用非竞争性ELISA测定单克隆抗体的亲和力常数

本文采用Beatty报道的非竟争性ELISA结合双抗体夹心法测定了5株单克隆抗体的亲和力常数。直接采用杂交瘤的细胞培养上清,无需纯化抗体,无需对抗原精确定量。而且,方法简便、快速、重复性和准确度都较好,值得推广。     

抗牛FSH单克隆抗体真实亲和力常数的测定

本文在Friguet等提出的酶联免疫吸附法测定单克隆抗体真实亲和力方法的基础上,提出了选择适宜抗原浓度实验点的公式,并用改良后的方法测定了五种抗牛促卵泡激素单克隆抗体的真实亲和力,取得了满意的结果。此外,本文论证了抗原、抗体从低浓度到高浓度变化时,其结合行为上存在的差异。     

单克隆抗体亲和常数的测定

本文介绍了单克隆抗体亲和常数测定的意义、表达方式以及适合于一般实验室使用的几种测定与分析单克隆抗体亲和常数的方法。     

抗PH-SA单克隆抗体相对亲和力的测定

抗金葡菌多肽（PH-SA）是利用金黄色葡萄球菌信息素（pheromone）和大肠杆菌la（colicin）人工合成的新的蛋白质工程多肽（pheromonicin），主要是针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methecillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）及其他致病菌的新型生物信息导向抗菌药物。     

单克隆抗体相对亲和力和特异性的测定

在单克隆抗体的制备中,亲和力和特异性的测定是非常重要的。实验证明单抗的特异性不是绝对的,我们也发现在免疫酶组化染色过程中,当单抗浓度达到一定水平时会出现交叉反应,即抗3型(或7型)腺病毒单抗与7型(或3型)腺病毒出现反应。因此有必要测定单抗特异性,以便筛选高特异性的单抗。     

单克隆抗体亲和力的测定及其意义

随着单克隆抗体杂交瘤技术日益广泛的应用,需要对获得的单克隆抗体(McAb)进行系统地分析鉴定,以确定其在各种免疫学试验中的价值。除了对McAb的免疫球蛋白链理化性质、结合抗原的特异性、以及检测抗原时的敏感度进行分析外,测定McAb对特定抗原的结合亲和力(affinity),对选择合适的McAb用于某一特定目的十分重要。     

抗肿瘤单克隆抗体亲和常数的流式细胞术测定

亲和常数(Avidity)是抗原抗体反应中的重要参数之一,它关系到一个抗体的使用前景。对质地均一的单克隆抗体尤为重要。本文介绍的流式细胞术(Flow.Cytometry)测定抗肿瘤单克隆抗体的亲和常数方法是以3倍系列稀释的FITC标记的抗结肠癌(类CEA)     

用放射免疫沉淀法测定单克隆抗体的亲和常数

我们使用固相SPA放射免疫沉淀来测定单克隆抗体的亲和常数。将饱和结合了单克隆抗体的SPA-Sepharose 4B珠与不同浓度的~(125)Ⅰ标记抗原混合。经低速离心洗涤后进行γ计数。这种方法能将游离的与结合的抗原有效的分开。较目前常用的盐析分离法,二抗夹心分离法有操作简便,不受抗原溶解度等因素的影响,结果的线性度好,精确性高度等优点。我们用此方法对12株抗乙性肝炎表面抗原和5株抗甲胎蛋白的单克隆抗体进行了测定,其中Ig亚类包括IG_1,IG_2b,IG_2a。均获得比较满意的结果。,     

抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定

目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定.方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力.结果:检测方法中抗原、酶标抗体的最佳稀释度分别为1∶800和1∶10 000,单抗的相对亲和力分别为:4A9约在5.242 μg/ml(1∶600),4C3约在0.763 μg/ml(1∶5 000),9F12约在0.127 μg/ml(1∶40 000),即9F12＞4C3＞4A9.结论:用建立的ELISA方法测定了3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力,将为进一步研究口蹄疫病毒而选取合适的单抗提供理论依据.     

