聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值

目的探讨用聚合酶链反应(PCR)荧光定量法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对189例临床确诊的结核病患者(结核病组)和45例非结核呼吸系统疾病患者(对照组)的痰或支气管灌洗液标本,分别应用PCR实时荧光定量法、涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测,然后对3种方法的阳性检出率进行统计学分析。结果 PCR法检测结核病组标本的阳性检出率为74.1%(140/189),明显高于涂片抗酸染色法的24.9%(47/189)及结核杆菌培养法的43.9%(83/189)。3种方法检测45例对照组患者的结果均为阴性,特异度为100.0%(45/45)。结论 PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法,用于结核分枝杆菌的鉴定简便、快速、特异,适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。对于结核病的及早诊断、预防和疗效监测具有良好的临床应用前景。     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

3种方法检测痰结核分枝杆菌的比较

目的：探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法：采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较。结果：荧光定量PCR技术的检出率最高,快速培养法次之且检测时间较长,抗酸染色法检出率最低。结论：荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便、快速、敏感、特异的检测,在肺结核的早期诊断和疗效观察中将能发挥重要作用。     

3种方法检测结核分枝杆菌的评价

目的评价荧光定量基因扩增法(FQ-PCR法)、胶体金法、痰涂片萋-纳氏抗酸染色法检测结核分枝杆菌情况,寻求结核分枝杆菌的快速、准确和特异性检测手段。方法选择经临床确诊96例肺结核患者痰液,采用3种方法进行检测。以临床确诊结核组为"真阳性",以对照组为"真阴性",分别计算3种方法的灵敏度、特异度、符合率、正确诊断指数、阴性及阳性预测值。结果 3种方法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为:FQ-PCR法42.7%,胶体金法48.9%,痰涂片萋-纳氏抗酸染色法12.5%,FQ-PCR法联合胶体金法66.7%。经χ2检验,FQ-PCR法、胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于痰涂片萋-纳氏抗酸染色法;FQ-PCR法联合胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于单独采用FQ-PCR法、胶体金法的检出率;FQ-PCR法具有高度灵敏性和特异性,结果的可信度优于其他两种方法,联合胶体金法诊断可在保持高灵敏性、高特异性的同时,进一步提高结核分枝杆菌检出率。结论对早期诊断可获得较好治疗效果的肺结核患者应该选择灵敏度高的诊断方法,FQ-PCR法联合胶体金法检测有一定优势。     

肺结核快速检测技术对肺结核的早期诊断

目的：评价实验室快速检测技术联合临床对结核病患病可能性的早期诊断。方法：依据临床对结核病患病可能性程度的判断将患者分为高、低2组，收集患者痰液标本，同时进行涂片抗酸染色法、荧光定量PCR法和培养法检测，根据最终诊断对不同患病可能性患者的检查结果进行分析。结果：确诊肺结核患者25例；高可能性组涂片抗酸染色法、荧光定量PCR法和培养法阳性率分别为21.43％、28．57％和30．36％，与低可能性组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。高可能性组涂片抗酸染色法和荧光定量的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值均优于低可能性组。结论：将结核病实验室检测技术与临床对患病可能性的判断相结合，可提高诊断肺结核的准确性。     

联合检测胸水中TB-Ab和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值

目的 评价检测胸水中结核抗体（TB-Ab）和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值。方法 以胸水为标本，用斑点免疫金渗试验检测结核抗体，用荧光探针PCR（TaqManPCR）技术检测TB-DNA，同时对胸水进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果 179例结核性胸膜炎胸水．结核抗体阳性率为60．89％（109／179）、TB-DNA阳性率为63．13%（113／179），TB-Ab阳性及，或TB-DNA阳性共135例（75．4％）．涂片抗酸染色阳性率为1．1%（2／179）、罗氏培养阳性率为1．68％（3／179）。30例非结核性胸膜炎胸水，结核抗体阳性率为6．67％（2／30），TaqManPCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论 结核抗体和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标．两者联检可进一步提高检测敏感性。     

直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值

目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性.方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价.结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%:MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%).结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究.     

