N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

目的：建立N-甲基-N亚硝脲（N-methyl-N-nitrosourea,MNU）损伤视网膜的模型,研究视网膜神经元凋亡对Müller细胞生物学特性的影响及神经营养因子的表达变化.方法：腹腔注射MNU建立视网膜损伤模型,免疫荧光染色方法研究感光细胞缺失对Müller细胞的生物学特性的影响,并检测主要神经营养因子表达的变化.结果：TUNEL法显示,腹腔注射MNU后2 d,视网膜外核层细胞凋亡现象明显.核增殖抗原（PCNA）及细胞周期素CyclinD1的表达明显增高.与此同时,Müller细胞也开始表达神经干细胞抗原巢蛋白（nestin） RT-PCR显示胰岛素样生长因子（IGF）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达均升高.结论：在视网膜受到损伤时,Müller细胞增殖、去分化呈现出干细胞的特性.而视网膜中IGF、bFGF和HGF等细胞因子的表达明显增高,提示视网膜损伤后可能通过大量分泌细胞生长因子,促进Müller细胞的增殖.     

Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压致大鼠视网膜损伤中作用

 目的 观察Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压(AOH)大鼠视网膜中变化及其抑制对视网膜损伤的影响。方法 建立大鼠AOH青光眼模型,分为正常对照(Ctrl)、AOH和AOH+玻璃体内注射胶质毒素α-氨基己二酸(AAA)后再灌注1、3和5d组,以及单纯AAA和AOH+PBS对照组。TUNEL染色检测细胞凋亡,GFAP免疫荧光染色反应Müller细胞反应性胶质化程度,Thy-1染色标记视网膜神经节细胞(RGCs)。结果 AOH可致大鼠视网膜内丛状层和内核层明显变薄、神经节细胞层内细胞排列紊乱和数量减少,并诱发Müller细胞反应性胶质化(GFAP表达增加)。同时,AAA抑制Müller细胞反应性胶质化可明显缓解AOH所致RGCs丢失和凋亡发生。结论 Müller细胞反应性胶质化参与AOH所致视网膜损伤,抑制其反应性胶质化可能是改善高眼压性青光眼视网膜病变的一种有效治疗方法。     

视网膜神经胶质细胞及其分泌的细胞因子与视网膜病变

视网膜内常见的神经胶质细胞包括星形胶质细胞、Müller细胞(放射状胶质细胞)和小胶质细胞。最近研究表明,这些神经胶质细胞能释放多种细胞因子,包括VEGF、bFGF、TGF、IGF、TNF及IL等,这些细胞因子不仅在调节视网膜神经细胞生长发育中起着重要作用,而且是参与视网膜病变的重要因素。     

高糖抑制体外培养Mnüer细胞生长

Müller细胞作为视网膜的重要组成部分,除了对视网膜神经细胞有支持和营养作用外,还在视网膜神经递质、钾离子、pH值的调节以及神经细胞的信号传递等方面发挥重要的作用,其改变不但可以引起视网膜血管病变,还能导致神经元的功能障碍[1].     

大鼠Mlüler细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定

Müller细胞是视网膜中一种非常重要的胶质细胞。成熟的Müller细胞发出很多分支包围、分隔神经元的胞体和突起[1]。研究表明Müller细胞在外伤或光损伤后可表达多种生长因子,这些生长因子除对神经元具有保护作用外[2],对细胞外环境也具有调控作用[3]。因此,Müller细胞在视网膜中的作用正日益受到人们的重视。而Müller细胞的培养方法主要有组织块贴壁培养法和酶解法。本实验应用酶解法成功分离了大鼠视网膜的Müller细胞,并进行体外培养、免疫组化鉴定,为进一步研究胶质细胞在中枢神经系统的作用提供实验基础。1材料和方法1.1实验动物…     

Müller细胞在增殖性糖尿病视网膜病变中的最新研究进展

Müller细胞是脊椎动物视网膜中的主要胶质细胞, 其纵向跨越整个视网膜, 几乎与视网膜中的每一种细胞类型都有接触。因其独特的定位, 可以参与维持视网膜内稳态所需的各种功能。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy, PDR)是糖尿病的眼部并发症, 在炎症的作用下内皮细胞、神经元和神经胶质细胞之间相互作用造成眼底微血管病变。在PDR中, Müller细胞经历反应性胶质增生, 一方面起到保护视网膜的作用, 另一方面, 由于炎性细胞因子/趋化因子的水平升高, 可导致瘢痕和视网膜新生血管形成, 损害玻璃体。由此可见, Müller细胞胶质化对于视网膜有着双重作用。另外, Müller细胞表达低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(low density lipoprotein receptor associated protein 1, LRP1), LRP1对新生血管和炎症有着密切联系。对Müller细胞、PDR玻璃体和LRP1展开研究可能为"趋利避害"提供新思路。     

胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞VEGF变化影响的研究

目的:观察在不同浓度胰岛素条件下, 体外培养的兔视网膜M櫣ller细胞的血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor, VEGF)表达的变化。方法:采用免疫细胞化学法和ELISA方法, 定性定量测定不同浓度胰岛素条件下体外培养的兔视网膜Müller细胞VEGF的表达水平的升高可能是胰岛素能明显增强VEGF的表达。结论:高浓度胰岛素可增强M櫣ller细胞VEGF的表达, 这种VEGF表达水平的升高可能是胰岛素促进糖尿病视网膜病变的因素之一。     

新生小鼠吸入高氧视网膜的血管发育与胶质纤维酸性蛋白表达的变化

目的:研究新生小鼠吸入高氧视网膜病(ROP)过程中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨Müller细胞与血管发育的关系。方法:实验用生后7 d(P7)C57BL/6J小鼠。ROP模型组在75%氧环境中饲养。在P9、P12、P14、P17和P21等不同时间取眼球,分别用ADP酶组织化学染色方法显示视网膜血管发育及免疫组织化学方法标记视网膜GFAP的表达。结果:小鼠视网膜血管生后开始发育,P21基本成熟;吸高氧后从P14开始出现新生血管,在P17~P21达到高峰。模型鼠视网膜Müller细胞从P14起内侧突起开始表达GFAP,到P21已遍布细胞全层。结论:高氧可导致视网膜发育晚期大量血管新生,且与GFAP表达的变化规律相一致,提示Müller细胞与视网膜血管发育关系密切。     

Nestin 和GFAP在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达及高氧治疗的作用

目的： 探讨巢蛋白（nestin）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法: 制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nestin免疫荧光双标染色。结果: 正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色,GFAP阳性染色仅位于星形胶质细胞上。缺氧后,在Müller细胞和星形胶质细胞上出现了nestin的表达,GFAP的表达没有明显变化。高氧治疗后,nestin在Müller细胞上的表达明显减弱,但在星形胶质细胞上仍有较强的表达。GFAP仍然只在星形胶质细胞上表达。结论: Müller细胞和星形胶质细胞针对缺氧损伤和高氧处理发生不同的细胞骨架蛋白重塑,这与它们和视网膜神经节细胞以及视网膜血管在解剖和功能关系上的差异有关。     

生后小鼠不同年龄阶段视网膜片层化及胶质细胞发育特点

目的:观察小鼠视网膜片层化过程中胶质细胞增殖及与双极细胞分化的关系。方法:各个年龄小鼠共计123只。应用免疫荧光和HE染色法对各个年龄的小鼠视网膜形态结构及胶质细胞的增殖、分化进行观察。结果:星形胶质细胞按照离心型的模式发育,P0时仅在视乳头和邻近周围区域出现幼稚的星形胶质细胞,尔后细胞突起相互缠绕形成的网状联系中出现中空"管样"结构,细胞形态呈现典型的星状外形,类似血管网的脉络。P6时小鼠视网膜Müller细胞零星的表达GS,双极细胞也开始表达少量的PKC-α,尔后Müller细胞GS阳性表达逐渐增加,而PKC-α阳性细胞伸向节细胞层的轴突更加密集,树突和胞体的数量也增多,P14时双极细胞的发育过程基本完成。同时,小鼠视网膜GS和PKC-α双标记,发现Müller细胞内、外突上发出许多细小的侧突与双极细胞的胞体相接触,提示Müller细胞在双极细胞的分化、迁移过程中伴着很重要的角色。结论:在小鼠视网膜片层化过程中,胶质细胞起着关键性作用,Müller细胞在双极细胞的分化、迁移过程中起重要作用。     

