约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

感染恶性疟原虫或间日疟原虫蚊体内子孢子和环子孢子抗原的定量测定

准确地估计蚊虫体内疟原虫子孢子的数量对于疟疾的监测、预防和媒介控制都是非常必要的。目前使用的蚊虫体内子孢子数量测定法是定量环子孢子(CS)ELISA试验。该法快速、准确,具有种特异性。但近年来的实践证明,该法需要改进。为使目前用于恶性和间日疟原虫子孢子定量检测的CS ELISA法试剂标准化,以及进一步确定蚊虫体内CS抗原量与子孢子数之间的相关性,开展了双抗体夹心法ELISA定量测定恶性疟原虫(Pf)、间日疟原虫(Pv210)和Pv247CS抗原和子孢子的研究。抗Pf、Pv210和Pv247CS抗原的单克隆抗体(MAb)来自WHO疟疾子孢子参考实验…     

人疟原虫的子孢子与红内期虫体间具有免疫交叉反应的证据

疟原虫在哺乳类宿主体内的发育是复杂的,不少研究认为子孢子表面与红内期原虫间无共同抗原。但本文证明,人恶性疟原虫子孢子表面与红内期原虫具有共同抗原,此抗原并能刺激人体发生强免疫应答。作者以间接免疫荧光法,用抗人工培养的恶性疟原虫泰国株(Kl)的单克隆抗体,测试恶性疟原虫子孢子,在22个单克隆抗体中,有一个(McAb5.1)与子孢子呈强阳性反应,其稀释滴度高达1:10~6;而且,其对子孢     

泰国不同地区分离的恶性疟原虫环子孢子蛋白存在共同抗原决定簇

本实验采用单克隆抗体(MAB)和抗疟原虫环子孢子(CS)蛋白特异的人血清抗体,以西部印渍法研究泰国不同疟区的恶性疟原虫环子孢子蛋白特异抗原决定簇。抗恶性疟子孢子的特异抗体血清(间接荧光抗体IgG滴度为1:1024)取自泰国东部     

抗环子孢子蛋白保守II~ 区单克隆抗体的制备及鉴定

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II 区 (RegionII )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II 区单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　结果　ELISA检测结果显示单抗能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段及天然CSP特异性反应。间接荧光抗体检测显示 ,单抗不仅能识别恶性疟原虫子孢子 ,也能识别约氏疟原虫子孢子。　结论　成功地获得了针对恶性疟原虫CSP保守II 区的单克隆抗体     

单克隆抗体M26—32靶抗原基因片断融合蛋白的表达和特性 …

用温度诱导方法获得了Ｍ２６－３２靶抗原基因片断表达的融合蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析显示,该融合蛋白能与单克隆抗体Ｍ２６－３２反应,证实了获得的基因序列是单克隆抗体Ｍ２６－３２的靶抗原基因片断。该融合蛋白能与抗间日疟原虫和抗恶性疟原虫血清反应,且抗该融合蛋白抗体和纯化融合蛋白和抗血清还能与间日疟原虫和恶化疟原虫的疱浆抗原反应,表明该靶抗原基因片断内含有间日疟原虫和恶性疟原虫的共同基因序列,且     

单克隆抗体M26-32靶抗原基因片断融合蛋白的表达和特性分析

用温度诱导方法获得了 M2 6 - 32靶抗原基因片断表达的融合蛋白。 Western- blot分析显示 ,该融合蛋白能与单克隆抗体 M2 6 - 32反应 ,证实了获得的基因序列是单克隆抗体 M2 6 - 32的靶抗原基因片断。该融合蛋白能与抗间日疟原虫和抗恶性疟原虫血清反应 ,且抗该融合蛋白抗体和纯化融合蛋白的抗血清还能与间日疟原虫和恶性疟原虫的胞浆抗原反应 ,表明该靶抗原基因片断内含有间日疟原虫和恶性疟原虫的共同基因序列 ,且这一共同基因表达的蛋白存在于间日疟原虫和恶性疟原虫抗原之中     