4种方法在检测痰内结核分枝杆菌结果的比较分析

目的对结核病临床诊断方法的应用价值进行比较分析。方法对别采用涂片法、免疫磁珠技术分离涂片法（IMS-涂片）、痰培养法、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对病例组112例和对照组53例痰标本进行检测。结果普通涂片法灵敏度最低为25.00%,其次是IMS-涂片和痰培养分别是39.29%和37.50%,FQ-PCR法的灵敏度为67.86%,明显高于其他方法。结论 FQ-PCR法和IMS-涂片可作为普通抗酸染色法和培养法的重要补充或是互补的方法,对提高检出率,早发现、早治疗极具临床意义。     

噬菌体生物扩增法检测不同标本对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测不同标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液、7例结核性脑膜炎患者脑脊液,共计196例结核标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例,共计20例标本进行检测。每例标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例痰标本、73例胸水、30例肺泡灌洗液、7例脑脊液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）、0（0／7）,涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）、0（0／7）,罗氏培养分别为44．19％（38／86）、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）、0（0／7）。20例非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测。同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）;涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）;罗氏培养阳性率分别为44．19％（38／861、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）。20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便。对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸

摘要:目的：建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌（MTB）核酸的环介导等温扩增（LAMP）方法。 方法：以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。 结果：LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。 结论：本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。     

荧光定量PCR分析法在结核病诊断中的应用

为了探讨荧光定量PCR(FQ PCR)技术检测结核分枝杆菌的临床应用 ,本文采用FQ PCR技术检测 14 5例标本 ,并与培养法、抗酸染色法和PCR 电泳法进行比较。结果 :在 115例来自结核病人的高度怀疑有结核分枝杆菌的标本中 ,FQ PCR法检出阳性为 5 3例 ,其检出率高于PCR 电泳法检出率(4 8/ 115 )、培养法检出率 (4 3/ 115 )和抗酸染色法检出率 (31/115 ) ,30例非结核病的病人标本 ,四种方法均未检出结核分枝杆菌。FQ PCR法的阳性检出最低值为 10 3 拷贝 /ml,PCR 电泳法为 10 4拷贝 /ml。结果表明 ,FQ PCR技术是高度灵敏、高度特异的快…     

噬菌体生物扩增法结合荧光染色法快速检测结核分枝杆菌

目的通过用噬菌体生物扩增法（PhaB）结合荧光染色法检测51例标本中的结核分枝杆菌,与抗酸染色和X线比较,来探讨此检测方法的临床价值。方法标本来源于门诊和住院病人,将每例标本进行噬菌体生物扩增法检测,并涂片进行抗酸染色法、结核杆菌荧光染色法检测,并与X线诊断结果和最后临床诊断进行比较,数据采用χ^2统计分析。结果噬菌体生物扩增法检出阳性率与X线检查阳性检出相符率、临床最后诊断相符率分别达95．0％和96．55％,诊断比较差异无显著性（P〉0．75）。而用单纯的抗酸染色法检查,相符率分别只达45．0％和62．07％,差异有显著性。结论采用噬菌体生物扩增法结合荧光染色法较单纯的抗酸染色法检查结核分枝杆菌阳性检出率和与临床最后诊断相符率显著增高,是一种敏感性高,特异性强,快速、简便和无创的检测方法,对防止漏诊,病情观察、疗效判断为临床提供了可靠的依据。     

