siRNA沉默DNA聚合酶β基因对胃癌BGC-823细胞增殖的影响

目的:观察siRNA沉默DNA聚合酶β(DNA polymerase β,pol β)基因后对胃癌BGC-823细胞增殖的影响.方法:用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测先前构建好的转染不同siRNA载体的各组细胞中pol β mRNA和蛋白质表达水平,用FCM法和裸鼠体内成瘤实验检测各组细胞的增殖情况.结果:转染pol β靶向siRNA的BGC-823细胞中pol β mRNA和蛋白质表达水平均明显降低,且siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ2(抑制程度83%)的沉默抑制作用强于siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ1(抑制程度56%);与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比,转染pRNAT-U6.1-sipolβ1组细胞的S期比例及细胞增殖速度明显下降,而转染pRNAT-U6.1-sipolβ2组细胞的S期比例以及细胞增殖则明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:DNA pol β高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态;BGC-823细胞中pol β表达通过siRNA沉默到合适的低水平,对肿瘤的生长可以起到抑制作用.     

一氧化氮对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的通过研究一氧化氮(nitricoxide，NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对胃癌细胞系BGC823的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖过程的影响.方法应用光学显微镜和透射电子显微镜进行形态观察,四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium     

三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖及细胞周期的影响

[目的]探讨三氧化二砷（AS2O3）对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用及对细胞周期的影响。[方法]应用MTT方法检测三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪进行细胞周期解析及凋亡检测．[结果]三氧化二砷对胃癌BGC823细胞具有杀伤作用，且呈时间-浓度依赖性抑制肿瘤细胞的增殖．72h抑制细胞50％增殖的药物浓度约为3．3μmol／L，与对照组比差异显著（P=0．0048）；5μmol／LAs2O3作用24h，细胞形态学可见典型的凋亡细胞及M期阻滞；流式细胞仪进行细胞周期解析结果提示，G2/M期细胞由正常对照的25％增加到46．3％，出现了明显的G2/M期阻滞，亚二倍体凋亡细胞由4％增加到18％。[结论]三氧化二砷抑制胃癌细胞的增殖．诱导细胞周期阻滞及凋亡。     

肾癌中miR-363的表达及其临床意义

目的:探讨miR-363在肾癌中的表达及其临床意义.方法:在大规模平行测序基础上,应用实时荧光定量PCR检测51例肾癌及其癌旁组织样本中miR-363的表达水平,并应用RT-PCR检测进行验证,分析miR-363的表达水平与肾癌患者的临床病理特征之间的关系.结果:与相应的癌旁组织比较,肾癌组织中miR-363的表达水平明显下调,平均下调约11.49％,且miR-363的表达水平与患者的年龄、病理分型及TNM分期有关(P＜0.05).结论:miR-363可能与肾癌的进展有密切关系,进行miR-363表达意义的研究可能对肾癌早期诊断及治疗具有潜在的临床意义.     

胃癌miRNAs表达谱及胃癌组织miR-21表达临床意义探讨

目的:筛选胃癌miRNAs表达谱,探讨miR-21在胃癌组织中的表达情况及其临床病理意义.方法:收集手术切除新鲜胃癌标本共65例,包括胃癌组织及相应胃正常上皮组织,随机选取其中6例,应用miRNA芯片技术研究胃癌的miRNAs表达谱.采用实时定量PCR验证芯片结果并检测miR-21在65例胃癌组织标本及相应胃正常上皮组织的表达水平,探讨其表达与胃癌临床病理参数间的关系.结果:与胃正常上皮组织相比,胃癌组织中表达上调超过2倍的miRNAs有7个(miR-374b*、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b和miR-18a),表达下调超过2倍的miRNAs有9个(miR-29b-2*、miR-1260、miRPlus-E1241、miR-S1-5p、miR-148a、miR-29c、miR-647、miR-196b×和ebv-miR-BART5).46例(70.8％)胃癌组织中miR-21表达水平明显高于胃正常上皮组织,且与肿瘤的分化程度(x2=6.257,P=0.012)、浸润深度(x =5.705,P=0.017)和有无淋巴结转移(x2=7.107,P=0.008)有关.结论:筛选出的差异表达miRNAs可能参与胃癌的发病;miR-21与胃癌生物学行为密切相关,可能成为胃癌诊断和治疗的潜在生物学指标.     

