内皮素-1基因的研究进展

内皮素 (ET)具有广泛的生物活性 ,为强效的缩血管肽和血管平滑肌细胞有丝分裂原。 ET家族成员有三种异构体ET- 1、ET- 2和 ET- 3,各种异构体之间仅有 2～ 6个氨基酸不同 ,有组织特异性。人的 ET- 1基因全长 12 46 4bp,结构基因由 5个外显子和 3个内含子组成。ET- 1基因的表达决定于基因中的特异转录调节因子和其本身的结构。这些调控位点除存在于ET基因启动子区结构中外 ,也存在于 ET基因的 3′端侧翼序列。GATA与 AP1位点是 ET- 1启动子功能所必需的 ,GATA与AP1有协同作用。ET- 1基因表达受许多因素的调控 ,各种因素通过作用于其受体 ,而影响一种或多种调控因子的表达 ,最后作用于 ET- 1基因的顺式调控元件 ,促进或抑制 ET- 1基因的表达。其中 GATA和 AP1位点的调控元件是 ET- 1基因调控的主要途径。     

内皮素基因表达及调控研究

内皮素(ET)是近年发现的一种血管活性多肽,其基因表达受许多因素调节。调控位点存在于基因启动子、结构基因和ET mRNA 3′端非翻译区等处,启动子A区和 B区可能发挥主要作用。影响基因表达的因素,如缺氧、血管紧张素Ⅱ 凝血酶和心钠素等分别作用于各自受体,通过细胞内信使系统,作用于相应的调控位点,发挥正性或负性调节作用。     

内皮细胞应力反应元件的研究进展

内皮细胞能对力学刺激发生反应,流体切应力能直接调节内皮细胞基因的表达,现已发现内皮细胞内受切应力调节的基因有20多种。目前认为其调节机制是通过存在于基因的启动子内并且能够被切应力所诱导的启动基因转录的顺式调控元件－－应力反应元件来调节基因的转录。目前已知的应力反应元件至少涉及4种转录因子的结合位点及10余种受切应力调控的相关基因。这4种转录因子分别是：（1）NF－κB;（2）AP－1;（3）Egr-1和（4）SP1。对应力反应元件的基序及基序结合蛋白的鉴定有待进一步的深入,以后还可能有效的应力反应元件被发现。在采用基因疗法来调控血管壁不同区段基因表达这方面已进行了有益的探索,显示出良好的前景。     

组织特异性表达基因PLUNC调控元件的生物信息学分析

目的分析组织特异性表达基因PLUNC的调控元件。方法采用进化足迹法,结合生物信息学工具,预测PLUNC基因的顺式作用元件和反式作用因子。结果预测的PLUNC基因的转录起始位点位于-1～＋10bp区域间、-29bp存在TATA盒子,启动子集中在-490bp～＋89bp内,在人和小鼠PLUNC基因的启动子保守区内存在29个共同的转录因子结合部位及5个增强子。结论PLUNC基因调控元件的分析可为探讨上呼吸道特异性表达基因的调控机制提供模型。生物信息学技术结合进化足迹法,在基因表达调控机制的研究中具有重要的应用价值。     

Ⅰ型胶原基因转录调控的研究进展

调控Ⅰ型胶原(COL1)基因转录的顺式作用元件位于启动子和第一个内含子中。顺式作用元件及其结合的转录因子有生物种类特异性。一些转录因子以不同的亲和力与其部分潜在结合位点结合,它们间的相互作用稳定了DNA的环状结构,并引发转录。转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子在转录水平参与COL1基因的调控,在COL1基因启动子上有它们的反应元件。     

鼻咽癌STGC3基因转录调控元件分析与鉴定*

目的：分析并鉴定STGC3基因转录调控元件,探讨鼻咽癌STGC3基因的转录调控分子机制。方法：运用 生物信息学,预测并分析STGC3基因核心启动子区的转录因子结合位点;将相关转录因子结合位点,制备3 种探 针即生物素标记野生型、突变型及未标记野生型;提取CNE2细胞核蛋白,利用电泳迁移率变动分析（ EMSA） 及染色质免疫共沉淀（ ChIP）分析,体内外鉴定转录因子结合位点。结果：在STGC3基因核心启动子区存在21 个转录因子结合位点,其中9 个为Sp1 转录因子结合位点;进一步严格限定参数,STGC3基因核心启动子区域含 有转录因子结合位点5 个,其中Sp1 转录因子结合位点2 个;EMSA和ChIP 实验结果显示,STGC3基因中存在转 录因子Sp1 特异性结合位点,从而鉴定出STGC3基因转录调控元件。结论： STGC3基因核心启动子区含有Sp1 特异性结合位点,为该基因的转录调控元件。     

缺氧反应基因及调控机制研究进展

细胞在缺氧情况下,可诱导缺氧反应基因转录增加,维持血氧稳定。缺氧诱导因子-1和包含有启动子、增强子序列的顺序作用元件为转录调控的关键环节,缺氧诱导因子-1可通过顺式作用元件内的缺氧诱导因子-1结合位点与之相结合,二者通过复杂的相互作用来实现转录调控。     