一种与间日疟原虫相类似的猴疟原虫:吼猴疟原虫的环子孢子蛋白基因

环子孢子蛋白(CSP)是一种种特异的子孢子表面蛋白,也是一种疫苗候选抗原。CSP基因的重复和非重复序列相关的结构特征,也用于研究疟原虫演化相关的标志。吼猴疟原虫(P.simium)的形态和生物学均与间日疟原虫近似,它们感染的红细胞均有薛氏点,但在蚊内发育的时间较间日疟     

卵形疟原虫卵囊中环子孢子蛋白的定位

众所周知,疟原虫环子孢子(CS)蛋白不仅是免疫应答的靶子,亦是抗疟原虫疫苗发展的首选目标。但对这些蛋白卵囊中的分布了解甚少。本文作者应用抗卵形疟原虫CS 蛋白的单克隆抗体(MAb 110-54. 3) ,结     

用双部位酶联免疫吸附试验鉴定感染疟原虫的蚊媒

鉴于应用免疫放射试验(IRMA)检测蚊体内子孢子要有较复杂的条件设备,本文报导试用双部位酶联免疫吸附试验(ELISA)微量法进行检测子孢子的研究。抗原为子孢子阳性蚊,以大劣按蚊叮咬感染诺氏疟原虫(H株)的恒河猴或弗氏按蚊叮咬感染伯氏疟原虫(ANKA株)的仓鼠后14～16天将蚊杀死而得,置室温干燥器内保存8周后使用。抗血清为对诺氏疟原虫子孢子特异的单克隆抗体(2G3),先以DEAE-Se-     

用间接荧光抗体方法筛选抗间日疟原虫子孢子单克隆抗体

用间接荧光抗体方法筛选抗间日疟原虫子孢子单克隆抗体云南省疟疾病防治研究所思茅６６５０００余蕾，余文祥，李菊异，李崇珍ＩＦＡ是检测抗体的较敏感而特异的方法。我们用此法筛选抗间日疟原虫（Ｐ．ｖ）子孢子单克隆抗体，获得较满意结果。材料与方法１抗原与试剂子孢...     

免疫电镜观察定位于斯氏按蚊胃的伯氏疟原虫环子孢子蛋白及血小板反应素相关粘附蛋白

疟原虫的雌雄配子体在蚊胃相互结合形成合子 ,合子发育后形体发生变化 ,形成具有侵入性的动合子 ,后者钻入胃上皮细胞继续发育。动合子能产生许多微线体 ,电镜下为电子密度高、有限膜结构的细胞器 ,通常位于顶突处。目前 ,把微线体归为分泌细胞器 ,其分泌的蛋白中含有血小板反应素相关粘附蛋白 (CTRP)以及环子孢子蛋白 (CSP)。敲除CTRP基因的动合子 ,失去了运动性以及对蚊胃的侵入性 ,说明CTRP为动合子侵入蚊胃细胞膜的重要物质。鼠疟原虫的CTRP与人疟原虫 (恶性疟原虫 )的同源性很高 ,其与胃细胞分子间的相互关系仍不清楚。作者应…     

以种特异性的放射免疫法测定蚊体内疟原虫子孢子的实验室评价

本文报道以单克隆抗体(Mab)放射免疫法(RIA)检测按蚊体内的疟原虫子孢子抗原。实验使用3种单克隆抗体,其中2种为抗诺氏疟原虫子孢子(2G3和8E11),另一种为抗食蟹猴疟原虫子孢子,实验蚊均自泰国分离的大劣按蚊。将受检蚊置塑料微量离心管内,用玻璃棒研碎,加入50μl蛋白酶抑制剂PBS,通过     

疟疾子孢子疫苗伍用Detox佐剂时的安全性、免疫原性和效果

抗疟原虫环子孢子(CS)蛋白重复区的多克隆和单克隆抗体被动转移给小鼠和猴,能抵抗子孢子诱导的疟疾。以伯氏疟原虫蛋白重复区为主要结构的合成肽和重组蛋白疫苗在实验动物亦显示诱导产生保护性免疫。为此,作者设计了恶性疟原虫的CS蛋白疫苗:含有B细胞表位的CS蛋白重复区(R32)T辅助细胞表位的流感病毒A非结     

