R_(b1)对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体R_(b1)250μg/ml显著抑制B型钙单通道活动,其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短,而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

Rb1对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体Rb1 250μg/ml显著抑制型钼单通道活动。其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短，而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

Rg_2与R_f对钙通道作用的单通道分析

在单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心室肌细胞上，用连细胞电压钳法，观察人参三醇组皂甙单体Ｒｇ２、Ｒｆ６０μｍｏｌ·Ｌ－１对钙通道单通道活动的影响，并与钙通道阻滞剂异博定７９μｍｏｌ·Ｌ－１、钙通道激动剂ＢＡＫ８６４４５μｍｏｌ·Ｌ－１对照，证明Ｒｇ２对钙通道有阻滞作用，其机理在于使钙通道的开放时间缩短、开放概率减少、关闭时间延长，而对Ｂａａ＋流幅值无明显影响，Ｒｆ可缩短Ｌ型钙通道的开放时间、延长关闭时间、降低开放概率。     

人参三醇组皂甙对大鼠心室肌细胞L型、T型、B型钙通道的阻滞作用

分离Wistar大鼠乳鼠的心室肌细胞,向培养基中分别加入人参三醇组皂甙300μg/ml,钙通道阻滞剂异博定37.5μg/ml或钙通道激动剂BAY K 8644 5μmol/L。用斑片钳的连细胞电压钳法,记录加药前后L、T、B三型钙通道的单通道活动。确证了人参三醇组皂甙的钙通道阻滞作用,并揭示其作用机理在于使钙通道的开放时间缩短与开放概率减少。     

人参皂甙Rg1对培养心肌细胞钙通道阻滞作用的单通道分析

用细胞吸附（Ｃｅｌｌ－ａｔｔａｃｈｅｄ）的膜片钳（Ｐａｔｃｈ ｃｌａｍｐ）方法，在培养２４－４８ｈ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心室肌细胞上，研究Ｒｇ１对心肌细胞钙通道的影响。由－７０ｍＶ的保持电位阶跃至一１０ｍＶ诱发Ｔ型通道的活动，由－５０ｍＶ阶跃至＋１０ｍＶ诱发Ｌ型钙通道的活动，在－６０ｍＶ的保持电压下，记录Ｂ型钙通道的活动。向浸溶液中分别加入Ｒｇ１，钙通道阻断剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ，钙通道激动剂Ｂａｙ     

人参皂甙Rg1对体外培养大鼠神经干细胞的增殖作用

1材料和方法1.1神经干细胞的原代培养和分组采用新生24 h内的W istar大鼠(解放军总医院实验动物中心提供)。取双侧大脑皮质,按文献报道方法进行神经干细胞(neural stem cells,NSC)培养。培养的标本随机分为对照组和实验组。实验组换液时培养液中加入人参皂甙Rg1(ginsenoside Rg     

人参皂甙单体Rh2对K562细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的 研究人参皂甙单体-Rh2(GS-Rh2)对人K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法 采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度GS-Rh2对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR).结果 MTT比色法测定显示,细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为25.8 μg/ml.结论 GS-Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

人参皂甙单体Rb1对豚鼠心肌细胞ICa^2＋电流阻滞作用的研究

研究人参单体Ｒｂ１对ＩＣａ＾２＋电流的影响。采用全细胞电压钳技术记录了豚鼠心室肌细胞ＩＣａ＾２＋电流，给出了电流－电压关系曲线。在保持电压－５０ｍＶ时，阶跃命令在－５０－＋６０ｍＶ，０ｍＶ时电流最大，并发现Ｒｂ１时ＩＣａ＾２＋电流有明显的阻滞作用。而且在１００μｍｏｌ／Ｌ，２００μｍｏｌ／Ｌ，３００μｍｏｌ／Ｌ，４００μｍｏｌ／Ｌ范围时有剂量依赖关系。     

脑损伤后神经细胞Ca~（2＋）通道变化及其对BBB和脑水肿的影响

通过检测脑皮质神经元突触体胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），研究大鼠脑损伤后神经细胞Ｃａ２＋通道变化，及其对血脑屏障（ＢＢＢ）和脑水肿的影响。结果表明，脑损伤后突触体［Ｃａ２＋］ｉ显著升高，分别为对照值的１０～１７倍，证实了神经细胞ｃａ２＋超载可能是引起ＢＢＢ通透增加，加剧脑水肿的重要因素。钙通过阻断剂尼莫地平可阻止Ｃａ２＋通道开放，有利于脑水肿防治。     

