人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导的神经细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠海马组织β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经细胞凋亡的影响。方法 36只SD雄性大鼠分为假手术组、Aβ模型组和人参皂苷Rg1干预组。Aβ模型组和人参皂苷干预组直接注射10μg/μL的β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)1μL于大鼠海马组织造模;人参皂苷干预组大鼠术后用人参皂苷Rg1 50mg/kg连续灌胃30天。采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,甲醇刚果红染色观察人参皂苷Rg1对海马组织Aβ的沉积影响,TUNEL法检测海马神经细胞凋亡。结果假手术组大鼠水迷宫测试逃避潜伏时间为(47.36±12.21)s,穿越平台次数为(7.48±1.25)次。与假手术组比较,Aβ模型组大鼠水迷宫测试逃避潜伏时间延长至(84.52±16.68)s(P0.01),穿越平台次数减少至(2.57±0.64)次(P0.01)。与Aβ模型组比较,人参皂苷干预组大鼠的逃避潜伏时间[(63.22±12.05)s,P0.05]和穿越平台次数[(5.22±1.31)次,P0.05]均显著改善。Aβ模型组大鼠海马组织出现明显Aβ沉积;人参皂苷干预组大鼠海马组织Aβ沉积的阳性斑块数量少于Aβ模型组。人参皂苷干预组海马组织TUNEL阳性神经细胞数目比Aβ模型组明显减少[(73.20±1.71)个比(101.83±1.45)个,P0.01],Aβ模型组海马组织细胞出现明显的细胞凋亡。结论人参皂苷Rg1可明显改善Aβ所致AD大鼠学习记忆功能,减少海马组织的Aβ沉积,抑制大鼠海马Aβ诱导的细胞凋亡。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35致小鼠海马神经元损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致小鼠海马神经元损伤的保护作用及ICI182,780的阻断作用。方法 C57BL/6雌性OVX小鼠侧脑室注射Aβ25-35制备Alzheimer病(AD)小鼠模型,在有或无雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780的情况下,腹腔注射Rg1。Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR技术检测海马bcl-2基因的表达情况。结果与对照组相比,Aβ25-35可导致小鼠的潜伏期和总路程增长(F=11.34、10.90,q=6.184、5.905,P<0.05),穿越平台次数减少(F=10.90,q=6.023,P<0.05),明显降低海马bcl-2基因的表达(F=18.47,q=6.082,P<0.05);与Aβ25-35组相比,Rg1可降低AD小鼠的潜伏期和总路程(q=5.478、6.097,P<0.05),提高其穿越平台次数(q=6.023,P<0.05),逆转Aβ25-35所致的bcl-2基因表达的降低(q=9.661,P<0.05);Rg1的这些作用可被ICI182,780完全阻断(q=5.360~7.482,P<0.05)。结论 Rg1可减弱Aβ25-35对小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与雌激素受体途径的激活有关。     

人参皂苷Rg1对Aβ1-40致AD模型大鼠行为学及caspase-3表达的影响

【目的】 观察人参皂苷Rg1对Aβ-淀粉样蛋白1-40致阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及对caspase-3表达的调控作用,探究人参皂苷Rg1对海马CA1区神经元凋亡的防护作用。 【方法】 选取3个月龄健康SD大鼠75只,随机分为青年组、假手术组、模型组、人参皂苷Rg1干预组[模型+人参皂苷Rg1 20 mg/(kg·d)剂量组和模型+人参皂苷Rg1 40 mg/(kg·d)剂量组],每组15只。D-半乳糖50 mg/kg大鼠腹腔注射,连续注射6周后,依照Paxions《大鼠脑立体定位图谱》,在海马区注入凝聚态Aβ1-40溶液1 μL制作AD模型。造模成功后,人参皂苷Rg1干预组分别给予人参皂苷Rg1 20、40 mg/(kg·d)灌胃,其它三组以等量生理盐水灌胃(1次/d),连续30 d后利用Morris水迷宫观察人参皂苷Rg1对AD大鼠学习记忆能力的影响;断头取海马,应用H-E染色法观察海马CA1区病理学改变;应用RT-PCR、免疫组化(SABC)和蛋白质印迹法检测caspase-3基因及蛋白表达情况。 【结果】 (1)人参皂苷Rg1干预组大鼠的学习记忆成绩优于模型组(P<0.05);(2)模型组海马CA1区神经元排列欠规则,可见肿胀的细胞,出现核固缩,锥体细胞较少,可见凋亡小体。人参皂苷Rg1干预组可见细胞排列基本规则,明显坏死的锥体细胞较少;(3)与青年组比较,模型组大鼠海马组织caspase-3基因及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,Rg1干预组大鼠的caspase-3基因及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。 【结论】 人参皂苷Rg1通过抑制caspase-3的表达,从而抑制Aβ1-40致AD模型大鼠神经元凋亡,进而改善AD大鼠学习记忆能力,达到防治AD的目的。     

