片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

三氧化二砷诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3)诱导骨肉瘤MG 6 3细胞凋亡的作用。方法 :用MTT法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2 O3诱导MG 6 3细胞凋亡的作用。结果 :As2 O3可有效地抑制MG 6 3细胞增殖 ,随着药物浓度增高其抑制作用增强 ,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失 ,染色质浓缩聚集于核膜下。结论 :As2 O3可诱导骨肉瘤细胞凋亡 ,其作用机制有待进一步探讨     

三氧化二砷诱导骨肉瘤MG—63细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导骨肉瘤MG－63细胞凋亡的作用。方法：用MTT法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导MG－63细胞凋亡的作用。结果：As2O3可有效地抑制MG－63细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。结论：As2O3可诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制有待进一步探讨。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究

目的用RNA i方法抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。方法用免疫细胞化学技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,构建针对survivin基因的siRNA表达载体并进行酶切和测序鉴定,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR初步分析siRNA表达载体对survivin表达的抑制作用。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中有较高表达,siRNA表达载体可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达60%。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究

目的研究用RNAi表达载体对胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,并把survivin基因克隆到T载体进行测序,构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC一1,RT-PCR初步分析干扰载体对survivin表达地抑制情况。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达,其基因序列与genebank中公布的一致,干扰载体si-svv-2可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达71％。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。     

△Np63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的：研究△Np63蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法：应用免疫组化S-P法检测28例骨肉瘤石蜡标本中△Np63蛋白的表达情况。结果：在28例骨肉瘤中仅有1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应,还有1例骨肉瘤△Np63表达为阴性,二者癌旁组织呈阳性反应（ ）。对照组的15例骨软骨瘤中,共有3例阳性,其中2例为（ ）,另1例为强阳性（ ）。结论：△Np63在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应,推测p63可能具有肿瘤抑制基因功能。     

ΔNp63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的: 研究ΔNp63蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用 .方法: 应用免疫组化S-P法检测28例骨肉瘤石蜡标本中ΔNp63蛋白的表达情况.结果: 在28例骨肉瘤中仅有1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应,还有1例骨肉瘤ΔNp63表达为阴性,二者癌旁组织呈阳性反应(+).对照组的15例骨软骨瘤中,共有3例阳性,其中2例为(+),另1例为强阳性(+ + +).结论: ΔNp63在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应,推测p63可能具有肿瘤抑制基因功能.     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的 探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM 2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P＜0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P＜0.05)。 结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

α2整合素抗体对人类骨肉瘤MG63细胞迁移侵袭的影响

目的:细胞间黏附分子整合素的变化与肿瘤细胞的侵袭迁移之间有重要联系,文中进一步深入探讨α2整合素抗体对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响,为预防骨肉瘤细胞的转移和辅助治疗提供理论依据. 方法:采用细胞迁移实验、细胞侵袭实验观察骨肉瘤MG63细胞在整合素α2单克隆抗体作用下瘤细胞迁移、侵袭能力的变化.迁移或侵袭的细胞通过结晶紫染色,100倍显微镜下计数. 结果:anti-α2阻断组细胞的迁移能力较对照组明显降低,侵袭能力较对照组明显减弱. 结论:α2整合素抗体在骨肉瘤细胞迁移侵袭过程中起着抑制作用.     

RNAi抑制Survivin基因的表达对乳腺癌SKBr-3细胞的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人Survivin基因表达,观察其对乳腺癌SKBr-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成靶向Survivin基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染乳腺癌SKBr-3细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western blot法观察乳腺癌细胞Survivin mRNA和蛋白质的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTt检测显示Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其细胞最高抑制率为(43.1±O.3)%;RT-PCR检测显示Survivin-siRNA组mRNA表达明显下调(P<0.01),其相对表达量分别为0.203 ±0.018、0.229±0.019,抑制率分别为55.2%、49.4%;Western blot检测显示Survivin-siRNA组蛋白表达下调(P<0.01),其蛋白相对表达量分别为0.702±0.007、0.684±0.016,抑制率分别为34.8%、36.4%;流式细胞仪检测显示Survivin-siRNA组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),分别为(14.2±1.4)%、(16.8±0.6)%.结论 Survivin-siRNA能有效封闭Survivin的表达,抑制SKBr-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,推测Sur-vivin基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.     

RNA干扰沉默bcl-2基因对人黑素瘤细胞生长抑制研究

目的：探讨应用RNAi技术下调bel-2基因表达后对人黑素瘤M14细胞株生长的影响。方法：采用人黑素瘤川4细胞株,利用人工合成的bcl-2靶向小分子干扰RNA（small interference RNA,siRNA）转染细胞,MTT法测细胞增殖情况。结果：免疫组化可见25例实验组细胞爬片均表达bcl-2,表达强度弱阳性,25例空白对照组和阴性对照均表达bel-2,表达强度强阳性,实验组细胞与空白对照组和阴性对照组相比bcl-2表达明显减低,差异有统计学意义（P〈0．05）,空白对照组和阴性对照组bcl-2表达差异无统计学意义（P〉0．05）,MTT法测定显示：转染48h后,实验组7组细胞平均吸光度OD值0．384±0．026,空白对照组7组细胞平均吸光度OD值0．590±0．032,阴性对照组7组细胞平均吸光度OD值0．541±0．034,实验组细胞吸光度降低,与空白对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,而空白对照组和阴性对照组两组间差异无统计学意义（P〉0．05）,实验组细胞增殖抑制率34．9l％,阴性对照组细胞增殖抑制率8．30％,差异有统计学意义（P〈0．05）,显示实验细胞增殖减慢。结论：Bcl-2RNAi能显著降低人黑素瘤M14细胞株的bcl-2蛋白表达,有效押制癌细胞的生长,为黑素瘤的治疗提供了一种新的治疗策略。     

bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果

目的 构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定.脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2 shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bci-2-1009.转染Raji细胞48 h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2 mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡.     