在离体工作心脏上对比观察人参二醇组与三醇组皂甙的钙通道阻滞作用

在Wister大鼠的离体心脏上进行观察,以主动脉流量、冠脉流量、心输出量、每搏输出量、脉压、左室最高压、左室舒末压、室内压最大上升与最大下降速率等9项参数为心肌收缩性能的指标。100μg/ml人参二醇组皂甙与人参三醇组皂甙均使心肌收缩性能立即减弱,后者的作用比前者强。洗脱后,各项指标迅速恢复Ca~(2+)8μ/ml或肾上腺素0.01μg/ml均可使两种人参皂甙的作用逆转。同法应用2.66μg/ml尼莫地平时,心肌收缩性能的表现相似。以上结果表明人参二醇组与人参三醇组皂甙均有钙通道阻滞作用,且后者比前者的作用强。     

人参单体皂甙Bbl和Rgl对家兔骨骼肌细胞膜钙离子通道拮抗剂受体的作用

以家兔骨骼肌组织提取细胞膜ＤＨＰ受体的粗制品及提纯制品，经聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果表明，骨骼肌细胞膜ＤＨＰ受体蛋白亚单位的分子量为１７０、１４０、５５和３３ｋ。采用３ＨＰＮ２００－ｌｌ０与ＤＨＰ受体进行受体结合实验，其ＫＤ为２，５ｎｍｏｌ／ＬＢｍａｘ为５８．９ｐｍｏｌ／ｍｇ。人参单体皂甙Ｒｂ１表现出抑制ＤＨＰ受体的作用，ＩＣ５０为１２０ｕｇ／ｍｉ而人参单体皂甙Ｒｇ１则无明显作用。     

人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2~-和H_2_O_2损伤的保护作用

目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高（P＜0．01）。结论：人参皂甙能保护培养大鼠皮层神经细胞少受自由基损伤。     

人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法及流式细胞术观察不同浓度的Rg3对U87细胞凋亡的影响,采用细胞吖啶橙／溴乙锭荧光观察凋亡形态学改变,采用WesternBlot技术检测细胞Bcl2、Bax、p-Akt及tAkt蛋白表达。结果Rg3显著抑制U87细胞增殖,Rg3呈剂量依赖性诱导肿瘤细胞凋亡。不同浓度Rg3作用U87细胞24h,U87细胞中Bax表达逐渐增高,Bcl-2表达降低．Bax／Bcl-2呈浓度依赖性升高,细胞p-Akt蛋白表达降低,而t—Akt蛋白未见改变。结论Rg3通过抑制P13K／Akt信号转导通路中的Akt磷酸化,影响胶质瘤U87细胞系Bcl-2蛋白表达降低,促凋亡Bax蛋白表达增加,调控胶质瘤细胞的凋亡。     

人参皂甙Re对大鼠心肌缺血-再灌注损伤时心肌和血浆前列腺素E_2水平的影响

在大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型上,研究了人参皂甙Re(10mg/kg和20mg/kg)对心肌和血浆中前列腺素E_2(PGE_2)水平的影响,并与维拉帕米进行了比较。人参皂甙Re10mg/kg和20mg/kg及维拉帕米均可抑制大鼠心肌和血浆中PGE_2水平的升高,并且人参皂甙Re10mg/kg和20mg/kg的作用均优于维拉帕米,提示人参皂甙Re对大鼠心肌缺血-再灌注时在循环血中和心肌内PGE_2大量蓄积所致的心脏损害有显著的保护作用。     

人参皂甙Rh_2对C_6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 :观察人参皂甙 Rh2 对 C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,并在分子水平探讨其作用机理。方法 :细胞计数法检测细胞增殖 ,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果 :1 Rh2 2 ,4,8μmol/L对 C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用 ,且呈明显量效关系 ;2 Rh2 作用 72 h后 ,4μmol/L浓度对 C6胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显 ;3 Rh2 作用后 ,G0 /G1期细胞百分率明显下降 ,而S期细胞百分率显著增加。结论 :Rh2 对 C6胶质瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,且这种作用有周期特异性。     

人参果皂甙对失血性休克犬心肌保护作用的电镜观察和Ca~(2+)分析

目的 :探讨人参果皂甙对失血性休克犬心肌的保护作用。方法 :采用健康杂种犬 1 6只 ,随机均分为失血性休克组 (HS,放血使血压降至 5.3k Pa,并在这个血压上维持 5h)和失血性休克人参果皂甙治疗组 (HSG,放血前 1 h肌注人参果皂甙生理盐水溶液 ,2 5mg/kg体重 ,其它处理同 HS组 )。观察失血后 5h犬存活率及心肌超微结构和 Ca2 +改变。结果 :与 HS组比较 ,1 HSG组犬存活率明显提高 ,差异显著 (P<0 .0 0 5) ;2 HSG组犬心肌超微结构病变 ,如肌膜、肌原纤维、肌浆网、线粒体、闰盘等细胞器损害明显减轻 ;3HSG组犬心肌肌浆网内 Ca2 +增加 ,线粒体内 Ca2 +减少。结论 :这些结果从不同水平上提示人参果皂甙有抗休克、保护心肌作用     

