见无细胞真皮上表皮干细胞渐增殖融合成片;2周时无细胞真皮表面可见菲薄皮片状生长的细胞膜片物。复合皮组织学检查可见无细胞真皮表面覆盖多层融合的表皮层细胞,无细胞真皮内细胞成分去除完全。③创面愈合情况:术后2周,实验组移植物成活,创面上已上皮化,移植物柔软,而对照组无细胞真皮表面未上皮化,较干燥,色暗、触之较硬,两组创面均未见明显收缩。4周,实验组创面愈合,未见明显排斥反应。对照组无细胞真皮干燥脱落而创面暴露,创面收缩明显,创面边缘因自体表皮细胞爬行而缩小创面。④组织学检查及免疫组织化学染色结果:实验组2周时创面已全部上皮化,但细胞分层少;3,4周表皮层分化良好,多层结构,真皮纤维内见成纤维细胞长入,见少许炎症细胞,大鼠自体正常皮肤见毛囊及毛发结构。对照组2周创面尚未上皮化,无细胞真皮干燥变性,3,4周后创面仍未愈合,可见大量炎症细胞。实验组愈合创面抗人人类白细胞抗原-Ⅰ型抗原直接免疫荧光染色呈阳性,证明新生表皮由移植的人表皮细胞形成。而对照组阴性。实验组愈合创面广谱角蛋白免疫组织化学染色见整个表皮层细胞胞浆染呈棕黄,为阳性反应。结论:利用体外纯化扩增的表皮干细胞及制备的猪脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤,该组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。     

Drug reaction, skin care, skin loss

Stevens-Johnson syndrome is a rare, potentially fatal drug reaction that causes necrosis of epidermal cells. Early recognition of the syndrome is essential to prevent complications. This article discusses identification, complications, and treatment of Stevens-Johnson syndrome.     

Matching the skin barrier to the skin type

Peristomal skin problems are thought to be common (Herlufsson et al, 2006; Williams et al, 2010), and can interfere with the security of stoma products. Stoma patients are reliant on the integrity of their peristomal skin to maintain a normal lifestyle. Bekkers et al (1996) highlighted that, if the peristomal skin becomes damaged, it not only affects the person physically, but also psychologically, ultimately prolonging rehabilitation and adaptation to the stoma. Therefore, it can be concluded that maintaining skin integrity is a basic and essential skill in ensuring good stoma management. This article explores the assessment of four stoma patients, highlighting the importance of matching their skin type with their skin barrier for optimum skin protection. The patients have kindly agreed for their case studies to be published as a means of informing others. All names have been changed in line with Nursing and Midwifery Council (2010) guidelines to maintain patient confidentiality. This article was originally presented at the World Council of Enterostomal Therapists' (WCET) annual conference in 2010, receiving first prize at poster presentations.     

Celebrating a fortnight of skin to skin holding

The fortnight of skin-to-skin holding was a great event held together with the formal launch of the Integrated Family Delivered Care (IFDC) project; emphasising the importance of staff supporting parents to be part of their babies’ care and the vital benefits that closeness of skin-to-skin care brings to their baby. Our aim was to showcase this event in order to reinforce skin-to-skin practice within our neonatal service with customised supporting material designed for this purpose. Supporting skin-to-skin holding is often the first step on the road to family integrated care.     

Aging skin

Environmentally induced (extrinsic) changes in aging skin are often difficult to distinguish from physiologic (intrinsic) changes due to longevity. Structural alterations include dermoepidermal junction flattening, epidermal basal cell heterogeneity, depletion of Langerhans' cells and melanocytes, dermal and subcutaneous atrophy, appendageal deterioration and a decline in special sensory end organs. In addition to cosmetically compromising changes in the skin, hair and nails, clinical manifestations include a propensity to blister formation, cutaneous injury, epidermal neoplastic transformation, infection, xerosis and thermoregulatory perturbations.     

组织工程复合皮肤修复大鼠皮肤缺损

目的实验室培养大鼠组织工程皮肤,探讨临床可行性。方法以新生SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到成年Wistar大鼠,通过大体观察、组织学检测对自体、异体及组织工程复合皮肤移植进行比较,研究了组织工程复合皮肤在修复皮肤缺损中的可行性。结果异体皮肤移植组有明显的免疫排斥,组织工程皮肤组未见有明显排斥,且与自体皮肤结合良好。结论组织工程复合皮肤与实验大鼠结合良好,可用于修复大鼠皮肤缺损。     

安多福在皮试皮肤消毒中的应用

目的 研究安多福在皮试皮肤消毒中的应用效果,寻找一种更好的皮试皮肤消毒剂。方法 门诊随机就诊病人400例,成人组200例,小儿组200例,两组分别再分为两组：(1)安多福组100例,采用0．1％的安多福消毒皮肤;(2)酒精组100例,采用75％酒精消毒皮肤。结果 成人组及小儿组安多福无皮肤过敏,无皮肤着色,酒精皮肤过敏发生率分别高达9％、6％,与安多福组相比存在显著性差异。结论 0．1％安多福杀菌效果好、对皮肤无着色、无刺激、无致敏、价格便宜、使用方便,是理想的皮试皮肤消毒剂。     

The ostomy skin tool: tracking peristomal skin changes

The Ostomy Skin Tool is a standardized measuring instrument for assessing the extent and severity of peristomal skin change in terms of discolouration (D), erosion (E), and tissue overgrowth (T) (DET). The reliability and validity of this tool has been determined in a previous study. The purpose of this article is to highlight the study's most important findings, and to demonstrate the usefulness of the DET score by evaluating three examples of peristomal skin changes. Additionally, a simplified categorical severity scale (defining 'mild', 'moderate', and 'severe' conditions) is introduced that may improve clinical interpretation of the DET score. It is reasonable to conclude that the DET score may empower the ostomy care nurse with an evidence-based platform to make qualified decisions on evaluation and treatment of peristomal skin disorders.