一组抗肿瘤单克隆抗体相对亲和常数的测定

本文用ABC-ELISA夹心法测定的终点浓度值分析了一组15种抗人结肠癌McAbs的相对亲和常数。结果是各McAb的相对亲和力各有不同,最高达4.15×10~(-12),最低为6.25×10~(-10)。实验表明本法用于针对复杂而微量的肿瘤抗原的测定是可行的,而且本法可一次测定多个这样的McAbs的相对亲和常数。亦不需标记被测抗体或抗原。故方法简便;且灵敏度高,重复性好,这对有关的研究具有参考价值。     

改良ELISA测定腹水中单克隆抗体的亲和常数

抗体亲和力对体内外免疫反应有重要影响,为阐明抗体亲和力在免疫学检测及疾病发生发展机理中的作用,需要建立简单准确的测定抗体亲和力的方法。本实验参照Friguet氏利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体亲和力的基本原理,建立了改良测定法,能准确且方便地直接测得腹水中单克隆抗体的亲和力常数。     

抗肿瘤细胞抗原单克隆抗体亲和常数的流式细胞术测定

本文介绍的流式细胞术(Flow Cytometry)测定抗肿瘤细胞抗原单克隆抗体的亲和常数方法是以3倍系列稀释的FITC标记的抗结肠癌(类CEA)单克隆抗体4D_6,直接染色标记结肠癌细胞系LS 174T,通过流式细胞仪FACS 440测定有抗原表达的细胞百分数。按照Michaelis-Menten方程原理,即当抗原为一定量时,逐渐增加抗体浓度,使抗原结合达饱和,然后求出     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

McAb为传染病的病原研究和临床诊断等提供了新的手段和制剂。由于每一株杂交瘤分泌的McAb的特性可能各不相同,而其中McAb对相应抗原的亲和力高低是决定其用途的重要依据之一,因此有必要及早确定。经典的测定抗体亲和力方法一般是以抗原抗体反应的平衡常数K值表示,但K值的求得需对抗原抗体进行纯化、定量,方法烦琐,不能常规使用。本文采用ELISA法测定,虽不十分精确,但操作简便,无需特殊试剂和设备,能快速而明确地比较出各株McAb对病毒抗原亲和力的相对高低。 测定了32株抗肾综合征出血热(HFRS)     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定

本研究应用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),对6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(单抗)的抗原结合位点及相亲和力进行了测定。通过ELISA相加试验证实,6株单抗识别5个不同的抗原位点。2H_4和2F_2的相加指数小于50％,表明二者识别相同的抗原位点,而其余单抗则具有不同的抗原位点。由本测定可知,JEV表面至少有5种不同的抗原决定簇。 从50％最大结合的单抗浓度分析可知,6株单抗的相对亲和力为nG_2>2H_4>2F_2>mG_9     

肝癌单克隆抗体亲和常数测定及其在体内的导向意义

单克隆抗体的亲和常数反映了抗体的亲和力及其靶抗原分布的位点和密度,是选择具有导向意义的抗肿瘤单抗的重要依据。本文报告肝癌单抗HAb18亲和常数的测定及其在导向诊断中的意义。 取HAb18 IgG单抗,采用高效碘标法,参照Hayes DF等法,取标记抗体起始浓度     

突变的单克隆抗体与抗原亲和力增加

B细胞的免疫球蛋白基因在体内发生伴体细胞突变的频率很高。通过使用一种体外系统来检测并分离其免疫球蛋白基因已发生体细胞突变的突变细胞,这将极其有助于分析体细胞突变机制及其真实发生率。作者发展了一种技术来分离突变的杂交瘤,该杂交瘤分泌的抗体与抗原亲和力增加。该技术用途很大,它不仅提供了一种研究体细胞突变的优良系统,而且提供了一种常规制备较佳单克隆抗体试剂方法,以供实验室和临床使用。 该方法采用“Sib选择”,乃将大量低浓度野生型细胞铺开(一般20～30个96孔板,每