茉莉酸甲酯调控阳春砂HMGR、DXR和DXS基因表达

[目的]探讨茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate,MeJA)调控阳春砂萜类化合物生物合成途径3个关键酶基因HMGR、DXR、DXS表达的规律.[方法]用20 μmol/L和200 μmol/L高、低2个浓度的MeJA喷施阳春砂幼苗,诱导不同时间后取样,提取RNA,采用荧光定量PCR法测定AvHMGR、AvDXR、AvDXS相对表达量.[结果]MeJA对AvHMGR、AvDXR和AvDXS的表达均有促进作用,其中对AvDXR的促进作用最明显,AvHMGR次之,两者最高表达量分别达到处理前的9.40和3.95倍;AvDXR基因受高、低浓度MeJA的诱导表达均十分明显,而AvHMGR基因仅对低浓度MeJA敏感,AvDXS基因对高、低浓度的MeJA均不敏感;AvHMGR和AvDXR的表达量在诱导后24 h达到最高峰,在72 h恢复到处理前水平.[结论]诱导子MeJA对AvDXR和AvHMGR基因表达的调控是激发式的,基因表达迅速上调到一定水平,而后逐渐回落.     

五环三萜皂苷生物合成与调控的研究进展

五环三萜皂苷是一类重要的天然产物,具有多种生理活性,临床应用前景诱人,但自然界中,其产量较低。采用分子生物学与蛋白质组学相关知识,通过代谢工程或基因工程进行五环三萜皂苷生物合成的工厂化生产,具有广阔的市场前景。综述了五环三萜皂苷生物合成途径及其调控因子的研究进展,并简要探讨了五环三萜皂苷生物合成的研究方法。     

茯苓三萜成分的最新研究进展

综述了有关茯苓三萜成分的分离纯化、结构测定和其结构特点等方面最新的研究成果,归纳了茯苓三萜衍生物的制备方法及对其构效关系的初探。     

茉莉酸甲酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖作用的实验研究

目的 初步探讨MeJA是否具有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用.方法 体外培养HepG2细胞;MTT法进行茉莉酸甲酯有效作用浓度筛选,确定MeJA作用浓度(1/2IC20);HE染色观察各组细胞形态变化;透射电镜观察细胞超微结构.结果 不同浓度MeJA作用不同时间对HepG2细胞增殖的抑制作用呈时-效和量-效依赖关系;MeJA工作浓度(1/2IC20)为4.3μmol/L,作为后续实验中MeJA的工作浓度;HE染色见各处理组出现不同程度贴壁细胞数量减少,悬浮细胞增多;透射电镜发现部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,可见大量凋亡小体形成.结论 MeJA具有抑制肝癌细胞增殖,诱导凋亡的作用.     

茉莉酸甲酯对贯叶连翘中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素含量的影响

目的刺激贯叶连翘次生代谢产物的迅速积累,提高有效成分含量。方法采用高效液相色谱法以Phenomenex硅胶基质C18色谱柱（5μm×4.6 mm×250 mm）为色谱柱,甲醇和0.2%乙酸水溶液为流动相,检测波长为270 nm,进样量为20μL来测定茉莉酸甲酯（5 mmol/L）处理后的贯叶连翘次生代谢产物的含量。结果在短时间的茉莉酸甲酯的处理下,芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的含量在整体上有一定的提高。结论若加长茉莉酸甲酯的处理时间,这些次生代谢产物的含量变化将更加显著。     

茯苓三萜成分RP-HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的 利用RP-HPLC-ELSD技术建立不同菌株茯苓三萜的指纹图谱,为评价不同菌株培育茯苓药材的质量品质提供理论依据,以期规范培育茯苓的菌株,提高茯苓资源品质。方法 色谱柱为Kromasil 100-5 C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为0.2%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）,采用梯度洗脱法;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30 ℃;蒸发光检测条件：雾化温度为40 ℃,压力为350 kPa,gain值为7;进样量为20 μL。结果 建立的指纹图谱中有18个共有峰,且方法学考察符合规定的标准。结论 该方法简便快速、准确可靠,可作为评价不同菌株茯苓药材质量的有效手段。     