免疫磁珠荧光染色法在痰液结核分枝杆菌检测中的应用

目的 建立免疫磁珠 (immunomagnetic beads,IMB)荧光染色法并评估其在临床痰液标本结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）检测的应用价值。方法 利用 IMB富集纯化结核分枝杆菌,利用自动染色机和自动显微镜智能软件扫描系统进行荧光染色及结果分析,建立结核分枝杆菌 IMB荧光染色法。用实验室培养的标准菌株评估该方法的检测灵敏度和特异度。同时选取 2021年 5月～2022年 2月在山东省第二人民医院就诊的 145例疑似肺结核患者作为临床研究对象,取每例患者的痰液标本,选用萋 -尼氏（Ziehl-Neelsen,Z-N）抗酸染色法、 IMB荧光染色法和 BACTEC 960系统培养法检测结核分枝杆菌感染情况,比较三种方法的阳性检出率、灵敏度、特异度和准确率,验证 IMB荧光染色法在诊断结核分枝杆菌感染中的优势和临床应用价值。结果 IMB荧光染色法的最低结核分枝杆菌检测量是 30 CFU/ml,在标本含菌量≥ 30 CFU/ml时,该方法学的敏感度为 100%;而在 10 CFU/ml时则降到 56%,该方法检测的特异度为 100%。在利用临床标本检测中, IMB荧光染色法、 Z-N抗酸染色法和培养法对于结核分枝杆菌的阳性检出率分别为 73.10%,40.69%和 78.62%;IMB荧光染色法的阳性率明显高于传统 Z-N抗酸染色法的阳性率,差异具有统计学意义（χ2=31.059 9,P＜ 0.05）;略低于培养法,差异无统计学意义（χ2=1.205 2,P＞ 0.05）。IMB荧光染色法在临床标本检测中的灵敏度、特异度和准确率分别为 92.98%,100.00%和 94.48%,明显高于 Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度和准确率（47.37%,83.87%和 55.17%）,差异具有统计学意义（χ2=56.664 7,5.438 6,P＜ 0.05;59.479 2,均 P＜ 0.05）。结论 研究建立的 IMB荧光染色法优于目前应用的其他染色法,可为结核病早期诊断提供新方法。     

结核杆菌三种实验方法的应用评估

目的比较痰涂片法、实时荧光定量PCR法和免疫结核抗体(金标法)检测对结核病的诊断意义。方法选取2015年7月至2015年10月在我院诊疗疑似或确诊患者172例,进行涂片抗酸染色、实时荧光定量PCR法检测和采集血样进行免疫结核抗体检测。结果 172例检测样本中,抗酸染色痰液标本阳性例数只有20例,阳性率为11.6%。实时荧光定量PCR法阳性例数55例,阳性率31.2%。免疫结核抗体(金标法)阳性例数为87例,阳性率为50.6%。结论三种方法中,以结核抗体阳性率最高,实时荧光定量PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。如果三种方法联合运用,相互佐证,可提高准确性。     

实时荧光定量PCR在非典型结核患者纤支液TB-DNA检测中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在非典型结核患者纤支液结核分支杆菌(TB)-DNA检测中的应用价值。方法收集该院2009年1月至2010年12月期间,526例临床疑似结核或肺部疾病患者纤维支气管镜检查,行支气管肺泡灌洗,取灌洗液进行实时荧光定量PCR法检测TB-DNA,同时采用常规浓集法涂片查找抗酸杆菌,比较两种检测方法在结核病患者标本中的阳性检出率。结果 526例肺泡灌洗液中阳性44例,TB-DNA阳性检出率为8.54%,常规浓集涂片阳性12例,抗酸杆菌阳性检出率2.28%,PCR法检测TB-DNA阳性检出率明显高于常规抗酸涂片法(P<0.05)。结论 TB-DNA定量能显著提高结核杆菌的检出率,优于传统的涂片、培养等方法,可作为结核病病原学诊断的首选项目使用。     