VEGF/KDR在前列腺癌中的表达及其与肿瘤Gleason评分之间关系的研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和KDR在前列腺癌(pros-tate cancer,PCa)中的表达及其与肿瘤Gleason评分之间的关系。方法20例前列腺癌组织[按Gleason评分,将≥7分者列为高Gleason评分组(n=12);<7分者列为低Gleason评分组(n=8)]、良性前列腺增生(benign prosta-tic hyperplasia,BHP)15例,正常前列腺组织(normal prostate,NP)中VEGF、KDR的表达水平。结果PCa中VEGF、KDR阳性表达率高于BPH及NP(P均<0.05),高Gleason评分组中VEGF、KDR阳性表达率(83.3%,91.7%)高于低Gleason评分组(37.5%、62.5%,P<0.05)。结论VEGF、KDR在前列腺癌中均为高表达,且与肿瘤的Gleason评分密切有关。     

慢病毒介导的RNAi对人多发性骨髓瘤DKK1基因表达的抑制作用

目的观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰（RNAi）对人骨髓瘤细胞株U266 中dickkopf1（DKK1）的抑制作用,为以DKK1基因为靶点的骨髓瘤骨病（myeloma bone disease,MBD）的基因治疗研究奠定基础。方法把构建好的DKK1 shRNA慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒混合,以L ipofectam ine 2000转染293FT细胞,48h后收取含病毒的上清液、浓缩,并检测病毒效价;RT-PCR和Western blot检测病毒感染多发性骨髓瘤细胞U266细胞后的DKK1表达。结果浓缩后的慢病毒效价为427&#215;105 TU/ml;DKK1shRNA慢病毒感染的U266细胞分别与未感染的U266细胞、无关序列shRNA慢病毒感染U266细胞DKK1表达量比较,统计学均有显著性差异（P〈0.001）。结论慢病毒介导的干扰RNA能有效抑制骨髓瘤细胞U266中DKK1的表达。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的构建RNAi表达载体,并分析其对胰腺癌细胞PANC-1 survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,并把survivin基因克隆到T载体进行测序,构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR、western-blot分析干扰载体对survivin表达的抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达,其基因序列与GenBank中公布的一致,干扰载体pTZU6＋1-svv2可以有效的抑制survivin的表达,抑制率约为74％,并诱导了肿瘤细胞的凋亡。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达并诱导胰腺癌细胞凋亡。     

髓母细胞瘤中血管内皮生长因子及其受体的表达和临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体激酶插入嵌合受体(kinase insert domain-containning receptor,KDR)在髓母细胞瘤中的表达情况及它们与肿瘤微血管密度(microvascular density,MVD)以及患者预后的关系。方法通过免疫组化方法测定VEGF、KDR在45例髓母细胞瘤和10例正常小脑组织中的表达,并结合临床资料,对病人生存时间与VEGF、KDR表达阳性率、肿瘤MVD之间关系进行分析。结果①正常小脑组织标本极少或不表达VEGF、KDR,而髓母细胞瘤标本多为不同程度的阳性表达;②生存时间长者KDR表达阳性率较低(r=-0.444,P<0.01);③VEGF与肿瘤MVD呈正相关(P<0.001),但是VEGF MVI与患者预后并无显著相关性。结论KDR在肿瘤细胞中的阳性表达率与髓母细胞瘤的预后呈负相关。髓母细胞瘤中KDR的表达水平可以作为判断病人预后的指标之一。     

血管内皮生长因子受体和AQP1在非小细胞肺癌中的表达

目的 观察血管内皮生长因子受体和AQP1在NSCLC、不典型腺瘤样增生及非肿瘤性病变肺组织中的表达,探讨它们在NSCLC发生发展中的作用及相互关系.方法 NSCLC 20例,不典型腺瘤样增生病变20例、肺良性瘤样病变20例,采用RT-PCR、Western-Blot检测KDR、AQP1在NSCLC肺组织、不典型腺瘤样增生病变和非肿瘤性病变肺组织中的表达变化.结果 ①NSCLC肺组织中的KDR和AQP1表达量高于不典型腺瘤样增生(P＜0.05),显著高于非肿瘤性病变肺组织(P＜0.01).②NSCLC肺组织中KDR和AQP1表达呈正相关(r =0.653,P＜0.05).结论 KDR、AQP1在NSCLC肺组织中的表达增加,在NSCLC的发生和发展中有协同效应.     

VEGF及其主要受体Flk-1/KDR在乳腺良恶性肿瘤中的表达及其意义

目的 探讨乳腺良恶性不同肿瘤在血管生成相关分子表达方面的差异性.方法 应用免疫组化技术检测CD34、VEGF及其受体Flk-1/KDR在两组肿瘤中的表达特性.结果 恶性组微血管密度(MVD)显著高于良性组(P<0.05),微血管丰富区位于癌巢边缘.VEGF在乳腺癌性上皮细胞及癌周血管内皮细胞呈强阳性表达,Flk-1/KDR在乳腺恶性肿瘤血管内皮细胞呈强阳性表达,VEGF及Flk-1/KDR尤其在癌灶边缘呈强阳性表达,良性组几乎不表达(P<0.05).结论 VEGF是促进乳腺癌血管生成的重要调节因子.