Kir2.1通道在牛视网膜胶质细胞中的分布和表达-mRNA和蛋白水平的研究

本研究目的为在 m RNA和蛋白质水平探讨 Kir2 .1通道在牛视网膜胶质细胞中的分布和表达。从神经视网膜和视网膜色素上皮分离 m RNA和蛋白质 ,以 RT-PCR,Northern blot,Western blot和免疫荧光组织化学法检测 Kir2 .1m RNA和 Kir2 .1蛋白的表达。结果表明 ,RT-PCR扩增的 Kir2 .1c DNA产物在神经视网膜中强表达 ,在视网膜色素上皮中弱表达 ;Northern斑点杂交的 Kir2 .1c DNA仅在神经视网膜表达 ;Western斑点杂交检测 Kir2 .1蛋白单带在神经视网膜中表达 ;免疫荧光组织化学显示 Kir2 .1蛋白在 Muller细胞中分布 ,并且主要分布在 Muller细胞与神经元相接触的细胞膜区域 ,与 Muller细胞的特异性标记蛋白质抗谷氨酸合成酶抗体双重标记显示其分布特性重叠。在视网膜色素上皮未检测到 Kir2 .1蛋白的免疫活性。上述结果表明 ,Kir2 .1分布在视网膜胶质细胞的 Muller细胞 ,这种分布特性可能与完成 Muller细胞功能 -保持细胞外 K+ 的平衡、促进 K+的内流有重要关系     

人胎视网膜发生的光镜和电镜观察

本文在光镜下观察40例人胎视网膜的发生,在电镜下观察15例人胎视网膜视细胞、双极细胞、节细胞的发育。结果表明:胚胎第9周时神经上皮可分内、外成神经细胞层。第10周时内、外成神经细胞层之间的Chievitz带消失;第11周时节细胞从内成神经细胞层内迁;第13周节细胞与内成神经细胞之间出现内网层;第16周始双极细胞从外成神经细胞层中内迁形成外网层和内核层。第20周后视网膜各层形成。而视细胞、双极细胞、节细胞的超微结构于胎儿8个月后才发育完善。其结构与成人基本相同。     

胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞VEGF变化影响的研究

目的:观察在不同浓度胰岛素条件下,体外培养的兔视网膜Müller细胞的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的变化.方法: 采用免疫细胞化学法和ELISA方法,定性定量测定不同浓度胰岛素条件下体外培养的兔视网膜Müller细胞VEGF的表达. 结果:胰岛素能明显增强VEGF的表达. 结论: 高浓度胰岛素可增强Müller细胞VEGF的表达,这种VEGF表达水平的升高可能是胰岛素促进糖尿病视网膜病变的因素之一.     

斑马鱼视网膜再生研究进展

哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力。与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力。斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力。研究表明,斑马鱼视网膜再生的细胞来源是Müller细胞。近年来,关于斑马鱼视网膜Müller细胞去分化及其增殖的分子机制和信号通路的研究取得了许多新的进展。我们就斑马鱼视网膜再生的研究历史、损伤模型和再生细胞来源以及调控的分子机制等做一综述。     

NF-E2相关因子2对视网膜细胞保护作用的研究进展

核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化还原通路在细胞氧化应激损伤过程中起到重要的保护作用。在氧化应激的刺激下,Nrf2可以启动多种细胞保护性基因的表达从而维持细胞稳态。因此,在治疗氧化应激损伤的疾病时,药物诱导Nrf2通路表达上调成为了一个新的研究方向。我们主要从视网膜神经细胞和视网膜血管内皮细胞两个方面总结了Nrf2在视网膜病变中的细胞保护作用的相关研究进展。     

GMFB在高糖处理的Müller细胞中的表达及其对Müller细胞的影响

目的:利用高糖处理Müller细胞,研究高糖条件下胶质细胞成熟因子B(glia maturation factor-β,GMFB)的表达情况和GMFB对Müller细胞的影响,揭示GMFB细胞在糖尿病视网膜病变中可能的作用机制,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的策略。方法:(1)用25mmol/L葡萄糖处理Müller细胞0,1,2,4和6 h,采用Western Blot检测GMFB的表达;(2)用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染Müller细胞后,1μg/ml重组蛋白GMFB处理Müller细胞0,2,4,8,12 h,采用Western Blot和免疫荧光检测自噬情况;(3)1μg/ml GMFB处理Müller细胞24 h为实验组,以未处理组作为对照组,进行RNAseq,检测其基因差异表达谱,选取其中表达差异大于1.5倍且P0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行基因本体论(gene ontology,GO)分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:(1)经高糖处理的Müller细胞早期出现GMFB表达上调,以2 h处理组的GMFB上调最为显著,提示高糖刺激早期能引起Müller细胞的GMFB表达升高;(2)重组蛋白GMFB处理Müller细胞后,Western Blot在第4 h检测到自噬被诱导,但很短暂。我们在24 h用免疫荧光检测,没有发现红绿荧光强度变化,提示双标自噬系统检测未检测到自噬发生,可能与不同检测方法的敏感性不同有关。(3)对GMFB处理24 h的Müller细胞抽提总RNA,进行RNAseq检测,显示在被检测的14411个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达的基因有152个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有103个,下调的有44个。通过GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析进一步发现GMFB与细胞黏附分子、轴突导向和胞质DNA感受通路等多条信号通路密切相关。同时,炎症基因IL-33表达降低,提示GMFB有神经保护的作用。结论:GMFB在高糖诱导的Müller细胞中表达明显上调,说明GMFB可能影响细胞间连接,参与炎症反应信号通路等。该工作为理解GMFB在糖尿病视网膜病变中的作用机制提供了有益的线索。GMFB在糖尿病视网膜病变的作用机制需要进一步验证。     