三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖及细胞周期的影响

[目的]探讨三氧化二砷（AS2O3）对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用及对细胞周期的影响。[方法]应用MTT方法检测三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪进行细胞周期解析及凋亡检测．[结果]三氧化二砷对胃癌BGC823细胞具有杀伤作用，且呈时间-浓度依赖性抑制肿瘤细胞的增殖．72h抑制细胞50％增殖的药物浓度约为3．3μmol／L，与对照组比差异显著（P=0．0048）；5μmol／LAs2O3作用24h，细胞形态学可见典型的凋亡细胞及M期阻滞；流式细胞仪进行细胞周期解析结果提示，G2/M期细胞由正常对照的25％增加到46．3％，出现了明显的G2/M期阻滞，亚二倍体凋亡细胞由4％增加到18％。[结论]三氧化二砷抑制胃癌细胞的增殖．诱导细胞周期阻滞及凋亡。     

miR-126对细胞周期的调控及其与肺癌患者预后的关系

目的研究miR-126在肺癌中的表达变化及其与癌细胞周期调控的关系,并分析miR-126表达对肺癌患者术后生存期的影响。方法对肺癌细胞株A549和49例临床肺癌手术标本进行实时定量RT-PCR检测miR-126的表达;A549细胞转染miR-126表达载体,MTT和流式细胞术检测miR-126表达对癌细胞增殖和细胞周期的影响;Kaplan-Meier曲线和log-rank分析方法比较miR-126高、低表达组之间无瘤生存期和总生存期的差别。结果A549肺癌细胞miR-126低表达（2.10±0.67）,转染miR-126表达载体后,miR-126表达升高（12.33±1.67）;转染miR-126后96小时,A549细胞存活率为（68.33±6.67）%,明显低于亲本A549细胞（105.33±8.58）%,差异有统计学意义（P〈0.001）;与亲本A549细胞比较（G0/G1期：37.48±3.28;S期：62.03±5.23）,转染miR-126的A549细胞G0/G1期细胞比例上升（53.67±6.06）,S期下降（43.21±3.75）,差异有统计学意义（P〈0.001）;肺癌组织miR-126表达水平（12.41±4.34）明显低于癌旁肺组织（23.29±6.28）,差异有统计学意义（P〈0.001）;miR-126高表达组无瘤生存期和总生存期均明显高于低表达组（P〈0.01,P〈0.001）。结论 miR-126在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能成为肺癌治疗的可选靶点之一。     

亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC-823的作用机制

 目的探讨亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC-823的作用机制。方法采用MTT法、光镜、电镜、流式细胞仪检测和免疫细胞化学法研究亚砷酸钠对BGC-823细胞生物学行为的影响。结果不同浓度的亚砷酸钠均可有效抑制BGC-823细胞生长,且具有浓度和时间依赖性,其中效浓度为4.86μmol/L。流式细胞仪检测发现亚砷酸钠作用不同时间后,细胞均出现G2/M期阻滞。形态学观察显示亚砷酸钠作用72h后,细胞出现典型的凋亡和坏死形态学改变。免疫细胞化学法发现亚砷酸钠能显著上调细胞Caspase-3蛋白的表达。结论亚砷酸钠对BGC-823细胞的生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡和坏死,其机制可能与其抑制ROS的清除,上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

miR-200b对人结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究miR-200b对人结肠癌sw620细胞E-cadherin表达的调节作用,探讨miR-200b对sw620细胞增殖及迁移的影响.方法 采用实时PCR (RT-PCR)技术分别检测转染pEGP-miR-200b后24h和72 h sw620细胞中miR-200b的表达变化;采用RT-PCR技术和Western blot方法检测转染miR-200b后对E-cadherin表达的影响;采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和划痕擦伤实验检测转染miR-200b对sw620细胞增殖、迁移的影响.结果 miR-200b转染sw620细胞48 h和72 h后,miR-200b相对表达量较对照组显著上调(t=11.579,P＜0.01;t=11.579,P＜0.01);且抑制了细胞的增殖能力,第3天抑制作用最显著,抑制率为55.34％;细胞的迁移速度受到明显的抑制,两组在24、48、72 h的迁移距离有显著差异(t=11.579,P＜0.01;t=10.419,P＜0.01;t=6.955,P＜0.01).同时细胞中E-cadherin基因的mRNA和蛋白表达水平显著升高(t=10.432,P＜0.01;t=8.325,P＜0.01).结论 上调miR-200b表达可抑制结肠癌细胞的生物活性,该作用可能与E-cadherin的表达有关.     

