滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫抗体的研究

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的检测血吸虫抗体的新方法。方法用滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫病人血清抗体,并以ELISA作平行对照。结果DIGFA和ELISA的敏感性分别为97．1％和95．7％;特异性分别为99．1％和100％,两法无显著差异（P＞0．05）。62份其它寄生虫感染血清,除肺吸虫1例,ELISA呈阳性反应外,其余均为阴性。结论实验结果不仅显示了DIGFA的敏感性和特异性与ELISA相似,而且具有简便、快速、不需要特殊设备等优点,是一种值得推广应用的检测血吸虫抗体的新方法。     

应用ROC曲线分析法评价免疫重氮乳凝试验诊断结核病的价值

目的　评价新型免疫载体重氮乳胶凝集试验 (DLAT)在结核病临床诊断中的价值 ,为临床应用提供参考依据。方法　选择临床确诊的结核病人和无结核病史的正常人为研究对象 ,收集相应的临床检测标本。以BACTEC快速培养和ELISA两种实验室常用的结核诊断方法为对照。根据每种方法对标本检测结果的灵敏度和特异度 ,以受试者工作特性曲线(ROC)进行分析比较。结果　DLAT ,BACTEC培养和ELISA三种方法的灵敏度分别为 6 1 32 % ,5 3 77%和 6 2 2 6 % ;假阳性率分别为 2 30 % ,0和 4 6 0 % ;ROC曲线下的面积分别为 0 795 ,0 76 9和 0 788。P值均小于 0 0 1。结论　ROC曲线分析结果显示 ,重氮乳凝法诊断结核病具有较好的准确性 ,该方法可作为结核病的实验室诊断方法     

PCR快速检测临床标本中结核杆菌的研究

本文用PCR(聚合酶链反应)技术检测238份临床标本中结核杆菌,并与培养及ELISA法进行对比观察。结果:用PCR扩增出123bp区带者142份(59.7％);培养出结核杆菌者55份(23.2％)。139份体腔液及尿标本还同时检测了抗PPD抗体,其中50份标本阳性(36％)。PCR检出率明显高于培养及ELISA(P<0.005)方法简便,快速,是一种检测结核杆菌的实用技术。     

血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的研究血清抗结核分支杆菌抗体在活动性结核病诊断和病情变化的意义。方法观察血清抗结核分支杆菌抗体在各类结核患者中的敏感性和特异性，与痰涂片及ＰＰＤ皮试的一致性，以及与疾病转归的关系。结果血清抗结核分支杆菌抗体诊断结核病的敏感性为７１．９％，特异性为９１．９％，与痰涂片阳性和ＰＰＤ皮肤试验阳性的一致率分别为８０．２％和６１．６％。抗结核分支杆菌抗体水平与病情变化有一定的相关性。结论血清抗结核分支杆菌抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。     

应用脂质体凝集反应板快速检测活动性结核病患者抗原

背景：共有1360例临床确诊的肺内结核、肺外结核患者标本及其他非结核标本。目的：建立一种快速、敏感、特异的检测不同临床标本中结核分枝杆菌糖脂抗原的方法。 研究设计：在1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺氢氯化物和N-羟基丁二酰胺溶液中将亲和纯化的兔抗糖脂抗体（IgG）结合在脂质体颗粒（0．2～0．4um）上，制备TB／M检测板的反应试剂。 结果：当检测样本中存在糖脂抗原时，连接抗体的脂质体在4min内会出现1个深蓝色的凝集点。而正常健康入或其他疾病患者的样本未见凝集点。结果显示该方法检测活动性肺结核患者临床样本中的结核分枝杆菌糖脂抗原的敏感性可低至1ng／ml，临床灵敏度为97．4％，特异性为96．9％。 结论：TB／M检测试验比较经济（一次检测只需4个印度卢比或0．09美元）、快速（4min），似乎有助于结核病流行国家大规模检测结核性脑膜炎、肺结核和其他肺外结核患者多种生物学标本（脑脊液、胸液、关节液、血清和组织活检标本）。     