人参皂苷对Aβ25-35蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。     

阿魏酸钠对β淀粉样蛋白25-35诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸钠(SF)对β淀粉样蛋白25-35(A β25-35)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用.方法以原代培养孕17～18d的SD大鼠胎鼠的大脑皮层神经细胞为观察对象.倒置显微镜下观察给药前后神经细胞的形态学变化,用MTT比色实验检测神经细胞活性,依据LDH漏出率检测神经细胞膜的损伤程度,以MDA生成量推测生物膜不饱和脂肪酸过氧化程度.结果与正常对照组相比,A β25-35(20μmol/L)处理24h,可使神经细胞活性显著下降(P<001),SF(10μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L, 1ol/L)能剂量依赖地减轻A β25-35的细胞毒性.结论 SF能够对抗A β25-35诱导的培养皮层神经细胞的损伤.     

人参皂苷治疗阿尔茨海默病作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种原因未明、以认知功能减退为主要临床表现的神经系统退行性疾病,已成为世界范围内危害人类健康最严重的疾病之一。中医药防治AD是近年来的研究热点,已发现人参根的提取物人参皂苷对AD具有良好的治疗作用。     

天麻素对Aβ25-35诱导的Alzheimer病细胞模型的保护作用

目的研究天麻素(GAS)对诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的作用。方法以β-淀粉样肽25-35片段(Aβ25-35)20μmol/L诱导原代培养的大鼠大脑皮层、海马神经细胞建立AD细胞模型,以人参总皂甙作为阳性对照,通过形态学观察、MTT等方法检测细胞活力。结果与对照组比较,Aβ25-35诱导的培养神经元发生明显的形态学变化,MTT检测显示细胞活力明显下降,乳酸脱氢酶(LDH)释放增多,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);当预先加入不同质量浓度的天麻素、人参总皂甙时,Aβ25-35对神经细胞的损伤明显减轻,细胞活力明显增强,LDH释放减少,与实验对照组对比差异均有显著性(P<0.05)。结论天麻素具有预防和治疗AD的潜在功效。     

知母皂苷B对大鼠海马注射β-AP(25～35)致tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP（25～35）]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法 用RT-PCR法检测p53和DKK mRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果 AD模型组海马内神经元的tau蛋白过度磷酸化,而p53和DKK mRNA的表达与假手术对照组相比也显著增多：而知母皂苷B给药治疗组均可使这种现象得到明显改善。结论 知母皂苷B可通过抑制β—AP引起的p53及其后续的DKK的表达增加而有效改善AD大鼠脑内神经元的tau蛋白过度磷酸化。     

胞二磷胆碱对阿尔茨海默病大鼠顶叶皮质Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的:研究胞二磷胆碱对AD大鼠大脑皮质Aβ及其相关蛋白表达的影响.方法:选用30只SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组、治疗组3组;模型组及治疗组腹腔注射D-半乳糖,同时喂饲AlCl3水溶液;对照组每日腹腔注射生理盐水40mL/kg;治疗组于造模结束后1 d开始腹腔注射胞二磷胆碱,连续给药4周;刚果红染色,铃木镀银染色判定神经元变性;用免疫组织化学方法、Western Blot结合图像分析对比观察胞二磷胆碱对Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达的影响.结果:与对照组比较模型组大鼠顶叶皮质Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达均明显增加,治疗组大鼠与模型组相比顶叶皮质内Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达无减少.结论:胞二磷胆碱不能通过作用于β-分泌酶及γ-分泌酶抑制Aβ的表达.     