茉莉酸甲酯对人肝癌细胞HepG-2裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用的研究

目的通过建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察茉莉酸甲酯（methyiasmonate，MeJA）对移植瘤的生长抑制作用，方法实验分为对照组和MeJA组、全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）组、MeJA＋ATRA3种处理组、观测裸鼠成瘤情况和周围血甲胎蛋白以及肿瘤组织形态学变化；RT-PCR检测瘤体中Bcl-2及Bax的mRNA表达、结果与对照组比较，3种处理组移植瘤体积变小，重量减轻（P□0．05）；HE病理切片观察处理组可见癌细胞密度减少，瘤组织分化渐成熟；各处理组外周血甲胎蛋白值降低（P□0，05）；各处理组瘤体Bcl-2mRNA表达均减弱（P□0、05）、BaxmRNA表达均增强（P□0，05）．结论MeJA对人肝癌细胞HepG-2裸鼠皮下移植瘤生长具有抑制作用，其机制可能与诱导肿瘤细胞分化，启动凋亡，使肿瘤的增殖失控发生逆转，细胞表型和功能向正常转化有关、     

p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中表达变化的实验研究

目的探讨p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中的表达变化.方法 RT-PCR检测HepG2细胞中p53mRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白表达.结果 MeJA作用HepG2细胞48h后：p53 mRNA表达水平明显下降（P〈0.01）;p53蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）.结论 MeJA通过下调mtp53及其蛋白的表达,相对增加了wtp53的比例,使细胞周期相关蛋白的表达发生改变,引起细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而发挥抗肝癌作用.     

27种菌种茯苓中茯苓酸分析比较研究

目的 建立茯苓中茯苓酸的测定方法,比较不同菌种培育的茯苓中茯苓酸的量,为评价不同菌株培育茯苓的品质提供理论依据,从而确定优良菌种,控制茯苓资源品质。方法 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Kromasil 100-5 C-18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸(80∶20),体积流量1.0 mL/min,检测波长242 nm。结果 茯苓酸在0.48～2.40 μg与其色谱峰面积呈良好线性关系(r=0.999 7),平均回收率100.26%,RSD为1.26%。不同菌种培育茯苓中茯苓酸的量有所差异。结论 该方法简便、专属、稳定,可用于评价不同菌种培育茯苓中茯苓酸量的研究。     

茯苓三萜类成分高效液相指纹图谱的优化及建立

目的 优化茯苓三萜类成分高效液相色谱指纹图谱分析方法,建立茯苓三萜类成分的指纹图谱.方法 色谱柱为Kromasil 100-5 C18柱;流动相为乙腈(A)-0.1％(体积分数,下同)H3PO4(B)溶液,梯度洗脱;检测波长为242 nm;柱温为30℃;流速为1.0 mL·min-1.结果 不同来源的13批茯苓样品均标示出19个三萜类成分共有峰;采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度评价,13批样品的相似度为0.925～0.997,提示茯苓三萜类成分质量较稳定.结论 本方法准确可靠、重复性好,为茯苓质量控制提供了依据.     

UPLC-LTQ-Orbitrap质谱联用技术分析茯苓中的化学成分

目的采用快速液相色谱LTQ-Orbitrap质谱联用技术对茯苓95%乙醇提取物中的化学成分进行分析。方法色谱分离采用Thermo Hypersil Gold C18(3μm,150mm×2.1mm)色谱柱,以0.1%甲酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据。结果通过一级和二级质谱分析并结合质谱碎裂规律及特征碎片信息,并通过比对对照品数据及相关文献,从茯苓95%乙醇提取物中初步分析了42个化学成分。结论本方法分离度良好、灵敏度高,可用于茯苓中化学成分的定性分析,并有助于对茯苓进行进一步的活性成分研究和质量控制。     

