肺炎链球菌实验室转化模型的方法学研究

目的 建立肺炎链球茵的实验室转化模型，以便于对该茵的各种目的基因进行重组改造。方法 通过检测细菌的光妻当竺，皇冀定的茵密度时利用感受态刺激因子(CSP)诱导，采用血平板培养筛选的方法，获取发生转化了的菌株。通过抗生素培养基和PCR鉴定是否发生转化。结果 发现不同肺炎链球菌株的转化最适茵密度不同，构建了肺炎链球菌感受态缺陷菌株，建立了肺炎链球菌在实验室的转化模型。结论 实验室条件下，在不同茵密度时可利用CSP诱导肺炎链球菌成为感受态而发生转化。     

肺炎链球菌243株耐药性研究

肺炎链球菌是引起儿童肺炎和败血症的常见致病菌 ,随着抗生素的广泛使用 ,肺炎链球菌耐药现象日益严重 ,如中国周边一些国家青霉素不敏感肺炎链球菌 (penicillin nonsensitivestreptococcuspneumoniae ,PNSP)的发生率高达57 9%～ 79 7% [1],而在儿童中的耐药率更是高于成人[2 ]。中国关于肺炎链球菌的研究相对较少 ,为此我们对浙江大学附属儿童医院分离的 2 43株肺炎链球菌进行了耐药性研究。一、材料与方法1.菌株来源 :2 0 0 1年 8月～ 2 0 0 2年 7月浙江大学医学院附属儿童医院从临床标本分离的 2 43株肺炎链球菌 ,2 12株分离自肺部感染…     

肺炎链球菌适应性评价的方法学探索

目的测定肺炎链球菌在无抗菌药和有抗菌药选择压力下适应性实验方法的评价。方法选用肺炎链球菌国际耐药克隆Taiwan19F-14、Spain23F-1各1株和肺炎链球菌标准菌株ATCC49619,采用分光光度法和菌落计数法分别测定肺炎链球菌生长曲线和杀菌曲线,以修正的Gompertz方程拟合曲线,计算生长动力学参数,对两种方法测定的生长曲线和杀菌曲线进行比较。结果两种方法测定的生长曲线在肺炎链球菌对数生长期所测的结果基本一致,同时还发现肺炎链球菌菌液的A600值和菌落计数之间,在对数生长期有很好的相关性,并确定了两者的函数关系。两种方法测定的杀菌曲线,分光光度法拟合1/2MIC,1MIC药物浓度杀菌曲线与对照曲线相比,随着药物浓度升高无明显下降趋势。分光光度法所测定杀菌曲线中达到99.9%杀菌率的2MIC浓度曲线,基本与X轴相重合。结论分光光度法作为测定肺炎链球菌生长曲线、计算生长动力学参数的实验方法 ,与菌落计数法比较结果一致,且更为简便,可以替代后者用于评价肺炎链球菌在无抗菌药条件下的适应性。但分光光度法测定肺炎链球菌杀菌曲线、评价杀菌效果,无法替代菌落计数法评价肺炎链球菌在抗菌药选择压力下的适应性。     

肺炎链球菌耐药性的研究新进展

肺炎链球菌是社区多得性肺炎的主要致病菌，近年来随着抗生素的大量使用，肺炎链球菌的耐药性问题越来越严重。本文就肺炎链球菌耐药性的流行概况，耐药机制，耐药性的影响因素等方面的研究现状做一系统综述。     

肺炎链球菌疾病的流行病学

肺炎链球菌为革兰阳性兼性厌氧菌,由Sternberg和Pasteur于100多年前分离出来.肺炎链球菌是导致发展中国家和发达国家各年龄组人群社区获得性肺炎的最重要病原菌,同时也是引起中耳炎、肺炎、脑膜炎和菌血症的主要病原菌.在世界范围内,每年由于肺炎链球菌感染引起的死亡已占总死亡人数的9%.近年来,由于其高发病率、高病死率,关于肺炎链球菌疾病的研究已成为医学界的热门课题.     