实时荧光PCR方法与痰涂片法检测结核杆菌的价值分析

目的比较实时荧光PCR法和痰涂片法检测结核杆菌的价值。方法选取2017年1月至2019年2月某中心结核门诊接诊的疑似肺结核患者95例,采集晨痰标本,分别予以痰涂片检测、PCR检测、MGIT960液体分离培养,观察比较三种检测方法的结核杆菌阳性检出率,以MGIT960液体分离培养法为金标准,对比实时荧光PCR法和痰涂片法的检测准确性、敏感度、特异度以及与MGIT960液体分离培养法检测结果的一致性。结果痰涂片法结核杆菌阳性检出率为29.47%(28/95),实时荧光PCR法检出率为37.89%(36/95),MGIT960液体分离培养法检出率为38.95%(37/95),三种检测方法结核杆菌阳性检出率比较差异无统计学意义(χ~2=2.239,P=0.3260.05)。痰涂片法检测结果与MGIT960液体分离培养法结果对比差异无统计学意义(P0.05),与MGIT960液体分离培养法结果一致性中等(K=0.467)。实时荧光PCR法检测结果与MGIT960液体分离培养法结果对比差异无统计学意义(P0.05),与MGIT960液体分离培养法结果一致性较好(K=0.933)。实时荧光PCR法检测准确率、敏感度均高于痰涂片法,对比差异有统计学意义(P 0.05),但两种检测方法特异度比较差异无统计学意义(P0.05)。结论实时荧光PCR法检测结核杆菌,能够提升结核杆菌阳性检出率,检测准确率、敏感度较高,与MGIT960液体分离培养法检测结果一致性较好,应用价值优于痰涂片检测。     

结核分枝杆菌DNA实时定量PCR技术在临床病理诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosis,TB)患者,对其石蜡包埋组织标本行组织病理学检查,并同时采用组织切片抗酸染色及FQ-PCR技术检测MTB-DNA,并对这三种方法的阳性检出率进行比较。结果在144例临床诊断TB患者的石蜡包埋组织中,FQ-PCR法检测MTB阳性68例,阳性率为47.22%,抗酸染色法检测阳性22例,阳性率为15.28%,组织病理学法检测阳性74例,阳性率为51.39%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P0.01)。FQ-PCR法对肺活检标本、肺叶切除标本和胸膜活检标本MTB的阳性检出率均高于组织病理学法和抗酸染色法;对淋巴结活检标本和其他组织标本的阳性检出率高于抗酸染色法,但低于组织病理学法。结论 FQ-PCR技术简便、快捷,敏感性明显好于传统抗酸染色法,可作为TB分子病理诊断的重要检测方法,为组织病理学诊断提供可靠的依据,具有较高的临床应用价值。     

3种检测方法在HIV合并结核分枝杆菌感染诊断中的对比研究

目的对比3种检测方法在HIV合并结核分枝杆菌感染中的诊断价值,以期找到最优的检测方法或检测方法组合。方法收集2013年1月至2015年12月确诊为HIV合并结核分枝杆菌感染患者的各类标本115份。每例患者均用相同类型的标本进行直接涂片抗酸染色镜检、罗氏培养和实时荧光定性PCR法检测。结果以任意1种标本检出阳性计算阳性率,115例HIV合并结核分枝杆菌感染患者的标本直接涂片抗酸染色法与罗氏培养法检测的阳性率比较,差异有统计学意义(χ~2=19.865,P=0.001);直接涂片抗酸染色法与实时荧光定性PCR法检测的阳性率比较,差异有统计学意义(χ~2=0.028,P=0.001);罗氏培养法与实时荧光定性PCR法检测的阳性率比较,差异无统计学意义(χ~2=21.261,P=0.868)。应用罗氏培养法来检测脓液、粪便和尿液,其检出率都达到了100.0%。实时荧光定性PCR法检测脑脊液、胸腔积液及腹水等含菌量较少的标本,检出率达到100.0%。罗氏培养法与实时荧光定性PCR法在检测痰液标本时检出率也较高(80.0%)。而从标本类型上来看,脓液标本3种方法均全部检出结核分枝杆菌,粪便和尿液标本用培养的方法检测结核分枝杆菌阳性率均为100.0%。支气管肺泡灌洗液的检出率也较高,均大于70.0%。结论实时荧光定性PCR在检测低排菌量标本如脑脊液、胸腔积液及腹水时具有明显优势;脓液标本3种方法均全部检出结核分枝杆菌,粪便和尿液标本用培养的方法均能100.0%检测出结核分枝杆菌。