人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞p53表达的影响

目的：检验氧化损伤的牛RPE细胞是否存在p53基因表达的变化和人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对其的影响,以期进一步研究RPE细胞氧化损害的机理.方法：建立牛RPE细胞氧化损伤模型,原位杂交技术测定RPE细胞p53mRNA的表达,免疫组化技术测定p53蛋白表达.结果：p53蛋白表达阳性的牛RPE细胞的细胞核染成黄色,与次黄嘌吟／黄嘌吟氧化酶（HX／XO）组p53蛋白阳性的细胞数相比较,正常对照组,Rg1（0.1mg.L-1）组及VitE（10mg.L-1）组存在显著性差异（P＜0.05）,而与Rb1（10mg.L-1）组无显著性差异.原位杂交法测定P53mRNA表达,牛RPE细胞P53mRNA表达阳性可在细胞浆内见到位于细胞周边部的蓝紫色絮状物,分别与HX／XO组阳性的细胞相比较,正常对照组,Rg1组及VitE组存在显著性差异（P＜0.05）,而与Rb1组无显著性差异.结论：氧化损伤可导致基因P53mRNA及其蛋白在RPE细胞内的表达明显增加.人参皂甙Rg1和VitE对抗氧自由基对RPE细胞损伤的机制可能是通过清除氧自由基,影响凋亡基困p53的表达,从而有效地抑制氧自由基对RPE细胞的损伤.     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,探讨GRbl的神经保护作用机制。方法阻塞大鼠大脑中动脉2 h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRbl给药组(GRb1组),GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1(40 mg/kg)。两组再按不同的再灌注时间(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d,每时间点4只)分为7个亚组。分别用HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2和Bax的表达。结果与I/R组相比,GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变,减少神经细胞凋亡数(12 h、1 d、2 d和3 d时P<0.05),上调Bcl-2阳性细胞数(12 h、1 d、3d、5 d和10 d时P<0.05)和降低Bax阳性细胞数(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d时P<0.05)。结论GRbl对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制Bax表达有关。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察人参皂甙Rb1（Ginsenoside Rb1，GRb1）对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响，探讨GRb1的神经保护作用机制。方法阻塞大鼠大脑中动脉2h制备脑缺血再灌注模型，大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组）和GRb1给药组（GRb1组），GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1（40mg／kg）。两组再按不同的再灌注时间（3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d，每时间点4只）分为7个亚组。分别用HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2和Bax的表达。结果与I／R组相比，GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变，减少神经细胞凋亡数（12h、1d、2d和3d时P〈0．05），上调Bcl-2阳性细胞数（12h、1d、3d、5d和10d时P〈0．05）和降低Bax阳性细胞数（3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d时P〈0．05）。结论GRb1对脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制Bax表达有关。     

1，6－二磷酸果糖对心肌细胞胞质游离Ca~（2＋）和pH的影响

考察外源性的１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）对心肌细胞内游离Ｃａ２＋浓度和ｐＨ值的影响。用荧光探针（Ｆｕｒａ－２，ＢＣＥＣＦ）技术同时测定成年大鼠心肌细胞内游离Ｃａ２＋浓度和ｐＨ值，并观察其在缺氧／复氧条件下的变化。结果：在缺氧／复氧过程中，胞质游离Ｃａ２＋浓度缓慢升高，从基础值１３０±２９．５ｎｍｏｌ／Ｌ１升至７４２±１５４ｎｍｏｌ／Ｌ，胞质ｐＨ值则从７．１２±０．０８降至６．７１±０．１３。在含有５ｍｍｏｌ／ＬＦＤＰ的细胞悬液中，则胞质游离Ｃａ２＋上升幅度明显低于对照组（Ｐ＜０．０５），在复氧结束时的最高值为５３８±１９３ｎｍｏｌ／Ｌ，但胞质ｐＨ值的变化与对照组比较无显著差别。结论：ＦＤＰ可以减轻由缺氧／复氧所造成的心肌细胞内游离Ｃａ２＋浓度增高的程度，而对胞质ｐＨ值的变化无明显影响。