肺炎链球菌自然转化机制的研究进展

肺炎链球菌的自然转化与其自身的染色体基因突变有着密切联系。研究发现，调控肺炎链球菌发生转化的关键基因是操纵子comCDE，它调控肺炎链球菌产生感受态，从而能获取外源基因。comC的产物CSP可诱导基因comDE的表达，而comE可反过来诱导comC的表达。comAB有修饰和运输comC的转录及翻译产物的作用。ciaRH则有抑制comC表达的作用，comE可通过诱导comX表达，从而诱导一系列的基因表达使细菌发生转化。一些环境因素可影响肺炎链球菌自然转化的发生。氧气可通过基因nox调节肺炎链球菌的转化发生。其中可能有基因ciaRH和MicAB的参与。Ca^2 对其转化的影响可能是通过调节基因ciaRH而实现的。而pH值则可能是通过改变CSP的活性对转化进行调节。     

肺炎链球菌实验室检测技术研究进展

肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SP）是儿童呼吸道感染主要致病菌之一，还可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。据统计，全球每年有300多万儿童死于由肺炎链球菌感染引起的菌血症或脑膜炎。现就肺炎链球菌的实验室检测技术作一综述。     

肺炎链球菌耐药性研究

目的了解我院肺炎链球菌的分布特征及耐药情况。方法回顾性分析我院2015-2017年期间分离的550株肺炎链球菌的分布特征及药敏结果。结果该菌主要分离自<3岁和>60岁患者,且以呼吸道分离率高,药敏结果显示其对红霉素、四环素、复方磺胺耐药率较高且趋势稳定;对氟喹诺酮类的耐药率(<0.5%)较头孢曲松和头孢噻肟(5.64%)更低;未发现对万古霉素耐药的菌株。结论肺炎链球菌为我院儿童和老年人群感染的常见病原菌,针对临床症状严重的患者,在留取标本进行细菌培养后,临床医生可经验选择氟喹诺酮类或三代头孢菌素进行治疗,待药敏结果出来及时根据药敏结果调整用药。     

尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中的临床意义

目的：探讨尿肺炎链球菌抗原检测在肺炎链球菌肺炎诊断中的临床意义。方法随机选择下呼吸道感染患儿300例,同时采集患儿痰标本、血标本、尿标本,对痰、血标本进行病原菌培养、鉴定,采用胶体金法检测尿肺炎链球菌抗原。结果300例患儿中,痰培养、血培养和尿肺炎链球菌抗原检测阳性率分别为10．33％（31/300）、15．67％（47/300）和19．33％（58/300）,尿肺炎链球菌抗原检测阳性率高于其他两种方法,血培养检测阳性率高于痰培养（P＜0．05）;尿肺炎球链菌抗原检测诊断肺炎链球菌肺炎的灵敏度和特异度分别为82．98％（39/47）和92．49％（234/253）。结论尿肺炎链球菌抗原检测可作为儿童肺炎链球菌肺炎的辅助诊断依据。     

肺炎链球菌自然转化机制的研究进展

肺炎链球菌的自然转化与其自身的染色体基因突变有着密切联系。研究发现 ,调控肺炎链球菌发生转化的关键基因是操纵子comCDE ,它调控肺炎链球菌产生感受态 ,从而能获取外源基因。comC的产物CSP可诱导基因comDE的表达 ,而comE可反过来诱导comC的表达。comAB有修饰和运输comC的转录及翻译产物的作用。ciaRH则有抑制comC表达的作用。comE可通过诱导comX表达 ,从而诱导一系列的基因表达使细菌发生转化。一些环境因素可影响肺炎链球菌自然转化的发生。氧气可通过基因nox调节肺炎链球菌的转化发生 ,其中可能有基因cia RH和MicAB的参与。Ca2 + 对其转化的影响可能是通过调节基因ciaRH而实现的。而pH值则可能是通过改变CSP的活性对转化进行调节。     

肺炎链球菌192株对新喹诺酮类体外耐药性测定

目的：调查192株肺炎链球菌对青霉素、红霉素和环丙沙星等的耐药现状，并与新喹诺酮类进行比较。方法：根据美国国家I临床实验室标准委员会(NCCLS)2002年标准使用微量肉汤稀释法检测192株肺炎链球菌对青霉素、红霉素、克林霉素和喹诺酮类抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果：肺炎链球菌对青霉素的耐药率(中介率 耐药率)已达42．7％，对红霉素的耐药率为77．6％，克林霉素、白霉素和环丙沙星的耐药率分别为66．7％、65．6％和57．3％，新喹诺酮类抗菌药物对之有较好的抗菌活性，敏感率皆大于90％；并与是否对青霉素、红霉素耐药无关。结论：在我国，肺炎链球菌对青霉素、红霉素的耐药率较高，新喹诺酮类抗生素有较好的抗菌活性。     

儿童肺炎链球菌对三种抗菌药物的耐药性及相关耐药基因的研究

目的了解南昌地区儿童肺炎链球菌（streptococus pnenurmoniae，SP）对青霉素、红霉素、四环素耐药状况。方法对呼吸道、血液标本、脑脊液标本中分离的31株SP进行青霉素、头孢噻肟E-test药敏试验及青霉素、红霉素和四环素耐药相关的PBP2B、ermB、ermA／B／C、mefA和Term基因PCR检测。结果①PBP2B基因突变30株，均为点突变，PBP2B同源性在80。85％之间。另有1株对青霉素敏感无突变；②含ermA／B／C耐药基因24株，含InerA耐药基因26株，含有erm或InefA耐药基因30株。结论PBP2B基因突变在对青霉素耐药的同时也对三代头孢表现为不同程度的耐药．SP的耐药性已严重影响青霉素．红霉素．四环素的疗效。     