茯苓菌落褐变的转录组测序分析

【目的】探究中药茯苓菌落褐变的相关基因,为进一步验证茯苓菌丝褐变相关基因及探讨其分子机理奠定基础。【方法】对茯苓正常与褐变菌丝体共4个样品的转录组进行测序,并与茯苓参考基因组进行序列比对,并基于比对结果进行各基因在不同样品中的表达量分析。【结果】共鉴定到12 383个转录本,发掘新基因1 017个,其中260个得到功能注释;发现正常菌落与3个不同程度褐变菌落有336个共同差异基因。【结论】茯苓菌落褐变的转录组测序分析发现系列差异表达基因,部分基因的表达量倍数差异达到数百倍甚至上千倍,它们的相关功能值得进行深入分析。     

不同生长环境下茯苓总三萜和水溶性总多糖含量比较

目的 比较大别山区金寨县野生、椴木栽培和仿野生栽培3种不同生长环境下茯苓化学成分的差异。方法 利用紫外分光光度法分别测定3种生长环境下的茯苓总三萜和水溶性总多糖的含量。结果 不同生长环境下茯苓水溶性总多糖含量比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,野生和仿野生栽培茯苓的水溶性总多糖含量显著高于椴木栽培（P＜0.05）。野生和仿野生栽培茯苓中总三萜含量均高于椴木栽培,但3种生长环境下茯苓总三萜含量比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 与椴木栽培茯苓比较,仿野生栽培茯苓质量更接近野生茯苓。     

茯苓乙醇提取物的分离纯化及抗KBV200细胞多药耐药活性

目的 对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化,并对所得的单体化合物进行抗KBV200细胞多药耐药活性的检测.方法 采用薄层色谱、柱色谱、葡聚糖凝胶分离、高效液相色谱等方法及波谱技术对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化和结构鉴定;利用MTT法检测各化合物对KBV200细胞多药耐药性的逆转作用.结果 从茯苓乙醇提取物中分离并鉴定出8个三萜类化合物.在浓度为12.5 mg/L时,8个化合物对KBV200的多药耐药性均有一定的逆转作用,其中化合物3(去氢土莫酸)的逆转作用最强,其逆转倍数为12.6.结论 茯苓中的三萜类化合物具有逆转KBV200细胞多药耐药性的作用.     

茯苓液体发酵条件的研究

通过摇瓶培养实验,对茯苓生长曲线进行了初步摸索,并进一步对茯苓液体发酵的最适培养基和培养条件进行了初步探讨.茯苓液体发酵的最适发酵培养基为:葡萄糖30 g,酵母浸膏3.9 g,蛋白胨5.1 g,K2HP04 1 g,M gS04.7H2O 0.5 g,水1L.茯苓液体发酵的最适培养条件为:培养温度26℃,摇瓶装量60mL(250 mi三角瓶),转速150 r/min,培养基初始pH值5.5,液体菌种茵龄2天,液体菌种接种量6%,摇瓶培养时间7天.     

Effect of Poria cocos Hydroethanolic Extract on Treating Adriamycin-Induced Rat Model of Nephrotic Syndrome