顺式作用元件的预测

顺式作用元件是同一DNA分子中具有特殊功能的转录因子DNA结合位点和其它调控基序,在基因转录起始调控中起重要作用;按功能特性分为通用调节元件如启动子、增强子及沉默子和专一性元件如激素反应元件,cAMP反应元件;确定顺式作用元件的试验方法主要有:DNA结构分析、序列分析和基因删除或替换等,软件预测是确定顺式作用元件的另一种方法,但不同软件预测结果差异较大,将试验方法与软件预测相结合能够提高顺式作用元件预测的准确性。     

应用基因芯片筛选慢性乙型肝炎患者PD-1/PD-L通路基因差异表达

目的 应用基因芯片技术筛选慢乙肝病人PD-1/PD-L通路差异性表达的基因.方法 应用基因芯片技术筛选4例慢乙肝病人与2例健康人外周血,获得差异性表达的基因,结合初步构建的PD-1/PD-L信号通路,挑选出一致的转录因子或调控蛋白,并应用Western blot方法检测CD 40L、Bcl-10、GATA-3、NFAT蛋白的水平的表达.结果 与健康人相比,慢乙肝患者有838个异常表达的基因,其中高表达的基因有150个,低表达的基因有688个.在这些异常表达基因中,有13个基因属于所构建的PD-1/PD-L信号通路中的转录因子或调控蛋白,其中表达上调的6个分别是BCL-10、AP、SRY、MYOD1、ELK4、NFAT,表达下调的7个分别是CD 40L、GADS、PDK1、IL-4、GATA3、CREB、RARG.Westem blotting法证实慢乙肝组高表达BCL-10,低表达CD 40L、GATA3,NFAT但与病毒载量不相关.结论 CD40L、BCL-10、GATA3、NFAT在慢性乙型肝炎患者PD-1/PD-L信号传导通路中可能有重要的调控作用,可以做深入的功能分析研究.     

SCL在造血、血管发育及白血病发病中的作用

干细胞白血病 (SCL)是bHLH转录因子 ,可调节早期造血细胞分化和胚胎血管发育。它通过调节c kit基因的表达而调控红系增殖和CD34+细胞凋亡。SCL以复合物的形式作用于靶基因的E box GATA序列。SCL基因高度保守 ,通过SCL增强子及选择不同启动子来实现表达调控。SCL通过多个环节参与白血病发病。T ALL中可由于多处染色体易位或缺失而出现SCL异常表达。对白血病进行诊断评估时除检测SCLmRNA外 ,还应有SCL蛋白的原位检测以及SIL SCL转录本检测。     

转录因子GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节Tie2基因的表达

目的：探讨在炎症刺激因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）介导的炎症反应中转录因子GATA家族成员是否参与了Tie2基因的转录调控。方法: 采用实时定量PCR测定TNF-α作用前后人主动脉内皮细胞（HAECs）和肺动脉内皮细胞（HPAECs）中GATA家族成员GATA2、GATA3 mRNA的表达,利用荧光素酶活性检测研究GATA转录因子能否激活Tie2基因启动子,并采用电泳迁移变动分析（EMSAs）和超级迁移率变动试验（supershift）研究GATA转录因子是否通过与Tie2基因启动子结合,从而激活Tie2基因的表达。结果: TNF-α可诱导人血管内皮细胞HAECs和HPAECs中转录因子GATA2的表达,高表达的GATA2可与Tie2基因启动子上的（T/A）GATA(A/G)序列结合,激活Tie2基因启动子,从而上调Tie2基因的表达。结论: GATA转录因子家族成员GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节了Tie2基因的表达。     

MHCⅡ类基因表达调控研究进展

目前认为ＭＨＣⅡ类基因的调节主要在转录水平上，已发现一系列作用于其启动子的转录因子，这些转录因子与染色体组蛋白及启动子保守序列交互作用影响ＭＨＣⅡ类基因的表达。其中，顺式作用元件与反式作用因子协同形成的蛋白－蛋白复合体起关键作用。本文对近年来在ＭＨＣⅡ类基因表达研究的长足进展作一综述。     

人类Pax—5基因外显子1B的5′侧翼区碱基序列分析

目的：探讨Pax-5基因表达在B细胞分化发育的调节机制。方法：利用分子克隆及亚克隆技术对Pax-5基因外显子1B的5′侧翼区分离克隆，用双链双脱氧终止法进行核苷酸序列测定，并对侧序资料进行列程序分析。结果：整段碱基序列（6671bp)分析表明：无TATA盒共同序列存在，近段启动子包括3个CAT盒，1个SP1和1个E盒；上游进一步推测的调节位点显示6个LMO2COM，5个NFAT，2个LPOLYA－B，3个GATA1，2个AP4，10个MZF1，1个ETS1－B，1个GATA3，1个NKX25，2个RORA1，1个LYF1，2个Ikaros2,2个TCF11，1个GATA－C和1个FREAC7确定在序列上。结论：Pax-5基因外显子1B的5′侧翼区与Pax-5表达的调节有关，且对保证B细胞谱系和B细胞发育起重要调节作用。     