转化缺陷的R6菌株经黏膜免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌有毒株感染

摘要：目的：研制一种无转化能力的肺炎链球菌（S.pn）减毒株R6ΔcomE,评价其作为S.pn活菌疫苗的保护效果。 方法：构建comE基因缺陷的R6ΔcomE株,评价R6、R6ΔcomE株的转化能力及其毒力;用R6、R6ΔcomE株分别对BALB/c小鼠进行黏膜免疫,用ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体效价和脾细胞上清中IFN-γ、IL-4及IL-17A水平;用D39株经鼻腔黏膜感染免疫小鼠,观察生存时间和生存率。 结果：成功构建comE缺陷的R6ΔcomE株。体外转化实验中R6株转化菌量中位数为1 970 CFU/mL,体内转化实验中每只小鼠34 CFU,体内外实验中R6ΔcomE株转化菌量均为0;感染1×10⁸ CFU D39株的小鼠于3 d内全部死亡,而感染相同剂量R6、R6ΔcomE株的小鼠均存活＞21 d,且均于感染后72 h内清除细菌。R6、R6ΔcomE株黏膜免疫小鼠后,血清抗体滴度的中位数（P₂₅,P₇₅）分别达1.0×10⁶（6.4×10⁵,1.8×10⁶）、1.2×10⁶（8.1×10⁵, 1.6×10⁶）,与相应阴性对照组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）;与相应阴性对照组比较,R6、R6ΔcomE株免疫组IL-4、IL-17A均升高（P均＜0.01）,而IFN-γ水平差异无统计学意义（P＞0.05）。黏膜免疫R6、R6ΔcomE株的BALB/c小鼠可抵抗D39株感染,生存率分别为60%和70%。 结论: R6ΔcomE株毒力弱,无转化能力,可诱导对S.pn感染的免疫保护,是一株安全有潜力的S.pn减毒活菌疫苗。     

烟台地区肺炎链球菌的耐药性检测

目的监测烟台地区肺炎链球菌的耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供理论依据。方法收集烟台地区部分医院临床分离的肺炎链球菌,用P试验、K-B法检测此菌对青霉素等10种抗菌药物的敏感度。结果102株肺炎链球菌中71株（70％）对青霉素不敏感。未检出对头孢噻肟、阿莫西林、左旋氧氟沙星和万古霉素耐药的菌株。对克林霉素、红霉素、四环素和复方新诺明耐药率很高,分别为97％、100％、100％和96％。结论烟台地区青霉素不敏感肺炎链球菌检出率高,对大环内酯类药物耐药状况极为严峻。     

Bactericidal activity of quinolones against Streptococcus pneumoniae by time-kill methodology

The increase in Streptococcus pneumoniae strains resistant to the drugs traditionally used in treatment has made the search for alternative agents necessary. We studied the bactericidal activity of ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, sparfloxacin, and trovafloxacin against six penicillin-resistant Streptococcus pneumoniae strains, using time-kill methodology. Our results indicate that trovafloxacin and sparfloxacin had greater bactericidal activity than ciprofloxacin, ofloxacin, and levofloxacin against all the strains tested, since these two quinolones showed bactericidal activity against all six strains at concentrations of not more than 4 mg/l. Ciprofloxacin and levofloxacin did not have bactericidal activity, in the range of concentrations of antibiotics used, against any of the strains studied; when such activity did exist, the concentration of antibiotic used was higher. Received: June 29, 1998 / Accepted: December 3, 1998     

磷脂酶C信号转导分子在肺炎链球菌触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排中的作用

目的 研究肺炎链球菌是否可触发肺Ⅱ型上皮细胞(A549)微丝肌动蛋白F-actin重排,进而导致对A549细胞的侵袭及其与磷脂酶C信号转导分子的关系。方法 采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察肺炎链球菌作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况,依照重排百分率得分标准以(％)表示;用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D预处理A549细胞,观察肺炎链球菌对A549细胞的侵袭数;使用PLC信号转导分子抑制剂U73122预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系。结果 肺炎链球菌作用A549细胞后,经FITC-phalloidin荧光染色,F-actin细胞骨架呈亮黄色圆形聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低肺炎链球菌对A549细胞的侵袭,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;PLC信号转导分子抑制剂U73122可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,并与F-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系,其相关系数为rPLC=-0.98(P<0.05)。结论 肺炎链球菌可通过激活A549细胞PLC信号转导分子而触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,而侵袭A549细胞。     