抗环子孢子蛋白保守II+区单克隆抗体的制备及鉴定

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II⁺ 区 (RegionII⁺ )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II⁺ 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II⁺ 区单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　结果　ELISA检测结果显示单抗能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段及天然CSP特异性反应。间接荧光抗体检测显示 ,单抗不仅能识别恶性疟原虫子孢子 ,也能识别约氏疟原虫子孢子。　结论　成功地获得了针对恶性疟原虫CSP保守II⁺ 区的单克隆抗体。     

以间接免疫荧光试验或免疫过氧化物酶抗体试验检测体外培养的伯氏疟原虫红外期的血清反应性

以有人胎肺细胞的盖玻片置于含10%小牛血清的NCTC-135培养基培养至细胞生长接近汇合成片时,加入按蚊唾腺的伯氏疟原虫子孢子,放5%CO_2培养箱中37℃孵育,于不同时间,取培养物用Hanks缓冲盐水(HBSS)洗涤,以冷甲醇固定,再以HBSS洗后即成培养的红外期抗原片,存4℃备用。经84拉德~(60)Co照射的伯氏疟原虫子孢子,按每次30,000个子孢子的剂量静脉免疫小鼠3次,获得与红细胞期无交叉反应的抗子孢子血清。用氯喹控制小鼠的感染,取得抗红细胞期的血清。单克隆抗体有二:其一是能与伯氏疟原虫子孢子保护性表面抗原(Pb44)反应的,腹水液纯化的IgG_1,在体内可中和子孢子感染;另一种是能与子孢子表面抗原相反应并     

来自不同种疟原虫子孢子保护抗原之间的类似结构

子孢子外周(CS)蛋白是一些疟原虫种的保护性抗原。抗CS蛋白的单克隆抗体能与另外二条细胞内多肽(IS_1和IS_2)发生免疫活性沉淀,这二条多肽得自[~(35)S]甲硫氨酸代谢标记的原虫抽提液中。本文作者通过双相电泳和反相高压液相层析,比较了来自伯氏疟原虫,诺氏猴疟原虫,食蟹猴疟原虫和人恶性疟原虫的CS和IS。在还原和非还原的情况下,这些疟原虫种的CS,IS_1和IS_2的分子量在42,000～67,000之间。它们的等电点值范围为4.7到6.0。由每一种疟原虫所分离出来的CS和IS蛋白能与各自的单克隆抗体反应,产生非常类似的肽段图谱。这些结果证明IS是CS的细胞内前体,而且因CS     

红内期恶性疟原虫的一种主要表面抗原—P190的加工、多晶形及生物学意义

Hold和Freenen成功地用单克隆抗体方法在约氏疟原虫中分离出了分子量为23.5万和23万的两种裂殖子蛋白,并用这二种蛋白做成疫苗预防约氏疟原虫的大量感染。同时也鉴定了分子量为4.2万和4.4万的诺氏疟原虫和伯氏疟原虫子孢子蛋白,其单克隆抗体对它们具有防止感染作用,由此可见,在疟疾研究中,单克隆抗体已作为一种工具用来鉴定抗原。本文报道有两种单克隆抗体     

用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测蚊体内三日疟原虫的子孢子

以单克隆抗体捕获抗原,并用相同的单克隆抗体酶结合物作探测的双位点法酶联免疫吸附试验可检测蚊体内三日疟原虫子孢子蛋白。     

在冈比亚婴儿中检出先天传递的抗疟原虫子孢子抗体

鉴于非洲婴儿在初生的几个月内对疟疾有抵抗力,作者等在西非的一个恶性疟高度流行区,研究了抗子孢子抗体是否能从有自然免疫的母亲被动地传给她们的子女。研究的对象为20名母亲及其新生儿。全部婴儿用血涂片法在3个月内均未检出疟原虫。恶性疟原虫子孢子是用冈比亚按蚊离体吸含配子体血感染后,饲养在实验室,然后解剖唾腺所得。疟原虫子孢子期的特异抗体是用环子孢子沉淀反应(CSP)和间接荧光抗体试验(IFA)检出的。在孵育后的未经稀释的血浆标本中,若有10%以上活的子孢子形成末端沉淀,即为环子孢子沉淀反应阳性。荧光抗体反应是用成二醛固定的恶性疟子孢子孵育血浆稀释液,然后用FITG结合的抗人IgG染色。