胃癌组织Cystatin SN mRNA表达及其临床意义的探讨

目的:研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂1 (Cystatin SN)在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:荧光定量PCR方法检测40例胃癌组织和40例癌旁组织中Cystatin SN的表达.结果:胃癌组织中Cystatin SN mRNA的表达水平为5.370 0±3.034 5,相应的癌旁组织为1.705 0±0.738 8,癌组织显著高于癌旁组织,t=8.297,P=0.000.Cystatin SN的表达与肿瘤大小(t=-0.646,P=0.001)、淋巴转移(t=3.393,P=0.002)、TNM分期(t=-3.798,P=0.001)和浸润程度(t=4.904,P=0.000)相关,与肿瘤的分化程度、患者年龄和性别无关,P＞0.05.结论:Cystatin SN在胃癌组织中的高表达与胃癌的发生发展密切相关.     

奥沙利铂联合替尼泊苷抑制胃癌BGC-823细胞生长和诱导凋亡的作用

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合替尼泊苷(teniposide, VM-26)抑制胃癌BGC-823细胞的体外生长及诱导细胞凋亡的作用.方法:应用MTT法检测不同浓度OXA和VM-26单药以及联合用药对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,应用FCM检测细胞凋亡率,同时应用免疫细胞化学法检测OXA单药以及OXA联合VM-26用药对胃癌BGC-823细胞caspase-9和livin蛋白表达的影响.结果:OXA和VM-26单药均可抑制胃癌BGC-823细胞的生长,且在一定浓度范围内呈剂量依赖效应;联合用药组的细胞生长抑制率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05),联合指数(combination index, CI)为0.46.OXA(1.250 μg/mL)单药作用于胃癌BGC-823细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为6.13%、13.86%和21.48%;VM-26(0.625 μg/mL)单药组的细胞凋亡率分别为4.60%、10.72%和17.07%;联合用药组的细胞凋亡率分别为11.73%、24.14%和44.75%.联合用药组的细胞凋亡率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,OXA(1.250 μg/mL)单用以及联合VM-26(0.750 μg/mL)作用于胃癌BGC-823细胞48 h后,凋亡相关基因caspase-9蛋白的阳性表达率均增加,而livin蛋白的阳性表达率均下降;各用药组之间以及用药组与对照组(未用药)之间的差异均有统计学意义(P<0.05).结论:OXA联合VM-26用药在抑制胃癌BGC-823细胞的生长和诱导细胞凋亡方面具有协同作用.     

凋亡抑制基因Livin在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究凋亡抑制基因Livin在人胃癌组织中的表达及其与组织分化程度、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系。方法应用RT-PCR方法检测Livinα和Livinβ mRNA表达水平,卡方检验分析两组之间表达水平差异。将胃癌临床病理参数与表达水平进行等级相关分析和检验,探讨二者之间的相关性。结果 40例胃癌患者中,Livin表达阳性率52.5%,且Livinα和Livinβ两种异构体均见表达。20例正常胃组织中均未见Livin mRNA表达,阳性率0%（P〈0.05）。Livin的表达与胃癌的分化程度以及是否有淋巴结转移之间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。相关性分析示Livin的表达与胃癌的浸润深度、TNM分期之间呈正相关,但Livin的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。Livin的表达与年龄、性别、胃癌的生长部位差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 Livin在胃癌组织中特异性的表达,可能作为胃癌免疫及基因治疗的一个有效靶点。     

EB病毒与胃癌关系的初步探讨

目的探讨本地区胃癌与EB病毒的关系。方法用聚合酶链反应方法检测本地区经病理确诊的胃癌组织标本58例、萎缩性胃炎24例及胃溃疡28例,其中胃癌组为病例组,萎缩性胃炎及胃溃疡设为对照。结果胃癌组织中EB病毒阳性7例,阳性率13.5%,而对照组EB病毒阳性0例,两者差异有统计学意义;不同分化程度胃癌EB病毒DNA检测结果不同,差异有统计学意义。结论 EBV感染可能是本地区胃癌发生的一个重要环境因素;EB病毒可能与恶性程度高的胃癌有关。     

奥曲肽对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(octreotide,OCT)对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及其可能的作用机制.方法:不同浓度的OCT作用于体外培养的人胃癌BGC-823细胞,以5-FU作为阳性对照,应用MTT法分析细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率,AO-EB染色观察细胞形态变化.结果:OCT对BGC-823细胞的生长、增殖产生抑制作用,该抑制作用具有量效、时效关系和饱和性;OCT作用后细胞呈典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测的细胞凋亡率和AO-EB染色测得细胞凋亡率与对照组相比较差异有显著性(P<0.05);BGC-823细胞经OCT作用后,G1期细胞数明显增加,S细胞数明显减少,细胞被阻滞于G1/S 期.结论:10-5-10-3g/L 浓度的OCT能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖,机制可能与其诱导肿瘤细胞的凋亡和出现G1/S期阻滞有关.     