白细胞介素6基因表达的转录和转录后调控

ＩＬ—６基因启动子上有许多顺式调控序列，已经鉴定出ＮＦ－ｋＢ、ＮＦ－ＩＬ６、糖皮质激素受体等反式调节因子也作用于启动子上相应的调控序列。许多诱导剂通过其可诱导的反式调节因子作用于ＩＬ－６启动子，或选择性控制ＩＬ－６ｍＲＮＡ的稳定性从而实现转录和转录后水平的基因调控。     

肿瘤细胞中基因选择性剪接的研究进展

选择性剪接是高等真核细胞在转录后水平调控基因表达以及产生蛋白质组多样性的重要机制。选择性剪接过程受多种顺式作用元件和反式作用因子相互作用调节。肿瘤癌基因、抑癌基因、肿瘤转移抑制基因可发生选择性剪接，与肿瘤发生发展关系密切，其蛋白异构体参与基因转录、细胞周期和凋亡等生命过程，对肿瘤生长有一定作用。以选择性剪接蛋白异构体为靶点或干预选择性剪接过程，可望进行肿瘤的分子治疗。     

小鼠p35^nck5a基因5’侧翼非编码区基因表达调控作用研究

目的：探讨决定Alzheimer’s病（AD）的相关基因p35^nck5a神经特异性表达的分子机理。方法：通过构建荧光素酶表达载体,利用原代培养神经细胞进行瞬时表达实验寻找指导神经特异性表达的顺式作用元件,并通过引物延伸实验寻找转录起始位点,通过染色质DNase1高敏位点（DNase 1 hypersensitivesite,DHSS)实验确定与p35^nck5a转录相关的DNase1高敏位点。结果：瞬时表达实验结果显示在神经细胞和非神经细胞中,所构建的各载体的表达情况没有明显差异;在新生大鼠的脑组织和肝组织中存在梁色质DNase1高敏位点的差异,该位点大约位于脑基因组p35^nck5a编码区上游－400bp处。引物延伸实验结果显示主要的转录起始位点的位置与DNase1高敏位点的位置具有一致性,与瞬时表达实验结果也具有相关性。结论：以上结果提示在所克隆到p35^nck5a5’侧翼序列中不存在决定该基因组织特异性表达的顺式作用元件,另外染色质水平上的某些调控机理可能对决定神经特异性表达具有重要意义。     

白细胞介素-5基因表达的调控研究进展

白细胞介素(IL)-5是调节嗜酸性粒细胞(EOS)生长、分化、活化的关键细胞因子。IL-5基因通过不同信号途径被活化,并且在转录水平被调控,其启动子／增强子中相应元件与转录因子NF-AT、AP-1、NF-кB、GATA家族、Octam"因子等结合而促进IL-5基因转录。糖皮质激素、球孢素A(CsA)、FK506、PGE2等通过不同途径抑制或促进IL5基因转录。     

低氧诱导促红细胞生成素基因表达的机制

低氧能够促进EPO基因表达。在EPO基因 3’ 端存在有低氧诱导增强子 ,而在 5’ 端旁侧序列上含有多种转录因子的结合位点。在低氧条件下 ,这些顺式调节元件与细胞核内反式作用因子特异性结合后 ,相互协调作用 ,增强EPO基因表达。     

MHC—Ⅱ类基因启动子及其多态性Ⅰ——顺式作用DNA元件研究进展

ＭＨＣ－Ⅱ类基因在免疫应答的调控中起着关键的作用，人类ＨＬＡ－Ⅱ类基因位于第６号染色体上ＭＨＣ复合体的Ｄ区，近年来国外已在一些Ⅱ类基因启动子区发现有多态性，且这种多态性在Ⅱ类基因中普遍存在，这不仅说明Ⅱ类基因启动子本身的调节活性十分复杂，也深化了对Ⅱ类分子表达调控的认识。本文以Ⅱ类基因启动子的结构为基础对启动子顺式作用元件的多态性作一综述。     

人CD226基因SNP和启动子序列分析

目的 研究人CD226（PTA1）启动子及其5‘上游调控序列。方法 应用计算机软件预测启动子序列，并分析人CD226基因5‘上游调控序列以及通过RT－PCR的方法研究开放读框中的单核苷酸多态性。结果 CD226基因在－375bp处和－130bp处可能有两个启动子，含有AP－1，Ets-1,Spl,P300,PU.1,PEA3等转录因子结合序列，在编码胞浆区的序列中存在一个单核苷酸多态性位点。结论 CD226基因表达受到多种转录因子和5‘端上游调控序列的调控。