联合检测结素试验和血清抗结核抗体对成人肺结核诊断预测价值：Bayesian分析

目的 探讨结素试验及血清抗结核抗体对成人肺结核诊断的预测价值。方法 经细菌学、病理组织学或细胞学确诊的134例肺结核病、109例胸部肿瘤及51例肺部感染成人患者接受结素试验及血清抗结核抗体检查。比较结素试验不同硬结直径作阳性筛查标准及与血清抗结核抗体的不同组合对结核病诊断的价值。阳性预测价值和阴性预测价值的估计应用Bayes公式。结果 结素试验与血清抗结核抗体检测，两者结合可提高诊断价值，若以结素试验硬结直径≥15mm或血清抗结核抗体阳性作为阳性筛查标准(标准1)，则阴性预测价值最大；若以结素试验硬结直径≥20mm及血清抗结核抗体阳性作为阳性筛查标准(标准2)，则阳性预测价值最大。若就诊患者中肺结核患病率分别为：0．5％，5％，10％，30％，60％时，标准1的阴性预测价值分别为：0．999，0．987，0．972，0．901，0．723；标准2的阳性预测价值均为1．000。结论 在结核高感染地区，联合检测结素试验及血清抗结核抗体对诊断成人结核病仍有辅助价值。结素试验硬结直径小于15mm且血清抗结核抗体阴性对排除结核病有帮助；结素试验硬结直径≥20mm且血清抗结核抗体阳性，对确诊结核病有帮助。     

检测外周血特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值研究

目的研究外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值。方法纳入2013年4月至7月期间深圳市第三人民医院肺科门诊活动性结核病患者;健康对照组人员来自体检科门诊志愿者,分为3个组：活动性结核病组（104例）、结核分枝杆菌（Mtb）潜伏感染组（26例）和健康对照组（33名）。分离其外周血单个核细胞（PBMCs）。体外培养4d后收集培养上清液,用ELISA法和蛋白免疫印迹法,ELISA和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌的特异性结核分枝杆菌抗体;检测各组收集的PBMCs培养上清液中的特异性结核分枝杆菌抗体,比较各组间的差异。所有数据均使用GraphPadPrism5．0进行统计学分析,用受试者工作特征（ROC）曲线评价ELISA法检测的诊断价值,得出敏感度、特异度;多组间的比较采用Kruskal—Wallis检验;两组间比较采用Dunnmultiplecomparison检验;蛋白免疫印迹法用四格表的卡方检验;以P〈0．05为差异有统计学意义。结果ELISA法检测活动性结核病组特异性结核分枝杆菌抗体的A450nm值（0．593±0．206）高于Mtb潜伏感染组（0．342±0．152）和健康对照组（0．246±0．121）,差异有统计学意义（H=77．27,P〈0．001）。特异性结核分枝杆菌抗体区分活动性结核病患者和Mtb潜伏感染者、健康对照者曲线下面积（AUC）分别为0．857、0．944,当诊断界限值为0．42时,其区分活动性结核病和Mtb潜伏感染的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为80．8％（21／26）;区分活动性结核病和健康人的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为93．9％（31／33）。蛋白免疫印迹法检测活动性结核病和健康人的敏感度、特异度和准确性分别为79．2％（61／77）、100．0％（11／11）、81．8％（72／88）（x2=24．8,P〈0．001）。结论ELISA法和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体诊断活动性结核病特异度高,可以作为临床结核病实验诊断的辅助方法。     

双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用

目的 探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法（S－DIGFA）在现场的应用价值。方法 在原已建立的以抗26kDaGST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的S－DIGFA的基础上，应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共1388份，并以双抗体夹心ELISA（S－ELISA）作对照。结果 用S－DIGFA和S－ELISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清300份，阳性检出率分别为15．7％和17．3％；两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清1088份，阳性检出率分别为3．9％和3．7％。结论 S－DIGFA检测循环抗原可在现场扩大和作血清流行病学调查。     