MicroRNA-21靶向PDCD4对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-21对胃癌细胞中PDCD4表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法将MGC-803人胃癌细胞分为5组,分别为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染不相关siRNA)、mir 21组(转染miRNA-21质粒)、mir 21 Inhibitor组(转染miRNA-21抑制物)、PDCD4 siRNA组(转染PDCD4 siRNA)。分别于转染后36、48、72小时收集细胞,采用实时定量PCR及细胞爬片免疫组织化学检测细胞中PDCD4基因及蛋白水平,运用MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白、阴性对照组比较,mir 21组PDCD4表达量下降,细胞增殖能力增强(均P<0.05);mir 21 Inhibitor组PDCD4表达量增多(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.01),细胞总凋亡比例增高(P<0.05);PDCD4 siRNA组PDCD4表达几乎完全被抑制,细胞增殖能力增强(均P<0.01),36小时时细胞总凋亡比例减少(P<0.05)。而阴性和空白对照组比较,细胞PDCD4表达量、细胞增殖与凋亡都无明显差异(P>0.05)。结论 MicroRNA-21能靶向调控PDCD4,抑制胃癌细胞MicroRNA-21的表达后可上调PDCD4表达,发挥抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。     

抗癌活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期的调控

目的:探讨抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)对人胃癌细胞BGC-823细胞周期的影响及其作用机制。方法:体外培养BGC-823细胞,将不同浓度的ACBP作用于细胞,MTT法测定不同浓度的ACBP对BGC-823细胞的生长抑制率;HE染色观察形态学变化;半定量RT-PCR检测细胞周期负性调控分子p27基因mRNA表达的变化。结果:不同浓度(10.0～25.0mg/L)ACBP均能抑制BGC-823细胞的生长,细胞出现明显的凋亡特征性改变,且具有浓度和时间依赖性,25.0mg/LACBP作用72h抑制率为(84.4±2)%,中效浓度(IC50)为7.86mg/L。RT-PCR发现经ACBP处理后,BGC-823细胞的p27mRNA表达明显增加。结论:ACBP对BGC-823细胞的生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,其抑癌机制可能与其调控细胞周期有关,使p27mRNA重获表达,从而发挥抗BGC-823细胞增殖的作用。     

BTG2基因对胃癌细胞系生物学特性影响的研究

目的:初步探讨细胞增殖抑制基因BTG2对于胃癌细胞生长、增殖状态、细胞周期和凋亡状态等生物学特性及成瘤、侵袭转移能力等恶性表型的影响。方法:将BTG2基因插入载体PCD-NA3.1构建PC-BTG2真核表达载体。以脂质体介导转染MKN45胃癌细胞,经G418压力筛选法筛出稳定表达的阳性克隆,经流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成和细胞迁徙等实验分析稳定表达株相关生物学特性变化,每种检测实验均设立PC-BTG2稳定转染细胞组、PCDNA3.1稳定转染细胞组和空白MKN45细胞组。结果:与转染PCDNA3.1空载体及空白MKN45胃癌细胞相比:1)转染PC-BTG2载体的稳定表达细胞株生长速度提高,开始计数后第3、4、5、6和7天PC-BTG2转染组平均细胞计数均显著低于其他两组,F=350.83,P<0.05;2)细胞周期检测显示,PC-BTG2转染组G0～G1期比例显著高于其他两组,F=18.70,P<0.05,而G2～M(F=35.36)、S期(F=20.94)比例显著低于其他两组,P<0.05;3)细胞凋亡检测显示,PC-BTG2转染组凋亡比例显著高于其他两组,F=37.34,P<0.05;4)平板克隆形成实验结果显示,PC-BTG2转染组平均克隆形成率显著低于其他两组,F=54.3,P<0.05;5)细胞迁徙实验结果提示,PC-BTG2转染组穿膜率显著低于其他两组,F=46.1,P<0.05。结论:BTG2基因有较显著的抑制细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,减少分裂期细胞,促进细胞凋亡,并具有降低肿瘤细胞侵袭转移能力的作用。