人参皂苷Rg1对寡聚态Aβ1-42增加p38丝裂原活化蛋白激酶活性诱导神经元损伤的可能影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)增加皮质神经元细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)活性、诱导神经元损伤的影响。方法 采用经神经元特异性抗体检测C57BL/6胎鼠来源的皮质神经元为研究对象,运用寡聚态Aβ_1-42诱导神经元损伤,把神经元分为空白对照组、Aβ_1-42单独作用组(模型组)、SB203580处理组、人参皂苷Rg1处理组、人参皂苷Rg1单独作用组。采用Western-blot方法检测p38、磷酸化p38(p-p38)的蛋白水平,采用光学显微镜观察神经元形态,采用TUNEL染色和caspase-3活性检测神经元凋亡相关指标。结果 (1)在寡聚态Aβ_1-42作用5和15 min时,皮质神经元中p-p38蛋白水平均较空白对照组明显升高,差别均有统计学意义(P<0.05)。(2)与模型组比较,人参皂苷Rg1处理组中,不同浓度(2.5、5.0和10.0μmol/L)的人参皂苷Rg1作用后,寡聚态Aβ_1-42诱导升高的p-p38/p3...     

人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的：研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法：体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组（10 mg/L）、Rb1中剂量组（50 mg/L）及Rb1高剂量组（100 mg/L）,应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果：MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。     

β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响

目的 研究β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响.方法 用浓度为125 hmol/L的Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性上清干预神经元,检测Bcl-2、Caspase-3、PARP的表达及神经元凋亡的情况.结果 炎性上清液干预组Caspase-3(14.2±1.8)、Bcl-2阳性细胞数(10.6±0.8)明显高于Aβ1-42干预组(2.2±0.6,5.0±0.3)(P＜0.01),吖啶橙免疫荧光结果显示炎性上清液处理组与Aβ1-42直接干预组48 h和72 h凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导小胶质细胞的炎性上清可以通过Caspase-3途径诱导神经元凋亡,小胶质细胞活化引起的慢性炎性过程是Aβ引起神经细胞凋亡的重要条件之一.

Abstract：

Objective To study the effects of neuronal apoptosis under the induction of β-amyloid inflammatory supernatant. Methods The neurons were intervened by β-amyloid-induced inflammatory supernatant at the concentration of Aβ1-42 at 125 nmol/L. And the expressions of Bcl-2, caspase-3, PARP and neuronal apoptosis were detected. Results The caspase-3 ( 14. 2 ± 1.8 ), Bcl-2 ( 10. 6 ± 0. 8 ) positive cells of microglia inflammatory supernatant stimulated group were significantly elevated than the control(2. 2 ± 0. 6,5. 0 ± 0. 3, P ＜ 0. 01 ). Nuclear chromatin was uniform yellow-green fluorescent. And there was significant difference of neuronal apoptosis between microglia inflammatory supernatant group and Aβ1-42directly stimulated group. Conclusion Neuronal apoptosis is induced by caspase-3 in β-amyloid inflammatory supernatant. One of the important causes is chronic inflammatory process of activated microglia by Aβ.     

淫羊藿苷对Aβ25-35所致神经细胞损伤的保护作用研究

目的 观察淫羊藿苷对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致神经细胞损伤的作用.方法 18只Wistar大鼠简单随机分为5组,分别为假手术组、模型组、ICA药物组(30、60、120 mg·kg-1),海马内注射Aβ25-3510μg(5μg.μl-1)制备AD大鼠模型,ICA30、60、120 mg·kg-1连续灌胃给药14天后,石蜡切片HE染色观察海马神经元形态及数量的变化;神经细胞原代培养,MTT检测神经细胞增殖活性.结果 与模型对照组比较,ICA连续灌胃给药14天可减少皮质和海马神经元的丢失;ICA给药组噻唑蓝值较模型组增加.结论 淫羊藿苷对Aβ25-35所致神经细胞损伤具有保护作用,有利于老年性痴呆的治疗.     