黄芪甲苷对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对糖尿病大鼠视网膜氧化应激的影响及其对Müller细胞的保护作用。方法利用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组及AS治疗组,3个月后试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,免疫组化及Western blot检测视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)变化,Western blot检测Müller细胞功能性蛋白酶——谷氨酰胺合成酶(GS)表达变化。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜MDA含量增加,GSH含量减少,GFAP表达增加,GS表达减少(均0.01),AS治疗组视网膜MDA及GSH含量、GFAP及GS表达较糖尿病组均无明显变化(均0.05)。结论 AS抑制糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应,恢复视网膜Müller细胞功能性蛋白酶GS的表达。     

过表达Cdh1蛋白对高糖诱导的视网膜Müller细胞株GFAP表达的影响

目的 探讨过表达Cdh1蛋白对高糖诱导的视网膜Müller细胞株GFAP表达的影响.方法 培养的Müller细胞分为4组:对照组(Control)、高糖组(HG group,30 mmol/L葡萄糖)、Cdh1过表达组(Cdh1,30 mmol/L葡萄糖+过表达Cdh1蛋白的慢病毒载体)、病毒阴性对照组(NC-Cdh1,30 mmol/L葡萄糖+慢病毒载体稀释液),显微镜下观察Müller细胞一般生长状况,免疫荧光检测GFAP在Müller细胞的表达情况,Western blot检测Müller细胞GFAP及Cdh1蛋白的相对表达.结果 HG组和NC-Cdh1组GFAP表达水平明显高于Control组,Cdh1明显低于Control组(P＜0.05);Cdh1组GFAP表达水平明显低于HG组,Cdh1高于HG组(P＜0.05),而HG组和NC-Cdh1组之间无统计学意义(P＞0.05).结论 过表达Cdh1蛋白下调高糖诱导的视网膜Müller细胞GFAP表达,对高糖诱导的Müller细胞损伤起到保护作用.     

wortmannin对高糖视网膜Müller细胞条件培养基诱导的内皮细胞增殖和迁移的影响

目的　探讨wortmannin抗眼内新生血管形成的可能。方法　采用免疫荧光、流式细胞分析和Boyden小室迁移实验观察高糖视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)诱导的内皮细胞增殖和迁移的影响。结果　50nmol/Lwortmannin可明显抑制HGMCM诱导的内皮细胞的增殖和迁移,使内皮细胞S期细胞百分率明显下降[ (37 .82±0 .57)%至(21. 91±0 .23)%,P<0 .01],G0 /G1 期细胞百分率显著升高[ (54 .57±1 .19)%至(65. 59±0. 41)%,P<0 .01],G2 /M期细胞增多(P<0 .05)。结论　wortmannin对HGMCM诱导的内皮细胞的增殖和迁移均有抑制作用,提示wortmannin具有抗视网膜新生血管形成的作用。     

钠尿肽受体A在小鼠视网膜发育过程中的表达

目的检测钠尿肽受体(NPR)在不同年龄小鼠视网膜内的表达,探讨其在视网膜发育过程中的作用。方法收集从受孕16日(E16)到出生90日(P90)小鼠眼球标本共127只,对NPR-A进行免疫荧光检测。结果NPR-A广泛存在于视网膜神经元中,例如,在外核层,NPR-A于P7开始高表达在视锥、视杆细胞内、外突起上,于P14减弱,P30之后持续稳定弱表达;在内核层,从P7开始NPR-A持续弱表达在双极细胞的突起中,而在水平细胞中未见NPR-A表达;在神经节细胞层,NPR-A于E16开始高表达在神经节细胞胞体中,P14明显减弱,而在神经纤维层,即神经节细胞的轴突中,NPR-A从胚胎期至成年持续高表达;在外网状层和内网状层,NPR-A于P14均高表达,但于P30之后逐渐减弱。此外,NPR-A还广泛的存在于Müller细胞的突起中。结论 NPR-A参与了视网膜的发育,可能是小鼠视网膜神经元发育过程中的关键分子,并对Müller细胞的功能活动起着重要的调节作用。