Objective: To evaluate the effect of Poria cocos (Schw.) Wolf hydroethanolic extract (PHE) against nephrotic syndrome (NS) in rats and to identify the potential active components from PHE. Methods: The high content compounds were isolated and purified by using column chromatography followed by preparative high-performance liquid chromatography (p-HPLC). Forty male Wistar rats with adriamycin (ADR)-induced NS were randomly divided into 5 groups, 8 in each group: model control group, positive control group (with prednisone treatment), PHE low-dose group, PHE middle-dose group and PHE high-dose group. Another 8 rats were recruited as vehicle control group. All rats received the intragastric administration of corresponding drugs or saline for 30 days. During the experimental period, rats'' behavior and appearance were observed and recorded daily, and their body weights were recorded weekly. After treatment, 24-h urine samples were collected to evaluate the urine protein and urine creatinine (Ucr); then the rats were sacrificed to collect carotid blood and to determine the levels of serum total protein (TP), albumin (Alb), globulin (Glo), total cholesterol (TC) and cytokine interlukin-4 (IL-4). Results: Six acidic components were isolated and identified from the PHE section: pachymic acid, 15α-hydroxydehydrotumulosic acid, trametenolic acid, dehydropachymic acid, 3β-hydroxy-lanosta-7,9(11), 24-trien-21-oic-acid and dehydroeburicoic acid. Compared with the model control group, the urine protein content were significantly decreased in the PHE treatment groups and positive control group (P<0.05), especially PHE middle-dose group (P<0.01). The Ucr values and serum levels of TP, Glo, TC and IL-4 in PHE low- and middle-dose groups were also presented obvious recover tendency as compared with the model control group (P<0.05 or P<0.01). However, positive control group and all PHE groups indicated no significant therapeutic effect on raising Alb value, although PHE low- and middle-dose treatment groups showed better outcomes than positive control group (P>0.05). Conclusions: PHE showed an encouraging therapeutic effect against ADR-induced NS in a rat model. PHE might be a group of effective substances for the treatment of NS.     

不同产地茯苓中萜类成分的HPLC指纹图谱研究

目的比较不同产地茯苓中萜类成分的HPLC指纹图谱。方法用高效液相色谱法分析10批英山GAP产地的茯苓药材,建立共有模式,并和其它产地茯苓药材的指纹图谱进行比较。结果英山GAP产地茯苓药材的指纹图谱稳定性好,不同产地茯苓药材的指纹图谱中典型色谱峰较一致,但峰面积存在差异。结论所建立的指纹图谱可用于茯苓药材的质量控制。     

茯苓不同部位16种元素分布规律研究

目的 测定茯苓的白茯苓、赤茯苓及茯苓皮3个部位的16种微量元素含量,分析茯苓不同部位元素分布规律。方法 采用微波消解-电感耦合等离子体质谱测定茯苓不同部位16种元素的含量,并对其进行非参数检验、因子分析及相关性分析。结果 大部分元素在茯苓皮中含量较高;不同部位中V、Cr、Mn、Fe、Zn、Rb、Sr、Mo、Cd、Cs、Ba、Pb元素含量差异具有统计学意义（P＜0.05）,Co、Ni、Cu、As含量差异无统计学意义（P＞0.05）;Cu、Cd、Zn、Ba元素是茯苓3个部位的特征性元素;大多数元素含量之间存在正相关关系（P＜0.05）。结论 茯苓不同部位对不同元素的吸收具有一定的选择性,不同部位的元素之间存在相关性。     

不同茯苓提取物对急性肝损伤小鼠的保护作用

目的 研究茯苓不同提取部位对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）所致急性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 〖JP2〗将120只昆明小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药物组（水飞蓟素100 mg/kg）,茯苓水提物低、中、高剂量组（30、60、120 mg/kg）,茯苓醇提物低、中、高剂量组（25、50、100 mg/kg）以及茯苓多糖低、中、高剂量组（10、20、40 mg/kg）,连续灌胃两周后腹腔注射0.5% CCl4溶液诱发小鼠急性肝损伤。模型复制12 h后处死小鼠,检测血清中谷氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）和肝组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;苏木精-伊红染色观察肝组织病理切片。结果 各给药组肝组织病理损伤减轻。与模型组比较,各给药组小鼠ALT、AST、MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著降低（P<0.05）,SOD活性显著升高（P<0.05）,且茯苓多糖的作用呈剂量依赖性,以茯苓多糖高剂量组最接近阳性药物组。结论 3种茯苓提取物对CCl4诱导的小鼠肝损伤均具有不同程度的保护作用,以茯苓多糖效果最为显著,其机制可能与增强肝脏抗氧化能力及减轻炎症有关。