人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 利用中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)采用MTY方法筛选人参皂苷Rgl抗Aβ细胞毒性的有效浓度.通过转染突变型(M146L)PS1基因的CHO细胞(PS1M146L),利用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹方法,探讨人参皂苷Rg1对PS1M146L细胞中Aβ42和凋亡效应基因半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性蛋白表达的影响,通过脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,观察人参皂苷Rg1对Aβ促细胞凋亡的影响.结果 加用25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1的CHO细胞活性明显高于未加用组(均P＜0.05).在转染突变型PS1M146L的CHO细胞中,加用人参皂苷Rg1作用24 h后早期细胞凋亡数(10.11.11±0.76)较未加用组(15.01±1.46)少,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Aβ42和caspase-3活性片段的蛋白质表达量较未加用组细胞亦不同程度降低(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1可能通过降低Aβ42生成和降低caspase-3蛋白质表达抑制Aβ诱导的细胞凋亡.     

尼古丁对Aβ25-35诱导的细胞毒性拮抗作用

目的:研究尼古丁对神经细胞的保护作用及其机制。方法:通过检测细胞形态变化、细胞活力及细胞周期的变化,研究不同浓度尼古丁对PC12细胞的影响。结果:人β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对PC12的细胞毒性作用呈时间、剂量依赖。尼古丁浓度为1μmol/L至100μmol/L时具有细胞保护作用,但不能逆转Aβ25-35对于细胞的损伤,而高浓度尼古丁(1 000μmol/L)则失去细胞保护作用。结论:Aβ25-35诱导细胞活性下降具有时间、剂量依赖性,此作用可被适宜浓度的尼古丁部分拮抗。     

针刺“百会”、“大椎”、“足三里”穴对AD模型大鼠学习记忆能力及海马组织内β-AP蛋白表达水平的影响

目的研究电针对AD模型大鼠学习记忆能力及海马组织内β-AP蛋白表达的影响,为临床应用针灸治疗AD进一步提供理论依据。方法选取健康Wistar雄性大鼠50只,进行行为学测试后,选取符合标准的30只大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组。造模方法采用微量注射每侧侧脑室10%链脲霉素10μL建立AD模型,电针组经电针刺激"百会"、"大椎"、"足三里"穴进行治疗。用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;用免疫组化染色法检测海马组织内β-AP阳性细胞表达情况。结果电针组大鼠的学习记忆能力显著提高,逃避潜伏期及游泳路程明显缩短(P<0.01),大鼠在原平台象限游泳时间占整个游泳时间的百分比显著升高,第1次穿过原平台所在位置的时间明显缩短(P<0.01);与正常组比较,模型组海马组织内β-AP蛋白表达水平升高(P<0.01),治疗后电针组与模型组比较,β-AP蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论电针治疗后AD大鼠学习记忆能力显著改善,针刺可降低AD大鼠海马组织细胞内β-AP蛋白表达水平,说明针刺对AD大鼠具有一定的治疗作用。     

转化人参皂苷菌株的筛选及发酵工艺优化

目的 筛选得到β-葡萄糖苷酶活性较高的食品级菌种发酵人参,以期提高二醇型皂苷转化率,并优化发酵体系,验证发酵过程的可控性。方法 以人参为原料,利用4种常见食品级发酵菌即酿酒酵母菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌和肠膜明串珠菌肠膜亚种发酵人参。通过对菌种代谢产生的β-葡萄糖苷酶酶活力的初筛及二醇型主要人参皂苷转化实验的复筛,最终确定以复合菌(植物乳杆菌+肠膜明串珠菌)作为人参发酵菌株。设置液料比、接菌量、发酵天数的单因素试验,利用响应面法优化人参发酵体系。结果 优化后的最佳发酵条件为液料比2∶1(mL/g)、接菌量为4%、发酵天数为23 d。在最佳工艺下,得到二醇型人参皂苷(Rb1+Rb2+Rb3+Rc)转化率为62.17%。结论 筛选得到的发酵菌株可以更好地将人参中二醇型主要皂苷转化为药理功效更强的次级皂苷,并优化了发酵体系,达到了经济、安全、高效的目的,极大地提高了人参的应用价值。     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.