东莞地区儿童肺炎链球菌携带率及耐药性检测

目的分析东莞地区学龄前健康儿童鼻咽部携带肺炎链球菌情况及对常用抗生素的耐药特点，为预防儿童肺炎链球菌感染及合理使用抗生素提供参考。方法采用专用巧克力平板和血平板培养基，对采集的350例3～5岁儿童鼻咽部分泌物作培养鉴定，对鉴定明确的肺炎链球菌根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准进行常用抗生素检测。结果东莞地区儿童肺炎链球菌携带率约为34．5％；携带株对左旋氧氟沙星、氯霉素、复方新诺明、苯唑西林、四环素、红霉素和青霉素的耐药率分别是2％、24％、42％、64％、74％、78％和24％，仅对万古霉素敏感。绪论东莞地区健康学龄前儿童鼻咽部肺炎链球菌携带率高于国内许多地区，对常用抗生素耐药性严重，并存在多重耐药现象。     

东莞地区儿童肺炎链球菌携带率及耐药性检测

目的分析东莞地区学龄前健康儿童鼻咽部携带肺炎链球菌情况及对常用抗生素的耐药特点,为预防儿童肺炎链球菌感染及合理使用抗生素提供参考。方法采用专用巧克力平板和血平板培养基,对采集的350例3～5岁儿童鼻咽部分泌物作培养鉴定,对鉴定明确的肺炎链球菌根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准进行常用抗生素检测。结果东莞地区儿童肺炎链球菌携带率约为34.5%;携带株对左旋氧氟沙星、氯霉素、复方新诺明、苯唑西林、四环素、红霉素和青霉素的耐药率分别是2%、24%、42%、64%、74%、78%和24%,仅对万古霉素敏感。结论东莞地区健康学龄前儿童鼻咽部肺炎链球菌携带率高于国内许多地区,对常用抗生素耐药性严重,并存在多重耐药现象。     

广州地区ermB和mef E基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌及其耐药性分析

目的了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因分布，比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性。方法用克林霉素纸片法检测199株对红霉素耐药的肺炎链球菌，并用浓度梯度法检测其耐药性。结果199株对红霉素耐药的肺炎链球菌中，ermB、mefE基因介导的耐药率分别为70．9％(141／199)和29．1％(58／199)。141株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌，对青霉素(MIC500．19μg／ml、MIC901．5μg／ml)、阿莫西林／克拉维酸(MIC500．19μg／ml、MIC901．0μg／ml)、头孢曲松(MIC500．19μg／ml、MIC900．75μg／ml)、头孢呋辛(MIC500．38μg／ml、MIC902．0μg／ml)、头孢克洛(MIC502．0Vg／ml、MIC9032．0μg／ml)的不敏感率分别为58．2％、0．7％、21．3％、46．1％和51．1％。58株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌，对青霉素(MIC500．5μg／ml、MIC901．5Vg／ml)、阿莫西林／克拉维酸(MIC500．38μg／ml、MIC901．0μg／ml)、头孢曲松(MIC500．38μg／ml、MIC900．75μg／ml)、头孢呋辛(MIC501．0μg／ml、MIC903．0μg／ml)、头孢克洛(MIC506．0μg／ml、MIC9048．0μg／ml)的不敏感率分别为67．2％、0、19．0％、58．6％和62．1％。结论广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌，其耐药机制以ermB基因介导为主；ermB基因介导的红霉素耐药水平高于mefE基因介导的耐药性。     

肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制研究

目的了解肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制和转座子整合酶的流行情况。方法188株红霉素耐药肺炎链球菌，用E试验和K—B纸片扩散法检测其对11种抗菌药物的敏感性；用双纸片法（红霉素和克林霉素）确定其耐药表型；用PCR扩增这些菌株的耐药基因ermB、mefa、mefE、tetM及转座子整合酶基因intTn。结果188株红霉素耐药株中耐药基因ermB总检出率为91．5％（172／188），mefE总检出率为38．3％，未检出mefA基因。97．9Yoo的红霉素耐药株中存在转座子整合酶intTn。耐药基因组合ermB（＋）mefE（-）和ermB（＋）mef（＋），占91．5％，两者均呈cMLSB耐药表型。ermB（-）mefE（＋）占8．5％，耐药表型为M型。结论我院分离的肺炎链球菌大环内酯耐药以errnB介导的cMLS。耐药表型为主。转座子可能在本地区肺炎链球菌耐药基因的水平转移和克隆播散中起重要作用。