应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康入的血清标本，并与痰涂片镜检法相比较。结果在菌阳肺结核、菌阴肺结核中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100％（26／26）、49．6％（45／91），在肺部其他疾病患者和健康人中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98．1％（101／103）。结论结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法，具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点，是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法。     

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ,将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果　用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体,本方法的特异性为９５－８ ％ ,敏感性为９７－３ ％ ,两法符合率为９６－６ ％ ．结论　ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值．     

三种结核病实验室检测方法对结核病的临床诊断价值的评价

目的 为评价聚合酶链反应（PCR）、快速培养法（Bactec-460）及酶联免疫吸附试验（ELISA）对结核病的诊断价值。方法 选取123例确诊的结核病患者和41例非结核病患者为研究对象,用PCR、Bactec-460培养法及ELISA三种方法检测,将检测结果用判别分析法和受试者工作特征（ROC）曲线分析法进行分析,以上述三种检测方法为指标,观察进入判别模型的情况进行真实性评价;通过受试者工作特征曲线（ROC）下面积的大小,来比较三个指标对结核病的判别能力。结果 PCR,Bactec-460和ELISA均进入了判别模型,即均有诊断价值;应用ROC曲线分析法时,各指标在曲线下的面积分别为0.9997,0.9998和0.9516。结论 PCR,Bactec-460快速培养法和ELISA诊断结核病均有较高的可靠性;PCR判别能力最强,即为最有价值的指标,而ELISA检测结果对结核病的判别效果相对较弱。     

Detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples using insertion sequences IS6110 and IS990

To detect Mycobacterium tuberculosis in clinical samples, we used the M. tuberculosis-complex specific insertion sequence IS990 as the target in a simple DIG-PCR ELISA assay, as this element is present as a single copy in all strains of M. tuberculosis we have examined to date. The IS990 test was compared with a similar PCR that utilizes IS6110 as target. For detection of PCR product, digoxigenin-11-dUTP (DIG-dUTP) was incorporated into the product. After amplification, the PCR product was hybridized with biotinylated capture probe, which was complementary to the inner part of the amplicon. The hybrid was captured onto streptavidin-coated microtiter plate and DIG-labeled PCR product was detected using a peroxidase-conjugated antibody to DIG. We evaluated DIG-PCR ELISA for the detection of M. tuberculosis DNA in 265 respiratory and non-respiratory specimens taken from patients with known and suspected tuberculosis disease or from controls. The sensitivity and specificity of both IS990-based test and IS6110-based test was 96.5% and 95.3% respectively, comparable to the sensitivity and specificity of the IS6110-based test. The results demonstrate that the IS990 PCR ELISA test is a rapid and sensitive tool for the detection and identification of M. tuberculosis in clinical samples, and may have advantages to the more widely used IS6110-based tests, particularly in areas where IS6110-negative strains are found.     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

Evaluation of rapid immunochromatographic NS1 test, anti-dengue IgM test, semi-nested PCR and IgM ELISA for detection of dengue virus

Dengue virus (DENV) causes various clinical symptoms of differing severity based on time of infections. The existing laboratory methods, semi-nested PCR and Dengue IgM ELISA, still have limitations for diagnosis. A commercially available rapid immunochromatographic dengue NS1 antigen and IgM antibody tests in comparison with semi-nested PCR and IgM ELISA for confirmation of DENV infection were evaluated. In total, 237 single acute serum specimens and 50 paired sera of dengue patients were examined using the rapid dengue NS1 antigen test, IgM antibody test, semi-nested PCR and Dengue IgM ELISA. The NS1 and IgM rapid tests showed sensitivity of 70.6%, and 75.6%, respectively, and specificity of 73.4% and 97.1%, respectively. The combination of NS1 and IgM tests enhanced diagnosis. Thus rapid dengue NS1 antigen and IgM antibody tests are highly appropriate for diagnosis of dengue infection as it is rapid, easily applicable, sensitive and highly specific.     

结核抗体等5项检测指标不同联合对复治肺结核诊断价值的研究

目的　探讨结核抗体、C反应蛋白(CRP)、血红细胞沉降率(ESR)、结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)皮肤试验、分枝杆菌聚合酶链反应(PCR)检测不同联合对复治肺结核诊断的临床价值。方法 结核抗体采用金标法,PCR检查采用荧光双标记定量法,ESR采用魏氏法,CRP采用免疫浊度法,结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)皮肤试验按照国家规定。结果 5项检查的单项敏感性依次为PCR(92.0%)、结核抗体检测(81.3%)、ESR(80.0%)、PPD(68.3%)、CRP(66.7%);特异性依次为94.0%、87.0%、32.0%、72.0%、75.0%。任意联合其中2项检测指标的结果对复治肺结核诊断的敏感性明显上升;结核抗体与PCR联合检测的诊断特异性与其他联合相比更有价值(P<0.05)。联合3项及3项以上的检测指标敏感性达到或接近100.0%,但其特异性与PCR和结核抗体联合检测相比反而下降明显(P<0.01)。结论 在结核抗体、ESR、CRP、PPD、PCR等5项检测指标中,联合检测结核抗体与PCR对复治肺结核的诊断最有价值,在此基础上增加检测项目并不能提高对复治肺结核的诊断价值。     

结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测在结核病诊断中的价值

目的研究结核分枝杆菌特异性蛋白（TB-SA）抗体检测在结核病诊断中的价值。方法对829例结核病患者（男471例，女358例）、278例非结核性肺部疾病患者（男172例，女106例）和125例健康志愿者（男51例，女74例）同时进行结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验，结核分枝杆菌TB-SA抗体检测，并对全部肺结核和非结核性肺部疾病患者进行痰抗酸杆菌涂片和培养。采用EPl2000统计软件进行统计学分析，组间比较采用t检验，计数资料采用X^2检验。结果结核分枝杆菌TB-SA抗体检测诊断菌阳肺结核的敏感度为75．1％（272／362）；诊断菌阴肺结核的敏感度为68．9％（226／328）；诊断肺外结核病的敏感度为71，2％（99／139）；诊断结核病的总体敏感度为72．0％（597／829），特异度为82．1％（331／403）。TB-SA血清抗体检测值并不与PPD值呈线性关系，即结核分枝杆菌TB-SA抗体检测诊断结核病不受卡介苗接种反应的影响。结论结核分枝杆菌TB-SA抗体检测诊断结核病有较好的敏感度和特异度，是辅助诊断和鉴别诊断结核病的有效手段。     

结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核中的诊断价值

目的通过检测结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验的结果,探讨其在菌阴肺结核诊断及鉴别诊断中的意义。方法将研究对象分为菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组。所有患者分别进行结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验、结核抗体三项测定及结核菌素试验。结果菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组患者PPD试验阳性率为84.8%、83.3%、28.6%、33.3%;结核抗体试验的阳性率为84.8%、66.6%、28.6%、33.3%;ELISPOT试验阳性率为93.9%、93.3%、7.1%、3.3%。结论结核杆菌感染T细胞酶联免疫斑点试验在肺结核诊断,可能优于结核菌素试验及结核抗体测定,对于菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断具有临床意义。     

新疆某牛场牛结核病的综合诊断与病原分离鉴定

目的 用多种方法检测新疆某牛场的结核病并分离病原。方法 选择皮内变态反应、牛型PPD点眼试验、IFN-γ试验及ELISA抗体检测试验4种免疫学诊断方法对新疆某牛场进行牛结核病的综合诊断,锁定疑似阳性牛后进行扑杀、剖检并采集病料进行病原的分离,用已建立的PCR方法对培养的细菌进行分型鉴定。结果 共检测了奶牛755头,其中4种方法综合锁定结核疑似阳性牛26头(3.4%)。从中随机选择5头牛进行剖检均发现有明显的结核病变,采样后在罗氏培养基上进行培养,结果均为阳性。挑取菌落经PCR鉴定结果均为牛分枝杆菌。结论 牛结核病的诊断存在其他分枝杆菌的干扰,单一诊断方法因特异性不足导致结果存在误差。合理选择诊断方法的组合有利于牛结核病的确诊。